Universidad De Nario - Facultad De Ciencias Exactas Y Naturales diegofer1414@hotmail.com, angevanne02@gmail.com.
INTRODUCCIN El concepto de ubicuidad de los microorganismos se afirma que estos se encuentran en cualquier lugar del entorno humano: suelo, aguas (desde arroyos hasta ocanos), atmosfera, entre otros lugares. Los determinantes ecolgicos (condiciones ambientales) establecen las caractersticas de los microorganismos presentes. Esas caractersticas se ven reflejadas en la variedad de especies, el nmero poblacional, los requerimientos nutricionales, utilizacin del oxgeno para su metabolismo, etc. 1 Vivimos inmersos en un ambiente con miradas de microorganismos que colonizan el entorno, las superficies corporales e incluso el interior de nuestras cavidades que tienen acceso al exterior. Aquellos que conviven con nosotros constituyen la microflora indgena o autctona, cuya presencia se traduce en beneficios. Sin embargo algunos agentes de esa microflora son potencialmente patgenos y pueden legar al ambiente a partir de secreciones, aerosoles y excreciones de animales e individuos enfermos . 2
Los microorganismos poseen estructuras que les permiten coexistir con otros tipos de microorganismos y tambin con organismos superiores. En la morfologa bacteriana se encuentran caractersticas mayores como: el tamao, la forma o estructura y el tipo de agrupacin. Algunas veces estas caractersticas se relacionan con el gnero y en ocasiones con la especie determinada. Sin embargo actualmente el tamao de una bacteria puede medirse con mxima exactitud, sin importar sus dimensiones microscpicas. Segn la especie las bacterias pueden ser esfricas, en forma de bastn, o espiral. Estas formas pueden sufrir variaciones por diferentes circunstancias externas (exgenas) a las bacterias, como aumento de la presin osmtica del medio, escasez de humedad, entre otras. En ciertas especies bacterianas, sus integrantes se organizan en grupos y conforman: pares, cadenas, racimos y filamentos. Con frecuencia estas formas de agrupacin son caractersticas de un grupo taxonmico o taxn. 1 Objetivos Identificar microorganismos contaminantes, para evitarlos en le desempeo de actividades en el laboratorio de microbiologa. Identificar las bacterias de nuestro cuerpo y reconocer que hacen parte de la flora normal o microbiota. Aplicar normas de bioseguridad necesarias para garantizar la calidad de nuestro trabajo. MATERIALES Y MTODOS Se atempero los medios de cultivo: sin destapar las cajas y flameando la base de la caja, se sec las cajas con una franela y se las rotulo respectivamente en su borde. Se sembr las cajas de agra nutritivo as: Primera caja: se humedeci un hisopo en solucin salina, se escoji la perilla de la puerta y se froto, luego se froto suavemente sobre el agar haciendo estras. Segunda caja: se seleccion un implemento de uso diario como son unas gafas y se realiz el proceso anteriormente descrito. Tercera caja: se realiz un frotis de garganta con un escobilln estril y se realiz una estra en el agar. Se sembr una caja de agar manitol salado as: Primera caja: con escobilln se tom una muestra de secrecin nasofarngea y se sembr en una caja de agar manitol salado que estaba dividida en dos: para la fosa nasal izquierda y la fosa nasal derecha. Cada caja se rotulo y se llevaron a incubacin por 24 horas a 37 0 . RESULTADOS Se examin cada una de las cajas, se identific y conto el nmero de colonias, se utiliz los criterios suministrados para describir colonias desarrolladas en cada caja: Primera caja de agar nutritivo - perilla de la puerta del laboratorio: se contaron 5 colonias con las siguientes caractersticas: 1 er colonia: de forma circular, aparento color amarillo brillante, su aspecto superficial fue pulida, presento una consistencia viscosa, una elevacin plana y un borde redondeado. Colonia 2: de forma rizoide, con un color blanco y present un centro oscuro, de aspecto superficial pulido, una consistencia seca, elevacin plana, y un borde rizoide. Colonia 3: present forma irregular, de color blanco, aspecto superficial con anillo concntrico, consistencia quebradiza, de elevacin papilada y un borde ondulado Colonia 4: present forma filamentosa, de color blanco con amarillo claro, aspecto superficial spero, de consistencia fibrosa, elevacin plana y borde filamentoso. Colonia 5: present forma rizoide, de color blanco, aspecto pulido, consistencia fibrosa, elevacin plana y borde rizoide. Agar nutritivo gafas Se contaron 5 colonias con las siguientes caractersticas: Colonia 1: de forma irregular con un color blanco, aspecto superficial pulido, una consistencia viscosa, elevacin plana y un borde ondulado. Colonia 2: present forma redondeada, color blanco, aspecto superficial con anillos concntricos, consistencia quebradiza, elevacin papilada y borde ondulado. Colonia 3: present forma rizoide, de color blanco con un centro oscuro, aspecto superficial pulido, consistencia seca, elevacin plana y borde rizoide Colonia 4: de forma rizoide, present un color blanco, con un aspecto pulido, consistencia fibrosa, elevacin plana y borde rizoide. Colonia 5: de forma circular, con un color blanco, aspecto superficial pulido, consistencia mantecosa, elevacin plana y borde redondeado. Agar nutritivo - muestra de garganta. Se encontraron 2 tipos de colonias con las siguientes caractersticas: Colonia 1: de forma rizoide, present un color blanco amarillento, de aspecto superficial pulido, una consistencia seca, elevacin plana y un borde filamentoso Colonia 2: de forma circular, con color amarillento, un aspecto superficial pulido, consistencia mantecosa, elevacin plana y borde redondeado. Agar manitol salado secrecin nasofarngea. La coloracin del agar manitol salado present un cambio en la coloracin de su medio, pasando de color rojo claro a amarillo. En espacios donde no se vio mucho crecimiento se not la presencia de colonias ms grandes y donde hay mayor crecimiento, se not colonias mas pequeas pero las dos presentaron las mismas caractersticas. -Tipo de colonia: circular -Aspecto de la superficie: spera -Consistencia: mantecosa -Elevacin: convexa -Borde: redondeado
Discusin. La morfologa bacteriana debe considerarse desde dos puntos de vista: 1) como clulas individuales observables slo al microscopio y 2) como colonias bacterianas apreciables a simple vista despus de desarrollarse en la superficie de medios de cultivo slidos. Las diferencias en el tamao, forma y ciertos detalles estructurales son caractersticas de los principales grupos de bacterias, y proporcionan las bases fundamentales para su estudio sistemtico e identificacin. De la misma forma, las colonias bacterianas, compuestas por masas de clulas individuales, tienen caractersticas de tamao, consistencia, textura y color que poseen un valor sistemtico. Cuando las bacterias crecen en la superficie de un medio de cultivo slido, las clulas en divisin permanecen aproximadamente fijas en su posicin y forman masas de muchos millones de clulas visibles a simple vista. Las colonias as formadas varan desde un tamao diminuto, apenas visible, hasta masas de varios milmetros de dimetro. Su tamao, forma, textura, olor y en algunos casos color son, a veces, muy orientativos para la identificacin de las bacterias que la componen. Aunque estas caractersticas dependen a menudo de la naturaleza del medio de cultivo y de las condiciones de incubacin, cuando stas se controlan cuidadosamente, son muy constantes y, en muchas ocasiones, tienen un valor diferencial considerable. La morfologa de las colonias es una de las caractersticas bsicas de las bacterias y es indispensable su estudio para comenzar correctamente una identificacin preliminar; para nuestro caso se tuvo en cuenta caractersticas como: forma, aspecto de la superficie, consistencia, elevacin y borde. Aunque debe tenerse en cuenta que hay otros parmetros como el tamao, el olor, entre otros. Morfologa (forma): La forma de la colonia puede ser circular (Staphylococcus) que se presento en el agar manitol salado, irregular o filamentosa (Bacillus). Que se presentaron en algunas colonias de agar nutritivo con muestra tomada de unas gafas y las muestras tomadas de una perilla; estas formas predominaron bsicamente en muchas de las colonias. Aspecto de la superficie: La superficie de la colonia, examinada mediante luz reflejada, puede mostrar un aspecto liso y brillante a la luz o, por el contrario, una textura irregular, rugosa, con anillos concntricos, con radios en su interior. Las colonias lisas son de aspecto homogneo, de textura uniforme y son caractersticas de microorganismos de tipo salvaje recientemente aislados de su hbitat natural como las enterobacterias. Las colonias rugosas son de aspecto granulado, en general son cepas mutantes que carecen de protenas o polisacridos de superficie. Las formas rugosas de enterobacterias, por ejemplo, generalmente no son virulentas. Consistencia: Las colonias bacterianas pueden tener una consistencia variable, desde seca y frgil a grasienta y cremosa o viscosa y pegajosa. Esta caracterstica slo se aprecia cuando tocamos las colonias con el asa de siembra. Podremos observar colonias "duras" que se deslizan fcilmente por la superficie del medio, siendo difcil manipularlas con el asa. A menudo estas colonias se fragmentan al intentar cogerlas. Otras colonias tienen apariencia cremosa, con superficie brillante generalmente y fciles de manipular con el asa. La mayora de las colonias tienen consistencia mantecosa, siendo muy fcil obtener pequeas porciones de la misma, que quedan bien adheridas al asa de siembra. Las mucoides o viscosas tienen aspecto acuoso, brillante, propio de las bacterias capsuladas o que forman cubiertas polisacridas como Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae. Entre las bacterias patgenas, las formas capsuladas suelen ser ms virulentas. Pigmentacin: Es caracterstico slo de unas pocas especies bacterianas. La pigmentacin slo se observa en colonias, y nunca en clulas individuales. Dentro de las bacterias patgenas, una de las formas pigmentadas ms importantes es Staphilococcus aureus, cuyas colonias son normalmente de color amarillo dorado. En ocasiones, el pigmento difunde al medio, dando a ste una tonalidad caracterstica en algunas especies. Pseudomonas, por ejemplo, produce un pigmento verdoso que puede ser fcilmente reconocido en medios incoloros como el Mueller-Hinton. Hay que tener especial precaucin para no atribuir una falsa pigmentacin a colonias que se han desarrollado en medios con determinadas sustancias nutritivas (azcares) e indicadores de cambio de pH. Por ejemplo, los grmenes que utilizan la lactosa para su metabolismo darn colonias de color amarillo en un medio que contenga este azcar y un indicador de pH adecuado.
Conclusiones. El desarrollo de las colonias sobre las superficies de agar, nos permite identificar las bacterias, ya que las especies a menudo forman colonias con una forma y aspecto caracterstico.} El tamao, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo La morfologa de la colonia de una bacteria puede variar segn el medio en el que crezca la bacteria Cuestionario. 1. Que es una colonia bacteriana? Una colonia es una agrupacin de bacterias formada a partir de la reproduccin de una Unidad Formadora de Colonia (UFC) sobre un medio slido; aunque vara de tamao generalmente es visible a simple vista. Una UFC puede ser un solo microrganismo o bien un grupo de microorganismos de una misma especie como en el caso de bacterias que tienen tendencia a permanecer unidas como los estafilococos o los estreptococos. Las colonias bacterianas tienen una medida, forma, textura y en algunos casos color caractersticos, que aunque puede variar de acuerdo al medio en que se encuentren, es constante bajo condiciones controladas y depende de la especie bacteriana que la forme. Debido a que las caractersticas de las colonias ocurren en varios grados y combinaciones dependiendo de las bacterias y son a menudo muy uniformes, sirven para identificar bacterias en cultivos mezclados. Sin embargo, adems de stas caractersticas se requiere tambin estudiar la fisiologa y propiedades inmunolgicas de las bacterias para poder realizar una identificacin completa. 2. Por qu en nuestro cuerpo se presentan reas colonizadas por bacterias, que representa esta situacin? Desde las pocas horas despus del nacimiento somos colonizados por bacterias que vivirn con nosotros durante toda la vida, estas bacterias colonizan toda la piel, tracto digestivo, vas respiratorias altas, odos y algunos otros tejidos La mayora de ellas son comensales, ya que viven con nosotros sin causar dao. Su nmero, as como la variedad de especies, cambia permanentemente. En cada momento cada uno de nosotros posee un espectro particular e individualizado de microorganismos. Estas bacterias estn all por un motivo, ya que algunas fabrican nutrientes para el cuerpo, por ejemplo las bacterias coliformes del intestino producen vitamina K y otras bacterias aportan otros nutrientes. Las bacterias de la flora normal tambin mantienen a raya a otros microorganismos nocivos, ya que de no ser as, seramos invadidos por microbios que causaran dao a nuestro cuerpo, por lo cual la flora forma parte de las que comnmente llamamos defensas del organismo. 3. especifique por reas corporales los tipos de microorganismos que normalmente se encuentran: microbiota. Microbiota de las diferentes regiones corporales MICROBIOTA DE LA PIEL - Podemos tener hasta 2m^2 de superficie de piel. - La epidermis no es medio favorable para crecimiento bacteriano (sequedad). Pero en cuero cabelludo, orejas, axilas, zona genitourinaria y anal, dedos de los pies, etc. hay condiciones de humedad y calor suficiente para favorecer ciertos microorganismos residentes. - La actividad bacteriana puede producir el conocido olor de zonas mal aseadas como axilas, ombligo donde los microorganismos se asocian a las glndulas sudorparas. Tambin los folculos pilosos, con su glndula sebcea, proporcionan un hbitat a los microorganismos. - La microbiota normal de la piel son bacterias Gram + (Staphylococcus, Propionibacterium acnes). Algunas Gram como E.coli estn presentes como contaminantes fecales. Acinetobacter es una Gram - residente frecuente de la piel. CAVIDAD ORAL - Es un hbitat muy heterogneo. - A pesar de que la saliva contiene componentes antibacterianos (lisozima, que rompe el pptidoglicano, y lactoperoxidasa), el exceso de restos de nutrientes convierte a la boca en un medio favorable para los microorganismos. - Mediante microcolonias, las bacterias pueden agarrarse y crecer en la superficie del diente. Slo algunas especies bacterianas pueden anclarse: Streptococcus sobrinus, S. mutans. Se puede formar una zona bacteriana espesa denominada PLACA. - A medida que la placa crece, van desarrollndose bacterias filamentosas (Fusobacterium). - Debido al crecimiento de anaerobias facultativas, en una placa hay poco acceso de oxgeno y estas bacterias pueden ser anaerobias. - El resultado final del crecimiento bacteriano en los dientes puede ser CARIES DENTAL, que se puede desarrollar en zonas donde la limpieza no es intensa y hay restos orgnicos. Implicados: S. sobrinus y S. mutants. - El fluoruro dentro del cristal de fosfato clcico hace que el diente sea ms resistente a la descalcificacin producida por el cido de bacterias cido-lcticas que fermentan azcares. TRACTO INTESTINAL - Una caracterstica importante es el bajo pH que existe en el estmago, convirtindose en una barrera antibacteriana. - Sin embargo, Lactobacilos y estreptococos, tolerantes al cido, s pueden colonizar las paredes del estmago. - A medida que avanzamos desde el duodeno (cerca del estmago y cido) a lo largo del intestino, el pH se va haciendo menos cido y la microbiota va cambiando, aumentando el nmero total de bacterias que pueden mezclarse con material digestivo y llegar hasta varios millones por gramo. - En el intestino grueso abundan las bacterias fermentativas. Algunas fermentativas, como E.coli suelen consumir todo el oxgeno y dejar un ambiente anaerobio estricto. Aqu pueden crecer gneros como Bacteroides, Clostridium o Enterococcus faecalis (puede haber un recuento, sobre todo de Bacteroides de hasta 1010-1011 clulas/g de contenido intestinal. - La microbiota intestinal realiza un gran nmero de reacciones metablicas que pueden afectar al animal en caso de modificacin (tratamiento con antibiticos, por ejemplo).
- Otros productos de la fermentacin bacteriana son las sustancias odorferas y gases. Esto, como ya se sabe, puede variar con la dieta - Las bacterias constituyen cerca de un tercio del peso de la materia fecal. - Con abuso de antibiticos, puede desaparecer la microbiota habitual y aparecer otros organismos oportunistas como Staphylococcus, Proteus o la levadura Candida albicans, que en condiciones normales no pueden competir con la microbiota normal. - Un adulto normal expele diariamente de sus intestinos varios cientos de ml de gas (entre ellos metano, CO2 y H2, procedentes de la accin fermentativa bacteriana), siendo ms de un tercio N2 procedente del aire tragado TRACTO RESPIRATORIO - Los microorganismos viven en reas baadas con las secreciones de las membranas mucosas. - Las bacterias pueden penetrar con el aire durante la respiracin. - Los organismos ms frecuentes son estafilococos, estreptococos y algunos cocos Gram negativos (menos corrientes). - Tambin pueden coexistir (pero con crecimiento limitado por la microbiota normal) organismos potencialmente patgenos como: Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, S. pyogenes o Corynebacterium diphteriae. El sistema inmune local delimita su crecimiento. - El tracto respiratorio inferior (trqueas, bronquios y pulmones) son bastante estriles, debido a que el flujo de aire va disminuyendo y el epitelio ciliado de las paredes empuja a las bacterias hasta que son expulsadas en la saliva o secreciones nasales. TRACTO UROGENITAL - Tanto en el hombre como en la mujer, la vejiga suele ser estril, pero la uretra puede colonizarse por bacilos y cocos Gram negativos aerobios facultativos (E. coli y Proteus mirabilis). Normalmente no son patgenos, pero por cambios (inmunosupresin) pueden producir infeccin. - La vagina de la mujer adulta es ligeramente cida y puede contener Lactobacillus acidophilus que fermenta glucgeno y produce cido. 4. Que precauciones se debe tener para evitar contaminar los cultivos y muestras en microbiologa? - La superficie externa de un recipiente de cultivo est por supuesto sometida a contaminacin y el interior del matraz o del tubo puede contaminarse cuando se abre para introducir o retirar el material. Este peligro se reduce al mnimo pasando el orificio por la llama de un mechero, inmediatamente despus de retirar el tapn y, de nuevo, justo antes de volverlo a colocar - Todo el material utilizado debe estar estril, Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10-15cm de la llama del mechero (zona asptica). En caso de utilizar mechero nunca se debe coger material por encima de la llama. Antes de comenzar a trabajar se procurar disponer de todo el material necesario para el procesamiento de la muestra. Tomar las medidas necesarias para evitar la contaminacin de las muestras y/o cultivo por microorganismos ambientales 5. Que es un cultivo puro y como se obtiene? Un cultivo puro es aquel que contiene una sola clase de microorganismos. Slo despus de haber obtenido un cultivo puro se puede identificar un microorganismo y/o estudiar sus caractersticas bioqumicas o de otro tipo. La obtencin de un cultivo puro se hace mediante una tcnica de aislamiento. La tcnica de aislamiento ms utilizada consiste en sembrar en un medio de cultivo slido en placa de tal manera que los microorganismos generen colonias separadas ("Aislamiento por agotamiento en estras"). Se sabe que cada colonia procede de una sola clula. Por lo tanto el cultivo descendiente de una colonia es un cultivo puro. Bibliografa. Microbiologa mdica. Murray. 1 Ed 2007. Elsevier Captulo 3 1. Microbiologa bsica para el rea de la salud y afines. 2.a edicin Hugo Humberto Montoya Villafane 2008 2. Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio Evelyn Rodrguez Cavallini http://microdonto.files.wordpress.com/2 009/03/morfologia-de-las-colonias- bacterianas.pdf termoqumica,1 Elisa Carrin Carrin. Universitat de Valncia, 28/11/2011 pagina 203