FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS AURORA MARN N.

GUA DE LABORATORIO 1 BIOLOGIA GENERAL PED. CIENCIAS CON MENCIN

OBSERVACIONES AL MICROSCOPIO DE LUZ

INTRODUCCIN El microscopio es un instrumento cientfico de alta precisin que se caracteriza por entregar una imagen aumentada del objeto, esto se logra sobre la base de piezas pticas, denominadas lentes. El microscopio que usted emplear a lo largo del semestre es un microscopio ptico o de campo claro. Funciona si se le entrega energa del tipo elctrica; gracias a las modificaciones que experimentan los rayos luminosos al pasar a travs de los lentes, se obtiene la imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico o de campo claro consta de tres sistemas fundamentales:

1. SISTEMA MECNICO: PIE: Es la base de sustentacin del instrumento y tiene, generalmente, forma de herradura o triangular. COLUMNA o BRAZO: Es la regin articulada al pie, que sostiene al: CONDENSADOR, PLATINA y TUBO. TUBO: Esta es la parte superior de la columna y lleva todo el sistema de lentes, es decir OCULARES y OBJETIBOS. REVLVER ( PORTAOBJETOS): Mecanismo situado en el extremo inferior del tubo que por simple rotacin permite el cambio de los OBJETIVOS. PLATINA: Es una plataforma horizontal con un orificio central que permite el paso de luz. En ella se coloca la preparacin la cual se fija mediante pinzas, y se desplaza mediante el CARRO DE VERNIER. TORNILLOS DE ENFOQUE: Se denomina MACROMTRICO, para el enfoque aproximado ( ajuste grueso ), y MICROMTRICO, para el enfoque de precisin ( ajuste fino ).

2. SISTEMA PTICO: Est constituido fundamentalmente por dos sistemas de lentes: Oculares y Objetivos. OCULARES: Estn ubicados en la parte superior del tubo del microscopio y su finalidad es aumentar la imagen producida por el objetivo. OBJETIVOS: Sistema de lentes ubicados en el extremo del revolver. Su cantidad es variable. La calidad de los objetivos es determinante para la calidad de la imagen y esta no puede ser mejorada con los otros elementos del microscopio. Entre los lentes objetivos se encuentra el 100x llamado "lente de inmersin". Cuando se utiliza se interpone entre la preparacin y el lente una sustancia ( aceite ) cuyo ndice de refraccin es lo ms aproximado posible al vidrio. Los objetivos estn marcados con nmeros que indican caractersticas esenciales. Por ejemplo en un lente Zeiss se hallan las siguientes indicaciones: 160/0.17 40/0.65 40= aumento del objetivo 160= long. en mm del tubo del microscopio 0.65= apertura numrica del lente 0.17= espesor del cubreobjetos que debe emplearse para que sean reales las indicaciones del lente. La combinacin del aumento dado por el objetivo y el ocular da el aumento total de la imagen. Ej; objetivo de 40x ocular de 10x aumento total = 400x

3. SISTEMA DE ILUMINACIN: FUENTE LUMINOSA: Puede ser natural o artificial. La mayora de los microscopios utilizan la luz artificial proporcionada por una ampolleta, incorporada al pie o a la base de la columna. Tambin se puede utilizar una fuente luminosa independiente del instrumento, en cuyo caso se hace necesario la presencia de: CONDENSADOR: es un sistema de lentes que tiene por objeto concentrar la luz en el plano de la preparacin, para obtener una mejor discriminacin de ella. En la parte superior lleva una lente frontal, movible, que debe ser utilizada cuando se emplean los objetivos de mayor aumento. En la parte inferior del condensador se encuentran:

a) DIAFRAGMA IRIS: Es un dispositivo que sirve para regular la cantidad de luz que llega al condensador y elimina los rayos luminosos perifricos que pueden producir aberraciones. b) ANILLO PORTAFILTRO: Permite colocar entre el condensador y la fuente luminosa ( o espejo ) un filtro, generalmente, de color azul, para obtener una luz monocromtica y parecida a la luz natural. En algunos microscopios el filtro, esta incorporado a la lamparilla.

PROPIEDADES DE LAS LENTES DEL MICROSCOPIO

PODER DE AUMENTO: Es la razn que existe entre el tamao de la imagen producida por el microscopio y el tamao del objeto observado. La combinacin del aumento dado por el objetivo y el ocular da el aumento total de la imagen. PODER DE DEFINICIN: Es la capacidad del microscopio de dar imgenes ntidas, de contornos precisos. Reside en la correccin de las aberraciones propias de las lentes. PODER DE PENETRACIN: Es la cualidad de las lentes que permite averiguar hasta que lmites podemos reconocer detalles de estructuras situadas en diferentes niveles de la preparacin. Si con lente de 10x se enfocan dos estructuras que estn superpuestas, al pasar al 40x podr enfocarse una de ellas y slo con un nuevo ajuste del micromtrico podr enfocarse la otra. Por lo tanto al pasar a los aumentos mayores se pierde penetracin. LMITE DE RESOLUCIN: se define como la menor distancia que puede haber entre dos puntos para ser distinguidos como dos entidades independientes. Para el ojo humano esta distancia es de 100 m, es decir que dos puntos que estn separados una distancia menor a 100 m sern percibidos por el observador como un nico punto.

La capacidad de distinguir (separar) detalles pequeos ser entonces el poder de resolucin del microscopio.
PODER DE RESOLUCIN: Es la capacidad que permite hacer perceptibles por separados, dos puntos situados muy prximos entre s en el objeto. Esta capacidad esta determinada por la apertura numrica (A.N) de la lente, siendo directamente proporcional a ella, y por la longitud de onda (lambda) de la luz utilizada, siendo inversamente proporcional a ella.
Teniendo en cuenta esta definicin, el poder de resolucin de un microscopio aumenta cuando la mnima distancia entre dos puntos que pueden distinguirse como dos objetos disminuye. El lmite de resolucin de una lente puede calcularse utilizando la ecuacin de Abbe:

El lmite de resolucin es la distancia mnima al que se pueden distinguir dos objetos por separado y esta dado por la siguiente frmula: L.R. = 0.61 AN = semingulo de apertura, AN = n Sen , n = ndice de refraccin

Dado que el seno de no puede exceder a 1 y los mejores aceites de inmersin dan un ndice de refraccin de no superior a 1.6 la mxima AN de las lentes es aproximadamente 1.4. Con estos datos calcule el mximo lmite de resolucin de los microscopios pticos. TABLA DE CONVERSIN DE UNIDADES 1 cm = 10 mm 1 mm = 1000 1 = 1000 nm 1 nm = 10 A

OBJETIVOS DEL PRCTICO Conocer la estructura y las funciones del microscopio de Luz. Aplicar y ejercitar las normas de uso y cuidado del microscopio ptico de luz mediante la observacin de distintos tipos de tejidos. Aprender el proceso de enfoque, as como los cuidados requeridos para el buen uso del microscopio ptico. Observar el poder de penetracin del microscopio ptico.

USO DEL MICROSCOPIO El microscopio es un instrumento costoso, por lo tanto, debe manipularse con el mayor cuidado posible. Siga siempre estas instrucciones generales cada vez que lo vaya a utilizar:

Norma de uso y cuidado 1. Antes de utilizar el microscopio, guarde todas aquellas cosas que no sean absolutamente necesarias con el fin de despejar el lugar de trabajo. 2. Debe transportarlo con las dos manos, una por debajo del microscopio (base) y la otra, en el brazo o columna. 3. Debe colocarlo alejado del borde de la mesa, con el brazo hacia Ud. luego conectarlo a la red de energa elctrica, evitando jalar o mover, innecesariamente el cable que lo une al enchufe. 1. Evite los movimientos bruscos, y sobre todo, cambiarlo de posicin una vez que haya comenzado a utilizarlo. Del mismo modo, debe apagar la lmpara al dejar de utilizarlo. 2. Mueva los tornillos con suavidad para que no se desajusten.

3. NUNCA limpie las lentes del microscopio con otra cosa que no sea papel para lentes o en su defecto, con el tipo de pao que se indique. Las lentes del microscopio cuestan tanto como las dems partes juntas. 4. Cuando termine su trabajo, guarde el microscopio, no sin antes colocar el objetivo de menor aumento en la posicin de enfoque, enrollar el cable elctrico por debajo de la platina, ubicar esta ltima en la posicin ms baja, y dejarlo cubierto con su funda.

Procedimiento de enfoque 1.- Debe colocar el objetivo de menor aumento en su posicin de enfoque; sentir un "clic" cuando este encaje en su sitio. 2.- La platina debe encontrarse en la posicin ms baja. 3.- Debe encender la lmpara para permitir la entrada de la luz, de manera que esta se refleje hacia arriba, a travs de la abertura de la platina. La mayora de los microscopios estn equipados con un diafragma iris para este fin; inicialmente debe abrirlo al mximo. 4.- Con el objetivo de menor aumento en posicin de enfoque, y MIRANDO POR FUERA se acerca el objetivo de menor aumento a la preparacin, moviendo el tornillo macromtrico. A continuacin mirando por el ocular se va separando el objetivo de la preparacin hasta que aparezca enfocada. Finalmente se ajusta el enfoque con el tornillo micromtrico. 5.- SIN DESENFOCAR se da vuelta al revolver para situar el objetivo de mediano aumento. Puede que se necesite ajustar la iluminacin y el enfoque. 6.- Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin. 7.- Para retirar la preparacin se sita el objetivo de menor aumento, se separa la platina del objetivo y ya se puede retirar la muestra Empleo del objetivo de inmersin: a.- Bajar totalmente la platina b.- Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite. c.- Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40.

d.- Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. e.- Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin. f.- Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. g.- Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. h.- Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso c. i.- Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin j.- Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio. ACTIVIDADES Sobre un portaobjetos limpio pon dos hilos coloridos cruzndose, luego agrega una gota de agua y el cubreobjetos. Comienza ajustando la distancia interpupilar a tu medida, luego ubica la muestra sobre la platina, ajstala en el carro con las pinzas y enfoca con el objetivo de lupa (4x), siguiendo cuidadosamente las instrucciones de enfoque. Una vez que logres observar bien en este aumento, pasa al siguiente, hasta llegar a mayor. Enfoca hacia arriba y hacia abajo para apreciar la estructura tridimensional de estos hilos sintticos. Cuntos hilos puede distinguir al mismo tiempo enfocando con objetivo lupa? Cuntos hilos puede distinguir a 10x? Como varia la profundidad en la observacin de hilos de colores, cuando se cambia de objetivo 10x al de 40x.? Cada alumno, observar una muestra de papel milimetrado con una letra impresa. Al enfocar la letra con la lupa (4,5x u otro segn el caso) deber responder lo siguiente: Con una regla mida la distancia entre el lente objetivo y la preparacin en el portaobjeto Usando las lneas del papel milimetrado determine el dimetro del campo observado, luego el radio y a partir de ste calcule el rea del campo. REFERENCIAS 1) Manual de prcticas de microbiologa. Carlos Ganazo, Ignacio Lpez-Gui, Ramn Daz. Tercera edicin. Editorial Masson. Espaa 2005. 2) Biologa molecular de la clula. Albert Bruce. Tercera edicin. Ediciones Omega, reimpresin enero, 2002. MS INFORMACIN EN:http://www.monografias.com/trabajos91/elmicroscopio/el-microscopio.shtml b) a)