Determinacin de Vitamina C

Fundamento:
La vitamina C, o cido ascrbico, es un compuesto hidrosoluble de 6 tomos de carbono relacionado con la glucosa. Su papel biolgico principal parece ser el de actuar como cofactor en diversas reacciones enzimticas que tienen lugar en el organismo. El cido ascrbico acta como coenzima de las hidroxilasas de prolina y lisina, encargadas de hidroxilar la lisina y prolina en el protocolgeno, modificacin necesaria para que ste pueda formar los enlaces cruzados para formar las fibrillas de colgeno. En este sentido, la vitamina C es importante para el mantenimiento del tejido conjuntivo normal, para la curacin de heridas y para la formacin del hueso, ya que el tejido seo contiene una matriz orgnica con colgeno. Entre los sntomas de carencias leves de vitamina C se encuentran la facilidad para producir heridas, debido al incremento de la fragilidad de los capilares. El escorbuto est asociado con una disminucin en la capacidad de curar heridas, osteoporosis, hemorragias y anemia.

O OH
HO
5 4

O
3
2

HO

OH
5

OH

O
3
2

O C

O C O H C OH HO C H
CH2 OH cido dicetogulnico

HO

OH

cido dehidroascrbico

. La vitamina C es un compuesto inestable, debido a la facilidad con la que se oxida e hidrata. Se destruyen con facilidad en el procesamiento y conservacin de los alimentos, por lo que es utilizada como indicador de la prdida vitamnica de un alimento durante su procesamiento y almacenamiento. Por otra parte, el calor y los cationes metlicos (cuidado al cocinar en recipientes de cobre) destruyen la vitamina C. Alimentos como los ctricos, kiwi, fresones, brcoli, lechuga, entre otros, son fuente natural de vitamina C, y su contenido depende de la especie, rea geogrfica en las que son cultivados, las condiciones de almacenamiento una vez recogidos y del estado de maduracin (generalmente aumenta con la maduracin). La cromatografa y la titulacin volumtrica de xido-reduccin son mtodos utilizados para cuantificar el contenido de vitamina C de un alimento. La cromatografa lquida de alta precisin (HPLC) es el mtodo ms utilizado por ofrecer una gran precisin de los resultados.

Equipos, materiales y reactivos Equipos: a) Cormatografo liquido de alta resolucin de Agilert 1100, con detector de arreglo de diodos, columna de fase reversa C-18 de Agilert de 15 cm con resina de tamao de poro de 5microlitros b) Balanza analtica Sartorius, con sensibilidad de 0.1 mg c) Equipo de filtracin al vacio d) Equipo de agua ultrapura e) Licuadora recondable con aspas de acrlico f) Centrigufa Materiales: a) b) c) d) e) Fiolas de 25 ml, 50 ml, 100 ml y 500 ml Filtros de me,brana, filtros jeringa Tubos de ensayo de 15 ml, de plstico y graduados Micrpipetas de 20 a 200 microlitros y 100 a 1000 microlitros Probeta de 1000 ml

Reactivos: a) Solucion estndar de vitamina C de 1000 ppm: 250 ml b) Acido fosfrico 0.05 N: 500 mL c) 1% (p/v) : 500 mL

Muestra de jugo de Naranja

muestra Bebida Gaseosa Fanta

Centrifugador

Solucion de Acido fosforico

Cromatgrafo liquido de alta resolucin de Agilent 1100

Procedimiento
Ejecutamos con 2 etapas: Etapa A: Preparacin de soluciones a) Fase mvil, 1% (p/v): Para 500 ml solucin pesar en la balanza analtica 5.0 5 de la sal, disolverla con agua ultrapura eb un vaso de precipitacin de 250 ml, luego transferirla a una fiola de 500 ml donde se afora con agua ultrapura. Filtrar la solucin al vacio empleando filtro de membrana de 45 microlitros. b) Solucin de acido fosfrico 0.05 N: La solucin concentrada de acido fosfrico tiene una concentracin de 45.0 N luego para preparar 900 ml e solucin 0.05 N medir con una pipeta 1.0 ml de la solucin concentrada en una probeta de 1000 ml y completar con agua ultrapura a 900 ml. c) Soluciones estadar de vitamina C de 1000 ppm: Pesar en una balanza analtica exactamente 0.1000 g de reactivo vitamina C, transferirlo rpidamente a una fiola de 100 ml donde se le disuelve con un poco de solucin de acido fosfrico 0.05 N y posteriormente se afora con la misma disolucin. Se conserva luego en refrigeradora a 4C d) Soluciones estndar diluidas de vitamina C: se preparan soluciones de 50 ml diluidas con solucin de acido fosfrico 0.05 N de acuerdo al siguiente cuadro

Solucin 1 2 3 4

Ppm 1 3 5 10

mL de estndar de 1000 ppm 0.050 0.150 0.250 0.500

e) Preparacion de muestras:

Tomar 10 ml de Gaseosa y aforar a 50 ml con Acido fosfrico Tomar 5 ml de jugo de naranja y aforar a 50 ml con acido fosfrico

f) Preaparacion de las soluciones estndar y muestras para la medicin por HPLC: con una jeringa hipodrmica de 3 mL de capacidad se toma de una de las soluciones estndar de vitamina C y se adiciona luego un filtro jeringa de un poro de 25 microlitros cuyo filtrado es depositado en un vial de 1.5 mL ( de preferencia de color ambar) etiquetado. Asi se prosigue con los dems estndares. De una manera similar las muestras tambin son filtradas teniendo en cuenta que la toma de muestra del tubo ser sin remover el residuo del fondo del tubo y debe utilizarse otro filtro jeringa.

Etapa B: Preparacion de HPLC para la medicin g) Verificacion inicial de HPLC h) Encendido del equipo y manejo de software del HPLC

Calculos:
Condiciones de operacin del cromatografo liquido Velocidad : 0.9 mL/min Fase mvil : Fase estacionaria : Columna de fase reversa C-18 Temperatura: 30C Longitud de Onda mxima: 245nm Tiempo recorrido: 10 min Tiempo de retencin: 1.23325 min Grafico Concentracion vs. Area de pico

Concentracin 1 3 5 10

rea de pico 70.59974 63.86806 82.1689 318.1301

Chart Title
350 300 250 Area de pico 200 150 100 50 0 0 2 4 6 Concentracion (ppm) 8

y = 29.368x - 5.8051 R = 0.8477

10

12

Encontramos la concentracin de las dos muestras: y = 29.36x

Para la muestra de jugo de naranja:

604.40771=29.36C

C= 20.59 ppm

Para la muestra de Gaseosa Fanta

72.33916=29.36C

C= 2.464 ppm