06 - Capitulo 4

213
CAPTULO 4
DETERMINAO DOS TEORES DE COMPOSTOS FENLICOS EM
Dimorphandra mollis Benth.

A teoria o que decide o que podemos observar.
EISTEIN

1. INTRODUO

Compostos fenlicos pertencem classe de compostos que inclui
diversidade de estruturas simples e complexas, com pelo menos um anel
aromtico no qual, ao menos um hidrognio substitudo por um grupamento
hidroxila (SIMES et al, 1999) (figura 1).

Figura 1: Estrutura benznica (fenlica) C6 com grupamento hidroxila (OH)

214
1.1. Biossntese dos compostos fenlicos
Sua origem biossinttica est relacionada a duas rotas biogenticas: a via
do cido chiqumico (carboidratos) e via do acetato-malato (malonil-CoA e acetil-
CoA) (figura 2) (MANN, 1996).

215

216
Figura 2: Rota biossinttica resumida nos vegetais superiores dos compostos
fenlicos, adaptado de CARRAPIO (1998).

217

Figura 2: A fenilalanina transformada pela PAL (phenylalanine ammonia lyase) em cido
cinmico que sofre hidroxilao formando o cumrico que se une a trs molculas de malonato,
ativados por acetil coenzima A (Acetil-CoA), formando respectivamente cumaril-CoA e malonil-
CoA, que se condensam em estrutura ativada que servir de substrato a ao da enzima chalcona
sintase, originando os flavonis como kampeferol e quercetina.
Quercetina
PAL

218
1.2. Classificao, distribuio e propriedades dos compostos fenlicos
a. Classificao
So classificados de acordo com o tipo de esqueleto principal (C6), que
constituir o anel benznico e com a cadeia substituinte (CX) (figura 1). Assim,
por exemplo, os fenis simples e as benzoquinonas C6; os flavonides e
isoflavonides C6-C3-C6 (figura 3 a); taninos hidrolisveis (C6-C1)n e
taninos condensados (C6-C3-C6)n (figura 3 b e c) (SIMES et al, 1999).
Figura 3: Estrutura principal de flavonides (a) e estruturas de taninos
hidrolisveis cido elgico, cido glico (b) e taninos condensados
procianidina (c).

Fonte: QUEIROZ et al, 2002.

(b)

(b)

Proacianidina (c)

219
Outra classificao est relacionada com a ocorrncia no reino vegetal dos
compostos fenlicos, assim, so amplamente distribudos como os derivados de
cidos benzicos e de cidos cinmicos, cumarinas, flavonides, de polmeros
(taninos e ligninas) ou so de distribuio restrita como fenis simples,
antraquinonas, xantonas, naftoquinonas (SIMES et al, 1999).

b. Distribuio
Compostos fenlicos esto amplamente distribudos em vegetais e em
microorganismos (COSTA & PROENA DA CUNHA, 2000).
Dentre os compostos fenlicos pertencentes ao metabolismo secundrio
dos vegetais encontram-se estruturas como cidos fenlicos, dos derivados de
cumarina, pigmentos hidrossolveis, ligninas, taninos, e ainda fazem parte de
protenas, alcalides e terpenides (PROENA DA CUNHA et al, 2003).
Os derivados do cido benzico so amplamente encontrados nas
gimnospermas e angiospermas. O cido glico ocorre em plantas lignificadas, as
cetonas fenlicas tem distribuio restrita, e os derivados do cido cinmico
possuem ampla distribuio, podendo ser encontrados como steres livres ou
heterosdeos (SIMES et al, 1999).
Os steres de cido cafico so marcadores taxonmicos em Lamiaceae. Os
fenis simples (fenol, pirocatecol, resorsinol e floroglucinol) tm distribuio
restrita, exceto a hidroquinona, presente em diversas famlias botnicas. Ainda,
so raramente encontrados em bactrias, algas e fungos, mas esto presentes
em lquens depsdeos com importante valor farmacutico (SIMES et al, 1999).

220
c. Propriedades
Contribuem no sabor, odor e colorao de diversos vegetais sendo muito
usados, os compostos fenlicos, como flavorizantes (aldedo cinmico e vanilina)
e corantes na indstria alimentcia, na cosmecutica (PROENA DA CUNHA et al,
2003).
Enfatizam-se, tambm a atividade antioxidante dos derivados fenlicos (Ilex
paraguariensis erva mate, Camellia sinensis ch, dentre outros) e a atividade
antibacteriana, antiviral e antifngica dos steres do cido cafico (Echinaceae
purpurea, Plantago major) (SIMES et al, 1999).
Nos vegetais ressaltam-se na defesa a herbivoria, na inter-relao entre
animal-vegetal; na inibio da germinao de sementes, do crescimento de
fungos e em alelopatia. HARBORNE (1985) enfatiza a importncia marcante dos
fenilpropanides como supressores do apetite de insetos.

1.3. Flavonides e Taninos
1.3.1. Flavonides e Flavonis
Os flavonides so compostos fenlicos que possuem 15 tomos de
carbono em seu ncleo fundamental, constitudo de duas fenilas ligadas por uma
cadeia de trs carbonos entre elas (C6-C3-O2-C6) (figura 3a). Nos compostos
tricclicos, as unidades so denominadas ncleos A, B, C e os tomos de carbono
recebem numerao com nmeros ordinrios nos ncleos A e C, e os mesmos
nmeros seguidos de linha () no ncleo B (figura 3a) (SIMES et al, 1999).

221
Figura 3 a Estrutura e numerao bsica de flavonides

Flavonides podem ser encontradas na forma aglicosilada, como, por
exemplo, a quercitina, naringenina ou ainda miricetina (figuras 4a, 4b e 4c), porm
mais freqente encontr-las no reino vegetal na forma glicosilada, unidas a
molculas de acares como a ramnose, rutinose (03 molculas de glicose)
(figura 5) ou ainda possvel mistura de glicosdeos, como a rhamno-glucosdeos,
formando respectivamente os derivados flavonides glicosilados (SPANOS &
WROLSTAD, 1992).

222
Figura 4: Estruturas qumicas de Flavonides. A. Quercetina, B. Naringerina, C.
Miricetina.

a Quercetina (Flavonol)
b Naringerina (Flavanona)
c Miricetina (Flavonol)

223
Figura 5: Estrutura qumica de flavonides heterosdeos (C e O )
a Quercetina 3-O-glicosdeo

b Isovitexin (flavona glicosdeo)

1.3.1.1. Biossntese de flavonides
Os flavonides so biossintetizados a partir da via do acetato e chiquimato.
As etapas da biossntese de flavonides iniciam-se com o metabolismo de
fenilpropanides. A fenilalanina (figura 6a) passa por desaminao pela enzima
phenylalanine ammonia lyase ou fenilalanina amnia liase (PAL) formando cido
cinmico (figura 6b) (J ONES, 1984). As vias subseqentes envolvem reaes de
hidroxilao do cido cinmico (SEYFERT, 1982) em p-Cumaril que origina p-
Cumarato-CoA que por meio da enzima p-Cumarato-CoA ligase forma p-Cumaril-
SCoA que condensa com trs unidades C
2
(Acetil-CoA) por meio da Chalcona
sintase produz Chacona que precursora de isoflavanonas; flavononas;
flavanonis; flavonas; flavonis; catequinas e antocianidinas (figura 7).

Glicona

224
Figura 6: Estruturas da fenilalanina (6a) e do cido cinmico (6b) e reao de
desaminao da PAL

Fenilananina (a) PAL cido cinmico (b)

Figura 7. Representao esquemtica simplificada da biossntese de flavonides
(PEDRIALI et al, 2005).

NH
3
cido fenolpirvico Fenilalanina
cido Cinmico

225

1.3.1.2.Classificao de flavonides
Flavonides tm particularidades no que tange aos tipos de ligaes,
quantidades de grupos hidroxilas, presena ou no de grupos cetonas e so
essas caractersticas estruturais que determinam a sua classificao (SIMES et al
1999) (figura 8)
Flavonol (2-fenil-benzo-alfa-pirona)
Quercetina
UDP-Glicose
Rutina
UDP-L-Ramnose Quercetina 3-glucoside

226
Figura 8: Estruturas qumicas dos principais flavonides

a. Flavonas e Flavonis e seus heterosdeos (O e C-Heterosdeos)
So compostos que possuem, na posio C3, hidroxila (OH), sendo
freqentemente oxigenados, substitudos com hidroxilas e ou metoxilas ou ainda,
acila, C-metila, metileno, pirano, dentre outras. Em flavonas, no ncleo
fundamental R=H, e em flavonis R=OH. A maioria das flavonas e flavonis
identificadas em plantas est sob a forma conjugada, ou seja, ligada a um ou
mais acares unidos aos grupos hidroxilas por uma ligao hemicetal facilmente
destruda por hidrlise cida.
Suas cores nos vegetais variam do branco ao amarelo, sendo identificados
em todo reino vegetal (quadro 5). Em flavonas os compostos mais abundantes
so a Apigenina e Luteolina. Em flavonis so a quercetina, miricetina, canferol
(figura4, quadro 1).
Flavona Antocianidina Isoflavona
Flavonona Flavanol Flavonol

227
Os heterosdeos constituem grupo importante de compostos orgnicos,
produzidos, em geral, pelo reino vegetal e que, pela ao dos cidos, bases ou
enzimas, se desdobram numa parte acar e a outra no acar (aglicona).
Essas partes esto ligadas entre si pelo intermedirio do tomo de carbono
anomrico do acar (SIMES et al, 1999).
Todos os heterosdeos possuem em comum a caracterstica de, por
hidrlise, se desintegrarem em um acar e a poro aglicona (genina). So,
portanto, carboidratos ligados a no-carboidratos (aglicona). A aglicona que
determina, geralmente, a ao do heterosdeo (BRUNETON, 1995).
Os heterosdeos mais difundidos na natureza so os O - heterosdeos, nos
quais, a parte acar a aglicona, que so normalmente ligadas pela funo
acetal. Encontram-se, todavia, igualmente N - heterosdeos, S - heterosdeos e C
- heterosdeos nos quais, o carbono anomrico do acar est unido aglicona
por um tomo de nitrognio (azoto), ou um tomo de enxofre ou um tomo de
carbono (por exemplo, casimiroedine (N - heterosdeo), sinigrina (S - heterosdeo)
e alona (C - heterosdeo). A aglicona est s vezes ligada ao acar pela funo
ster (COSTA, 2000).
Em geral, os heterosdeos so compostos slidos, incolores e constituem
substncias de reserva dos organismos vegetais ou atuam como estimulantes. A
maioria dos heterosdeos tem aplicaes teraputicas. Possuem gosto muito
amargo, e so classificados de acordo com a poro genina em: Glicosdeos
alcolicos - genina lcool; Glicosdeos cianogenticos - liberam cido ciandrico
quando hidrolisados; Glicosdeos esterides - genina esteride; Glicosdeos
antraquinnicos - genina antraquinona (C
6
H
4
(CO)
2
.
C
6
H
4
) (OLIVEIRA et al., 1991).

228
Os primeiros heterosdeos isolados eram produtos condensados da
glicose, motivo pelo qual foram chamados de glicosdeos; termo depois
generalizado aos heterosdeos e hoje, reservado somente queles derivados da
glicose (EVANS & TREASE, 1996). Reconheceram-se vrios compostos da natureza
anloga, mas derivados de outras oses designados de galactosdeos,
ramnosdeos (TYLER et al, 1997). So denominados, de acordo com o nmero de
molculas de acar presente em sua estrutura como oligo-heterosdeos ou poli-
heterosdeos.
Nos flavonis, os heterosdeos, contm a poro acar ligada a poro
no-glicdica (genina ou aglicona), que neste caso pigmento. Entre os flavonis
heterosdeos tm-se 3-rutinosdeo quercetina (rutina) (figura 9) e 7-glicosdeo
luteolina.

Quadro 1: Estrutura qumica de flavonas e flavonis

Fonte: SILVA, S et al (2003)

229
Figura 9: Estrutura qumica da Rutina (3-rutinosdeo quercetina).

Fonte: PubChem Substance Summary, 2006

b. Di-hidroflavonides (Flavanonas e Flavanonis)
As flavanonas so caracterizadas pela ausncia da dupla ligao
(olefnica) nos carbonos 2 e 3, possibilitando o posicionamento do anel B em
posio R ou S (SILVA, S et al, 2003). Tambm caracterizado pela ausncia de
hidroxila na posio 3 (quadro 2). As flavanonas so intermedirios biossintticos
da maioria das classes de flavonides. Podem possuir sabor amargo ou doce,
devido as configuraes esteroqumicas, agindo como defesa a herbivoria e ao
mesmo tempo como alimento (SIMES et al, 1999).
Quadro 2: Estrutura qumica de Flavanonas:


230
c. Flavanas, Leucoantocianidinas e proantocianidinas
Esses compostos fazem parte de uma classe de flavonides, junto aos
biflavonides e mais recentemente os isoflavonides, nos quais e possvel
encontrar estruturas oligomerizadas. Caracterizadas pela ausncia de ligao
olefnica entre os carbonos 2 e 3, e tambm da hidroxila na posio 3 (quadros 3
e 5) (SIMES et al, 1999).

Quadro 3: Estrutura qumica das flavanas


Isoflavonides so caracterizados por uma cadeia arila-C3-arila, mais do
tipo difenil-1,2-propano (figura 10 quadro 5). Os substituintes mais comuns so
os grupamentos hidroxilas, metoxilas e metilenodioxila. Possuem distribuio
taxonmica restrita, ocorrendo em Fabaceae. Biogeneticamente so formados via
chaconas. Distribuem-se em isoflavonas, isoflavononas, pterocarpanos,
isoflavanas, cumestanos (Costa, 2000).
Nos vegetais comportam-se como fitoalexinas substncia produzida pela
planta em resposta a infeco por algum agente patognico. As propriedades
biolgicas mais importantes so a atividade estrognica (isoflavona e
cumestanos), antifngica e antibacterianas (fitoalexinas) e as propriedades
inseticidas (rotenides) (SIMES et al, 1999).

231
Figura 10: Estrutura qumica da Isoflavona

d. Chalconas
O termo chacona utilizado na caracterizao da famlia de compostos
que possue o ncleo fundamental o 1,3-diarilpropano, modificado pela presena
de ligao olefnica, de grupamento cetona e ou de grupo hidroxila. Caracterstica
marcante desse grupo possuir pigmentao amarela que passa a vermelha em
meio alcalino. As cores tm importante papel em sistemas ecolgicos, pois esto
implicadas na polinizao por insetos e pssaros (quadro 4 e 5).
Quadro 4: Estrutura qumica da Chaconas

1.3.1.4 Propriedades Biolgicas
a. Pigmentao vegetal
As antocianinas (figura 11) so utilizadas pelas plantas na formao das
cores, sendo o glicosdeo delfinina conhecido como malonilawobanina,
responsvel pela colorao das flores azuis das angiospermas (Salvia uliginosa,
Labiatae; Nymphaea caerulea, Nymphaeaceae). Essa colorao formada
Nome R2 R3 R4 R3 R4

Marena OH OH O-glic OH OH
Okanina OH OH OH OH OH

232
quando a delfinina, ou seus derivados, complexa-se com o copigmento do tipo
flavona e com metais catinicos que promovem a emisso de luz caracterstica
(quadro 5).
Algumas espcies vegetais tm outro flavonide, a cianidina, que permite
coloraes do vermelho at o magenta, como ocorre em plantas como as
Rosaceae (GOTTLIEB, 1982; KONDO et al., 1992). Ainda destaca-se a cor vermelha
prpura caracterstica das orqudeas, onde o flavonide (cianidina, glicosdeo
peonidina) associa-se a copigmentos e a metais (FIGUEIREDO et al., 1999;
BLOOR;1998).

Figura 11: Antocianinas (a) e Malonilawobanina (delfinina) (b)

Quadro 5: Principais sub-classes de flavonides e suas coloraes
Sub- Classes Cor Flavonides representativos
Antocianidina Azul, vermelho e violeta Cianidina
Flavanol Incolor
Amarelo
Catequinas, Epicatequinas
Procianidina
Flavonas Amarelo claro Apigenina, Luteolina
Flavonol Amarelo claro Quercetina, Rutina, Miricetina
Isoflavona Incolor Genistena, Diazena
Flavanona Incolor, amarelo Hesperidina, naringerina
Fonte: ACKER et al, 1996
a b

233
b. Proteo radiao UV-B
A radiao ultravioleta B (280-315 nm) a faixa do espectro solar de
menor comprimento de onda e maior energia. Ao incidir nas folhas, a radiao
UV-B absorvida pelos pigmentos complexos formados pelos flavonides, que,
de modo geral, absorvem na mesma regio fornecida pelo UV-B, funcionando
assim, como filtro e evitando que a radiao atue sobre outras molculas
celulares importantes, como o DNA, modificando-o e levando-o, a formao de
clulas defeituosas (HARBORNE et al, 2000). Gentipos mais resistentes aos danos
da radiao UV-B promovem aumento nas snteses de flavonides e de outros
polifenis, como flavonas e glicosdeos flavonnicos.
H evidncias que plantas submetidas radiao UV-B artificial promovem
mudanas nas rotas sintticas dos flavonides, alterando a sua concentrao nas
clulas epidrmicas (Pinus silvestris, Oryza sativa), de folhas cerosas
(Gnaphalium luteo-album), folhas pilosas (Quercus ilex) e talos (Marchantia
polymorpha) (SILVA, S et al, 2003).

c. Proteo antimicrobiana
Os flavonides so os agentes constitutivos que produziro as fitoalexinas
em resposta a ataques microbianos (GRAYER & HARBORNE, 1994; HARBORNE 1994)
atuando como antifngicos (Luteolina 7-(2-sulfaglucosdeo), antibacteriano
(5,7,2,6-tetrahidroxi-6-prenil-8-lavanduli-4-metoxiflavanona) e antiviral
(Quercitina-3-(2-galoilarabinopiranosdeo). Destacam-se os isoflavonides,
flavanas e flavanonas por possurem hidroxilas fenlicas que inibem o
crescimento das micelas, esporos e partculas virais. No entanto PICMAN et al.
(1995, 1986) afirmam que o aumento do nmero de substituintes hidroxilas,

234
metoxilas ou glicosilas provoca a diminuio da atividade do composto; exceto em
chalconas hidroxiladas que so mais efetivas, quanto maior o nmero de
hidroxilas, como foi demonstrado por GAFNER et al. (1996).

d. Interao Planta-animal
Os polifenis (flavanas polimricas, proantocianidinas, flavonas, flavonis
e isoflavonas) de baixo peso molecular tm funo de destaque na proteo
vegetal contra herbvora (insetos e animais) (HARBORNE,1995 e 1999).
Trs glicoflavonas a schaftosideo, isoschaftosideo e a neoschaftosideo,
foram isoladas de plantas de arroz e testadas como inibidores da ao de insetos
como o Niloparvatta lugens, tendo resultado na inibio da atividade de ingesto
da seiva (GRAYER et al., 1994). Em arroz, tambm, foi identificado que a flavanona
sacuranetina e o cido clorognico tm suas concentraes foliares aumentadas
em respostas infeco do nematide Ditylenchus angustus (PLOWRIGHT et al.,
1996). A sacuranetina, ainda, aumenta no excesso de radiao UV e de fungos,
sendo de vital importncia na proteo das plantas de arroz (DILLON et al., 1997).
Alguns gneros de insetos como Helicoverpa, Heliothis, Lymantria e
Trichoplusia, so pouco tolerantes a flavonides glicosilados, principalmente no
segundo estgio larval. BENINGER & ABOU-ZAID (1997) verificaram que extratos
purificados de Pinnus banksiana que continham flavonis glicosilados (rutina;
quercitina 3-glicosdeo), quando administrados na dieta de larvas promoviam
aumento da mortalidade e diminuio do crescimento.
Espcies de borboletas como a Danaus plexippus so dependentes da
presena de flavonides glicosilados encontrados em Asclepias curassavica
(Asclepiadaceae) na induo da ovoposio. O estmulo ovopositor devido aos

235
glicosdeos flavnicos derivados da quercitina 3-galactosideo (3-dirhamnosil
galactosdeo; 3-rutinosideo; 3- rhamnosil galactosideo) (HARIBAL & RENWICK, 1996
e 1998).
Ainda, na defesa contra a herbivoria, as procianidinas, podem se
condensar, em muitas formas, originando taninos (STEVENS et al., 1998). Segundo
LAWLER et al (1998) plantas como os Eucalyptus ovata e o Eucalyptus viminalis,
que servem de alimentos de ursos Koalas, mostraram a presena de polifenis
floroglucinol, macrocarpol G e jensenona, que esto relacionados as procianidinas
geradoras de taninos. Dietas artificiais com concentraes de cerca de 2% de
macropol G reduzem o consumo alimentar em cerca de 90%, indicando o carter
protetor dessa substncia herbivoria.

e. Propriedades farmacolgicas
Hoje, conhece-se cerca de 4.200 flavonides que desempenham os mais
diversificados funes biolgicas no organismo humano (PEDRIALI et al, 2005).
Flavonides possuem a capacidade inibir a xantina oxidase, enzima
responsvel pela oxidao de tecidos, sendo, portanto, capazes de inibir a
formao de radicais livres e o combater o envelhecimento precoce. A
capacidade de remoo de radicais livres dos flavonides pode prevenir
processos de estresse oxidativo, que causam morte celular como a degenerao
de neurnios e membranas celulares (Mal de Parkinson e Alzheimer) (SMITH et al,
1987; GIASSON et al., 2002; LIN et al, 2002) e de cncer devido aos danos
provocados pelos radicais s molculas de DNA (HALLIWELL, 1999) (figura 12).

236
Figura 12: Regies estruturais dos flavonides com alta atividade de seqestro
de radicais livres (PEDRIALI et al, 2005)

Alm disso, os radicais livres atuam como pr-oxidantes sobre as
lipoprotenas de baixa densidade (LDL), possibilitando a deposio e formao de
placas arteriosclerticas no endotlio, facilitada pela aderncia dos macrfagos
(DE VRIES et al., 1998). Foi demonstrado que certos flavonides tm a capacidade
de impedir que o LDL tenha modificao oxidativa, fornecendo assim proteo
contra riscos arteriosclertico (WHALLEY et al., 1990; MANGIAPANE et al., 1992;
RANKIN et al., 1993).
Ainda tambm foram relatados diversos efeitos biolgicos importantes
como antitumoral, antiulcerognica, anti-hemorrgicas, tratamento de doenas
circulatrias, hipertenso e cofator da vitamina C, atividade estrognica, atividade
antiinflamatria e muitas outras (MANTLE et al, 1999; DI CARLO et al, 1999;
HARBORNE & WILLIAMS, 2000; RAJ NARAYANA et al, 2001; SIMES et al, 1999).

237
1.3.2. Taninos
Taninos so compostos fenlicos de grande interesse econmico e
ecolgico estando presentes na maioria das plantas e podendo variar de
concentrao nos tecidos vegetais, dependendo da idade e do crescimento da
planta, da parte coletada, da poca ou, ainda, do local de coleta (TEIXEIRA et al,
1990; SIMON et al.,1999; LARCHER, 2000).
A palavra tanino largamente usada, particularmente em bibliografia
botnica, originalmente derivada do termo tanante, implicando que a matria-
prima vegetal curta couro a partir de peles (HASLAN, 1965; 1988).
A maioria dos compostos fenlicos no encontrada no estado livre na
natureza, mas na forma de steres ou de heterosdeos sendo, portanto, solveis
em gua e em solventes orgnicos polares. Tm peso molecular compreendido
entre 500 e 3000 Daltons, possuindo a habilidade de formar complexos insolveis
em gua com protenas, gelatinas e alcalides (MELLO et al, 2001). Ainda so
responsveis pela adstringncia de muitos frutos e produtos vegetais, devido
precipitao de glucoprotenas salivares, o que ocasiona a perda do poder
lubrificante (BRUNETON, 1995).
A ligao entre taninos e protenas ocorre, provavelmente, atravs de
pontes de hidrognio entre os grupos fenlicos dos taninos e determinados stios
das protenas. Na formao dessas ligaes necessrio que o peso molecular
dos taninos esteja compreendido entre limites bem definidos; se este
demasiadamente elevado, a molcula no pode se intercalar entre os espaos
interfibrilares das protenas ou macromolculas; se muito baixo, a molcula
fenlica se intercala, mas no forma nmero suficiente de ligaes que assegure
a estabilidade da combinao (BRUNETON, 1995).

238
Por serem fenlicos, os taninos so muito reativos quimicamente, formam
pontes de hidrognio, intra e intermoleculares. Um mol de taninos pode ligar-se a
doze moles de protenas; e com base nessa propriedade pode-se identificar
taninos por teste de precipitao de gelatinas (MELLO et al, 2001). Estes
compostos so facilmente oxidveis, tanto pelas enzimas vegetais especficas
quanto por influncia de metais, como cloreto frrico, o que ocasiona o
escurecimento de suas solues (SIMES et al, 1999).
No Brasil, vrias espcies so pesquisadas por suas propriedades
tanantes; entre as principais esto Stryphnodendron adstringens (Martius) Coville,
Dimorphandra mollis Benth., Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenam, Acacia
mearnssi De Wild, Psidium guajava L. e Myracrodruon urundeuva (Engl.) Fr. All.
(TEIXEIRA et al., 1990; BRANDO, 1992; RODRIGUES et al., 1992; MAGALHES et al.,
1997; CALDEIRA et al., 1998; SANTOS et al., 2002, MELLO et al, 2001).

1.3.2.1. Classificao dos taninos
Classicamente, segundo a estrutura qumica, os taninos so classificados
em dois grupos: hidrolisveis e condensados (figuras 3b e 3c).
Os taninos hidrolisveis consistem de steres de cidos glicos e cidos
elgicos (hexahidroxidifnicos) glicosilados (figura 3b), formados a partir do
chiquimato (HELDT, 1997), onde os grupos hidroxila do acar so esterificados
com os cidos fenlicos (VICKERY & VICKERY, 1981).
Os taninos elgicos so muito mais freqentes que os glicos, e provvel
que o sistema bifenlico do cido hexaidroxidifenlico seja resultante da ligao
oxidativa entre dois cidos glicos (BRUNETON, 1995).

239
Amplamente encontrados no reino vegetal, os taninos condensados ou
proantocianidinas so polmeros de flavan-3-ol e/ ou flavan-3,4-diol, produtos do
metabolismo do fenilpropanol (HELDT, 1997; HEIL et al, 2002).
As proantocianidinas, assim denominadas provavelmente pelo fato de
possurem pigmentos avermelhados da classe das antocianidinas, como cianidina
e delfinidina (figuras 10a e 10b) e tm rica diversidade estrutural, resultante de
padres de substituies entre unidades flavnicas, diversidade de posies entre
suas ligaes e a esteroqumica de seus compostos (BRUNETON, 1995).
MELLO & SANTOS (2001) ressaltaram ainda que a ocorrncia desses
compostos comum em angiospermas e gimnospermas, principalmente em
plantas lenhosas. Considerando a proporo da ocorrncia de taninos em famlias
das Angiospermas arranjadas de acordo ao sistema de classificao de
Cronquist, somente 4% de 228 espcies testadas por MOLE (1993) foram positivas
a taninos. Nas ordens Polygonales e Plumbaginales apenas uma nica famlia de
cada tem taninos, e em famlias de Caryophyllales tais compostos estavam
ausentes. Nas Moraceae, os taninos presentes esto em quantidade insuficiente
a precipitao de protenas (MONTEIRO et al, 2005).

1.3.2.2. Propriedades biolgicas de taninos
a. Interao Planta-animal
Os vegetais defendem-se dos herbvoros por vrios caminhos, seja por
estruturas convencionais como espinhos ou plos urticantes ou ainda por
sofisticadas defesas qumicas como os taninos. Todos estes mtodos consomem
energia e os produtos fotossintticos so desviados do crescimento ou
reproduo em prol da defesa (MOORE, 1998).

240
Compostos fenlicos em vegetais, principalmente taninos, tm
reconhecidamente a funo de inibirem herbvoros, pois em altas concentraes,
frutos, folhas, sementes ou demais tecidos jovens tornam-se impalatveis aos
fitfagos e, ainda, combinado a algumas protenas, estes tecidos resistem
fortemente putrefao (VOLZ et al 2001).
Foi verificado por REYNOLDS et al. (1965) que macacos africanos tem alta
rejeio por plantas com alto teor de tanino, porm, alguns chipanzs possuem
tolerncia ao tanino, principalmente quando h maior nvel de acar livre, como
no caso de figos (Ficus carica L.), onde aps a ingesto dos frutos, as sementes
(taninos) so regurgitadas.
RODRIGUES et al (1992) e MAGALHES et al (1997) estudam o aspecto
antinutricional de cultivares com altos teores de taninos e sua resistncia a
pragas.
HELDT (1997) informa que em savanas sul africanas, as folhas de accia
so recursos alimentares do antlope kudu. Essas folhas contm taninos que,
em baixas quantidades, no afetam sua qualidade nutricional. Quando estas
rvores so predadas pelos antlopes, liberam o etileno, hormnio vegetal que
induzir, em cerca de 30 minutos, o aumento da sntese de taninos em rvores
vizinhas. Os nveis de taninos aumentam tanto que os mamferos podem chegar
morte se continuarem a alimentar-se dessas folhas.
Algumas plantas e animais usam estratgias na reduo adstringncia
causada por estes compostos (SCALBERT, 1991). Em frutos, a reduo da
adstringncia no parece ser devido diminuio das quantidades de taninos e
sim pela produo de molculas com afinidade por esses. Alguns animais, como

241
ratos com dieta rica em taninos, conseguem induzir liberao maior de protenas
salivares se protegendo contra o efeito da adstringncia.

b. Interao planta-ambiente
Estudos sobre variaes do teor de taninos mostram que h diferenas
quando as plantas so coletadas e analisadas em perodos distintos (TEIXEIRA et
al, 1990; SIMON et al, 1999; PANSERA et al, 2003).
Polifenis de baixo peso molecular e elagitaninos foram analisados em
HPLC, por SIMN et al (1999) em quatro espcies de carvalho (Quercus robus L.,
Q. petraea Liebl., Q. pyrenaica Wild. e Q. faginea Lam.) obtidos do extrato da
madeira. As coletas foram realizadas antes e depois de um ano e, durante este
processo, as concentraes de polifenis de baixo peso molecular aumentaram e
a concentrao de elagitaninos, dmeros e monmeros, diminuram, concluindo
que a sazonalidade natural afeta a composio qumica devido a processos de
desidratao e maturao. As modificaes qumicas foram similares nas quatro
espcies.
Os efeitos da poluio na atmosfera podem alterar a resistncia de
Tibouchina pulchra Cogn. herbivoria. O estudo de duas localidades no Sudoeste
do Brasil mostrou que as altas taxas de poluio atmosfrica induzem o aumento
da quantidade de nitrognio foliar e ao decrscimo de compostos fenlicos nas
folhas, devido, provavelmente, ao baixo ganho de carbono (FURLAN et al, 1999).
SALMINEN et al (2001) avaliaram a variao sazonal de taninos hidrolisveis
em folhas de Betula pubescens Ehrh; associados a herbivoria. O nvel mximo de
compostos fenlicos foi encontrado em folhas jovens e, durante a maturao, o
contedo decresce rapidamente, pois os taninos hidrolisveis tm padres de

242
sazonalidade distintos e as variaes de galoilglucose e elagitaninos so
especficas por possurem caminhos biossintticos prprios.

c. Propriedades farmacolgicas
O uso de medicamentos com taninos est relacionado suas propriedades
adstringentes, sendo empregada como antidiarrico, anti-sptico; cicatrizante na
proteo da pele e mucosas (MONTEIRO et al, 2005)
Ao precipitar protenas, os taninos propiciam efeito antimicrobiano e
antifngico. Ainda so hemostticos e, como precipitam alcalides, podem servir
de antdoto em casos de intoxicaes (BRUNETON, 1995).
Em processos de cura de feridas, queimaduras e inflamaes, os taninos
auxiliam formando camada protetora (complexo tanino-protena e/ ou
polissacardeo) sobre tecidos epiteliais lesionados (MELLO et al, 2001).
Provavelmente, devido habilidade de ligar-se s protenas e outras
macromolculas, os taninos tm atividades txicas.
AYRES et al (1997) verificaram que a rpida mortalidade de insetos tratados
com taninos condensados parece ser devido atividade txica destes compostos
e no pela inibio da digestibilidade. Associa-se a alta toxicidade ao maior peso
da molcula.
Outro mecanismo de toxicidade com taninos deve-se ao fato desses
complexarem-se com facilidade a ons metlicos. Sistemas biolgicos, incluindo
microrganismos, necessitam de ons metlicos como cofatores enzimticos
(MONTEIRO et al, 2005).
Os taninos so considerados nutricionalmente indesejveis, pois precipitam
protenas, inibem enzimas digestivas e afetam a utilizao de vitaminas e

243
minerais podendo, ainda, em alta concentrao, desenvolver cncer de boca
(mucosa) e esfago (CHUNG et al, 1998; SINGH et al, 2001).
Vrias doenas degenerativas como cncer, esclerose mltipla,
arteriosclerose e o prprio processo de envelhecimento esto associados a altas
concentraes intercelulares de radicais livres. Taninos, tambm, atuam como
captadores de radicais livres, os quais interceptam o oxignio ativo formando
radicais estveis (MELLO et al, 2001).
CHUNG et al (1998) hipotetizam que os taninos tm duplo efeito devido ao
efeito quimiopreventivo contra carcinognese ou antimicrobiano e aos efeitos
carcinognico, hepatotxico ou antinutricionais. A atividade anticarcinognica
evidenciada por CHUNG et al (1998), que ressaltam que os japoneses consomem
o ch verde (Camelia sinensis), rico em cido tnico e outros polifenis, em
grandes quantidades e o risco de cncer gstrico mostra-se baixo. Taninos das
espcies Quercus suber L. e Q. coccifera L. tem efeito gastroprotetor, variando
entre 66 e 91% (KHENNOUF et al, 2003). CHUNG et al (1998) relataram que nozes
contendo cerca de 25% de taninos podem ser responsveis pela alta incidncia
de cncer de esfago em determinada localidade dos EUA, onde pessoas
comumente as consomem aps o almoo.
Molculas de taninos esto sendo testadas com a inteno de se
descobrir algum frmaco eficiente contra o vrus da AIDS (HIV) (KILKUSKIE et al,
1992; CHUNG et al, 1998). KILKUSKIE et al (1992) observaram que galotaninos
possuem atividade inibitria somente em concentraes txicas, elagitaninos e
taninos condensados inibiram fracamente a replicao viral e os taninos
complexos mostraram potente atividade contra a replicao do HIV. Concluram

244
que a atividade anti-HIV exibida por taninos devida inibio da transcriptase
reversa, dificultando assim a replicao viral.
SCALBERT (1991) relata que taninos condensados e hidrolisveis no tm
diferenas significantes frente a fungos e bactrias, visto que o efeito da
toxicidade relacionado estrutura molecular do tanino ainda desconhecido.
Muitas bactrias so sensveis aos taninos, dentre elas Staphylococcus
aureus, Streptococcus pneumonia, Bacillus anthracis e Shigella dysenteriae e, em
concentraes mnimas (0,5 g/L), o fungo Fomes annosus tem seu crescimento
inibido (CASTRO et al, 1999).
NISHIZAWA et al (1990) demonstraram significante atividade bactericida do
decocto da raiz de Nuphar variegatum Durand contra microorganismos
patgenos. Relataram que, por sculos, o rizoma e as razes foram usados na
medicina popular por suas propriedades afrodisacas, hemostticas, adstringentes
e sedativas. O rizoma, em especial, empregado na cura de infeces diversas e
o decocto da raiz no tratamento de infeces dos olhos, garganta e dores
internas. A anlise cromatogrfica (HPLC) do extrato aquoso da raiz dessa planta
evidenciou dois galotaninos e dois elagitaninos, sendo reconhecidos por
nupharina A e nupharina B.

245

2. OBJETIVOS

Avaliar metodologias de extrao do flavonide rutina em frutos e folhas
de Dimorphandra mollis Benth., a fim de proporcionar agregao de
valor comercial e qualitativo aos coletores/ moradores das regies de
Cerrado.
Desenvolver nova tecnologia que permita aumento da extrao de
compostos fenlicos em Dimorphandra mollis Benth., especialmente
dos flavonides rutina e quercetina, compostos farmacologicamente
ativos, a fim de agregar maior valor financeiro aos coletores da espcie.
Identificar e quantificar os teores de compostos fenlicos,
especialmente os flavonides rutina e quercetina em Dimorphandra
mollis Benth.
Analisar o desenvolvimento, crescimento e os compostos do
metabolismo secundrio de plntulas jovens de Dimorphandra mollis
Benth. mediante o uso de preparados homeopticos.
Relacionar o uso de preparados homeopticos a produo de
compostos fenlicos e de flavonides em Dimorphandra mollis Benth.

246
Comparar os teores de compostos fenlicos e flavonides em folhas e
frutos de plantas adultas de Dimorphandra mollis Benth. coletados no
Cerrado em reas do norte de Minas.
Confrontar os teores de compostos fenlicos e flavonides em folhas e
frutos de plantas adultas de Dimorphandra mollis Benth. coletados em
reas de cerrado do norte de Minas e em plantas cultivadas em Viosa,
em ambiente protegido (telado) mediante tratamentos homeopticos.
Identificar e separar por meio de cromatografia em camada delgada,
grupos especficos de compostos farmacologicamente ativos em
Dimorphandra mollis Benth. e em seus subprodutos (p de frutos,
folhas, frutos, sementes).

247

3. MATERIAIS E MTODOS
3. 1. Obteno das amostras
3.1.1. Amostras de campo
Folhas totalmente expandidas e frutos no primeiro estdio de maturao
(totalmente verdes) (figuras 1 e 2) de plantas adultas de Dimorphandra mollis
foram coletados no ms de abril/ maio de 2006, no Cerrado do norte de Minas, na
macro-regio de Montes Claros por meio de podo/ ou tesoura de poda. As
coordenadas de campo foram obtidas em GPS, constituindo doze tratamentos,
com quatro repeties (TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 e TRF-MOC 01 a TRF-MOC
12), totalizando 96 amostras (Anexo 1/ figura 3).
Figura 1: Folhas totalmente expandidas de Dimorphandra mollis.

Fonte: arquivo pessoal

248
Figura 2: Frutos no primeiro estdio de maturao de Dimorphandra mollis.


3.1.2. Amostras cultivadas
Frutos de plantas matrizes de D. mollis foram coletados em Montes Claros,
nos meses de agosto a outubro de 2005. Aps a secagem natural (luz solar, a
temperatura ambiente mdia de 35
0
C), os frutos foram abertos manualmente
(figura 4), selecionadas as sementes colocadas em sacos de plsticos e em papel
Kraft e transportadas ao Departamento de Fitotecnia da Universidade Federal de
Viosa.
Figura 4: Frutos e sementes de D. mollis


249
3. 2. Seleo e Obteno dos tratamentos
3.2.1. Amostras de campo
Os tratamentos TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 e TRF-MOC 01 a TRF-MOC
12 foram armazenados em sacos plsticos e transportados ao Laboratrio de
Melhoramento Vegetal, do Departamento de Fitotecnia da Universidade Federal
de Viosa onde foram identificados, pesados, armazenados em embalagens de
papel Kraft, dispostos em bandejas em estufa de ventilao forada a temperatura
de 38
o
C at peso constante.

3.2.2. Amostras cultivadas
As sementes selecionadas foram pesadas em balana analtica (Toledo
Mettler) e separadas em 16 tratamentos (25 sementes por repetio) com 4
repeties (TR-VIC 01 a TR-VIC 16), no Laboratrio de Melhoramento Vegetal.
Em seguida, procederam-se a embebio, germinao e avaliao do
crescimento (padres fitotcnicos) das sementes/ plntulas. Os medicamentos e
preparados homeopticos adotados foram:
01 gua destilada;
02 gua destilada 6 CH;
03 gua destilada 12 CH;
04 Phosphorus 6 CH;
05 Phosphorus 12 CH;
06 Cyrtopodium 1D;
07 Kali phosphoricum 6 CH;
08 Sulphur 6 CH;
09 Sulphur 12 CH;

250
10 Etanol 70% 6 CH
11 Etanol 70% 12 CH
12 Carbo vegetabilis 12 CH;
13 Caryocar brasiliensis (Pequi) 6 CH;
14 Caryocar brasiliensis (Pequi) 12 CH;
15 Dimorphandra mollis fungi 6 CH;
16 Dimorphandra mollis fungi 12 CH.

3.3. Conduo do experimento
3.3.1. Amostras de plantas cultivadas
Na embebio os tratamentos foram dispostos em bqueres, com 10 mL de
gua destilada e 1mL (20 gotas) de preparados homeopticos, em delineamento
inteiramente casualizado. A aplicao dos tratamentos homeopticos foi feita em
duplo-cego. Em seguida, as sementes dos tratamentos TR-VIC-01 a TR-VIC-16
foram novamente pesadas em balana analtica (Toledo Mettler), distribudas em
64 caixas gerbox (16 tratamentos com 4 repeties), previamente preparadas,
procedendo-se a incubao dos tratamentos em BOD temperatura de 35
o
C,
com fotoperodo de 12 horas, por 21 dias. Durante a germinao, foram
consideradas sementes germinadas, aquelas que emitiram radcula primria de 4
mm, conforme critrio adotado por DICKIE & SMITH (1995).
Aps a germinao procederam-se a contagem das sementes germinadas
que foram transferidas a vasos de 2 L com substrato constitudo de 2/3 de solo
proveniente da rea do Tiro de guerra, Viosa (anexo 1) e 1/3 de areia;
identificados por tratamento (duplo-cego) e distribudos inteiramente ao acaso, em

251
casa de vegetao telada nas dependncias do Departamento de Fitotecnia, da
Universidade Federal de Viosa.
Acompanhou-se o desenvolvimento das plntulas, avaliando nmero de
folhas, espessura/ dimetro e altura do caule por 63 dias. A cada sete dias foram
reaplicados nos tratamentos TR-VIC-01 a TR-VIC-16, os devidos preparados
homeopticos.
Depois de 65 dias, as plantas dos tratamentos TR-VIC-01 a TR-VIC-16 foram
coletadas, identificadas, pesadas em balana analtica (Micronal B200),
armazenadas em embalagens de papel Kraft, dispostas em bandejas em estufa
de ventilao forada temperatura de 38
o
C at peso constante.

3.4 Manipulao dos Preparados homeopticos
A manipulao dos preparados homeopticos foi feita de acordo com o
Manual de Normas Tcnicas da Farmcia Homeoptica (ABFH, 2003) e
Manipulao de Preparados Homeopticos (RODRIGUES-DAS-DRES, ANDRADE &
CASALI, 2007).

3.5 Aplicao dos preparados homeopticos
3.5.1 Embebio e Germinao
Na embebio das sementes dos tratamentos TR-VIC-01 a TR-VIC-16,
utilizou-se de 10 mL de gua destilada e 1mL (1000L = 20 gotas) dos
respectivos preparados homeopticos (1:10), por 24 horas. Em seguida, a gua
destilada/ homeopatia no embebida foi drenada e procedeu-se a germinao.
Durante o perodo de germinao (21 dias) no houve reaplicao dos
tratamentos homeopticos.

252
3.5.2 Plantas cultivadas
Nos tratamentos TR-VIC-01 a TR-VIC-16, a cada sete dias, foram
reaplicados os devidos preparados homeopticos sendo cada vaso regado com
100 mL de gua com 0,1 mL (100 L = 2 gotas) de preparado homeoptico
(1:1000).

3.6. Preparo das amostras
3.6.1. Preparo do extrato metanlico
Aps a secagem, pesou-se em balana analtica (Micronal B200) 400 mg
dos tratamentos TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12, TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12, TR-
VIC-01 a TR-VIC-16, todos com quatro repeties, que foram tratados com cerca
de 5 mL de metanol PA (Merck), por 24 horas. Em seguida, foram filtrados em
papel de filtro Reagen (R42, 9cm) e o extrato (5mL) armazenado em frascos de
10 mL transparentes, com tampa.

3.7. Triagem fitoqumica
3.7.1 Preparo dos extratos
O preparo dos extratos seguiu a metodologia de WAGNER et al (1996)
(esquema I Extratos 1, 2, 3, 4 e 5), onde foram elaborados extratos, em
condies favorveis identificao de compostos fenlicos como flavonides
(heterosdeos flavnicos), taninos; terpenos (leos essenciais), saponinas,
cumarinas, alcalides, antraquinonas (heterosdeos antracnicos) e cardiotnicos
(heterosdeos cardiotnicos).
Os extratos foram elaborados de folhas de plantas de D. mollis coletadas no
Cerrado do norte de Minas (TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12) constituindo, aps a

253
homogeneizao desses tratamentos, a amostra TRF-MOC e dos frutos (TFR-
MOC 01 a TFR-MOC 12) pelo mesmo procedimento, obteve-se a amostra TFR-
MOC. Das plantas cultivadas de D. mollis (TR-VIC 01 a TR-VIC 16) procedeu-se
idntica homogeneizao dos tratamentos originando a amostra TR-VIC; das
sementes provenientes de frutos de plantas matrizes de D. mollis, comps-se
amostra TRS-MOC; e ainda, dos frutos, aps secagem em estufa de ventilao
forada a temperatura de 40
0
C, moagem em moinho de facas, homogeneizao,
quarteamento e classificao do p obtido, teve-se a amostra TR-PO.
Assim, foram elaborados extratos de TF-MOC, TR-VIC, TRS-MOC, TFR-
MOC e TR-PO utilizados na identificao de flavonides, taninos; leos
essenciais, saponinas, cumarinas, alcalides, antraquinonas e carditnicos.

3.7.1.1.Plantas cultivadas
Em plantas cultivadas de D. mollis (TR-VIC 01 a TR-VIC 16) fez-se anlise
fitoqumica especial de flavonides e taninos, visando identificar a presena ou
ausncia de flavonides (rutina, quercetina) e taninos (cido tnico vermelho,
cido tnico branco).
De tal forma que foram elaborados extratos metanlicos conforme extrato 1
da metodologia de WAGNER et al (1996) (esquema 1) organizados em TR-VIC 01
a TR-VIC 16.

3.7.2 Execuo da triagem fitoqumica por Cromatografia em Camada
Delgada
A triagem dos compostos foi realizada por Cromatografia em Camada
Delgada (CCD) (figura 4) tendo como suporte (fase estacionria) placas

254
cromatogrficas do tipo (Merck GF 254, Alugram SilG UV 254, Polygram SilG UV
com espessura de 0,250 mm); como fase mvel solventes (Reagen, Sigma,
Merck, Synth) em diversas polaridades segundo WAGNER et al (1996), e
reveladores adequados (esquema 1). Os reagentes, fases mveis, reveladores
foram preparados segundo WAGNER et al (1996).
Nas anlises cromatogrficas foram avaliados os extratos TF-MOC, TR-
VIC, TRS-MOC, TFR-MOC e TR-PO e comparados aos Rfs de padres de
flavonides (rutina, quercetina), taninos (cido tnico); leos essenciais (eugenol,
terpenol, mentol, anetol); saponinas (saponina padro Merck); cumarinas
(cumarina padro Merck); alcalides (reserpina, quinina, estricnina, pilocarpina,
atropina, brucina); antraquinonas (antraquinona padro Merck, alona, emodina) e
carditnicos (digoxina, Digitalis), e ainda padro de cido clorognico. Todas as
placas cromatogrficas foram refeitas e re-analisadas com quadro repeties.
As placas cromatogrficas foram digitalizadas aps a revelao, analisados
os Rfs das amostras e dos padres, comparados e identificados quanto
presena ou ausncia dos compostos.

3.7.2.1 Plantas cultivadas
A triagem dos compostos foi realizada por Cromatografia em camada
delgada (CCD) (figura 4) tendo como suporte (fase estacionria) placas
cromatogrficas do tipo (Merck 60 GF 254, Alugram SilG UV 254, Polygram SilG
UV com espessura de 0,250 mm); como fase mvel solventes acetato de etila/
metanol (ACOET/MEOH - 75:25) (Reagen e Merck, respectivamente) segundo
WAGNER et al (1996), e reveladores soluo metanlica de cloreto de alumnio 5%
(AlCl
3
) (Reagen) na deteco de flavonides e vanilina sulfrica (vanilina/ H
2
SO
4
)

255
(Nuclear) em taninos (esquema 1). Os reveladores e fase mvel foram
preparados segundo WAGNER et al (1996).
Nas anlises cromatogrficas foram avaliados os extratos dos 16
tratamentos e suas 4 repeties (TR-VIC 01 a TR-VIC 16), analisados e
comparados aos Rfs de padres de flavonides (rutina, quercetina Sigma e
Merck) e de taninos (cido tnico branco e cido tnico vermelho CRQ e Vetec).
Todas as placas cromatogrficas foram refeitas e re-analisadas com trs
repeties; sendo, em seguida a revelao, digitalizadas, e por meio dos Rfs das
amostras e dos padres, identificados nos tratamentos (TR-VIC 01 a TR-VIC 16)
presena ou ausncia de rutina, quercetina e cido tnico.

Figura 4: Desenho esquemtico de Cromatografia em Camada Delgada

Fonte: RODRIGUES-DAS-DRES & CASALI In: Plantas Medicinais e Aromticas:
Controle de Qualidade. UFV, 2007.

256
ESQUEMA I: TRIAGEM FITOQUMICA Identificao dos compostos presentes
por Cromatografia em camada delgada (CCD) nos extratos 1, 2, 3, 4 e 5 (WAGNER
et al, 1996)
EXTRATO 1
0,5 g de p
5 mL de Metanol a 60 C
5 minutos
Filtrar
Extrato 1

leos essenciais Heterosdeos Antracnicos Flavonides
Terpenos Taninos

FM: DCM/ACOET(93:7) FM: ACOET/MEOH/H
2
O (100:17:13) FM: ACOET/MEOH(75:25)
FE: slica gel 60 F
254
FE: slica gel 60 F
254
FE: slica gel 60 F
254

REVELADOR: Vanilina/H
2
SO
4
REVELADOR:

KOH 5 % em Etanol REVELADOR: AlCl
3
/vanilina/H
2
SO
4

Padres: Terpenol Padres: Alona Padres: Quercetina
Eugenol Emodina Rutina
Mentol cido Tnico

257
EXTRATO 2.
2 g de p
10 mL ETOH 70%
Refluxo 10 min.
Filtrar
Evaporar a 5 mL
Extrato 2

Saponinas

FM: CHCl
3
/MEOH/H
2
O(60:30:4)
FE: slica gel 60 F
254
Revelador: Vanilina/H
2
SO
4
Padres: Saponina Merck

258
EXTRATO 3
1 g de p
10mL de MEOH
Banho-maria 30 min.
Filtrar
Evaporar
Extrato 3

Cumarinas

FM: ACOET/MEOH/GUA (100:17:13)
FE: slica gel 60 F
254
Revelador: KOH 5%

a 10% em MEOH

Padres: Cumarina Merck
Lapachol
Bergapteno

259
EXTRATO 4.
1 g de p
20 mL ETOH 50%
10 ML sol de acetato 10%
Refluxo 15 min.
Resfriar
Filtrar
Filtrado 1
cido actico (SR) pH=5
Funil de separao
Extrair 15mL de DCM (3X)
Na
2
SO
4
Evaporar
Resduo (1mL DCM/ ETOH 1:1)
Extrato 4

Cardiotnicos

FM: ACOET/ MEOH/ H
2
O (100:13,5:10)
FE: slica gel 60 F
254
Revelador: SbCl
3
Padres: Digoxina Merck
Digitalis

260
EXTRATO 5.
1 g de p
10 mL H
2
SO
4
0,05M
5 min.
Resfriar
Filtrar
Filtrado 1
1mL NH
4
OH conc.
Funil de separao
Diluir 10 mL de H
2
O
Extrair com ter
Na
2
SO
4
Filtrar
Evaporar
Resduo (0,25mL de MEOH)
Extrato 5

Alcalides

FM: ETOH/ MEOH/ H
2
O (100:13,5:10)
FE: slica gel 60 F
254
Revelador:

Dragendorff ou Iodo metlico

Padres: Estricnina, Brucina, Quinina, Reserpina, Atropina
dentre outros.

261
3.8. Quantificao de compostos fenlicos por doseamento
espectrofotomtrico
Determinou-se a concentrao de compostos fenlicos nos tratamentos
TR-VIC 01 a TR-VIC 16; TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 e TFR-MOC 01 a TFR-
MOC 12 de acordo com a metodologia de J AYAPRAKASHA et al (2001) e de
Singh et al (2001).
200 L dos extratos metanlicos dos tratamentos TR-VIC 01 a TR-VIC
16; TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 e TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12, foram
misturados com 1000 L do Reagente de Folin Ciocalteu (1:10) e com 800 L
de soluo carbonato de sdio a 7,5%. Procedeu-se homogeneizao dos
tratamentos, deixando-os em repouso a temperatura ambiente por 30 minutos
e em seguida as concentraes de compostos fenlicos foram medidas
quantitativamente em 765 nm em espectrofotmetro Shimadzu Modelo UV1601
(esquema 2) e os resultados expressos em g/mL de cido tnico.

3.8.1 Curva Padro
A curva padro de compostos fenlicos teve como substncia padro
cido tnico (CRQ). Pesou-se 100 mg de cido tnico e dilui-se com metanol a
80% (Merck), em balo volumtrico de 10 mL, obtendo soluo estoque (SE)
com 10 mg/ mL de cido tnico. Da soluo estoque (SE) retirou-se uma
alquota de 1mL e dilui-se com metanol 80%, em balo volumtrico de 100 mL
constituindo a soluo amostra (SA) com 0,1 mg/ mL ou 100 g/mL, da qual
foram retiradas alquotas de 100 L a 500 L, com as concentraes de 10 g
a 50 g, que foram misturados com 1100 L a 700 L do Reagente de Folin
Ciocalteu (1:10) e com 800 L de soluo carbonato de sdio a 7,5%.

262
Procedeu-se homogeneizao, deixando-os em repouso a temperatura
ambiente por 30 minutos e em seguida as concentraes de compostos
fenlicos foram medidas quantitativamente em 765 nm em espectrofotmetro
Shimadzu Modelo UV1601 (esquema 3) e os resultados expressos em g/mL
de cido tnico.

Esquema 2: Metodologia de quantificao de compostos fenlicos por
doseamento espectrofotomtrico.

Extratos metanlicos (200 L)
TR-VIC 01 a TR-VIC 16 (64 amostras)
TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 (48 amostras)
TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 (48 amostras)
1000 L de Folin Ciocalteau
800 L de Carbonato de sdio (7,5%)
Homogeneizar
30 minutos Temperatura ambiente
Cubetas espectrofotomtricas
ABSORBNCIA
760 nm

263
Esquema 3: Curva de calibrao de compostos fenlicos
CONCENTRAO DO PADRO DE CIDO TNICO (C
76
H
52
O
46
)

PM =1700
C= M onde: M=massa em mg;
V V =volume em mL.

100 mg (C= 100 mg/10ml = 10 mg/ mL)
q.s.p. de metanol 80% (MEOH 80%)
Balo volumtrico de 10 mL
Homogeneizar
SOLUO ESTOQUE - SE (0,1:10) =10 mg/ mL
Alquota 1 mL
99 mL de MEOH 80%
Homogeneizar
SOLUO AMOSTRA SA (10:100) =0,1 mg/ mL =100 g/mL
Alquotas

100L (10g) 200L(20 g) 300L(30g) 400L (40g ) 500L(50g)
(0,01 mg/ mL)

Alquotas de 100 L a 500 L de Soluo Amostra
1000 L de Folin Ciocalteau (q.s.p 2000 L)
800 L de Carbonato de sdio (7,5%)
Homogeneizar
30 minutos Temperatura ambiente
ABSORBNCIA
760 nm

264
3.9 Quantificao de flavonis por doseamento espectrofotomtrico
A concentrao de flavonis nos tratamentos TR-VIC 01 a TR-VIC 16;
TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 e TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 foi adaptada da
metodologia de J AYAPRAKASHA et al (2001) e de BUTLER et al (2002).
500 L dos extratos metanlicos dos tratamentos TR-VIC 01 a TR-VIC
16 e TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 foram misturados com 2500 L de soluo
de Vanilina 0,5% (Nuclear) em metanol (Merck) e cido clordrico 4% (HCl -
Reagen). Procedeu-se homogeneizao dos tratamentos, deixando-os em
repouso a temperatura ambiente, ao abrigo da luz, por 20 minutos e em
seguida as concentraes de flavonis foram medidas quantitativamente em
500 nm em espectrofotmetro Shimadzu Modelo UV1601 (esquema 4). De
forma similar, o branco foi preparado com 2500 L de soluo de Vanilina 0,5%
(Nuclear) em metanol (Merck) e 2500 L de cido clordrico 4% (HCl) (Reagen)
em metanol (Merck) em seguida as foi medido quantitativamente em 500 nm
em espectrofotmetro Shimadzu Modelo UV1601 (esquema 4). A concentrao
do branco foi subtrada dos tratamentos TR-VIC 01 a TR-VIC 16; TRF-MOC 01
a TRF-MOC 12 e TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 e os resultados expressos em
g/mL de rutina.
Os tratamentos TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 (frutos) foram analisados
com 200 L de extratos metanlicos e com 2500 L de soluo de Vanilina
0,5% (Nuclear) em metanol (Merck) e cido clordrico 4% (HCl). Procedeu-se
homogeneizao dos tratamentos, deixando-os em repouso a temperatura
ambiente, ao abrigo da luz, por 20 minutos e em seguida as concentraes de
flavonis foram medidas quantitativamente em 500 nm em espectrofotmetro

265
Shimadzu Modelo UV1601 (esquema 4), devido alta concentrao de
flavonis.

3.8.1 Curva Padro
A curva padro de flavonis teve como substncia padro rutina padro
Sigma Pesou-se 100mg de rutina e dilui-se com metanol a 70% (Merck), em
balo volumtrico de 10mL, obtendo-se a soluo estoque (SE) com 10 mg/mL
de rutina. Da soluo estoque (SE) retirou-se uma alquota de 1mL e dilui-se
com metanol 70%, em balo volumtrico de 100 mL constituindo a soluo
amostra (SA) com 0,1 mg/ mL ou 100 g/mL, da qual foram retiradas alquotas
de 100 L a 500 L, com as concentraes de 10 g a 50 g, que foram
misturados com 2500 L de soluo de Vanilina 0,5% (Nuclear) em metanol
(Merck) e cido clordrico 4% (HCl). Procedeu-se homogeneizao dos
tratamentos, deixando-os em repouso a temperatura ambiente, ao abrigo da
luz, por 20 minutos e em seguida as concentraes de flavonis foram medidas
(esquema 5) e os resultados expressos em g/mL de rutina.

3.9.2 Quantificao de flavonis em diversos solventes orgnicos
Na determinao e quantificao de flavonis em solventes orgnicos,
os extratos orgnicos foram preparados em duplicata, pesando-se 1 g de p de
frutos de D. mollis proveniente do tratamento TRPO. Aps a pesagem em
balana analtica (Micronal B200) e identificao dos tratamentos, transferiu-se
a tubo de ensaio, com aproximadamente 5 cm de dimetro e previamente
identificados.

266
Adicionou-se, em seguida, os 16 tratamentos que foram constitudos por
10 mL dos solventes Metanol e suas diluies (MEOH P.A.; MEOH 70%;
MEOH 50%); Etanol e suas diluies (ETOH; ETOH 70%; ETOH 50%); Acetato
de etila (ACOET); Acetato de etila/ metanol (ACOET/MEOH (75:25);
ACOET/MEOH (50:50); Acetato de etila e diclorometano (ACOET/DCM (50:50);
ACOET/DCM (25:75); Diclorometano ou cloreto de metileno (DCM); Acetona
(ACONA); Acetona e gua (ACONA/H
2
O (75:25); ACONA/H
2
O (50:50); e da
testemunha gua (H
2
O), organizados em TR-SOLV 01 A TR-SOLV 16.
TR-SOLV 01 MEOH
TR-SOLV 02 MEOH 70%
TR-SOLV 03 MEOH 50%
TR-SOLV 04 - ETOH 70%
TR-SOLV 05 ETOH 50%
TR-SOLV 06 ETOH
TR-SOLV 07 ACOET
TR-SOLV 08 ACOET/ MEOH 75:25
TR-SOLV 09 ACOET/ MEOH 50:50
TR-SOLV 10 ACOET/ DCM 50:50
TR-SOLV 11 ACOET/DCM 25:75
TR-SOLV 12 DCM
TR-SOLV 13 ACONA
TR-SOLV 14 ACONA/ H
2
O 75:25
TR-SOLV 15 ACONA/ H
2
O 50:50
TR-SOLV 16 gua destilada

267
Aps 24 horas, os tratamentos TR-SOLV 01 A TR-SOLV 16 foram
filtrados em papel de filtro Reagen R 42, 9cm. O resduo foi desprezado e o
extrato separado em 4 repeties (TR-SOLV 01 r1 a r4 at TR-SOLV 16 r1
a r4). De cada repetio retirou-se alquota de 500 L que foram misturados
com 2500 L de soluo de Vanilina 0,5% (Nuclear) em metanol (Merck) e
cido Clordrico 4% (HCl). Procedeu-se homogeneizao dos tratamentos,
deixando-os em repouso a temperatura ambiente, ao abrigo da luz, por 20
minutos e em seguida as concentraes de flavonis foram medidas
(esquema 4) e os resultados expressos em g/mL de rutina.

268
Esquema 4: Metodologia de quantificao de flavonis por doseamento
espectrofotomtrico

Extratos metanlicos (500 L)
TR-VIC 01 a TR-VIC 16 (64 amostras)
TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 (48 amostras)
TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 (48 amostras)
2500 L de Vanilina 0,5% em MEOH
2500 L de HCl 4% em MEOH
Homogeneizar
20 minutos Temp. ambiente Abrigo da luz (escuro)
ABSORBNCIA
500 nm

Branco
2500 L de Vanilina 0,5% em MEOH
Homogeneizar
20 minutos Temp. ambiente - Abrigo da Luz (escuro)
ABSORBNCIA
500 nm

269
Esquema 5: Curva de calibrao de flavonis

CONCENTRAO DO PADRO DE RUTINA
C= M onde: M=massa em mg; PM=610,5
V V =volume em mL.

100 mg (C=100 mg/10ml =10 mg/ mL)
q.s.p. de metanol 70% (MEOH 70%)
Homogeneizar
SOLUO ESTOQUE - SE (0,1:10) =10 mg/ mL
Alquota 1 mL
99 mL de MEOH 70%
Homogeneizar
SOLUO AMOSTRA - SA (10:100) =0,1 mg/ mL =100 g/mL
Alquotas

100L (10g) 200L(20 g) 300L(30g) 400L (40g ) 500L(50g)
(0,01 mg/ mL)

Alquotas de 100 L a 500 L de Soluo Amostra
2500 L de Vanilina 0,5% em MEOH (q.s.p)
Homogeneizar
20 minutos Temp. ambiente Abrigo da Luz (escuro)

ABSORBNCIA
500 nm

270
3.10. Avaliao e determinao do flavonide Rutina por HPLC
A concentrao de flavonol rutina nos tratamentos foi adaptada da
metodologia de OLIVEIRA et al (2001).
Os tratamentos TR-VIC 01 a TR-VIC 16; TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 e
TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 foram cromatografados em HPLC/ UV (Shimadzu
SPD 10AV), nas seguintes condies: coluna Novapak Water C18; 250 x 4.6
milmetros, tamanho da partcula 5 m, tendo como fase mvel metanol (Vetec
Espectrofotometria) e gua acidificada a pH 3,0 com cido fosfrico P.A.
(Vetec). A eluio foi feita por gradiente tendo como fase mvel metanol/ gua
1:1 (0 a 10 minutos) e metanol/ gua 7:3 (10 a 20 minutos), com trmino de
eluio em 25 minutos, dbito (fluxo) de 1ml/minuto, a 339 nm e injeo de 20
L.
Alquotas de 500 L dos tratamentos TR-VIC 01 a TR-VIC 16 e de TRF-
MOC 01 a TRF-MOC 12 diludas em 500 L de fase mvel (metanol:gua 1:1)
constituram os 20 L injetados na determinao de rutina nas amostras. Em
TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 , utilizou-se de 100 L diludos em 900 L de
fase mvel (metanol: gua 1:1). Aps o clculo da rea dos picos encontrados
em cada tratamento e de suas repeties (4) fez-se a integrao das reas
calculando a concentrao de rutina (g/ mL) devidamente multiplicada pelos
fatores de diluio e os resultados foram expressos em g/ mL de rutina por
tratamento.

3.10.1. Curva Padro
A curva padro de quantificao do flavonol rutina em HPLC teve como
substncia padro rutina (Merck) na concentrao de 5000 ppm em metanol a

271
70% (Merck) obtendo a soluo amostra (SA) da qual tomou-se alquotas nas
concentraes de 1250 ppm a 100 ppm, das quais 20 L foram injetados em
aparelho HPLC UV (Shimadzu SPD 10AV), nas mesmas condies descritas
nas anlises dos tratamentos TR-VIC 01 a TR-VIC 16; TRF-MOC 01 a TRF-
MOC 12 e TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 (OLIVEIRA et al, 2001).

3.11. Extrao e Processamento de rutina em extrato aquoso
Pesou-se em balana analtica (Micronal B200) 50 gramas de p de
Dimorphandra mollis que foram tratados com 250 mL de gua destilada a
temperatura de 60
o
C (Banho-maria Tecnal TE 184) em erlenmeyer de 500
mL, por 15 minutos, formando soluo de colorao marrom amarelada, em
seguida a preparao obtida foi filtrada em papel de filtro Reagen R42 e
aquecida ebulio em chapa aquecedora (Tecnal). Aps aquecimento por
cerca de 30 minutos ocorre a formao de precipitados (PPt-PO) que foram
filtrados em papel de filtro Reagen R42, transferidos com auxlio de esptula
metlica a placas de Petri colocadas em estufa (Fanen) a temperatura de 35
o
C,
at a secagem (peso constante). A gua usada na filtragem (gua-me)
aquecida foi imediatamente submetida temperatura de 8
o
C, em geladeira
convencional, por 60 minutos, onde houve a formao de cristais, que foram re-
filtrado (filtragens sucessivas) em papel de filtro Reagen R42 e colocado placas
de Petri em estufa (Fanen) a temperatura de 35
o
C, at a secagem (peso
constante).
Em seguida, calculou-se o rendimento da extrao e identificou-se o
precipitado (PPt-PO) por cromatografia em camada delgada (CCD) e doseou-
se os flavonides por espectrofotometria segundo a metodologia da FARM.

272
BRAS. IV (2003) (esquema 6) e concentrao calculada em percentual (m/ m)
de flavonides calculados como quercetina (C
15
H
10
O
7
).

Onde: A =absorvncia medida;
m =massa da droga (g);
Pd =determinao de gua (%).

A identificao de PPt-PO em CCD (figura 4) teve como suporte (fase
estacionria) placas cromatogrficas do tipo (Merck 60 GF 254, Alugram SilG
UV 254, Polygram SilG UV com espessura de 0,250 mm); como fase mvel
solventes acetato de etila/ metanol (ACOET/ MEOH - 75:25) (Reagen e Merck,
respectivamente), reveladores cloreto de alumnio (AlCl
3
) (Reagen) na
deteco de flavonides e vanilina sulfrica (vanilina/ H
2
SO
4
) (Nuclear) e
padres de rutina e quercetina (Sigma e Merck), segundo WAGNER et al (1996).

3.12. Extrao e Processamento de rutina em extrato metanlico
Pesou-se em balana analtica (Toledo Mettler) 150 gramas de p de
Dimorphandra mollis que foram tratados com quantidade suficiente de Metanol
P.A. a temperatura de 25
o
C em erlenmeyer de 1500 mL, por cerca de 168
horas, devidamente tampada e identificada, armazenada em capela exaustiva.
Aps esse perodo procedeu-se filtrao do extrato em papel de filtro Reagen
R42 (colorao amarelada), e em seguida fez-se transferncia a balo de
fundo redondo de 1000 mL (marca Bucchi) previamente pesado e procedeu-se
concentrao em evaporador rotativo (modelo FANEN). O resduo obtido foi
seco em estufa (Fanen) a temperatura de 35
o
C, at peso constante.
A=

A x 62500

50 x m x (100 Pd)

273
Aps a secagem, calculou-se o rendimento obtido na extrao e
identificou-se o extrato (TR-EXT) por cromatografia em camada delgada (CCD)
e doseou-se os flavonides por espectrofotometria segundo a metodologia da
FARM. BRAS. IV (2003) (esquema 6) e concentrao calculada em percentual
(m/ m) de flavonides calculados como quercetina (C
15
H
10
O
7
).

Onde: A =absorvncia medida;
m =massa da droga (g);
Pd =determinao de gua (%).

A identificao de TR-EXT em CCD (figura 4) teve como suporte (fase
estacionria) placas cromatogrficas do tipo (Merck 60 GF 254, Alugram SilG
UV 254, Polygram SilG UV com espessura de 0,250 mm); como fase mvel
solventes acetato de etila/ metanol (ACOET MEOH - 75:25) (Reagen e Merck,
respectivamente), reveladores cloreto de alumnio (AlCl
3
) (Reagen) na
deteco de flavonides e vanilina sulfrica (vanilina H
2
SO
4
) (Nuclear) e
padres de rutina e quercetina (Merck), segundo WAGNER et al (1996).
A=

A x 62500

50 x m x (100 Pd)

274
Esquema 6: Doseamento de flavonides segundo FARM. BRAS. IV (2003)
(adaptado de RODRIGUES-DAS-DRES & CASALI In: Plantas Medicinais e
Aromticas: Controle de Qualidade. UFV, 2007)

275
3.13 Processamento de dados e anlise estatstica
Os dados obtidos foram submetidos anlise de varincia e teste de
mdia (Dunnett, Tukey) a 5% de probabilidade, utilizando os programas
Sistema para Anlises Estatsticas (SAEG) e Gentica Quantitativa e
Estatstica Experimental VS (GENES).

276

4. RESULTADOS E DISCUSSO

4.1 RESULTADOS
4.1.1 Triagem fitoqumica nos tratamentos TF-MOC, TFR-MOC, TRS-MOC,
TR-VIC e TR-PO
Anlises cromatogrficas por camada delgada (CCD) dos flavonides
tendo como padres Rutina (Rf =0,54) e Quercetina (Rf =0,68), com fase
estacionria slica-gel (Merck GF 254, Alugram SilG UV 254, Polygram SilG UV
com espessura de 0,250 mm), fase mvel MEOH/ ACEOT (25:75) e revelador
AlCl
3
foram positivos nos tratamentos TF-MOC, TR-VIC,TR-PO e TFR-MOC e
negativo em TRS-MOC. Em TR-VIC no foram detectados outros flavonides,
em TF-MOC detectou-se flavonides com Rf =0,45 (figura 1); em TFR-MOC
com Rf =0,56; em TR-PO com Rf =0, 45 e Rf =0,78 (quadro 1, figura 1).
Em CCD de taninos com padro de cido tnico (Rf =0,65), com fase
estacionria slica-gel (Merck GF 254, Alugram SilG UV 254, Polygram SilG UV
com espessura de 0,250 mm), fase mvel MEOH/ ACEOT (25:75) e revelador
vanilina sulfrica (Nuclear) foram positivos nos tratamentos TF-MOC (Rf =
0,62), TR-VIC (Rf = 0,64), e negativo em TRS-MOC, TR-PO e TFR-MOC
(quadro 1).

277
Na anlise de leos essenciais (terpenos) por CCD utilizaram-se os
padres de Anetol (Rfs =0,85; 0,80; 0,69; 0,53); Mentol (Rf =0,69); Eugenol
(Rf = 0,62) e Terpinol (Rfs = 0,66, 0,80), com fase estacionria slica-gel
(Merck GF 254, Alugram SilG UV 254, Polygram SilG UV com espessura de
0,250 mm), fase mvel DCM/ ACOET (93:7) e revelador vanilina sulfrica
(Nuclear) foram negativos em todos os tratamentos TF-MOC,TR-VIC, TRS-
MOC, TR-PO e TFR-MOC (quadro 1).
Em heterosdeos antracnicos (antraquinonas, antronas) com
antraquinona padro Merck (Rfs =0,77; 0,48; 0,32), com fase estacionria
slica-gel (Merck GF 254, Alugram SilG UV 254, Polygram SilG UV com
espessura de 0,250 mm), fase mvel ACEOT/ MEOH/ H
2
O (100:17:13) e
revelador KOH 5% em ETOH foram negativos nos tratamentos TF-MOC, TR-
VIC (Rfs =0,80; 0,73; 0,43; 0,30); TR-PO (Rfs =0,43; 0,30); TFR-MOC (Rf =
0,45; 0,30) e TRS-MOC; (quadro 1, figura 2).
Em cumarinas, tendo como padro Cumarina Padro Merck (Rf =0,62),
Bergapteno Merck (Rf =0,73) com fase estacionria slica-gel (Merck GF 254,
Alugram SilG UV 254, Polygram SilG UV com espessura de 0,250 mm), fase
mvel ACOET/MEOH/GUA (100:17:13) e revelador KOH 5% em MEOH,
foram negativos em todos os tratamentos (quadro 1).
No foram detectados os alcalides Pilocarpina (Rfs=0,84; 0,79); Quinina
(Rf =0,66); Reserpina (Rfs =0,76; 0,68); Estricnina (Rf =0,37) e Atropina (Rf =
0,25) nos tratamentos TF-MOC (Rf =0,80); TR-VIC, TRS-MOC (Rf =0,84), TR-
PO (Rf =0,85) e TFR-MOC utilizando como fase estacionria slica-gel (Merck
GF 254, Alugram SilG UV 254, Polygram SilG UV com espessura de 0,250
mm), fase mvel ETOH/ MEOH/ H
2
O (100:13,5:10) e revelador iodo metlico e

278
to pouco saponinas com saponina padro Merck (Rf =0,66), utilizando como
fase estacionria slica-gel (Merck GF 254, Alugram SilG UV 254, Polygram
SilG UV com espessura de 0,250 mm), fase mvel fase mvel
CHCl
3
/MEOH/H
2
O(60:30:4) e revelador vanilina sulfrica (Nuclear).
Em anlise dos Heterosdeos cardiotnicos e dos padres de Lanatosdeo
C (Rf =0,50) e de Digitonina Merck (Rfs =0,77 e 0,11), fase estacionria
espessura de 0,250 mm), fase mvel fase mvel ACOET/MEOH/H
2
O
(100:13,5:10) e revelador vanilina sulfrica (Nuclear), os tratamentos TF-MOC;
TFR-MOC (Rf =0,50) e TR-PO (Rfs =0,50; 0,11) tiveram Rfs semelhantes ao
Lanatosdeo C e em TR-PO a Digitonina, no entanto, com intensidade de
colorao foi menos intensa, sendo identificados como fracamente positivo ().

279
Quadro 1: Perfil fitoqumico por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) em
folhas (TRF-MOC); frutos (TFR-MOC); p de frutos (TR-PO); sementes (TRS-
MOC) provenientes de Montes Claros e em plantas cultivadas (TR-VIC) de
Dimorphandra mollis.

TRATAMENTOS
PADRES Rf
TF-MOC TR-VIC TFR MOC TR PO TRS-MOC
0,68 + + + + -
FLAVONIDES
0,45 + + + + -
TANINOS 0,65 + + - - -
0,77 - - - - -
ANTRAQUINONA
0,48 - - - - -
0,85 - - - -
-
0,80 - - - -
-
0,69 - - - -
-
0,62 - - - -
-
LEOS
0,53 - - - -
-
0,84 - - - - -
0,76 - - - - -
0,68 - - - - -
ALCALIDES
0,66 - - - - -
0,77 - - - - -
0,50 - -
CARDIOTNICOS
0,11 - - - -
0,73 - - - - -
CUMARINA
0,62 - - - - -
Legenda: Positivo (+) valores de Rfs iguais ou muito prximos aos dos padres.
Negativo (-) valores de Rfs iguais ou muito prximos aos dos padres.
Fracamente positivo () valores de Rfs iguais ou muito prximos aos
dos padres.

280
Figura 1: Cromatografia em Camada delgada de Flavonides em slica gel e
revelador AlCl
3,
com os

padres de Rutina (Rut); Quercetina (Querc) e os
tratamentos TF-MOC, TR-VIC, TR-PO, TFR-MOC e TRS-MOC .

FM:ACOET/ MEOH (75:25)
FE: slica gel 60 F
254

REVELADOR: Cloreto de Alumnio
Padres: Rutina
Quercetina

Figura 2: Cromatografia em Camada delgada de Antraquinonas em slica gel e
revelador KOH 5% em ETOH
,
com o

padro de Antraquinona padro e os
tratamentos TF-MOC, TR-VIC, TR-PO, TFR-MOC e TRS-MOC.

TFR-MOC TRF-VIC TRF-MOC TR-PO TRS-MOC RUT QUERC TFR-MOC TRF-VIC TRF-MOC TR-PO TRS_MOC RUT QUERC

281
4.1.1.1. Triagem fitoqumica por Cromatografia em Camada Delgada em
Plantas cultivadas
O resultado da triagem por Cromatografia em Camada Delgada (CCD)
nos extratos metanlicos dos 16 tratamentos e suas 4 repeties (TR-VIC 01 a
TR-VIC 16) de plantas cultivadas de D. mollis revelou a presena (+) ou
ausncia (-) de compostos fenlicos e comparados aos Rfs de padres dos
flavonides rutina (Rf =0,32), quercetina (Rf =0,78) e de taninos: cido tnico
branco (Rf =0,48) e cido tnico vermelho (Rf =0,68) (quadro 2 figura 3).
A presena de taninos (Rf =0,68) foi detectada nos tratamentos gua
destilada (Testemunha) (Rf = 0,66), gua destilada 12 CH (Rf = 0,77),
Phosphorus 6 CH (Rf = 0,80), Phosphorus 12 CH (Rf = 0,75), Kali
phosphoricum 6 CH (Rf =0,75), Sulphur 6 CH (Rf =0,80), Sulphur 12 CH (Rf =
0,75), ETOH 6 CH (Rf =0,77), ETOH 12 CH (Rfs =0, 66; 0,50), Fungos 6 CH
(Dimorphandra mollis fungi) (Rf =0,65), Fungos 12 CH (Dimorphandra mollis
fungi) (Rf =0,63, Pequi 12 CH (Caryocar brasiliensis frutis) (Rf =0,65) e no
visualizados em gua 6 CH (Rfs =0,81; 0,60; 0,28 e 0,10), Cyrtopodium 1D
(Rf =0,15); Carbo vegetabilis 12 CH (Rf =0,30), e Pequi 6 CH (Caryocar
brasiliensis frutis) (Rf =0,10). O tratamento ETOH 12 CH (Rfs =0, 66; 0,50)
sobressaiu-se aos demais devido relativa presena ( fracamente positivo)
de cido tnico branco (taninos Rf =0,48) (figura 3).
Rutina (Rf = 0,32) foi positiva nos tratamentos gua destilada (Rf =
0,29), gua 6 CH (Rf =0,28), GUA 12 CH (Rf =0,29), Phosphorus 6 CH (Rf =
0,32), Phosphorus 12 CH (Rf =0,32), Kali phosphoricum 6 CH (Rf =0,35),
Sulphur 6 CH (Rf =0,35), Sulphur 12 CH (Rf =0,32), ETOH 12 CH (Rf =0,27),
ETOH 6 CH (Rf =0,27), Carbo vegetabilis 12 CH (Rf =0,35), Fungos 6 CH

282
(Dimorphandra mollis fungi) (Rf =0,35), Fungos 12 CH (Dimorphandra mollis
fungi) (Rf = 0,35), Pequi 12 CH (Caryocar brasiliensis frutis) (Rf = 0,24) e
negativa em Cyrtopodium 1D (Rf =0,15) e Pequi 6 CH (Caryocar brasiliensis
frutis) (Rf =0,10).
O flavonide Quercetina (Rf =0,78) foi positivo em gua destilada (Rf =
0,74), gua 6 CH (Rf =0,81), gua 12 CH (Rf =0,77), Phosphorus 6 CH (Rf =
0,78), Sulphur 6 CH (Rf =0,80), Sulphur 12 CH (Rf =0,75), ETOH 6 CH (Rf =
0,80), ETOH 12 CH (Rfs =0,78), Fungos 6 CH (Dimorphandra mollis fungi) (Rf
=0,79), Fungos 12 CH (Dimorphandra mollis fungi) (Rf =0,78). Pequi 12 CH
(Caryocar brasiliensis frutis) (Rf =0,75) e negativo em Phosphorus 12 CH,
Carbo vegetabilis 12 CH, Cyrtopodium 1D (Rf =0,15), Kali phosphoricum 6 CH
e Pequi 6 CH (Caryocar brasiliensis frutis) (Rf =0,10) e (quadro 2).
Figura 3: Cromatografia em Camada delgada de Flavonides em slica gel e
revelador vanilina sulfrica
,
com os

padres de Rutina (R); Quercetina (Q) e
taninos (AC e T) em plantas de Dimorphandra mollis (TR-VIC 01 a 16, r1 a r4),
cultivadas em Viosa e tratadas com preparados homeopticos, nos meses de
abril a junho de 2006 (63 dias).

T1R1 T1R2 T1R3 T1R4 T2R1 T2R2 T2R3 ACTAN1 ACTAN2 RUT QUERC T2R3 T2R4 T3R1 T3R2 T3R3 T3R4 T4R1 ACTAN2 ACTAN1 QUERC

283
Quadro 2: Anlise do perfil fitoqumico em Cromatografia em Camada Delgada
(CCD) de plantas de Dimorphandra mollis, cultivadas em Viosa e tratadas com
preparados homeopticos, nos meses de abril a maio de 2006 (63 dias) de
compostos fenlicos (Rutina, Quercetina, cido tnico e Taninos).
COMPOSTOS FENLICOS
TRATAMENTOS
Rutina Quercetina
cido
tnico Taninos
TR-VIC 01 gua destilada
(TESTEMUNHA) + + + -
TR-VIC 02 gua destilada 6 CH + + + -
TR-VIC 03 gua destilada 12 CH; + + - -
TR-VIC 04 Phosphorus 6 CH + + + -
TR-VIC 05 Phosphorus 12 CH + - + -
TR-VIC 06 Cyrtopodium 1D - - - -
TR-VIC 07 Kali phosphoricum 12 CH + - + -
TR-VIC 08 Sulphur 6 CH + + + -
TR-VIC 09 Sulphur 12 CH + + + -
TR-VIC 10 Etanol 70% 6 CH + + + -
TR-VIC 11 Etanol 70% 12 CH + + + +/-
TR-VIC 12 Carbo vegetabilis 12 CH + - - -
TR-VIC 13 C. brasiliensis frutis 6 CH - - - -
TR-VIC 14 C. brasiliensis frutis 12 CH + + + -
TR-VIC 15 D. mollis fungi 6 CH + + + -
TR-VIC 16 D. mollis fungi 12 CH + + + -
Legenda: Positivo (+) valores de Rfs iguais ou muito prximos aos dos padres.
Negativo (-) valores de Rfs iguais ou muito prximos aos dos padres.
Fracamente positivo () valores de Rfs iguais ou muito prximos aos
dos padres.

284
4.1.2 Quantificao de flavonides em diversos solventes orgnicos
A quantificao de flavonis nos solventes orgnicos visa identificar a
polaridade que os flavonis rutina e quercetina so melhores extrados e
portanto teriam maior rendimento (figura 4). Dentre os tratamentos, TR-SOLV
15 ACONA/ H
2
O (50:50) tem teor mdio (tm) de flavonides de 104,39
g/mL, seguido de TR-SOLV 14 ACONA/ H
2
O (75:25) (tm =37,68 g/mL) e
de ETOH 50% (tm =36,36 g/mL) conforme no quadro 3.
As menores solubilidades foram em TR-SOLV 13 ACONA (tm =8,10
g/mL), TR-SOLV 08 ACOET/ MEOH (75:25) (tm =8,52 g/mL) e em TR-
SOLV 09 ACOET/ MEOH (50:50) (tm =8,57g/mL) (quadro 3, tabela 1).

Tabela 1: Resumo da anlise de varincia dos Teores mdios de flavonis
(TMF g/mL) nos tratamentos TR-SOLV 01 a TR-SOLV 15 e a testemunha TR-
SOLV 16 gua destilada.

** F significativo ao nvel de 5% de probabilidade.

Quadrados Mdios
F.V. G.L. TMF
TRAT 15 2250,75**
RESDUO 48 13,10
CV(%) 16,38

285
Quadro 3: Teores mdios de flavonis (g/mL) nos tratamentos TR-SOLV 01
a TR-SOLV 15 comparados as testemunhas TR-SOLV 16 gua destilada (*)
(testemunha 1) e TR-SOLV 04 ETOH 70% (*) (testemunha 2)
COMPARAES
DUNNETT
TRATAMENTOS MDIAS
TUKEY
H
2
O ETOH
TR-SOLV 15 ACONA/ H
2
O (50:50) 104,39 A
* *
TR-SOLV 14 ACONA/ H
2
O (75:25) 37,68 B
* *
TR-SOLV 05 ETOH 50% 36,36 B
* *
TR-SOLV 16 H
2
O (gua destilada -
TESTEMUNHA 1)
21,92 C
*
TR-SOLV 03 MEOH 50% 20,71 CD
*
TR-SOLV 02 MEOH 70% 19,90 CDE
*
TR-SOLV 12 DCM 14,00 CDEF
*
TR-SOLV 10 ACOET/ DCM (50:50) 13,00 CDEF
*
TR-SOLV 01 MEOH 12,60 DEF
*
TR-SOLV 11 ACOET/ DCM (25:75) 12,37 DEF
*
TR-SOLV 04 ETOH 70%
(TESTEMUNHA 2)
12,36 DEF
*
TR-SOLV 07 ACOET 11,89 DEF
*
TR-SOLV 06 ETOH 11,15 EF
*
TR-SOLV 09 ACOET/ MEOH
(50:50)
8,57 F
*
TR-SOLV 08 ACOET/ MEOH
(75:25)
8,52 F
*
TR-SOLV 13 ACONA 8,10 F
*
As mdias seguidas de uma mesma letra no variam estatisticamente pelo
teste de Tukey a 5% de probabilidade.
As mdias com asterisco (*) diferiram das testemunhas (gua destilada TR-
VIC 01 e ETOH 70% TR-SOLV 04) ao nvel de 5% de probabilidade pelo
teste de Dunnett.

286
Figura 4: Colorao dos extratos dos tratamentos TR-SOLV 01 MEOH; TR-
SOLV 02 MEOH 70%; TR-SOLV 03 MEOH 50%; TR-SOLV 04 - ETOH
70%; TR-SOLV 05 ETOH 50%; TR-SOLV 06 ETOH; TR-SOLV 07
ACOET; TR-SOLV 08 ACOET/ MEOH (75:25); TR-SOLV 09 ACOET/
MEOH (50:50); TR-SOLV 10 ACOET/ DCM (50:50); TR-SOLV 11 ACOET/
DCM (25:75); TR-SOLV 12 DCM; TR-SOLV 13 ACONA; TR-SOLV 14
ACONA/ H
2
O (75:25) ;TR-SOLV 15 ACONA/ H
2
O (50:50) comparados
testemunha TR-SOLV 16 H
2
O, utilizados em determinao dos teores mdios
de flavonis (g/mL) .


4.1.3 Quantificao de compostos fenlicos por doseamento
espectrofotomtrico
A concentrao de compostos fenlicos nos tratamentos TR-VIC 01 a
TR-VIC 16; TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 e TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 e
suas repeties (r1, r2, r3 e r4) foram avaliadas estatisticamente por anlise de
varincia e teste de mdia (Tukey e Dunnett) (quadros 4, 5 e 6).
A equao de calibrao de compostos fenlicos, com concentraes de
10 g/mL (=0,01 mg/ mL) a 50 g/mL (0,050 mg/ mL) =0,0294 x (r
2
=
0,9967).
Nos tratamentos TR-VIC 01 a TR-VIC 16, os teores mdios (tm) maiores
que a TR-VIC 01 (testemunha) H
2
O (tm = 179,35 g/mL) foram nos

287
tratamentos TR-VIC 09 Sulphur 12 CH (810,14 g/mL ), seguido de TR-VIC
05 Phosphorus 12 CH (tm =709,83 g/mL); TR-VIC 11 ETOH 12 CH ( tm =
595,71 g/mL ); TR-VIC 10 ETOH 6 CH (tm =536,70 g/mL); TR-VIC 16
Fungos 12 CH (Dimorphandra mollis fungi) (530,78g/mL); TR-VIC 03 H
2
O
12 CH (tm =446,80 g/mL) e TR-VIC 08 Sulphur 6 CH (tm =426,23 g/mL).
Os menores que a testemunha foram em TR-VIC 13 Pequi 6 CH (Caryocar
brasiliensis frutis 6 CH) (tm =1,36 g/mL) e TR-VIC 06 Cyrtopodium 1 D (tm
=55,83g/mL) (quadro 4, tabela).
Os tratamentos TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 tiveram os teores mdios
(tm) maiores em folhas TRF-MOC 12 (tm =126,70 g/mL), TRF-MOC 04 (tm =
118,91g/mL), TRF-MOC 05 (tm =117,35 g/mL) e os menores em TRF-MOC
06 (tm = 76,98 g/mL) e TRF-MOC 10 (78,20 g/mL), correspondendo
respectivamente aos pontos catalogados na figura 3 (anexo 1 - GPS) Pt-P01,
Pt-284, Pt-285, Pt-286 e Pt-290 (quadro 5). Em frutos TFR-MOC 01 a TFR-
MOC 12 (quadro 6), os teores mdios (tm) maiores foram TFR-MOC 11 (tm =
1430,51 g/mL), TFR-MOC 12 (tm = 1404,25 g/mL), TFR-MOC 05 (tm =
1243,63 g/mL) e os menores em TFR-MOC 10 (tm =446,43 g/mL) e TFR-
MOC 04 (618,17 g/mL), correspondendo respectivamente aos pontos
catalogados na figura 3 (anexo 1- GPS) Pt-291, Pt-P01, Pt-285, Pt-290 e Pt-
284 (quadro 6).

288
Tabela 2: Resumo da anlise de varincia dos teores de compostos fenlicos (TCF), flavonis (TMF), flavonides por HPLC (FH)
em microgramas por mililitro (g/mL) em folhas (TRF-MOC), frutos (TFR-MOC) e plantas cultivadas (TR-VIC) de D. mollis.

*** F significativo ao nvel de 10% de probabilidade.
** F significativo ao nvel de 1% de probabilidade.
* F significativo ao nvel de 5% de probabilidade.
QUADRADOS MDIOS QUADRADOS MDIOS
TRF-MOC TFR-MOC TRF-VIC F.V. GL
TCF TMF FH TCF TMF FH
GL
TCF TMF FH
TRAT 11 1062,93 255,75 153918,4 423692,6 6857,41 24047,07 15 0,86** 187,10** 44377,81**
RESIDUO 36 922.45 219,02 116892 275524,6 10560,54 22422,27 48 0,19 41,33 3723,97
CV (%) 30,37 42,27 58,20 53,96 43,41 43,40 14,94 29,33 54,22

289
Quadro 4: Teores mdios de compostos fenlicos (g/mL) de plantas de
Dimorphandra mollis cultivadas em Viosa (MG) correspondentes aos
tratamentos TR-VIC 02 a TR-VIC 16 comparados a testemunha (TR-VIC 01
gua destilada).

COMPARAES TRATAMENTOS MDIAS
TUKEY DUNNETT
TR-VIC 09 Sulphur 12 CH
2,70
A
*
TR-VIC 16 D. mollis fungi 12 CH
2,60
A
*
TR-VIC 05 Phosphorus 12 CH
2,59
A
*
TR-VIC 10 Etanol 70% 6 CH
2,58
A
*
TR-VIC 12 Carbo vegetabilis 12 CH
2,58
A
*
TR-VIC 11 Etanol 70% 12 CH
2,53
AB
*
TR-VIC 14 C. brasiliensis frutis 12 CH
2,52
AB
*
TR-VIC 03 gua destilada 12 CH
2,51
AB
*
TR-VIC 02 gua destilada 6 CH
2,46
AB
*
TR-VIC 15 D. mollis fungi 6 CH
2,42
AB

TR-VIC 08 Sulphur 6 CH
2,41
AB

TR-VIC 07 Kali phosphoricum 12 CH
2,33
AB

TR-VIC 01 gua destilada (TESTEMUNHA)
2,24
AB

TR-VIC 04 Phosphorus 6 CH
2,09
AB

TR-VIC 06 Cyrtopodium 1D
1,76
B
*
TR-VIC 13 C. brasiliensis frutis 6 CH
0,80
C
*
Obs: dados transformados log (CF+5).
As mdias com asterisco (*) diferiram da testemunha (gua destilada TR-VIC
01) ao nvel de 5% de probabilidade pelo teste de Dunnett.

290
Quadro 5: Teores mdios de compostos fenlicos (CF) (g/mL) e flavonis (F)
(g/mL) nas folhas de Dimorphandra mollis dos tratamentos TRF MOC 01 a
TR-MOC 12.

MDIAS TRATAMENTOS
COMPOSTOS
FENLICOS
FLAVONIS
TRF MOC 12 126,70 A 30,58 A
TRF MOC 04 118,91 A 38,05 A
TRF MOC 05 117,34 A 37,42 A
TRF MOC 11 113,16 A 34,89 A
TRF MOC 08 100,20 A 31,42 A
TRF MOC 07 98,91 A 55,10 A
TRF MOC 09 97,92 A 27,32 A
TRF MOC 02 96,90 A 34,21 A
TRF MOC 01 91,80 A 32,00 A
TRF MOC 03 82,96 A 34,52 A
TRF MOC 10 78,20 A 38,79 A
TRF MOC 06 76,97 A 25,74 A

291
Quadro 6: Teores mdios de compostos fenlicos (g/mL) e flavonis
(g/mL) nos frutos de Dimorphandra mollis correspondentes aos tratamentos
TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12.

MDIAS TRATAMENTOS
COMPOSTOS
FENLICOS
FLAVONIS
TFR MOC 11 1430,51 A 176,21 A
TFR MOC 12 1404,25 A 211,02 A
TFR MOC 05 1243,62 A 220,63 A
TFR MOC 06 1213,87 A 229,47 A
TFR MOC 02 1187,41 A 263,15 A
TFR MOC 03 1044,41 A 229,47 A
TFR MOC 08 886,73 A 221,47 A
TFR MOC 01 777,31 A 208,63 A
TFR MOC 09 723,56 A 337,47 A
TFR MOC 07 695,92 A 231,37 A
TFR MOC 04 618,71 A 228,00 A
TFR MOC 10 446,43 A 283,58 A

292
4.1.4 Quantificao de flavonis por doseamento espectrofotomtrico
A concentrao de flavonis nos tratamentos TR-VIC 01 a TR-VIC 16;
TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 e TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 e suas
repeties (r1, r2, r3 e r4) foi avaliada estatisticamente por anlise de varincia
e teste de mdia (Tukey e Dunnett) (quadros 5, 6 e 7).
A equao de calibrao de flavonis, com concentraes de 10 g/mL
(=0,01 mg/ mL) a 50 g/mL (0,050 mg/ mL) =0,0095 x (r
2
=0,9933). Os
maiores teores mdios (tm) foram nos tratamentos TR-VIC 12 Fungos 12 CH
(Dimorphandra mollis fungi) (tm = 29,05g/mL), TR-VIC 03 ETOH 6 CH
(28,10 g/mL); TR-VIC 10 Sulphur 12 CH (tm =27,79g/mL) e menores em
TR-VIC 13 Pequi 6 CH (Caryocar brasiliensis frutis) (ns**), TR-VIC 06
Cyrtopodium 1D (tm =18 g/mL) (quadro 7).
Em TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 (folhas) tiveram os teores mais altos
em TRF-MOC 07 (tm =55,10 g/mL), TRF-MOC 10 (tm =38,78 g/mL) e os
mais baixos em TRF-MOC 06 (tm =25,74 g/mL) e TRF-MOC 09 (tm =27,31
g/mL) correspondendo respectivamente aos pontos catalogados na figura 3
(GPS) Pt-287, Pt-290, Pt-286, Pt-289 (quadro 5). Em TFR-MOC 01 a TFR-
MOC 12 (frutos), os teores mdios (tm) maiores em frutos TFR-MOC 09 (tm =
337,47 g/mL), TFR-MOC 10 (tm =283,58 g/mL) e os menores em TFR-MOC
11 (tm = 176,21 g/mL) (quadro 6) correspondendo respectivamente aos
pontos catalogados na figura 3 ( Anexo 1 - GPS) Pt-289, Pt-290 e Pt-291.

293
Quadro 7: Teores mdios de flavonis (g/mL) de plantas de Dimorphandra
mollis cultivadas em Viosa (MG) correspondentes aos tratamentos TR-VIC 02
a TR-VIC 16 comparados a testemunha (TR-VIC 01 gua destilada).
Comparaes Tratamentos Mdias
Tukey Dunnett
TR-VIC 01 gua destilada (TESTEMUNHA) 19,47 A
TR-VIC 02 gua destilada 6 CH 28,10 A
TR-VIC 03 gua destilada 12 CH 19,21 A
TR-VIC 04 Phosphorus 6 CH 19,58 A
TR-VIC 05 Phosphorus 12 CH 24,63 A
TR-VIC 06 Cyrtopodium 1D 18,00 A
TR-VIC 07 Kali phosphoricum 12 CH 21,31 A
TR-VIC 08 Sulphur 6 CH 24,00 A
TR-VIC 09 Sulphur 12 CH 27,79 A
TR-VIC 10 Etanol 70% 6 CH 25,58 A
TR-VIC 11 Etanol 70% 12 CH 26,79 A
TR-VIC 12 Carbo vegetabilis 12 CH 24,32 A
TR-VIC 13 C. brasiliensis frutis 6 CH B *
TR-VIC 14 C. brasiliensis frutis 12 CH 19,42 A
TR-VIC 15 D. mollis fungi 6 CH 23,42 A
TR-VIC 16 D. mollis fungi 12 CH 29,05 A
=0,3510
-14
01) pelo teste de Dunnett a 5% de probabilidade.

294
4.1.5. Avaliao e determinao do flavonide Rutina por HPLC
A concentrao de rutina nos tratamentos TR-VIC 01 a TR-VIC 16; TRF-
MOC 01 a TRF-MOC 12 e TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 e suas repeties (r1,
r2, r3 e r4) foi avaliada estatisticamente por anlise de varincia e teste de
mdia (Tukey e Dunnett) (quadros 8, 9 e 10).
A equao de calibrao de rutina padro, com concentraes de 1000
ppm a 100 ppm =42161x 99244 (r
2
=0,999) e o cromatograma do
padro de Rutina com 1000ppm est disposto na figura 5.
Os maiores teores mdios (tm) foram nos tratamentos TR-VIC 15 -
Fungos 6 CH (D. mollis fungi ) (tm =338,46 g/mL) (figura 11), TR-VIC 01
gua destilada (testemunha) (tm = 276,86 g/mL e TR-VIC 12 - Carbo
vegetabilis 12 CH (tm =250,58 g/mL) e menores TR-VIC 13 Pequi 6 CH
(Caryocar brasiliensis frutis) (nd), TR-VIC 07 - Kali phosphoricum 12 CH (tm =
7,30 g/mL) e TR-VIC 03 gua destilada 12 CH (tm =9,20 g/mL) (figura 6)
(quadro 8).
Em TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12 (folhas) tiveram os teores mais altos
em TRF-MOC 09 (tm =876,31 g/mL) (figura 7), TRF-MOC 01 (tm =874,81
g/mL) e TRF-MOC 08 (tm =716,60 g/mL) e os mais baixos em TRF-MOC 12
(tm = 257,29 g/mL) e TRF-MOC 07 (tm = 318,87 g/mL) (quadro 9);
correspondendo respectivamente aos pontos catalogados na figura 3 (GPS) Pt-
289, Pt-280, Pt-288, Pt-292, Pt-287.
Em TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 (frutos), os teores mdios (tm) maiores
em frutos TFR-MOC 08 (tm =56.052,03 g/mL) (figura 8), TFR-MOC 12 (tm =
55.753,46 g/mL) e os menores em TRF-MOC 06 (tm =25.720,36 g/mL) e
TFR-MOC 11 (tm = 33.170,04 g/mL) (quadro 10) correspondendo

295
respectivamente aos pontos catalogados na figura 3 (Anexo 1 - GPS) Pt-288,
Pt-292, Pt-286, Pt-291.

Figura 5: HPLC Cromatograma de padro de Rutina na concentrao de 750
ppm.

Condies: Coluna Novapak Water C18; 250 x 4.6 milmetros, partcula 5 m;
eluio por gradiente: fase mvel metanol/ gua (1:1) (0-10 min) e (7:3) de (10-
20min); fluxo 1mL/min; deteco 339nm. Diluio 500 L amostra: 500 L de
FM.

296
Figura 6: HPLC Cromatograma de tratamento TR-VIC 12 Carbo vegetabilis 12
CH (tm =250,58 g/mL).

20min); fluxo 1mL/min; deteco 339nm. Diluio 500 L amostra: 500 L de
FM.

297
Figura 7: HPLC Cromatograma de tratamento TRF-MOC 09 (tm = 876,31
g/mL).

20 min); fluxo 1mL/min; deteco 339nm. Diluio 500 L amostra: 500 L de
FM.

298
Figura 8: HPLC Cromatograma de tratamento TFR-MOC 08 (tm =56052,03
g/mL).

20 min); fluxo 1mL/min; deteco 339nm. Diluio 100 L amostra: 900 L de
FM.

299
Quadro 8: Teores mdios de rutina (g/mL) em plantas de Dimorphandra
mollis cultivadas em Viosa (MG) correspondentes aos tratamentos TR-VIC 02
a TR-VIC 16.
COMPARAES TRATAMENTOS MDIAS
Tukey Dunnett
TR-VIC 15 D. mollis fungi 6 CH 338,46 A *
TR-VIC 01 gua destilada (TESTEMUNHA) 276,86 AB
TR-VIC 12 Carbo vegetabilis 12 CH 250,58 AB
TR-VIC 11 Etanol 70% 12 CH 206,90 ABC *
TR-VIC 10 Etanol 70% 6 CH 149,37 BCD *
TR-VIC 09 Sulphur 12 CH 127,92 BCD *
TR-VIC 14 C. brasiliensis frutis 12 CH 121,37 CD *
TR-VIC 04 Phosphorus 6 CH 87,52 CD *
TR-VIC 05 Phosphorus 12 CH 56,74 CD *
TR-VIC 02 gua destilada 6 CH 52,88 CD *
TR-VIC 16 D. mollis fungi 12 CH 52,88 CD *
TR-VIC 08 Sulphur 6 CH 39,34 D *
TR-VIC 06 Cyrtopodium 1D 21,34 D *
TR-VIC 03 gua destilada 12 CH 9,20 D *
TR-VIC 07 Kali phosphoricum 12 CH 7,30 D *
TR-VIC 13 C. brasiliensis frutis 6 CH 0,00* D *
no detectados
01) ao nvel de 5% de probabilidade pelo teste de Dunnett.

300
Quadro 9: Teores mdios de Rutina, (g/mL) em folhas de Dimorphandra
mollis correspondentes aos tratamentos TRF-MOC 01 a TRF-MOC 12.

TRATAMENTOS MDIAS
TRF MOC 09 876,31 A
TRF MOC 01 874,81 A
TRF MOC 08 716,60 A
TRF MOC 05 665,29 A
TRF MOC 02 660,11 A
TRF MOC 06 653,32 A
TRF MOC 11 618,63 A
TRF MOC 04 490,78 A
TRF MOC 03 458,46 A
TRF MOC 10 457,83 A
TRF MOC 07 318,87 A
TRF MOC 12 257,29 A

301
Quadro 10: Teores mdios de Rutina (g/mL) em frutos de Dimorphandra
mollis correspondentes aos tratamentos TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 .
TRATAMENTOS MDIAS
TFR MOC 08 56052,03 A
TFR MOC 12 55753,46 A
TFR MOC 07 49701,83 A
TFR MOC 04 48634,74 A
TFR MOC 02 47729,89 A
TFR MOC 01 47064,55 A
TFR MOC 05 43355,13 A
TFR MOC 09 38222,32 A
TFR MOC 10 34388,21 A
TFR MOC 03 33756,02 A
TFR MOC 11 33170,04 A
TFR MOC 06 25720,36 A
As mdias seguidas de uma mesma letra no variam estatisticamente
pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade.

4.1.6. Extrao e Processamento de rutina em extrato aquoso
O clculo de rendimento foi feito tendo como base a massa inicial de p
de frutos de D. mollis (10g) obtendo-se teores mdios de 35% (tm =35%) e no
doseamento de flavonides de 29,08%.
Anlises cromatogrficas por camada delgada (CCD) tendo como
padres Rutina (Rf =0,54) e Quercetina (Rf =0,68), com fase estacionria

302
espessura de 0,250 mm), fase mvel MEOH/ ACEOT (25:75) e revelador AlCl
3

foram positivos em PPt-PO (Rf =0,56 e 0,69).

4.1.7. Extrao e Processamento de rutina em extrato metanlico
O clculo de rendimento foi feito tendo como base a massa inicial de p
de frutos de D. mollis (150 g) obtendo teores mdios de 38,38% (tm =38,38%)
e no doseamento de flavonides de 32,51%.
Anlises cromatogrficas por camada delgada (CCD) tendo como
padres Rutina (Rf =0,54) e Quercetina (Rf =0,68), com fase estacionria
espessura de 0,250 mm), fase mvel MEOH/ ACEOT (25:75) e revelador AlCl
3

foram positivos em PPt-PO (Rf =0,53 e 0,65).

303

4. 2. DISCUSSO

4. 2.1 Triagem fitoqumica nos tratamentos TF-MOC, TFR-MOC, TRS-MOC,
TR-VIC, TR-PO e em TR-VIC 01 a TR-VIC 16
A triagem fitoqumica a metodologia mais utilizada na obteno de
informaes da constituio qumica de plantas permitindo inferir quais as
possveis substncias que esto presentes na amostra e origem biossinttica.
O conhecimento dos constituintes qumicos de diversas partes da planta
favorece o seu uso sustentvel e contribui na sua preservao.
A cromatografia em camada delgada (CCD) utilizada com freqncia
na anlise vegetal, em virtude da simplicidade, rapidez, sensibilidade e pelo
rigor dos resultados, sendo utilizados na identificao e na padronizao dos
frmacos pelas farmacopias. So fixadas condies tais como adsorventes,
espessura das placas, umidade, eluentes, que determinam a velocidade de
migrao de cada constituinte, expresso pelo valor numrico, Rf, que exprime a
relao entre a distncia percorrida pela substncia em anlise e pelo solvente.
No entanto, no se tm dados investigativos sobre o screening fitoqumico em
cromatografia de camada delgada (CCD) em D. mollis. sabido, por HPLC
(cromatografia lquida de alta afinidade), que em frutos de D. mollis esto
presentes compostos fenlicos como os flavonides rutina e quercetina e

304
taninos em sua casca (FERREIRA et al, 2001; CHAVES et al, 2001; SILVA,S et al,
2003; FARIA et al, 2005; PEDRIALI et al, 2005).
O uso de preparados homeopticos interfere no metabolismo secundrio
de D. mollis inferindo em alterao dos nveis de compostos fenlicos (quadro
4). interessante salientar que as escolhas dos preparados homeopticos
decorrem de pressuposies e resultados de ANDRADE et al (2001); ARMOND et
al (2004); CASTRO et al (2003), BONATo et al (2005); SUKUL et al (2006, 2002);
DATTA (2006); HAMMAN et al (2003); BETTI et al (2003a, 2003b).
A utilizao de gua destilada como testemunha, seus preparados
dinamizados em 6 CH e 12 CH, bem como de Etanol 70% em 6 CH e 12 CH
teve como inteno evitar contestaes a respeito da possvel ao da gua e
do lcool etlico dinamizados como fatores de ao ou inibio de taxa de
compostos secundrios.
O uso dos medicamentos homeopticos Phosphorus 12 CH, Kali
phosphoricum 12 CH e Carbo vegetabilis 12 CH, nas condies dessa anlise,
favoreceu aumento da sntese de flavonide (rutina 3-rutinosdeo quercetina),
o que pode ser interessante em cultivos de subsistncia em agricultura familiar
e na recuperao de sistemas agroflorestais visando o manejo sustentado e
conseqente extrao de rutina. Outro aspecto interessante a ser considerado
a dinamizao 12 CH, que agiu como indutora-seletiva de rutina em
preparaes homeopticas, ressaltando que em Carbo vegetabilis 12 CH (TR-
VIC 12) detectou-se apenas rutina.
Todos os tratamentos positivos a quercetina, tambm foram positivos
em rutina e cido tnico, afora em TR-VIC 03 (gua destilada 12 CH). O uso de
gua destilada 12 CH, nas condies dessa anlise, possibilitou a produo

305
isolada de flavonides (rutina e quercetina). Especificamente quando se utilizou
o preparado homeoptico gua destilada 12 CH relacionou-se ao processo de
diluies e dinamizaes sucessivas em Homeopatia que visam diminuir a
massa molecular (matria) e aumentar o estado energtico vibracional das
molculas, resgatando a informao.
O efeito do solvente (gua) pode ser entendido em funo da teoria do
estado energtico de transio, onde o aumento da constante de velocidade
devido a um fator entlpico (diluies e dinamizaes) pode resultar no
aumento da entalpia do estado inicial e decrscimo no estado de transio e
liberao energtica vibracional (SILVA & J ONES J R, 2001).
A segunda lei da Termodinmica determina que quanto maior a
desordem do sistema, maior entropia". A entropia associada ao grau de
desordem, mede a parte da energia que no pode ser transformada em
trabalho, funo de estado cujo valor cresce durante o processo natural em
algum sistema fechado, como acontece quando dinamizada e succusionada
a preparao homeoptica.
As relaes preparado homeoptico/ plantas/ entropia/ entalpia podem
ser relacionadas Teoria dos Sistemas (BERTALANFFY, 1968): A vida um
estado energtico onde o caos (entropia) mantm interao dinmica e
sinrgica com a ordem (entalpia). O equilbrio da energia vital est no estado
entlpico (energia suficiente) e o desequilbrio o estado entrpico (energia
insuficiente), aplicado ao contexto biolgico dos sistemas. Portanto a mutao
do sistema a falha na transmisso da mensagens codificadas como
mecanismo de defesa, surgindo ou aumentando a produo de compostos

306
secundrios; mostrando que a entropia (desordem da informao) em pequena
escala tambm ajuda no melhoramento/ aprimoramento dos sistemas.
Neste sentido, pode-se explicar a ao da gua destilada 12 CH,
segundo PORTO et al (1998) que analisam as alteraes das propriedades
biolgicas e fsico-qumicas da gua induzidas por campos eletromagnticos e
relatam que a ausncia de soluto (partculas) e mudanas no comportamento
da gua podem ser devido distribuio de clusters de diversos tamanhos e
formas na gua lquida, destacando que a explicao mais plausvel a esse tipo
de comportamento seja a reorganizao das molculas de gua durante o
processo de magnetizao. Esclarece que o movimento de um on, partindo de
um estado estacionrio, devido a um campo eltrico aplicado, pode ser obtido
relacionando-se a FEM (fora eletro-motriz), soma dos retardamentos
causados pelo atrito; pela assimetria e eletroforese, que so intensificados
medida que a concentrao eletroltica aumenta, o que causa aumento das
foras de retardamento e diminuio da condutividade; logo quanto mais
diluda a soluo, maior a energia vibracional, maior o campo energtico e
menor a concentrao eletroltica, como ocorreu em gua destilada 12 CH (1x
10
-12
dinamizada e diluda).
Ainda, HARARI & LIN (1989) trabalhando com gua magnetizada
utilizaram no crescimento de meles e mostraram que o tamanho, o nmero de
frutas e o contedo de acar (metabolismo primrio) nos meles irrigados com
gua tratada magneticamente foram significativamente maiores do que aqueles
irrigados com gua normal (sem tratamento magntico).
A presena de cido tnico somente no tratamento TR-VIC, dentre os
tratamentos TF-MOC, TFR-MOC, TRS-MOC e TR-PO e posteriormente em

307
TR-VIC 01 a TR-VIC 16, exceto em TR-VIC 03 (gua destilada 12 CH); TR-VIC
06 (Cyrtopodium 1D); TR-VIC 12 (Carbo vegetabilis 12 CH) e TR-VIC 13 (Pequi
6 CH Caryocar brasiliensis frutis) pode ser relacionada necessidade de
defesa da espcie frente aos tratamentos homeopticos caracterizando
patogenesia. Entende-se por patogenesia nesta situao, o aparecimento de
compostos novos, no necessariamente presentes na espcie, quando
analisada isoladamente como ocorreu aps anlise dos frutos (TFR-MOC), das
folhas (TF-MOC) e do p (TR-PO). Segundo BONATO (2004) patogenesia o
padro de desequilbrio energtico ocasionado pelo medicamento homeoptico
em plantas sadias.
MONTEIRO et al (2005) lembram que D. mollis possui propriedades
tanantes, e por tais, denominada popularmente como falso barbatimo
(Stryphnodendron adstringens (Martius) Coville) sendo muitas vezes,
erroneamente coletada como tal, contudo SANTOS et al (2002) ao analisar
taninos em D. mollis, relatam a presena de catequina, epicatequina
(monmeros) e de polmeros condensados em cascas, no detectando em
folhas, que continham apenas glicosdeos flavnicos.
No h relatos de cardiotnicos em plantas adultas ou em frutos de D.
mollis como ocorreu nos tratamentos TF-MOC; TFR-MOC e TR-PO, que
correspondem a folhas, frutos e ao p de frutos. Entretanto SANTOS et al (1975)
relatam que os frutos e as folhas so usados como forrageira ao gado, porm,
podem causar intoxicao em bovinos, levando-os at a morte. FARIA et al
(2005) destacam que as favas so adocicadas e txicas aos bovinos, podendo
provocar aborto (rutina) e mortalidade. Os heterosdeos cardiotnicos como a
digitalina e digitoxina presentes em Digitalis purpurea ou D. lanatta, so tnicos

308
cardacos que tm dose letal (DL
50 =
0,18 mg/kg), com ao imediata
(FOERSTER et al, 1966 THE MERCK INDEX, 2003). Dessa forma, a presena de
heterosdeos cardiotnicos, mesmo em pequenas propores, pode ser
pertinente letalidade ou intoxicao com folhas e frutos.
Os demais compostos detectados como taninos e flavonides eram
esperados em todos os tratamentos exceto em sementes (TRS-MOC) que so
constitudas de galactomanano, estaquiose, rafinose e sacarose (carboidratos
de reserva) que se decompem em galactose, glicose e frutose durante a
germinao (LIMA & BORGES et al, 2002).

4.2.2 Quantificao de flavonides em diversos solventes orgnicos
Rutina (flavonol) (figura 9) substncia slida, amarela clara, e
altamente solvel em gua, muito mais solvel que a quercetina (poro
aglicona) (THE MERCK INDEX, 2005). importante lembrar que a ausncia de
cadeia glucdica ocasiona o acrscimo da solubilidade nos solventes menos
polares (COSTA & PROENA DA CUNHA, 2000).
A caracterizao, extrao, identificao e dosagem dos flavonides
compreendem reaes cromticas relacionadas ao grupo cromforo (cromona)
ou com a presena de hidroxilas ligadas a ncleos aromticos. A extrao
feita com metanol a quente; ou outro solvente de maior polaridade. A extrao
do rutsido feita com solventes hidratados, a quente (MEOH 70%, ETOH
70%, Acetona, ter: gua) (COSTA & PROENA DA CUNHA, 2000), como
propostos nos tratamentos TR-SOLV 02, TR-SOLV 04, TR-SOLV 13.
A escolha dos solventes nos tratamentos TR-SOLV 01 a TR-SOLV 16
seguiu a usualidade em extraes orgnicas, a solubilidade e polaridade. A

309
prioridade de escolha de determinado solvente no pode ser analisada apenas
por suas caractersticas macroscpicas; tais como constantes fsicas como
densidade, constante dieltrica, ndice de refrao; como tambm devem ser
consideradas as caractersticas descontnuas que consistem nas interaes
entre molculas de solventes (SILVA & J ONES J R, 2001).
Solubilidade importante propriedade fsico-qumica na determinao da
forma farmacutica e cosmtica adequada. A escolha dos tratamentos (TR-
SOLV 01 a 16) baseou-se na ordem decrescente de polaridade e respectivas
constantes dieltricas (D ou ) a 25
0
C dos solventes: gua (79) > cidos
orgnicos (cido actico) > amidas (N,N-dimetilformamida 37) > lcoois
(Metanol 32,63; Etanol 25) >aminas (Trietilamina, Piridina) >aldedos,
cetonas (Acetona 20,7) >steres (Acetato de etila 6) >haletos (Clorofrmio
4,8; Diclorometano 4,6) >teres (ter dietlico 4,3) >aromticos (Benzeno
2,27; Tolueno 2,4) >alcanos (Hexano 1,9) uma vez que quanto maior a
constante dieltrica, maior a capacidade de solvatar cargas opostas em dois
compostos.
Solventes, como metanol, etanol, propanol, acetona, acetato de etila
dimetilformamida e suas combinaes so usados na extrao de compostos
fenlicos combinados ou no com vrias propores de gua. Por exemplo,
rutina e cido clorognico so extrados eficientemente em ervas de buckwheat
(trigo sarraceno, Fagopirum sagittatum, F. esculentum Polygonaceae) por
macerao com etanol 30% e agitao por 2 horas (NACKZ & SHAHIDI, 2006).
A utilizao de gua como solvente, presente nesta anlise no
tratamento TR-SOLV 16, usualmente era descartada nos extratos orgnicos
devido insolubilidade ou incompatibilidade de alguns compostos e extrao

310
de outros compostos indesejveis (KING et al, 1992; LUBINEAU et al, 1994).
Embora o uso de solventes orgnicos na elaborao de extratos vegetais seja
convencional, seu emprego implica em questes relativas a toxicidade
ambiental e farmacolgica, alm da periculosidade existente ao manipul-los
(SILVA & J ONES J R, 2001). Assim, a substituio dos solventes orgnicos
tradicionais por gua ou misturas com gua, como nos tratamentos TR-SOLV
01 a TR-SOLV 16, de grande interesse pelo menor impacto ambiental, custo
operacional, periculosidade e toxicidade.
A ordem de polaridade dos solventes aumenta de acordo com o
tamanho da cadeia carbnica, nmero de hidroxilas, e constante dieltrica. Nos
tratamentos TR-SOLV 01 a TR-SOLV 16 tem-se a seguinte relao de
polaridade decrescente: gua destilada (testemunha H
2
O); Metanol/ gua
(70% e 50%); Metanol absoluto (CH
3
OH); Etanol/ gua (70% e 50%); Etanol
absoluto (CH
3
-CH
2
OH); Acetona/ gua (50% e 75%); Acetato de Etila/ Metanol
(50% e 75%), Acetato de Etila (CH
3
-COO-CH
2
CH
3
); Acetona (CH
3
-CO-CH
3
);
Diclorometano/ Acetato de etila (50% e 75%) e Diclorometano P.A. (Cloreto de
Metileno CH
2
Cl
2
).
Pela rutina ser muito solvel em gua (testemunha TR-SOLV 16)
acreditava-se que teria maior extrao de flavonis em meio aquoso, no
entanto, as solues hidratadas que englobam Acetona/ gua como nos
tratamentos TR-SOLV 15 (Acetona/ gua 50:50) e TR-SOLV 14 (Acetona/
gua 75:25) foram mais eficientes. Tal fato pode se relacionado estrutura
qumica da rutina (figura 9), a presena da gua na mistura de solventes que
atuam no aumento da permeabilidade celular e facilita as interaes
hidrofbicas, e, a presena de quercetina, que pde ser comprovada em

311
anlise por CCD, na triagem fitoqumica, onde no tratamento TR-PO foram
detectados os flavonides rutina e quercetina (vide quadro 1). prioridade
lembrar que as agliconas (quercetina) tm solubilidade aumentada nos
compostos menos polares, hiptese testada em Diclorometano TR-SOLV 12 e
na mistura de Acetato de etila e Diclorometano (50:50) e (25:75) TR-SOLV 10 e
TR-SOLV 11.
Outra considerao implicada nos extratos em anlise que no TR-
SOLV 15 ACONA/ H
2
O (50:50) tem-se 12,88 e 4,76 maior teores de flavonis
do que no solventes isolados TR-SOLV 13 ACONA e TR-SOLV 16 H
2
O,
respectivamente, comprovando a influncia do meio aquoso na eficcia do
processo extrativo (quadro 3). Relao de similaridade de aumento dos teores
pode ser traada em relao aos demais tratamentos com solventes P.A. e
suas misturas, como pode ser comprovado no quadro 3 onde se tem na
soluo de Etanol 50 % (TR-SOLV 05) 3,26 vezes maior teor que em Etanol
P.A. (TR-SOLV) diferindo significativamente entre si; e 1,64 em Metanol 50%
(TR-SOLV 03) em relao a Metanol P.A (TR-SOLV 01), no havendo
diferena entre estes tratamentos. O aumento da polaridade permite a extrao
de compostos mais polares como os biflavonides.
Segundo J AYAPRAKASHA et al (2001) em anlise da atividade
antioxidante e dos teores de flavonis de extratos de sementes de uvas (Vitis
vinifera) nos solventes Acetona P.A., Acetato de etila P.A., Metanol P.A.,
Acetato de etila/ gua (9:1) (17:3) e (4:1), houve maior eficcia em teor mdio
de flavonis (tm) em Acetato de etila/ gua (17:3) (tm =54,0 4,86%), seguido
de Acetato de etila/ gua (4:1) e (9:1) com teores mdios de 50,5 4,35% e
43,0 3,34% respectivamente concluindo que o emprego de solventes simples

312
Acetona (tm =15,0 1,35%), Acetato de etila (tm =35,0 2,10%), Metanol (tm
=16,0 2,71%) no to eficiente na extrao de flavonis em relao
mistura de solventes como Acetato de Etila e gua, atribuindo a eficcia do
processo a presena da gua que aumenta a permeabilidade dos tecidos nas
sementes facilitando o transporte de molculas por difuso, o que tambm
ocorreu nos tratamentos TR-SOLV 01 a TR-SOLV 16.

4.2.3 Doseamento de compostos fenlicos em folhas, frutos e plantas
cultivadas de Dimorphandra mollis.
O estudo dos compostos fenlicos, de um modo genrico, e
especificamente dos cidos fenlicos, considera-se de mximo interesse por se
encontrarem ligados maior parte dos fenmenos biolgicos, botnicos,
genticos e taxonmicos. Devido grande diversidade de processos
metablicos na formao das substncias fenlicas, difcil estimar o seu teor
quantitativo nos tecidos das plantas de modo absoluto (EVARISTO & LEITO,
2001).
Normalmente, cada espcie vegetal est associada determinada
classe de polifenis mais importante, cujos teores aumentam com a idade e
variam com o desenvolvimento vegetativo da planta (EVARISTO & LEITO, 2001).
A maioria dos compostos fenlicos no encontrada no estado livre na
natureza, mas na forma de steres ou de heterosdeos sendo, portanto,
solveis em gua e em solventes orgnicos polares (SIMES et al, 1999). A
extrao com metanol nos tratamentos TR-VIC 01 a 16, TRF-MOC 01 a 12 e
TFR-MOC 01 a 12 mostrou-se eficiente, com teores mdios relativamente altos
(quadros 4,5 e 6), em conformidade com de SANTOS et al (2002) que

313
determinaram os teores de fenis totais em folhas e cascas de D. mollis tendo
25,3 10,8 mg/ g e 59,9 0,6 mg/ g respectivamente.
Em Fabaceae (Leguminosae), principalmente em Caesalpinaceae, tm-
se altos nveis de compostos fenlicos principalmente em cascas e frutos. Ao
analisar folhas provenientes de reas de coleta do Cerrado de Montes Claros
(TRF-MOC 01 a 12) verificaram-se teores mdios (tm = 126,70 g/mL e
118,91g/mL), menores aos encontrados em TR-VIC 01 (testemunha) H
2
O
(tm = 179,35 g/mL), no entanto, tais resultados viabilizam a utilizao de
folhas como fonte substituinte de compostos fenlicos, destacando que a sua
coleta menos agressiva planta, j que as cascas quando coletadas de
forma errnea podem levar a morte da planta; outro fator que merece destaque
que as folhas esto nas plantas durante todo o ano ao contrrio de frutos.
Tais resultados confirmam os estudos de MONTEIRO et al (2005) que
avaliaram em extratos metanlicos pelo mtodo de Folin-Ciocalteau, o teor de
taninos e fenis totais em trs espcies medicinais arbreas da Caatinga onde
no ocorreram diferenas significativas entre cascas e folhas das espcies
testadas, propondo o sistema de manejo e extrao que promova, em
determinadas pocas, a intercalao dos recursos que permitam reduzir a
presso sobre as cascas, exploradas permanentemente como fonte de
fenlicos.
As variaes individuais entre tratamentos provenientes de regies de
Cerrado nos tratamentos (TRF-MOC e TFR-MOC) podem ser atribudas
idade das plantas, procedncia, insolao e mecanismo de defesa contra
herbivoria (COLEY & BARONE, 1996; THOMSON, 1993; HELDT, 1997; KOZLOWSKI &
PALLARDY, 1997; MISRA et al, 1999), contudo no houve diferenas significativas

314
entre as mdias de folhas (TRF-MOC), diferindo significativamente em frutos
(TFR-MOC).
Considerando que os frutos (TFR-MOC 01 a 12) provm das mesmas
plantas adultas de onde foram retiradas as folhas totalmente expandidas
(comprimento mdio de 366 mm) (tratamentos TRF-MOC 01 a 12) variaes
semelhantes nos teores de compostos fenlicos entre tratamentos eram
esperadas, no entanto, ocorreu apenas em TRF-MOC 12 e em TFR-12 (tm =
126,70 g/mL e tm =1404,25 g/mL), correspondendo ao maior quantidade de
compostos fenlicos, localizada na rea Pt-PO1 (292), podendo ser matriz de
estudo de germoplasma, j que compostos fenlicos so produzidos
rapidamente e se acumulam aps a infeco, especialmente em variedades
resistentes (CAMPOS et al, 2004).
MACHEIX et al (1986) afirmam que h distino entre cultivares e
estdios de desenvolvimento das plantas no que tange o acmulo de
compostos fenlicos e a resposta aos ferimentos. A ativao do metabolismo
de fenis aps infeco, como mecanismo de defesa, segundo esses autores,
pode levar mais ou menos tempo, dependendo da formao de molculas mais
simples e de sua integrao com estruturas qumicas mais complexas, como a
ligninas. Este fenmeno, de acordo com BELL (1981), pode ser interpretado
como parte da induo de resistncia das plantas.
O aumento da resistncia da espcie como mecanismo de defesa a
herbivoria (florao), em diversas condies edfico-climticas (resposta a
radiao/ insolao/ tempo/ perodo climtico/ ciclo vegetativo da espcie/
estdio de desenvolvimento) foi verificado por FONSECA et al (2001) ao
analisarem os teores de taninos em Porophyllum ruderalle por 5 pocas, a

315
partir de 60 dias de plantio, com intervalos de 15 dias, realizando-se a colheita
s 7 horas da manh; 13 horas e 18 horas, no perodo de Outubro de 2000
(primavera/ vero) e s 7 horas da manh em maro a maio de 2001(outono/
inverno) classificam em os rendimentos de taninos em mdios na colheita
realizada s 7 horas, altos nas colheitas realizadas as 13 e 18 horas (2000) e
em baixos nas pocas I (60 dias), II (75 dias) e III (90 dias), e em mdios nas
pocas IV (105 dias) e V (120 dias) (2001) e concluem que aos 120 dias de
idade constatou-se maior teor de tanino (plena florao).
Os tratamentos (preparados e medicamentos homeopticos) escolhidos
nesse experimento fundamentam-se nos princpios da Homeopatia: A lei dos
semelhantes Similia similibus curantur; Diluies infinitesimais e Uso de um
nico preparado homeoptico. A melhor compreenso dos princpios acima
pode ser fundamentada pela Lei da Ao e Reao de Newton onde a toda
ao corresponde a uma reao igual em sentido contrrio. Na compreenso
deste postulado, o preparado homeoptico atuar impulsionando o vegetal a
produzir efeitos no sentido de defesa e manuteno da sua vitalidade, em
menor ou maior intensidade.
Teores de compostos fenlicos em plantas cultivadas com preparados
homeopticos (TR-VIC 01 a 16) como o Cyrtopodium 1D e Pequi 6 CH
(Caryocar brasiliensis frutis), TR-VIC 06 e 13, respectivamente, tiveram os mais
baixos teores de compostos fenlicos. Atribu-se tal fato a pouca similaridade
desse preparados a D. mollis. J os tratamentos TR-VIC 09 Sulphur 12 CH
(810,14 g/mL ), seguido de TR-VIC 05 Phosphorus 12 CH (tm =709,83
g/mL); TR-VIC 11 ETOH 12 CH ( tm =595,71 g/mL ); TR-VIC 10 ETOH 6
CH (tm =536,70 g/mL); TR-VIC 16 Fungos 12 CH (Dimorphandra mollis

316
fungi) (530,78g/mL); TR-VIC 03 H
2
O 12 CH (tm =446,80g/mL) e TR-VIC
08 Sulphur 6 CH (tm =426,23 g/mL) tem alta similaridade com D. mollis no
que concerne produo de compostos fenlicos produzido como mecanismo
de defesa (desequilbrio energtico levaria a aumento da produo de
compostos secundrios).
Por similaridade (Simillium) entende-se, o aumento imediato da ao de
resposta de dado tratamento em relao testemunha, no caso, compostos
fenlicos. Segundo HAHNEMANN (1810) nos organismos vivos, qualquer afeco
dinmica mais fraca extinta de maneira durvel pela mais forte; e se esta,
difere em espcie, se assemelha muito em manifestao. A ao do simillium
orientar a fora vital a fim de atingir o equilbrio e defesa do vegetal da melhor
forma possvel (HAHNEMANN, ORGANON, PARGS 12, 16, 25 e 26).
Segundo BONATO (2004) o estresse fisiolgico em plantas devido a
condies externas que afetam o crescimento, desenvolvimento e
produtividade, relacionando-o a condies biticas ou abiticas que afetariam a
energia vital resultando em distrbio fisiolgico. O mecanismo de escape de
tais situaes em plantas seria no sentido de produzir efeitos opostos a ao
dos agentes inspitos, em maior ou menor intensidade de acordo com suas
possibilidades biolgicas, visando o reequilbrio de sua energia vital. Destaca
ainda, que a resposta energtica ocorre em nveis fisiolgicos ou bioqumicos
se os agentes agressores forem de densidade quantitativa maior, como 6 CH e
12 CH, e no nvel energtico se forem qualitativos.
Nos tratamentos TR-VIC 14 - Pequi 12 CH (C. brasiliensis frutis) e TR-
VIC 13 - Pequi 6 CH (C. brasiliensis frutis); TR-VIC 05 - Phosphorus 12 CH e
TR-VIC 04 - Phosphorus 6 CH, os teores de compostos fenlicos so 130,0 e

317
4,7 vezes superiores em 12 CH em relao a 6 CH, respectivamente, indicando
que o aumento da dinamizao leva a tentativa de defesa do vegetal, buscando
reorganizar a fora vital. BONATO (2004) hipotetizou que, em plantas, com base
em experimentaes de freqncia e comprimento de onda (Fsica Quntica), a
medida que se dinamiza o preparado homeoptico, muda-se a amplitude do
comprimento de onda e a freqncia permanece constante. Inferiu tambm que
quanto mais alta a dinamizao maior a amplitude da onda, porm no
significando que determinado preparado homeoptico cause respostas
fisiolgicas crescentes e to pouco haja linearidade em tais respostas.
Comprovando tal teoria, ARRUDA et al (2005) estudando plantas
adultas floridas e no floridas de Achilleia millefolium tratadas com o preparado
homeoptico Sulphur 3 CH nos perodos de 5, 9 e 12 dias verificaram que a
concentrao de compostos fenlicos aumentaram nos quinto e no nono dia,
aps aplicao, tendo, as plantas floridas maior teor (2,18; 1,8 e 1,87 vezes
maior na testemunha no florida, testemunha florida e plantas no floridas,
respectivamente). Atribuem a no variabilidade dos teores aps o dcimo
segundo dia a Lei de Royal, em que baixas dinamizaes tem efeito rpido,
porm, no duradouro e no linearidade das respostas. Concluem que tal
aumento proporcionado pelo preparado homeoptico estaria relacionado aos
ciclos vegetativos da espcie, uma vez que em perodo de florao,
mecanismos naturais de defesa a herbivoria estariam mais ativos,
conseqentemente com maior produo de fenis totais.
FIDELIS et al (2003) trabalhando com a linearidade de resposta
comprovaram que em Sphagneticola trilobata, ao usarem Sulphur 3 CH, as
concentraes de compostos fenlicos (taninos) aos 30 dias que era de 1,09%

318
e aumentava 77 vezes aos 120 dias (1,93%). Ainda em S. trilobata, NUNES et al
(2005) avaliaram a resposta preparao homeoptica Sulphur, quantificada
pelo teor de tanino no tecido foliar, estudando o efeito aditivo da dose e tempo
de persistncia da homeopatia; efeito da aplicao em relao posio das
folhas; potncias e diluies das solues aplicadas mostrando que a aplicao
da homeopatia causou oscilaes nos teores de taninos nas folhas, devido ao
fenmeno rtmico, com alteraes no metabolismo primrio e secundrio,
indicando ressonncia entre a planta e o preparado homeoptico, com tempo
de persistncia durando 10 dias. Conclui ainda, que a aplicao nas folhas do
pice a intensidade de resposta na produo de taninos, tende a ser maior e
diminuir com o tempo (10 dias) e houve ausncia de efeito aditivo.

4.2.4 Doseamento de flavonis em folhas, frutos e plantas cultivadas de
Dimorphandra mollis
Doseamento por espectrofotometria envolve processos elaborados que
so expressos pela intensidade da cor desenvolvida por cada classe de
compostos e da quantidade extrada de compostos mediante determinados
reagentes. A cor da substncia no caracterstica fsica desta, pois depende
do tipo de luz incidente, solventes e reagentes utilizados na sua extrao; os
flavonides e flavonis, por exemplo, reagem com cloreto de alumnio e
vanilina-sulfrico-clordrica respectivamente, formando complexos de cor
amarela, lidos em 425nm e 500nm (COSTA, 2000).
A quantificao de compostos fenlicos e flavonides em plantas, nessa
dcada, tm tido relevante importncia devido a suas propriedades
antioxidantes, anticarcinognicas e cardiovasculares. Desde o sculo XIX, no

319
entanto, sabe-se que na medicina tradicional, a maioria das plantas hoje
estudadas como potencial fonte de flavonis, j eram utilizadas como
medicamentos no combate a molstias infecto-urinrias, estomacais e
intestinais (CHEN & ZUO, 2006). No sculo passado, D. mollis era usada pelos
habitantes do Cerrado, como forrageira de animais, em curtumes e como
enchimento de almofadas, selas e cangalhas (PIO CORRA, 1984). Hoje, os
coletores do norte de Minas acreditam que os frutos so utilizados pelas
indstrias na fabricao de rao de sunos; sem uso medicinal, pois letal a
bovinos. At os meados de 1990, era comum, que se cortassem as rvores
adultas e rebrotas das pastagens ocasionando a destruio do hbitat, a
formao de distribuio restrita e de populaes isoladas, fatores
determinantes na sua incluso na Listas Amarela das espcies ameaadas de
extino (IBAMA, 2006; COPAM, 1997, DEPRN, 1998).
Os flavonis no ocorrem livremente nos vegetais, estando quase
sempre disponveis na forma de O-glicosdeos, como ocorre em D. mollis, onde
o glicosdeo (rutina) aps reao de hidrlise libera a aglicona (quercetina) e o
acar.
A quantificao de flavonis nos tratamentos (TRF-MOC, TR-VIC e TFR-
MOC) e o rendimento do processo esto interligados aos solventes adotados
na extrao desses e na metodologia de doseamento de flavonis.
Ao se escolher a metodologia proposta por J AYAPRAKASHA et al (2001) e
de BUTLER et al (2002) levou-se em conta a praticidade da anlise e a
capacidade que os flavonis tm de reagir com a vanilina clordrico-sulfrica,
revelador especfico a meta-fenis (MONTEIRO et al, 2005) formando compostos
coloridos (flavonis possuem grupos cromforos que absorvem radiao

320
eletromagntica), e aumentando a conjugao dos anis aromticos alm da
especificidade/ sensibilidade da metodologia a flavonis (QUEIROZ et al, 2002)
O solvente e a polaridade escolhida em determinado procedimento
extrativo determinam a toxicidade ou pureza do produto final, no caso rutina,
acarretando tambm, maior ou menor teor de flavonis. Como visualizado na
anlise de flavonis em diferentes solventes polares, a anlise do extrato (TR-
SOLV 15) Acetona/ gua (50:50) proporcionou maior teor de flavonis,
necessitando anlises residuais toxicolgicas. Ainda, de acordo com PEDRIALI
et al (2005), o aumento da solubilidade propiciaria melhora de estabilizao das
cores naturais que os flavonis possuem por formar complexos moleculares
com pigmentos (copigmentao), sendo que essa reao limitada pela
solubilidade dos flavonis.
A opo por extrato metanlico vem da usualidade e praticidade em
trabalhar com solventes polares e de trabalhos referncia com flavonis como
J AYAPRAKASHA et al (2001), BERNADINI et al (2005); KOURI et al (2006); GLEN
et al (2007), alm da facilidade que teriam os produtores/ coletores de obt-lo.
Em frutos e folhas o teor de flavonides do TRF-MOC 10 e TFR-MOC 10
foi superior, indicando que os mecanismos de defesa, proteo e interao
com o ambiente estariam mais ativados que nos demais tratamentos, sendo
necessrias investigaes de fitoqumicas, fitosociologias e florsticas da rea
Pt-290, na tentativa de averiguar outras possveis interaes (planta-ambiente,
planta-animais, fatores edficos-climticos, variabilidade gentica) que
permitissem ou justificassem tal comportamento.
No houve diferenas significativas entre os tratamentos TRF-VIC 01 a
16, exceto em TR-VIC 13 - Pequi 6 CH (Caryocar brasiliensis frutis). A no

321
variabilidade de teores de flavonides entre os tratamentos TR-VIC 01 a 16
pode ser relacionada estreita amplitude de resposta, necessitando estudos
que propiciassem aplicaes dos preparados homeopticos em escala
crescente de dinamizaes com acompanhamento dirio de teores de
flavonis.
O tratamento com o preparado homeoptico Pequi TR-VIC 13 no
teve identificao com a espcie em estudo, ocorrendo pouca similaridade, no
induzindo resposta significativa, to pouco patogenesia, porm, dificultou o
desenvolvimento da espcie, funcionando como inibidor, que
homeopaticamente pode ser definido como agente causal de agravao. A
escolha do tratamento Pequi seguiu indicaes agronmicas de produtores
locais que utilizam o fruto do pequizeiro na induo de crescimento de plantas
do Cerrado e por ser tambm o Caryocar brasiiensis planta nativa do Cerrado
brasileiro, rica em vitaminas e flavonides.

4.2.5 Quantificao de rutina por HPLC em folhas, frutos e plantas
cultivadas de Dimorphandra mollis
O isolamento de rutina de folhas, frutos e plantas cultivadas de D. mollis
em metanol seguida do preparo da amostra em meio cido (gua pH =3,0)
promovem a hidrlise parcial da rutina em quercetina, isoquercetina e ramnose
(figura 15), tais compostos so mais caros e bem mais difceis de serem
encontrados livremente na natureza. A importncia de utilizar metodologia
adequada no isolamento evitar a hidrlise total da rutina. A anlise por HPLC
e as condies estabelecidas permitiram boa separao entre os picos
facilitando a identificao da rutina (tr =5,6), conforme a figura 9.

322
A concentrao de flavonis nos tratamentos diretamente proporcional
eficcia do processo de secagem, do tipo e da polaridade do solvente
extrator, no caso Metanol, e do procedimento adotado em sua identificao e
quantificao uma vez que, a produo do extrato metanlico em TRF-MOC,
TFR-MOC e TR-VIC foi feita com 400 mg de massa seca.
Considerando que todos os tratamentos em anlise TR-VIC e TRF-MOC
foram secos nos mais rigorosos critrios, h de se supor as variveis
indesejveis como excesso de umidade residual, contaminao por patgenos,
alteraes enzimticas no possam estar interferindo nas anlises. EM TFR-
MOC torna-se mais improvvel o aparecimento de interferentes, pois, o
processamento da matria-prima (frutos) mais demorado e exige
temperaturas mais altas e umidade residual muito baixa (menor que 4%, FARM.
BRAS. IV, 2003).
As amostras de TFR-MOC 01 a TFR-MOC 12 tm alta concentrao de
rutina, confirmando o potencial da espcie D. mollis como fonte de obteno de
flavonides, alcanando os frutos como no TFR-MOC 12 (292) os teores de
982,55 mg/g de massa seca, permitindo destac-la como matriz de estudos
genmicos (DNA, germoplasma, isoenzimas, variabilidade) e estudos
fitotcnicos (germinao, crescimento, resistncia, melhoramento).
Em TFR-MOC 08 e TRF-MOC 08, os teores de rutina em frutos e folhas
foram altos, ao contrrio do que observado em TRF-MOC 07 e 12 e TFR-MOC
07 e 12, onde houve maior produo em frutos e mais baixa em folhas,
indicando que a produo de rutina (flavonol) est concentrada nos frutos. Tal
fato pode ser visto como estratgia adaptativa da espcie a proteo de frutos
e aumento da resistncia, ou ainda a baixa luminosidade nas folhas e mais

323
altas nas partes areas superiores, estimulando a produo de compostos
fenlicos.
Em anlise de folhas e frutos confirma-se a hiptese citada
anteriormente, ou seja, as folhas funcionam como fonte de rutina (tmx =15,90
mg/g e tmn = 0,53 mg/ g) nas entressafras dos frutos. Tais valores de
substncia isolada em produto natural podem ser considerados como
excelentes, pois raro conseguir-se rendimentos to expressivos.
A sensibilidade, especificidade e eficcia do mtodo HPLC tambm
pode ser ressaltada ao serem comparados esses resultados com doseamento
quantitativo em espectrofotmetro onde os tratamentos com mais altos teores
so em HPLC os menores ou de teores intermedirios, como acontece em
frutos e folhas (quadros 6 e 10; 5 e 9). Tal variao pode ser relacionada ao
limite de saturao, extrao e solubilidade da rutina nos tratamentos em meio
vanilina metanlica e cido clordrico resultando na formao de complexos
insolveis (precipitados), com conseqente saturao da cor ou hidrlise da
rutina, em cido clordrico 4%.
Quando se analisaram os menores teores apenas o tratamento TFR-
MOC 11 (frutos) tem em ambos mtodos, concentraes diminutas, no
ocorrendo em folhas. Em TR-VIC (plantas cultivadas com preparados
homeopticos) tal relao tambm pode ser inferida nos tratamentos TR-VIC
07 (Kali phosphoricum 12 CH) e TR-VIC 13 (Pequi 6 CH) (quadros 4 e 8).
Em ambas as metodologias, em plantas cultivadas h nos tratamentos
TR-VIC 15 Fungos 6 CH (D. mollis fungi ), TR-VIC 12 Carbo vegetabilis 12 CH
e TR-VIC 09 Sulphur 12 CH, com indutor de maiores teores de flavonol (rutina)
e compostos fenlicos (quadros 4 e 8).

324
O uso de preparados homeopticos na estimulao de compostos
secundrios de interesse em sistemas de cultivo em ambiente protegido. Os
medicamentos homeopticos como Sulphur, Mercurius, Phosphorus, Carbo
vegetabilis, Arsenicum album, Cinna e isoterpicos tm sido utilizados em
experimentaes com plantas (CASALI, 2000; BONATO, 2004; CASTRO et al,
2003; ANDRADE et al, 2001; DUARTE et al, 2003; ARMOND et al, 2003; ARRUDA et
al, 2005; ROSSI et al, 2005; BRIZZI et al, 2005, e 2000; BAUMGARTNER et al 2004;
HAMMAN et al, 2003, DITTMANN et al, 1996; DATTA, 2006; BINDER et al, 2005;
BETTI et al, 2003) objetivando avaliar o desempenho e relacionar as alteraes
metablicas decorrentes desses preparados.
Sulphur (enxofre) constituinte mineral de plantas bem como
Phosphorus (fsforo) e ambos funcionam como co-fatores enzimticos na
produo de protenas, acares, aminocidos e conseqentemente no
processo fotossinttico, respiratrio e na via biossinttica de compostos
secundrios.
O fsforo est presente na transferncia de energia, diviso celular,
crescimento das clulas, promove a formao e crescimento prematuro das
razes, melhora a qualidade de muitas frutas e verduras, sendo vital a formao
de sementes e maturao de frutos, auxilia as razes e plntulas a se
desenvolverem mais rapidamente, aumentando a resistncia ao frio, a
patgenos, herbivoria e ao estresse hdrico (LOPES, 1998). Os fitatos so os
compostos de reserva de fsforo em sementes e frutos e representam
aproximadamente 50% do fsforo total em sementes de Fabaceae
(Leguminosae) e de 60 a 70% em gros de cereais. A funo do fitato na
germinao de sementes atuar, principalmente, nos primeiros estgios de

325
crescimento das plntulas, quando o embrio tem alta exigncia de nutrientes
minerais, incluindo o fsforo, na formao dos fosfolipdios das membranas
celulares e cidos nuclicos (MARSCHNER, 1995). O enxofre ainda constituinte
estrutural de membranas, estimula o desenvolvimento vegetativo das plantas,
quando h deficincia, as folhas se tornam ligeiramente amareladas
(MARSCHNER, 1995).
O medicamento homeoptico Carbo vegetabilis o carvo vegetal, onde
todos macronutrientes (N, S, P, K, Ca e Mg) e micronutrientes (Zn, Cu, Fe, Mn,
B, Mo, Cl e Co) esto presentes, em quantidades diminutas, essenciais ao
resgate da informao e de suas funes no organismo vegetal.
Em Homeopatia, a diluio favorece a resposta do sistema e aumenta a
eficcia dos preparados homeopticos frente ao metabolismo vegetal (primrio
e secundrio), assim quanto menor for a quantidade de matria (i.e, macro e
micronutrientes), mais informao estar disponvel. A informao contida no
medicamento homeoptico pode ser reconhecida pelo metabolismo da espcie,
vindo a agir na estimulao/ inibio de determinada substncia, como
mecanismo de resposta a agentes externos, em favorecimento ou detrimento
de uma via metablica.
Em D. mollis, a plntula reconhece a informao homeoptica contida
nos medicamentos Sulphur, Phosphorus, Carbo vegetabilis, durante a
formao de folhas e frutos podem absorver e metabolizar o enxofre e o fsforo
elementar, como se fossem os macronutrientes, favorecendo o crescimento e
desenvolvimento da planta.
Outro aspecto que pode ser considerado que D. mollis planta do
Cerrado fixadora de alumnio, no entanto, suas folhas no tm o aspecto

326
xeromrfico, causado pelas condies oligotrficas como solos cidos, com
elevados teores de alumnio e ferro, pobres em nutrientes. Ao administrar a
informao contida nos medicamentos homeopticos, mecanismos de
proteo/defesa seriam ativados e conseqentemente tm-se respostas no
metabolismo celular.

Figura 15: Rutina hidrolisada em meio cido resultando em quercetina,
isoquercetina e ramnose.

Fonte: Adaptado de Merck Brasil, 2007

4.2.6. Extrao e Processamento de rutina em extrato aquoso
A extrao com gua destilada e precipitao de flavonis rutina e
quercetina em PPt-PO considerada processo eficiente, barato e de fcil
execuo, com excelente rendimento (PPt-PO tm =35%), demandando mo-
C
6
H
12
O
5

C
12
H
20
O
9

C
15
H
10
O
7

HCl 4%
HCl 4%
HCl 4%

327
de-obra pouco especializada e equipamentos de baixo custo, facilitando a
formao de cooperativas de coleta e beneficiamento de frutos de D. mollis.
A importncia de obter extrato aquoso de frutos de D. mollis, como
ocorreu em PPT-PO, est na baixa toxicidade e pureza do produto obtido, visto
que a gua veculo de vrios produtos farmacuticos e est presente na
constituio dos seres vivos e do planeta.
Ainda existe a possibilidade de aps a extrao de flavonis com gua
destilada, utilizar-se o liofilizador, que retiraria a gua e liberaria os flavonis
(rutina e quercetina) em p (Liofilizao), a exemplo do que ocorre com leite
em p (liofilizador e secador de leito fluidizado).
As anlises de qualidade deste precipitado (PPt-PO) podem ser feitas
com tcnicas simples e especficas como identificao dos cristais por CCD,
como em PPt-PO com Rfs =0,56 e 0,69 ou por temperatura de fuso, e ainda,
por anlises mais elaboradas como doseamento por espectrofotometria ou
cromatografia lquida de alta afinidade (HPLC).
A metodologia proposta pode ser adequada aos coletores de favas de D.
mollis da regio de Cerrado do Norte de Minas, visando agregar valor
financeiro ao produto, facilitando a comercializao deste e propondo nova
frente de trabalho/ renda aos coletores, j que 60kg de frutos de D. mollis
comprado por R$ 0,60 ou $ 0,24 (sessenta centavos de Real ou vinte e 1quatro
cents de Dlar) e 1 Kg de rutina aps beneficiamento, com alto padro de
qualidade, tem custo em torno de $389,00 dlares (trezentos e oitenta e nove
dlares cotao Sigma) e quercetina de $944,00 (novecentos quarenta e nove
dlares) ou R$ 1050,00 (Um mil e cinqenta reais) e R$ 2548,00 (dois mil
quinhentos e quarenta e oito reais) respectivamente; sendo necessrios, com o

328
rendimento (PPt-PO tm = 35%), cerca de 2,860 kg de frutos na dolres
obteno de 1 Kg de rutina.
Alm de agregar valor financeiro e social, o produto pr-beneficiado
seria a forma mais barata e adequada de transporte at aos centros
tecnolgicos, propiciando gerao de renda e valorizao cultural da populao
do Cerrado pelas indstrias farmacuticas.

4.2.7. Extrao e Processamento de rutina em extrato metanlico
A extrao de frutos de D. mollis com metanol (TR-EXT), solvente
orgnico, sub-produto de destilao da cachaa, bebida alcolica produzida
com abundncia no Norte de Minas Gerais interessante pois poderia
aproveitar os maiores rejeitos dos alambiques locais (produtores), no caso o
metanol, constituindo extrato mais elaborado, mas de fcil execuo, com
excelente rendimento (PPt-PO tm =38,38%), tambm propiciando a criao de
cooperativas de coleta e beneficiamento de frutos de D. mollis.
No mesmo raciocnio da proposio do extrato aquoso, no extrato
metanlico (TR-EXT tm =38,38%) a quantidade de favas (frutos) de D. mollis
necessrios obteno de 1 Kg de rutina seria de aproximadamente 2,605 Kg
de frutos.
importante que se pense e viabilize, como em TR-EXT, novas
tecnologias que permitam o enriquecimento, uso e manejo sustentado do
Cerrado, possibilitando aos seus habitantes, populao to carente, formas de
aumento de recursos financeiros e subsistncia famlia agro-extrativista.

329

5. CONCLUSES

Os preparados homeopticos Fungos (Dimorphandra mollis fungi) 6
CH e o medicamento Carbo vegetabilis 12 CH favoreceram aumento
da sntese de flavonide (rutina 3-rutinosdeo quercetina).
A presena de cido tnico somente no em plantas cultivadas (TR-
VIC), dentre os tratamentos TF-MOC, TFR-MOC, TRS-MOC e TR-PO
pode ser relacionada necessidade de defesa da espcie,
caracterizando patogenesia.
O tratamento TR-SOLV 15 ACONA/ H
2
O (acetona/ gua 50:50)
mais eficiente na extrao de flavonis do que nos solventes isolados
TR-SOLV 13 ACONA (acetona P.A.) e TR-SOLV 16 H
2
O (gua)
comprovando a influncia do meio aquoso na eficcia do processo
extrativo.
O teor mdio de compostos fenlicos encontrado em folhas de plantas
adultas (TRF-MOC) possibilita a respectiva utilizao como fonte de
compostos fenlicos e flavonides.
As folhas de Dimorphandra mollis coletadas em Montes Claros na
coordenada Pt-PO1 (292) possui os maiores teores de compostos
fenlicos, indicando possvel matriz de estudo de germoplasma.

330
O tratamento TR-VIC 09 Sulphur 12 CH foi mais eficaz na induo de
compostos fenlicos.
Em frutos e folhas o teor de flavonides do TRF-MOC 10 (folhas pt-
290) e TRF-MOC 01 (folhas pt-280) e TFR-MOC 08 (frutos pt-288) e
TFR-MOC 12 (frutos pt-292) foram maiores, indicando que os
mecanismos de defesa, proteo e interao com o ambiente estariam
mais ativos que nos demais tratamentos, sendo necessrias
investigaes de fitoqumicas, fitosociologias e florsticas das reas Pt-
280, Pt-290, Pt288 e Pt292, na tentativa de averiguar outras possveis
interaes (planta-ambiente, planta-animais, fatores edficos-
climticos, variabilidade gentica) que justificassem tal
comportamento.
O processo de extrao com gua destilada e precipitao dos
flavonis rutina e quercetina em PPt-PO eficiente, barato e de fcil
execuo, com rendimento de 35%.
A extrao com metanol no tratamento TR-EXT permite a utilizao do
sub-produto de destilao da cachaa, com excelente rendimento
(PPt-PO tm =38,38%).
A criao de cooperativas de coleta/ beneficiamento utilizando
extrao aquosa ou metanlica de frutos e de folhas de D. mollis,
agregaria valor scio-econmico, como o agro-extrativismo
sustentvel, o manejo adequado e a conscientizao da populao/
coletores da importncia da biodiversidade do Cerrado.

331

ANEXO 1

Figura 3: reas de coleta de D. mollis correspondentes aos tratamentos TRF-
MOC 01 a TRF-MOC 12 (folhas) e TFR-MOC 01 a TR-MOC 12 (frutos).
Legenda
PONTOS GPS
Pt
TRATAMENTOS
FRUTOS
TRATAMENTOS
FOLHAS
281 TFR MOC 01 TRF MOC 01

332

333

334

335

336

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