LEOQ 9

Clase II

Crecimiento Microbiano

Es un incremento en el nmero de clulas o
aumento de la masa microbiana. El crecimiento es
un componente esencial de la funcin microbiana,
ya que una clula individual tiene un perodo de vida
determinado en la naturaleza y la especie se
mantiene solamente como resultado del crecimiento
continuo de la poblacin celular. En muchas
situaciones prcticas es necesario el control de la
poblacin celular, el conocimiento de cmo se
expande es til para el diseo de mtodos de
control para el crecimiento microbiano. Una
bacteria es una mquina capaz de duplicarse as
misma. Los procesos sintticos de crecimiento
celular bacteriano implican no menos de 2000
reacciones bioqumicas de una gran variedad de
tipos. Las reacciones principales de la sntesis
celular son de polimerizacin, luego se ensamblan
las macromolculas, se forman las estructuras
celulares: pared celular, membrana citoplasmtica,
flagelos etc.

El crecimiento microbiana ocurre por fisin binaria,
bajo las mejores condiciones de E. coli puede
completar su ciclo en 20 minutos. El control de la
divisin celular est ntimamente ligado a los
acontecimientos de replicacin cromosmica.

Crecimiento de poblaciones

La velocidad de crecimiento es el cambio en el
nmero de clulas por unidad de tiempo. El tiempo
requerido para que a partir de una clula se formen
dos clulas o el tiempo requerido para duplicar una
poblacin de clulas se llama tiempo de generacin
o tiempo de duplicacin. En una sola generacin se
duplica el nmero de clulas o masa celular, en
minutos en ocasiones en horas o das.


Crecimiento exponencial

Modelo de incremento de la poblacin en el que el
nmero de clulas se dobla cada cierto perodo de
tiempo. Una de las caractersticas del crecimiento
exponencial es que la velocidad de incremento en el
nmero de clulas es lenta inicialmente pero
despus incrementa constantemente. Como
muestra la figura 1, tpica curva de crecimiento
exponencial expresada aritmticamente, la
pendiente va incrementando progresivamente. Esta
figura se obtuvo de un crecimiento de una nica
clula que tiene un tiempo de generacin de 30
minutos, tabla 1. En la figura 2 se presenta el
nmero de clulas en escala logartmica versus
tiempo en escala aritmtica (Grfico semilog) lo que
da una lnea recta, este es un inmediato indicador
de que las clulas estn creciendo
exponencialmente. Este tipo de grficos semilog es
util para la estimacin de tiempos de generacin a
partir de datos experimentales, el tiempo de
generacin puede leerse directamente a partir del
grfico figura 3.


Tiempo
(horas)
Nmero total
de clulas
0 1
0.5 2
1 4
1.5 8
2 16
2.5 32
3 64
3.5 128
4 256
4.5 512
5 1.024
5.5 2.048
6 4.096
.
.
.
.
10 1.048.576

Tabla 1. Incremento del nmero de clulas en el
tiempo.


















Figura 1. Velocidad de crecimiento de un cultivo
microbiano. Escala lineal. Datos de la poblacin
duplicada cada 20 minutos.


0 1 2 3 4 5 6
0
1000
2000
3000
4000
Data: Data1_B
Model: Boltzman
Chi^2 = 1.8733E-7
A1 -0.05074 0.00493
A2 0.09273 0.00037
x0 3.25278 0.38573
dx 5.84933 0.14841
Nmero de clulas en escala aritmtica
N
u
m
e
r
o

t
o
t
a
l

d
e

c

l
u
l
a
s
Tiempo ( horas )

LEOQ 10
















Figura 2. Velocidad de crecimiento de un cultivo
microbiano. Escala logartmica

















Figura 3. Modelo de estimacin de los tiempos de
generacin.



En algunos casos es necesario emplear una
ecuacin diferencial para expresar relaciones
cuantitativas de crecimiento:

X
dt
dX
=

dt
X
dX
=



=
t
o
X
Xo
dt
X
dX


t Xo X = ln ln (1)

t
Xo
X
=

ln

e
t
Xo
X
=

e
t
Xo X

=

Duplicacin de la poblacin

2 =
Xo
X


e
tgen
= 2

tgen = 2 ln

( )
tgen tgen
1
2 ln
2 ln
= =

( ) K K 693 . 0 2 ln = =

Reemplazando en (1)

K Xo X 693 . 0 ln ln =

t
Xo X
K
693 . 0
ln ln
=

Donde K es la constante de crecimiento para un
cultivo cerrado, y K estn relacionadas y reflejan
el proceso de crecimiento de una poblacin que
incrementa exponencialmente.

Las densidades poblacionales bacterianas se
expresan en notacin cientfica mediante potencias
de 10, por tanto en la ecuacin

e
t
Xo X

=
se pueden convertir los logaritmos neperianos a los
logaritmos base 10 y sustituir la constante
instantnea por K:

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5
10
100
1000
Data: Data1_B
Model: Boltzman
Chi^2 = 1.8733E-7
A1 -0.05074 0.00493
A2 0.09273 0.00037
x0 3.25278 0.38573
dx 5.84933 0.14841
Nmero de clulas en escala logaritmica
N
u
m
e
r
o

t
o
t
a
l

d
e

c

l
u
l
a
s
Tiempo ( horas )

0 1 2 3 4 5
1E7
1E8
t=2
n=1
g=t/n= 2 horas
C

l
u
l
a
s

/

m
l
tiempo ( horas )

LEOQ 11
t
X X
K
o t
301 . 0
log log
10 10

=



Clculo del tiempo de generacin

Para muchos propsitos en microbiologa es til
conocer el tiempo de generacin de una poblacin
microbiana durante el crecimiento exponencial, de
la figura 2 se deduce que el crecimiento bacteriano
exponencial es una progresin geomtrica, existe
una relacin directa entre el nmero de clulas
presente en el momento inicial y el habido en un
momento determinado del crecimiento exponencial
as:

n
N N 2
0
=

N= nmero final de clulas, No= nmero inicial de
clulas y n= nmero de generaciones que ha
ocurrido durante el perodo de fase exponencial, el
tiempo de generacin de la fase exponencial se
calcula t/n, donde t= horas o minutos de crecimiento
exponencial y conociendo N y No, es posible
calcular el nmero de generaciones y a su vez el
tiempo de generacin.

Para expresar la ecuacin
n
N N 2
0
= en trminos
de n, es necesario la siguiente transformacin

n
N N 2
0
=

2 log log log
10 0 10 10
n N N + =

2 log
log log
10
0 10 10
N N
n

=

301 . 0
log log
0 10 10
N N
n

=


De la figura 3 para un tiempo de generacin de 2
horas. N = 10
8
, No = 5x10
7
.

n = Log 10
8
Log (5x 10
7
) / 0.301

n = 9 - 8.69 / 0.301 = 1

Por lo tanto el tiempo de generacin, g = t/n = 2/1 =
2 horas. El tiempo de generacin puede calcularse
de la pendiente en un grfico semilog de
crecimiento exponencial, como pendiente = 0.301/g.
Con el conocimiento de n y t se puede calcular g
para microorganismos creciendo exponencialmente,
bajo diferentes condiciones de crecimiento.

Ejercicio


Tiempo
(horas)
Nmero total
de clulas
0 300.000
2 1.41x10
8
4 9.95x10
10
6 3.3x10
14
8 2.7x10
16
14 1.22x10
26
18 2.16x10
29



-Sin hacer aproximacin por mnimos cuadrados,
calcule

-Grafique y obtenga y K.

-Obtenga el tiempo de duplicacin grfico y terico.


Ciclo de crecimiento de poblaciones

Se ha visto el ciclo de crecimiento parcialmente en
la parte de crecimiento exponencial. Un cultivo
bacteriano simple y homogneo tiene un ciclo de
crecimiento como el que se representa a
continuacin. puede dividirse en varias fases:
Fase de latencia, exponencial, estacionaria y de
muerte, ver figura 4.

Fase de latencia: Cuando una poblacin microbiana
se inocula en un medio fresco, el crecimiento ocurre
despus de cierto tiempo. Si un cultivo en
crecimiento exponencial se inocula exactamente el
mismo medio, no se observa esta fase sino que
sigue creciendo exponencial, se requiere cuando
las clulas se toman de un cultivo viejo, tambin
cuando las clulas han sido daadas por
tratamientos: radiaciones, txicos, calor,





LEOQ 12
















Figura 4. Curva tpica de crecimiento de una
poblacin bacteriana (4).



tambin cuando se pasan de un medio rico a un
medio pobre.

Fase exponencial: Es la consecuencia de que una
clula se divida en dos, estas en otras dos y as
sucesivamente, la mayora crecen
exponencialmente pero las velocidades de
crecimiento exponencial pueden variar
esencialmente. Es influenciada por las condiciones
ambientales (temperatura, composicin del medio
de cultivo) y por las caractersticas genticas del
microorganismo las procariotas crecen ms
rapidamente que las eucariotas.

Fase estacionaria: En un cultivo donde no se
renueva el medio un cultivo el crecimiento
exponencial no puede ocurrir indefinidamente. Una
bacteria pesa alrededor de una billonesima de
gramo (10
-12
g), cada 20 minutos en 18 horas
producir una poblacin bacteriana cerca de 4000
veces el peso de la tierra, obviamente es imposible
mantener ese ritmo de crecimiento. Habitualmente
un nutriente esencial del medio de cultivo se acaba,
o algn producto de desecho se acumula en el
medio hasta que alcanza una concentracin
inhibitoria de crecimiento exponencial. La poblacin
alcanza la fase estacionaria. No hay incremento
neto o decremento del nmero de clulas. Sin
embargo, aunque no hay crecimiento, ocurren
funciones celulares, incluyendo el metabolismo
bioenergtico y algunos procesos biosintticos.
Algunos microorganismos pueden tener un
crecimiento lento, algunas clulas crecen y otras
mueren, siendo el balance total de ausencia de
incremento en el nmero de clulas, esto se conoce
como crecimiento crptico.

En E. coli se han identificado genes que son
necesarios para la supervivencia durante esta fase
genes sur, si existen mutaciones conducen
rpidamente a la muerte celular a medida que
entran en la fase estacionaria.

Fase de muerte: Si la incubacin continua despus
que la poblacin alcanz la fase estacionaria las
clulas entran en fase de muerte, en algunos casos
acompaada de lisis celular, es tambin de acuerdo
a la figura 4 una funcin exponencial. Sin embargo,
en muchos casos la velocidad de muerte es mucho
ms lenta que la velocidad de crecimiento
exponencial.

Medicin del crecimiento

Se mide siguiendo los cambios en el nmero de
clulas o el peso de la biomasa celular. Existen
diversos mtodos para contar el nmero de clulas
o para estimar la masa celular dependiendo del
microorganismo.

Contaje total de clulas

-Contaje directo, en muestras secas o lquidas, en
lquidas se requiere de una cmara especial de
Petroff-Hausser:





















Figura 5. Contaje microscpico directo usando la
cmara de de Petroff-Hausser (2).



LEOQ 13
Para la observacin microscpica; se cuentan todas
las clulas en un cuadrado; por ejemplo 12 clulas
(en la prctica se halla la media de varios
cuadrados), cada rejilla tiene 25 cuadrados grandes
y un rea total de 1 mm
2
y un volumen de 0.02
mm
3
. Para calcular el nmero por mililitro de
muestra:

12 clulas x 25 cuadrados x 50 x 10
3
=1.7 x 10
7



nmero por mm
2

nmero /mm
3

nmero /cm
3
(ml)

Cuando la muestra no est teida se requiere un
microscopio de contraste de fases.

-Contaje de viables

El anterior cuenta tanto clulas vivas como clulas
muertas, para el contaje de vivas est el mtodo de
contaje para viables, contaje en placa o contaje de
colonias, una colonia es una clula viable que
puede dar lugar a una colonia, ver figura 6.


















Figura 6. Tcnica de contaje en placa (2).

Se pude hacer de dos maneras:

Siembra en superficie: se siembra con una asa de
siembra y se incuban las colonias, se cuentan las
que crezcan en la superficie.

Vertido en placa: Es una siembra a profundidad, se
pipetea un volumen conocido (0.1-1 ml) en el medio
de cultivo fundido previamente y enfriado a 40 C,
se vierte se mexcla e incuba. El organismo debe
resistir 40-45 C. Se cuentan tanto las colonias de
superficie como las que estn sumergidas en el
medio.

El nmero de colonias debe oscilar entre 30-300. Si
se obtiene este nmero en la dilucin 1/1000, por
ejemplo 159 colonias x factor de dilucin (10
3
), es el
reciproco de la dilucin (10
-3
), se reporta 1.59 x 10
5

UFC/ml de muestra.

Medidas de masa celular y de turbidez

A veces es ms importante estimar la masa celular
que el nmero. Como son proporcionales se
determina un parmetro para estimar el otro. La
masa seca obtenida por peso seco es
aproximadamente el 10% y el 20% de la masa
hmeda. Otro mtodo son las medidas de turbidez,
aunque muestras por encima de 0.5 de D.O pierden
linearidad.

























Figura 7. Espectrofotometro para medir difraccin
de la luz (3)



Este mtodo se emplea ampliamente para seguir el
crecimiento de cultivos microbianos; se puede
medir repetidamente la misma muestra y construir
grficos semilog para calcular tiempos de
generacin, ver figura 7.


LEOQ 14
















Figura 7. Curva patrn de biomasa para
Acetobacter aceti (8)



Nutricin y condiciones de crecimiento como
agentes selectivos en poblaciones naturales

Los microorganismos en la naturaleza son capaces
de mejorar el papel de recicladores de la materia
orgnica e inorgnica, ya que existen diversas
especies y diferentes requerimientos metablicos,
ejemplo Streptococus lactis, es un importante
miembro de un digestor anaerobio y en una herida
humana puede causar gangrena, debido a su
habilidad de digerir protenas anaerobicamente. Es
importante entender los hbitat de crecimiento de
los microorganismos porque los Ingenieros
Ambientales a menudo dirigen e intentan el control
de microorganismos en su hbitat natural.

Los microorganismos y su hbitat

Las especies comprenden las poblaciones
microbianas y estas son seleccionadas para
interactuar con el ambiente y unas a otras: hbitat
natural . Los microorganismos debido a su tamao
son dispersados por aire y agua a grandes
distancias, entonces , existen diferentes tipos de
microorganismos que se introducen en un hbitat y
proliferan; las condiciones fsicas y nutricionales de
los microorganismos mezclados es la mejor
adaptacin a ese ambiente. Muchos ambientes son
capaces de soportar el crecimiento de muchas
especies microbianas diferentes, el balance de
especies se ajusta frecuentemente debido a los
pequeos cambios nutricionales y de condiciones
fsicas. Otros ambientes son restrictivos y habitados
por unos pocos tipos especializados de
microorganismos. El hecho de que los factores
nutricionales y fsicos afectan el crecimiento de los
microorganismos nos permite predecir el tipo de
microorganismo que predomina en cierto hbitat,
cada microorganismo debe ser aislado en un cultivo
puro y ser determinados los requerimientos. Este
conocimiento es esencial para el control de los
habitantes microbianos en un hbitat natural.

Los factores fsicos actan en general como
agentes selectivos, porque determinan el tipo de
microorganismo capaz de crecer y su influencia
sobre la tasa de crecimiento en otros
microorganismos.

Los factores qumicos pueden o no ser selectivos,
carbono y nitrogeno se usan y se requieren en
formas especficas, Mg y Fe son usados en la
misma forma por todos los microorganismos, en
pequeas cantidades pueden ejercer una presin
selectiva.

Efecto de los factores ambientales sobre el
crecimiento

Entendiendo la influencia medio ambiental sobre los
microorganismos se explica como se distribuyen,
mtodos de control y cual condicin ambiental es
ms benfica para uno u otro microorganismo. Los
factores ms importantes son: Temperatura, pH,
Disponibilidad del agua y oxgeno.

Los factores ms importantes son: Temperatura,
pH, Disponibilidad del agua y oxgeno.

Uno de los factores ms importantes en la seleccin
de especies es la temperatura. Cada
microorganismo es capaz de crecer solamente
entre un rango especfico de temperaturas. Puede
ser estrecho para patgenos, ejemplo Neisseria
gonorreae.

Para cada microorganismo existe un a temperatura
mnima por debajo de la cual no existe crecimiento,
una temperatura ptima, a la cual el crecimiento es
lo ms rpido posible y una temperatura mxima a
la cual no existe crecimiento. La temperatura ptima
siempre esta ms cerca de la mxima que de la
mnima. Se denominan temperaturas cardinales,
caractersticas de cada microorganismo y pueden
variar ligeramente de acuerdo a la composicin del
medio de cultivo. Las temperaturas cardinales para
un microorganismo difieren enormemente; algunos
poseen temperaturas tan bajas como 5-10 C y
otros hasta 100 C. El rango de temperaturas es
mucho ms amplio, desde puntos por debajo de la
congelacin del agua hasta 110 C que es el caso

Regresin lineal

ptica = -0.31705 +1.38771
C

R= 0.98808
LEOQ 15
de la Arquea Pyrodictium brokii. El rango habitual de
crecimiento es de unos 30 C, aunque no es
constante para todos los microorganismos.


















Figura 8. relacin de la temperatura y la tasa de
crecimiento para un psicrfilo, mesfilo, termofilo y
termofilo extremo (5).



Clases de microorganismos segn la
temperatura

Es posible distinguir cuatro grupos microbianos en
relacin con su temperatura ptima: psicrfilos, con
temperaturas ptimas bajas, mesfilos, con
temperaturas ptimas medianas, termofilos, con
temperaturas ptimas ms altas, hipertemofilos o
termofilos extremos, con temperaturas muy altas.

Acidez y Alcalinidad

Se expresa en una escala en la que la neutralidad
es 7. El pH es una funcin logartmica, un cambio
en una unidad de pH representa 10 veces el cambio
en la concentracin de hidrogeniones, ver figura 9.



































Figura 9. Escala de pH (5).



Cada organismo tiene un rango de pH dentro del
cual es posible el crecimiento y normalmente posee
un pH ptimo muy bien definido. La mayora de los
ambientes naturales tienen pH de 5.9, slo pocos
crecen a pH menores de 2 y mayores de 10. los que
crecen a pHmenores de 2 son acidfilos , los
hongos tienden a soportar la acidez ms que las
bacterias. Los microorganismos que posean un pH
mayor de 10 se denominan alcalfilos , se
encuentran generalmente en suelos altamente
carbonatados, son importantes industrialmente ya
que poseen proteasas alcalinas, son empleadas
como suplemento para detergentes. Independiente
del pH extracelular el pH intracelular debe
permanecer cercano a la neutralidad, con el objeto
de impedir la destruccin de las macromolculas.
En acidfilos o alcalfilos extremos el pH debe
variar en 1.0 y 1.5 unidades respecto a la
neutralidad, pero para los neutrofilos (pH 6.0-8.0), el
ph del citoplasma es neutro o casi neutro.

Disponibilidad del agua

Es importante para el crecimiento microbiano,
depende del contenido de agua del ambiente y de la
concentracin de solutos en ella. Esto es porque las
sustancias disueltas tienen gran afinidad por el
agua, por esto en asocio a los solutos es inutilizable
por los microorganismos.

LEOQ 16
Actividad del agua y Osmosis

La disponibilidad del agua se expresa generalmente
en trminos fsicos como actividad del agua,
abreviadamente (a
w
), es la razn entre presin de
vapor del aire en equilibrio con una sustancia en
solucin y la presin de vapor, a la misma
temperatura del agua pura. Por tanto sus valores
varan entre 0-1.

El agua difunde desde una regin de elevada
concentracin (baja concentracin de soluto) a otra
en la que la concentracin del agua es menor
(concentracin de soluto ms alta), en un proceso
que denominamos osmosis. La mayora de las
veces el citoplasma celular posee una mayor
concentracin de solutos que el medio exterior, de
modo que el agua difunde hacia el interior celular,
se dice que hay un balance de agua positivo, ver
figura 10 a). Sin embargo cuando una clula esta en
un ambiente con baja a
w
, existe una tendencia de
salida del agua intracelular. Por tanto, cuando una
clula se introduce en una solucin con baja a
w
, tal
como una disolucin de sal o azcar, pierde agua y
se produce plasmolisis. La disolucin de sal o
azcar puede considerarse como un ambiente seco.












a) balance de agua positivo









b) Plasmolisis














b) Estado de equilibrio


los efecto osmticos en la naturaleza son de inters
principalmente en hbitats con elevadas
concentraciones salinas. El agua de mar contiene
alrededor del 3% de cloruro sdico, y pequeas
cantidades de elementos y minerales. Los
microorganismos aislados del mar halfilos,
requieren por tanto cloruro sdico, pero la
concentracin ptima varia de un microorganismo a
otro; moderadamente halfilo 6-15% de cloruro
sdico, discretamente halfilo entre 1-6% de sal.
Con baja a
w
los microorganismos se mueren o
pasan a formas durmientes por tiempo indefinido.
Los halotolerantes soportan cierta baja a
w
. Por el
contrario otros crecen en baja a
w
, con muy alta
concentracin salina halfilos extremos, requieren
15-30% de cloruro sdico para crecer. Los que
crecen en altas concentraciones de azcar
osmfilos y en ambientes muy secos xeroflicos.

Oxgeno
Basados en los requerimientos de oxgeno
molecular las bacterias se pueden dividir en 5
grupos:
Aerobios obligados: requieren oxgeno para el
crecimiento pues dependen de este elemento para
cubrir sus necesidades energticas. Crecen con
tensin de oxgeno total (aire 21%) e incluso
concentraciones mucho mayores. El oxgeno es el
aceptor final de electrones en la cadena
respiratoria.
Microaerfilos: slo pueden crecer con bajas
tensiones de oxgeno porque las altas tensiones
son txicas para este tipo de microorganismos (1 a
12% de O
2
en la fase gaseosa). Por su limitada
capacidad de respirar o porque contienen una
enzima sensible al oxgeno. La energa la obtienen
por respiracin aerbica, cuando no hay aceptores
electrnicos terminales alternativos, o anaerbica.



LEOQ 17
Anaerobios aerotolerantes: pueden crecer en
presencia o ausencia de oxgeno, pero la energa la
obtienen por fermentacin. No pueden utilizar el
oxgeno.
Anaerobios obligados: crecen en ausencia total
de oxgeno porque necesitan un medio muy
reductor. Mueren en presencia de oxgeno; tal vez
porque son incapaces de eliminar algn producto
txico proveniente del metabolismo del oxgeno
como: perxido de hidrgeno (H
2
O
2
), Superxido
(O
2
) y radicales de hidrxilo (OH
+
). Muchos
anaerobios estrictos son ricos en enzimas
flavnicos, que reaccionan espontneamente con el
oxgeno para dar estos productos txicos. Loa
aerobios contiene enzimas que descomponen estos
productos txicos, las cuales no poseen los
anaerobios. Utilizan respiracin anaerobia donde los
aceptores finales de electrones pueden ser
generalmente SO
4
2-
, Fumarato
2-
o CO
3
2-
.


Anaerobios facultativos: pueden crecer en
presencia o ausencia de oxgeno. Utilizan al
oxgeno como aceptor final de electrones en la
cadena respiratoria cuando est disponible, y en
ausencia de oxgeno la energa la obtienen por
fermentacin o respiracin anaerobia (generalmente
el NO
3-
es un aceptor final de electrones en las
enterobacterias).




















Figura 11. Crecimiento aerbico, anaerbico,
facultativo y microaeroflico (6).


Cultivo microbiano y efecto del oxgeno

Formas txicas del oxgeno

El oxgeno es un oxidante poderoso y excelente
aceptor de electrones para la respiracin, su forma
normal se le conoce como triplete de oxgeno, su
forma normal de oxgeno txico se le conoce como
singlete de oxgeno, una forma de mayor energa en
la que la capa ms externa de electrones que
rodean el ncleo se hace altamente reactivo y son
capaces de llevar a cabo una serie de oxidaciones
indeseables dentro de la clula, se produce
bioqumicamente por accin de las peroxidasas.
Los microorganismos que se encuentran
corrientemente con singletes de oxgeno son las
bacterias del aire o fototrficas, contienen
caratenoides que los transforman a formas no
txicas.

Otras formas txicas incluyen anin superxido
(O
2
-
), perxido de hidrgeno (H
2
O
2
) y el radical
hidrxilo se producen durante el proceso de
reduccin del oxgeno hasta agua durante la
respiracin. Flavoprotenas, quinonas, tioles y
protenas que contienen azufre, pueden reducir el

LEOQ 18
(H
2
O
2
) hasta (O
2
-
) que es altamente reactivo y
puede oxidar cualquier compuesto orgnico
incluyendo las macromolculas. Los (H
2
O
2
) pueden
daar componentes celulares, pero no son txicos
como (O
2
-
) y los (HO
-
), estos ltimos constituyen la
forma ms txica del oxgeno, afortunadamente es
una forma transitoria y slo producidos por
radiaciones ionizantes. Se pueden originar
pequeas cantidades de (HO
-
) a partir de (H
2
O
2
),
figura 12, pero cuando no se acumulan estos
perxidos, se elimina la fuente de radicales
hidrxilo-








Figura 12. Reduccin del oxgeno hasta agua
mediante la incorporacin secuencial de electrones.
Todos los compuestos intermediarios que se
forman son altamente reactivos y txicos para las
clulas (5).



Enzimas que destruyen las formas txicas del
oxgeno

Con tantas formas txicas los microorganismos han
desarrollado formas enzimticas capaces de
destruirlas, figura 13. la ms comn es la catalasa,
destruye el perxido de hidrgeno, figura 13 a), otra
enzima que acta sobre esta forma txica es la
peroxidasa, que difiere de la catalasa en que
requiere un agente reductor normalmente el NADH,
originando agua como producto, figura 13 b), La
superxido dismutasa (SOD), combina dos
molculas de superxido para formar una molcula
de perxido de hidrgeno y una molcula de
oxgeno, figura 13 C), la SOD y la catalasa trabajan
juntas para llevar a cabo la conversin de
superxidos de vuelta al oxgeno, figura 13 d). Los
aerobios y aerobios facultativos, generalmente
contienen SOD y catalasa. La ausencia de SOD en
anaerobios obligados es la razn por la que el
oxgeno es txico para ellos.


















Figura 13. Mecanismos protectores de bacterias (3)



Carbono

Este elemento puede aportarse a los
microorganismos en forma muy diversa
dependiendo del tipo de metabolismo que posean.
El carbono es utilizado por los microorganismos
para sintetizar los compuestos orgnicos requeridos
para las estructuras y funciones de la clula.
Los microorganismos se pueden dividir en
categoras nutricionales en base a dos parmetros:
naturaleza de la fuente de energa y naturaleza de
la fuente principal de carbono (Estas propiedades
metablicas fueron seleccionadas arbitrariamente y
no brinda una descripcin completa de las
necesidades nutricionales de un organismo).
Fototrofos: utilizan luz como fuente de energa.
Quimiotrofos: la fuente de energa es qumica.
Autotrofos: utilizan como fuente de carbono al CO
2

y a partir del cual sintetizan los esqueletos
carbonados de los metabolitos orgnicos.
Heterotrofos: utilizan compuestos orgnicos como
fuente de C y electrones.
Combinndose estos dos parmetros se pueden
establecer cuatro categoras principales de
organismos:


LEOQ 19
Fotoautotrofos: dependen de la luz como fuente
de energa y utilizan CO
2
como principal fuente de
carbono. Vegetales superiores, bacterias
fotosintticas, algas eucariticas, etc.
Fotoheterotrofos: utilizan luz como fuente de
energa y emplean compuestos orgnicos como
fuente de carbono. Algunas bacterias fotosintticas
y algas eucariticas.
Quimioautotrofos: utilizan CO
2
como fuente de
carbono y emplean fuentes de energa qumica
proveniente generalmente de compuestos
inorgnicos reducidos (H
2
, S
2-
, NH
4
+
, etc).













Figura 14. Clasificacin Nutricional (6)

Quimioheterotrofos: utilizan compuestos
orgnicos como fuente de carbono y energa. Los
compuestos orgnicos tambin se comportan como
fuente de electrones. Este grupo est integrado por
animales superiores, hongos, protozoos y la
mayora de las bacterias.
Nitrgeno
El nitrgeno es utilizado por las bacterias para
formar aminocidos, pirimidinas, purinas, etc, y
puede provenir de fuentes diferentes.
Asimilacin de NH
3
y sales de amonio: el
nitrgeno es transferido con este estado de
oxidacin a los aminocidos por la va de la
glutamato/glutamina.
Fijacin de Nitrgeno: el N
2
es reducido dentro de
la clula a NH
4+
y metabolizado.
Reduccin asimiladora de Nitratos: los nitratos
son reducidos dentro de la clula por la va de los
nitritos a NH
3
y metabolizado.
Hidrolizados proteicos: los microorganismos
incapaces de asimilar el nitrgeno de sales
inorgnicas, lo obtienen a travs de compuestos
orgnicos nitrogenados como los hidrolizados
proteicos. Estos compuestos proteicos son a su vez
hidrolizados por enzimas bacterianas, fuera de la
clula, a aminocidos, los que despus son
metabolizados dentro de la clula.


Azufre

El azufre puede ingresar en la clula reducido
(grupos sulfhidrilos), como sulfato (debe ser
reducido dentro de la clula para metabolizarse) o
como aminocidos azufrados. El azufre es utilizado
para la sntesis de aminocidos azufrados como la
cistena o metionina, que tienen un papel muy
importante en la estructura terciaria de las protenas
(formacin de puentes S-S) y en el sitio cataltico de
enzimas.

Factores de Crecimiento

Son compuestos orgnicos que el microorganismo
es incapaz de sintetizar a partir de los nutrientes y
son fundamentales para la maquinaria metablica
de la clula. Son vitaminas, aminocidos, purinas,
pirimidinas, etc.
En relacin al requerimiento de factores de
crecimiento los microorganismos se pueden dividir
en:
Prottrofos: microorganismos que sintetizan
sus propios factores de crecimiento.

LEOQ 20
Auxtrofos: microorganismos que requieren
una fuente exgena de factores de crecimiento
debido a que son incapaces de sintetizarlos.

Iones Inorgnicos
Son esenciales para el crecimiento porque
estabilizan los compuestos biolgicos como
enzimas, ribosomas, membranas, etc. Los iones
requeridos para el crecimiento bacteriano son
aportados en el medio a travs de sales que
contienen K
+
, Mg
2+
, Mn
2+
, Ca
2+
, Na
+
, PO
4
3-
, Fe
2+
,
Fe
3+
y trazas de Cu
2+
, Co
2+
y Zn
2+
.

Bibliografia

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