Villanueva A. Carlos E.

Biotecnologa Microbiana

ESTEQUIOMETRIA MICROBIANA

1. CONCEPTOS Y APLICACIN EN BIOPROCESOS

Estudia las relaciones aritmticas entre las masas o volmenes de los reactantes y los productos en una reaccin qumica llevada a cabo por los microorganismos. Los clculos estequiomtricos permiten determinar las relaciones msicas y molares entre los reactantes y los productos finales en los procesos fermentativos. Cual es la concentracin final de microorganismos o productos obtenidos respecto de la concentracin de los componentes (sustratos) del medio de cultivo Esta informacin se deduce de las ecuaciones de reaccin escrita y balanceadas correctamente y de los pesos atmicos pertinentes. Por ejemplo: Reactantes !. 2 H2 "g C6H 2!6 !&' g + #% g $. + 6 O2 !($ g #)$ g 6 CO2 + 6 H2O + "# $%P $%" g !'& g #)$ g O2 #$ g Productos 2 H2 O #% g

*urante las reacciones +u,micas o bio+u,micas los tomos y molculas se reordenan para formar nuevos grupos pero se conservan las cantidades siguientes!. La masa total de reactantes & masa total de productos. y $. El numero de tomos de cada elemento (C/0/1) en los reactantes & numero de tomos de cada elemento (C/0/1) en los productos. 2in embargo/ no e3iste una ley correspondiente para la conservacin de moles/ es decir/ moles de reactantes 4 moles de productos La estequiometra es de aplicacin en 'ioprocesos por+ue permite!. El 'alance de masa y energ,a $. *eterminar el rendimiento terico y compararlo con el rendimiento actual del producto. #. C5e+uear la consistencia de datos de la fermentacin e3perimental ". (ormulacin del medio de nutrientes El crecimiento micro'iano (r3 6 d3 7dt 6 89) y la )ormacin de productos (rp 6 dp7dt 6 +p . 9) son procesos comple:os +ue refle:an la cintica y este+uiometr,a global de cientos de reacciones intracelulares.

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*iscutiremos: +Como son )ormuladas las ecuaciones de reaccin para el crecimiento micro'iano , la sntesis de productos -meta'olitos. /

2. ESTEQUIOMETRIA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Cuando ocurre crecimiento celular (r3 6 d3 7dt 6 89)/ las clulas ( 'iomasa0 1) constituye un producto de la reaccin y debe ser representada en la ecuacin de reaccin este+uiomtrica. $2 P3$4%5$6754%O *5 3$ 5C8$C7O4 *5 CR5C76754%O C5383$R a2 El crecimiento celular obedece a la le, de la conser9acin de la masa y podemos escribir la siguiente ecuacin para e3presar el crecimiento celular aero'io. C;031y<= > a 1$ > ' 0g15<i Bormula +uimica sustrato :lucosa: C6H 2!6 C6% 9 6$ D 6% E 6 carece *ondea0 '0 c0 d0 e son los coe)icientes estequiomtricos Bormula +uimica )uente 42 c C0?1@<A > d C1$ > e 0$ 1

Bormula +uimica 'iomasa seca

'2 La ecuacin es escrita sobre la base de ! mol de sustrato. For lo tanto- a moles de 1$ son consumidos y d moles de C1$ son formados por mol de sustrato reactante. c2 La figura representa esta conversin a nivel celular.
Jioconversin del sustrato/ o3igeno y fuente de nitrgeno para crecimiento celular

C;031y<= KKKKKKKKKKK a 1$ ' 0g15<i KKKKKKKKKK KKKKKKKKKK

KKKKKKKKK KKKKKKKK KKKKKKKKK

c C0?1@<A d C1$ e 0$ 1

CELLLG
d2 <o se incluye multitud de compuestos tales como GHF y <G*0/ no su:etos a intercambio neto con el ambiente. Las vitaminas y minerales podr,an estar incluidos/ pero se obvian por su consumo pe+ueIo. 1tras sustancias y productos podr,an ser seleccionados si son apropiados.

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e2 La 'iomasa es representada por la formula composicin de la 'iomasa micro'iana.

CH;O<4= +ue es una refle3in de la

Los microorganismos (por e:. E. coli) contienen un amplio rango de elementos (Habla !). 2in embargo (' M (N O de la biomasa puede estar constituida por " elementos mayores- C/ 0/ 1/ <. %a'la 2

En la %a'la 2 son listadas la composicin elemental de varias especies en trminos de a+uellos " elementos. %a'la 2 Composicin elemental , grado de reduccin para organismos seleccionados 1rganismo Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae Candida utilis Candida utilis Candida utilis Candida utilis Promedio Bormula elemental C 0 !.)) 1 '."( < '.$" C 0 !.&# 1 '.N% < '.!) C 0 !.&! 1 '.N! < '.!) C 0 !.&# 1 '.N" < '.!' C 0 !.&) 1 '.N% C 0 !.&# 1 '."% C 0 !.&) 1 '.N% CH
2>?

Prado de reduccin A (Qelativo al <0#) ".') ".$' ".$& "."N

O !2@! 4 !22!

A2?

C H 2# O !2@ 4 !22 puede ser usado como una formula general cuando el anlisis de composicin no es disponible. El peso molecular promedio de 'iomasa basado sobre cantidades de C/ 0/ 1/ </ es por lo tanto 2A26 aun+ue el NK!' O de residuo mineral es a menudo adicionado para contar a+uellos elementos no incluidos en la formula.

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B2 C(OR683$ 67476$D *5 84 67CROOR:$47E6O PRO65*7O 2 Composicin elemental de un microorganismo Es el porcenta:e de cada elemento contenido en !'' partes de masa celular -ta'la . 2e puede definir un Rmicroorganismo promedioR como a+uel cuya composicin (O F7F) de elementos mayoritarios (C/0/1/<) esC 6 "%.N O . H 6 %."( . O 6 #!.' O . 4 6 !'.&N

2iendo el contenido de sales N O La composicin elemental de la 'iomasa se mantiene constante durante el cultivo/ <o se modifica mayormente durante un cultivo. 2on seme:antes para distintos tipos de microorganismos (bacterias y 5ongos). 2in embargo/ la composicin macromolecular (prote,nas/ cidos nucleicos/ etc.) puede variar sensiblemente.

22 *eterminacin de C)ormula mnimaD de un microorganismo promedio Heniendo en cuenta la composicin elemental media anterior es posible escribir una C)ormula mnimaD de un microorganismo promedio/ como-

CH

26>

O !2@ 4 !22

Esta formula representa solo el (N O p7p de la biomasa. 2e calcula as,22 2 Clculo de cocientes atmicos: *ividir composicin centesimal de cada elemento por su peso atmico C 6 "%.N 7 !$ 6 #.&& 0 6 %."( 7 ! 6 %."( 1 6 #!.' 7 !% 6 !.(" < 6 !'.&N 7 !" 6 '.)& 2222 O'tener relacin atmica: *ividir los cocientes atmicos por el menor de ellos C 6 #.&& 7 '.)& 6 ".() 1 6 !.(" 7 '.)& 6 $."( 22"2 Relacionando al car'ono *ividir relaciones atmicas entre ".() C 6 ! Qesulta la22A2 0 6 !.%) ' 6 '.N
26>

06 <6

%."( 7 '.)& 6 &.#$ '.)& 7 '.)& 6 !

< 6 '.$ O !2@ 4 !22

C(rmula mnimaD : C H

*e)inir F CC mol de 'iomasa D Con fines netamente prcticosRcantidad de biomasa +ue contiene un atomo gramo de carbonoS Tu peso de clulas ( o biomasa) corresponde Ra un mol R es decir/ Cuantos gramos de clulas ( o biomasa) corresponde Ra un mol R !$ (!) > ! (!.%)) > !% ('.N) > !" ('.$) $".") !CKmol de biomasa 6 KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 6 KKKKKKK 6 $N.& g

'.(N
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For tanto una concentracin de biomasa ( 9 en gLK!) es e+uivalente a97$N.& CKmol de biomasa. o bien- 9P3 7!$ CKmol de biomasa LK!

*onde- P3 es la fraccin de carbono de biomasa ('."%N para el Rmicroorganismo promedioS) Esta ltima forma de calcular los CKmoles de biomasa es venta:osa ya +ue solo re+uiere conocer P3/ un dato +ue se puede obtener fcilmente de la bibliograf,a. En caso de no e3istir datos disponibles/ se puede suponer P3 6 '."%N sin temor a cometer errores graves. 22@2 *e)inir FC mol de )uente de car'ono , energa0 , tam'in producto2 For e:emplo para Plucosa (C%0!$'%) Etanol (C$0%') !KC mol de glucosa ser C0$' 6 #' g !KC mol de etanol ser C0#' '.N 6 $# g C mol de

En general para un compuesto de la forma C n 0L1+ <m !KC mol estar representado por C 0L7n 1+7n < m7n C2 *5%5R674$C7O4 *5 CO5(7C754%5E 5E%5G87O65%R7COE La ecuacin de reaccin planteada no es completa si no se conocen los coe)icientes estequiomtricos a0 '0 c0 d0 e C;031y<= > a 1$ > ' 0g15<i c C0?1@<A > d C1$ > e 0$ 1

PROCEDIMIENTO:
2 O'tencin de la )ormula para 'iomasa: una ve= obtenida/ los coeficientes son evaluados usando procedimientos normales para balances de ecuaciones. 22 Balance elemental , solucin de ecuaciones simultaneas C;031y<= > a 1$ > ' 0g15<i c C0?1@<A > d C1$ 6 6 6 6 c> d c? > $e c@ > $d > e cA > e 0$ 1

Jalance de C; JaIlance de H3 > bg Jalance de O- y > $a > b5 Jalance de 4: = > bi

2e tiene N coeficientes desconocidos y solo " ecuaciones de balance "2 7n)ormacin adicional- esta es re+uerida antes +ue las ecuaciones puedan ser resueltas. Lsualmente es obtenida de e3perimentos. Ln parmetro medible til es elUoles C1$ producido d Coeficiente este+uiomtrico/ QT 6 KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 6 KKK moles 1$ consumido a A2 *eterminacin de los coe)icientes estequiomtricos

@2 Completar ecuacin de reaccin2 62 *eterminar cantidades de E0 40 O

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3. ESTEQUIOMETRIA DE LA FORMACION DE PRODUCTOS

BALANCE QUIMICO: Los procesos micro'ianos en los cuales la 'iomasa micro'iana -CH;O<4=. es el nico producto formado (e:. produccin de levadura de panificacin)/ son en la practica relativamente raros. Cuando el crecimiento micro'iano es acompaIado de la produccin de uno o varios meta'olitos -CjHHOl4m. la reaccin global obedece al principio de la conservacin de la materia y la ecuacin este+uiomtrica del crecimiento puede e3tenderse para incluir la s,ntesis del metabolito de la sgte maneraC;031y<= > a 1$ > ' 0g15<i *onde- CjHHOl4m )
-

c C0?1@<A

> d C1$ > e 0$ 1 > ) CjHHOl4m

frmula bruta del con:unto de productos del metabolismo diferentes a la biomasa/ C1$ y 0$ 1 - coeficiente este+uiomtrico para el producto.

APLICACIONES DE LOS CLCULOS ESTEQUIOMTRICOS 2 5stequiometra de la produccin de etanol 2 2 Clculo del coe)iciente rendimiento terico del etanol

5jercicio: *eterm,nese el coeficiente de rendimiento de etanol conociendo +ue la reaccin global del proceso fermentativo obedece a la siguiente ecuacin +u,micaC6 H 2 O6 Eolucin: La ecuacin corresponde a la reaccin principal de la )ermentacin de etanol- conversin de glucosa en etanol y di3ido de carbono Esta ecuacin e3presa +ue una molcula de glucosa se descompone para dar 2 molculas de etanol y dos molculas de diIido de car'ono Gplicando los pesos moleculares/ la ecuacin muestra +ue la reaccin de !&' gramos de glucosa produce ($ gramos de etanol y && gramos de di3ido de carbono. J pKs $ V !$($) > (%) > (!%) W ($ 6 KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 6 KKKKKK 6 !2@ ggF V !$(%) > (!$) > !% (%) W !&' 2C2 H@OH + 2CO2

Guiere decir: se formaron '.N! g de etanol por gramo de glucosa consumida

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22 5stequiometra de la produccin de aminocidos 22 2 Clculo del coe)iciente rendimiento terico del acido glutmico

5jercicio: Cual es el rendimiento terico del acido glutmico a partir de la glucosa y del total de reactantes consumidos La ecuacin este+uiomtrica esC% 0!$ 1% !&' g Eolucin: Gplicando los pesos moleculares/ la ecuacin muestra +ue la reaccin de !&' gramos de glucosa produce !") gramos de acido glutmico . J pKs !") g CN 0(<1" !") 6 KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 6 KKKKKK 6 !2# ggF !&' g C$ 0!$ 1% !&' > <0# > #7$ 1$ CN 0(<1" > C1$ > #0$1 !) g "& g !") g

!") g CN 0(<1" !")g producto J pKs 6 KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 6 KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 6 !26 ggF !&' g C$ 0!$ 1% > !) g <0# > "& 1$ $"N g reactantes Consumidos El rendimiento es un trmino muy importante en el anlisis bio+u,mico dada la comple:idad del metabolismo y la e3istencia de frecuentes reacciones laterales. 2222 Clculo de relaciones msicas en la produccin de acido glutmico

5jercicio: La reaccin global para la conversin microbiana de glucosa a acido glutmico esC% 0!$ 1% > <0# > #7$ 1$ CN 0(<1" > C1$ > #0$1

Tu masa se 1$ se necesita para producir !N g de acido glutmico Eolucin: Fesos moleculares- 13igeno 6 #$ Gcido glutmico- !") En la ecuacin/ los gramos de acido glutmico se convierten en moles utili=ando los corc5etes unidad de pesos moleculares. 2e aplica la ecuacin este+uiomtrica para convertir los moles de acido glutmico en moles de o3igeno.

Binalmente los moles de o3igeno se convierten en gramos ! mol glutmico #7$ mol 1$ #$ g 1$ !N g. glutmico V KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK W V KKKKKKKKKKKKKKKKKKKK W V KKKKKKKKKKK W 6 ".( g 1 $ !") glutmico ! mol glutmico ! mol '$ Entonces se necesitan ".( g de o3igeno. 2i e3iste tambin crecimiento microbiano se necesitar una cantidad de o3igeno mayor. 5E%5G87O65%R7$ 54 3$E R5$CC7O45E 74*8E%R7$35E La ecuacin de la fermentacin alco5lica- C$ 0!$ 1% $C$ 0N10 > $C1$ . 2ugiere +ue todos los reactantes (PLLC12G) se convierten en los productos especificados (EHG<1L y C1$) y +ue la reaccin progresa 5asta el final . 2in embargo/ en los procesos industriales esto no es el caso. En las reacciones industriales la este+uiometr,a puede no conocerse con e3actitud y con el fin de manipular la reaccin convenientemente/ los reactantes no se alimentan en las proporciones e3actas indicadas por la ecuacin de la reaccin. <ormalmente se aIaden cantidades de algunos reactantes en e3ceso/ los cuales se encuentran me=clados con el producto una ve= +ue la reaccin 5a finali=ado. Gdems los reactantes se consumen en reacciones laterales para formar productos no descritos en la reaccin principal. estos subproductos forman parte tambin de la me=cla final de la reaccin. En estas circunstancias se necesita informacin adicional antes de calcular las cantidades de producto formado o de reactante consumido. Glgunos trminos utili=ados para describir las reacciones parciales o laterales sonR5$C%$4%5 3767%$4%5 Qeactante +ue se encuentra presente en la menor cantidad este+uiomtrica. Uientras +ue los otros reactantes pueden estar presentes en menores cantidades absolutas al mismo tiempo +ue se consume la ltima molcula de reactante limitante/ en la me=cla final de la reaccin aparecern cantidades residuales de todos los reactantes e3cepto del reactante limitante. 5jercicio: Fara la reaccin de produccin del acido glutmicoC% 0!$ 1% !&' g > <0# > #7$ 1$ CN 0(<1" > C1$ > #0$1 !) g "& g !") g

Cual es el reactante limitante si se proporcionan !'' g de glucosa/ !) g de <0 # y "&g de 1$ Eolucin: La glucosa ser el reactante limitante/ incluso aun+ue se disponga de la mayor cantidad de masa comparada con las dems sustancias.

R5$C%$4%5 54 51C5EO Qeactante presente en una cantidad en e3ceso sobre la necesaria para combinar con a+uel reactante limitante. Es a+uel +ue permanece en la me=cla de reaccin una ve= +ue el reactante limitante se 5a consumido totalmente. El porcenta:e en e3ceso se calcula utili=ando la relacin entre la cantidad de material en e3ceso y la cantidad necesaria para el consumo completo de reactante limitante. Uoles (masa) presente M moles (masa) necesarios para reaccionar completamente con el reactante limitante O en e3ceso 6 KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK 3 !'' moles (masa) necesarios para reaccionar completamente con el reactante limitante C$4%7*$* R5G85R7*$ *5 R5$C%$4%5 Es la cantidad este+uiomtrica necesaria para alcan=ar la conversin completa del reactante limitante. 5jercicio: En el caso de la produccin del acido glutmicoC% 0!$ 1% !&' g > <0# > #7$ 1$ CN 0(<1" > C1$ > #0$1 !) g "& g !") g

a. Cul es la cantidad requerida del reactante NH3 para alcan=ar la conversin completa de !'' g de glucosa b. 2i se aIaden !) g de <0# Cul es el O en e3ceso de <0# Eolucin: a. 2e re+uiere !) g de <0 # para la conversin completa de !&' g de glucosa. For lo tanto/ la cantidad re+uerida de <0# para la conversin completa de !'' g de glucosa es!) g <0# 3 !'' g glucosa Cantidad re+uerida de <0# =___---------------------------------------------------------- = (." g <0# !&' g glucosa !) g <0# K (." g <0# --------------------------------- 3 !'' (." g <0# '.&' 3 !'' 6 &'O

O en e3ceso de <0# = 6

Las cantidades re+ueridas y en e3ceso se basan en la misma cantidad de reactante limitante incluso solo se produ=ca una parte de la reaccin.