AISLAMIENTO DE Enterobacter aerogenes A PARTIR DE UNA MUESTRA DE QUESO

ISOLATION GIVES Enterobacter aerogenes FROM A SAMPLE OF CHEESE Over Cavadia Angel1, Elizabeht Luna Llorente1, Maria Carolina Ramos Salgado1

RESUMEN Enterobacter es un gnero de bacterias Gram negativas facultativamente anaerbicas de la familia de las Enterobacteriaceae. Muchas de estas bacterias son patgenas y causa de infeccin oportunista en huspedes comprometidos, generalmente hospitalizados. Causa preferentemente infeccin del tracto urinario y del tracto respiratorio. Esta investigacin fue realizada con el objetivo de realizar el aislamiento de Enterobacter aerogenes en una muestra de 10g de queso en 90ml de agua de peptona y posterior incubacin durante 24 h a 37C. Se emple para el aislamiento Medio EMB, Medio McConkey, TSI, KIA, Indol, Voges Proskauer, Motilidad y H2S. Palabras claves: Enterobacter aerogenes, aislamiento, queso. ABSTRACT Enterobacter is a genre of facultatively anaerobic Gram-negative bacteria of the family Enterobacteriaceae. Many of these bacteria are pathogenic and cause opportunistic infection in hosts compromised, usually hospitalized. Preferably cause urinary tract infection and respiratory tract. This research was conducted with the aim of making the isolation of Enterobacter aerogenes in a sample of 10g of cheese in 90ml peptone water and subsequent incubation for 24 h at 37 C. Was used for insulation Middle EMB, Middle McConkey, TSI, KIA, Indol, Voges Proskauer, Motility and H2S. Keywords: Enterobacter aerogenes, isolation, cheese. INTRODUCCIN microorganismo es el agar MacConkey, el cual contiene sales, tintes, y nutrientes de la leche, este medio es selectivo ya que inhibe Gram (+). Aunque tambin sean mencionados cultivos en la literatura de este microorganismo en el agar EMB, ya que este medio esta qumicamente definido, puesto que es un medio sinttico. Una caracterstica particular de la Enterobacter aerogenes es que es un microorganismo mvil, esto gracias a la presencia de flajelos, los cuales les permite realizar dichos movimientos. Por otra parte la literatura indica que es la Enterobacter aerogenes es un microorganismo patgeno lo que indica que hay presencia de cpsula en l.
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Es un miembro de la familia Enterobacteriaceae, la Enterobacter aerogenes es un bacilo Gram negativo (esta bacteria no puede retener un tinte violeta cristalino durante el proceso de tincin Gram. Las bacterias Gram (--) aparecen rosadas o rojas bajo el microscopio). La Enterobacter aerogenes es un bacilo, por lo tanto, bajo el microscopio, luce como un bastn derecho. Como anaerobio facultativo, prefiere los ambientes con poco o nada de oxgeno, tales como las heces, las plantas de desecho y el suelo. Sin embargo, tambin puede sobrevivir e incluso crecer donde el oxgeno es abundante. En una caja de Petri, la Enterobacter aerogenes forma colonias blancas y redondas que se curvan de forma convexa. El rango ptimo de temperatura de cultivo est entre (30 37) C, y el agar utilizado para sembrar este

Estudiante de Ingeniera de Alimentos, IV Semestre, Universidad de Crdoba, Facultad de Ingenieras, Programa de Ingeniera de Alimentos, BerasateguiCrdoba

MATERIALES 250g de queso, bolsa estril, balanza analtica, recipiente para macerar, bolsa estril, 90ml de agua de peptona, pipetas, asas(en punta y redonda), 1 medio McConkey Agar, 1 medio EMB Agar, Mechero, portaobjetos. Para pruebas bioqumicas: 4 caldos RM-VP, -naftol al 5%, indicador de rojo de metilo, 2 caldos peptona tripticasa, reactivo de Kovacs, 2 medios SIM, 2 medios TSI, 2 medios KIA, 2 medios LIA. Para tinciones: Cristal violeta, agua destilada, Lugol, alcohol acetona, safranina de Gram, aceite de inmersin, solucin acuosa 1% de cristal violeta, solucin acuosa 20% de sulfato de cobre. METODOLOGA ETAPA N1: OBTENCIN DE LA MATERIA PRIMA La materia prima fue queso comprado en un local (tienda) ubicada en el corregimiento de Berastegui perteneciente al municipio de Cienega de Oro-Crdoba. ETAPA N2: MUESTRA PREPARACIN DE LA Fig 1. Pre-enriquecimiento no selectivo (agua peptona y queso macerado) ETAPA N4: SIEMBRA EN LOS MEDIOS DE CULTIVO Se tomaron inculos del caldo pre-enriquecido (mezcla de agua peptona y queso) con una asa redonda y se sembr por el mtodo francs (con el fin de llevar a cabo el aislamiento) en los medios EMB y McConkey, sometindolos a incubacin posteriormente a 37C por 24h. ETAPA N5: TINCIONES BIOQUIMICAS Y PRUEBAS

Se tomaron 250g los cuales se cortaron en rodajas finas en tal caso de que cupieran en la bolsa estril, en la cual duro aproximadamente 3 das para que la flora bacteriana presente en la muestra de alimento (queso) se propagara. ETAPA N3: PRE-ENRIQUECIMIENTO DE LA MUESTRA (SELECTIVO) Se pesaron en balanza analtica 10g de queso, se maceraron y se introdujeron en una bolsa sellable con 90 ml de agua peptonada. Se agito manualmente, luego se llev a incubar a 37C por 24 horas

Con los respectivos crecimientos de los microorganismos en los diferentes medios (EMB y McConkey), se realizaron las tinciones correspondientes (Gram y Hiss); luego se realizaron una serie de pruebas bioqumicas he aqu sus principios: TSI y KIA: Determina la capacidad de la bacteria de atacar un hidrato de carbono especifico, incorporado en un medio de crecimiento bsico, con produccin o no de gases, junto con la posible formacin de H2S. INDOL: Determina la capacidad que tiene un microorganismo de desdoblar el Indol de la molcula de triptfano (aminocido), lo cual es logrado por la accin de las enzimas intracelulares denominadas triptofanasas. MOTILIDAD Y H2S: Se basa en observar la motilidad de un microorganismo, gracias a la baja concentracin de agar, lo cual nos indica la presencia de flagelos. Por otro lado se puede determinar si se ha liberado H2S por la

accin enzimtico de los aminocidos que contienen azufre, produciendo una reaccin visible de color negro, se usan como indicadores tiosulfato de sodio y sulfato ferroso. Adems tambin se observa en el medio la formacin de Indol. DESCARBOXILASA: Mide la capacidad enzimtica de un organismo para descarboxilar un aminocido para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad, tambin se observa formacin de H2S. En este medio (LIA) se evala la lisina Descarboxilasa (LD), los microorganismos LD+ transforman la lisina en cadaverina, amina que en medio cido provoca el viraje del indicador prpura de bromocresol; los LD- fermentadores de glucosa producirn otro viraje. VOGES PROSKAUER: Determina la capacidad de algunos microorganismos de obtener un producto final neutro, el acetilmetilcarbinol (acetoina), a partir de la fermentacin de la glucosa. ROJO DE METILO: Comprueba la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales cidos de la fermentacin de la glucosa, y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. RESULTADOS Y DISCUSIN 1) SIEMBRA EN MEDIO EMB Y MEDIO McCONKEY

Fig 3. Crecimiento en McConkey El crecimiento fue evidente en el Medio EMB (fig 2) puesto que crecio con colonias azules, esto segn la literatura significa que son fermentadoras de lactosa; en cuanto al medio (fig 3) segn la literatura cuando se da crecimiento de colonias transparentes, quiere decir que no son fermentadoras de lactosa cabe aclarar que el crecimiento en el Medio McConkey fue mas escaso que en EMB. 2) TINCIN DE GRAM

Fig 4. Coloracin de Gram en el Medio EMB (bacteria Gram-negativas) <

Fig 5. Coloracin de Gram en el Medio McConkey (bacterias Gram-negativas) Fig 2. Crecimiento en Medio EMB En las respectivas tinciones de Gram a los medios empleados se observo en el Medio EMB (fig 5) presencia de coccos y Streptoccos Gram-negativos. En cuanto al Medio McConkey (fig 6)

tambien se observo la misma morfologia de coccos y Streptoccos Gram (--). 3) TINCIN DE HISS

4) PRUEBAS BIOQUIMICAS TSI

Fig 6. Observacin microscopica de la tincin de Hiss aplicada al Medio EMB Fig 8. Resultado (A/A) de prueba TSI aplicado al sembrar en el la colonia extraidad del Medio EMB

Fig 7. Observacin microscopica de la tincin de Hiss en el Medio McConkey En las fotografias de las tinciones de Hiss, logramos observar en la fig 7, la observacion en el Medio EMB en la que claramente identificamos que la bacteria se ve de color morado intenso en cuanto a su aro alrededor de ella no se logra identificar en la fotografia; en cuanto a la fig 8, en el Medio McConkey no se observa bacterias ni mucho menos capsulas.

Fig 9. Resultado (presencia de H2S) de prueba TSI aplicado a la colonia sembrada extraida del Medio McConkey En la fig 9. El resultado de la prueba TSI para EMB fue: fermentacin de sacarosa y lactosa en aerobiosis, y fermentacion de glucosa en anaerobiosis. En cuanto a la fig 10. El resultado para McConkey fue: presencia de H2S tanto

aerobiosis anaerobiosis. KIA

como

en

McConkey fue: produccin de H2S junto con fermentacin de la lactosa en aerobiosis y fermentacin de la glucosa en anaerobiosis. INDOL

Fig 10. Resultado (A/A) de prueba KIA aplicado a la colonia sembrada extraida del Medio EMB

Fig 12. Resultado de Indol para colonia sembrada extraida de Medio McConkey El resultado de Indol fue (-) negativo para Medio McConkey, es decir, se torno amarillo por el reactivo. (fig 13) MOTILIDAD Y H2S

Fig 11. Resultado de la prueba KIA aplicado a la colonia sembrada extraida del Medio McConkey En la fig 11 en el Medio EMB el resultado fue: fermentacin de la lactosa en aerobiosis y fermentacin de la glucosa en anaerobiosis. En cuanto a la fig 12, el resultado en el Medio

Fig 13. Resultado de la prueba de Motilida y H2S para colonia sembrada, extraida de EMB El resultado fue (+) positivo para EMB de motilida y H2S puesto que hubo migracin de la linea

de siembra y ennegrecimiento del medio. (fig 14) DESCARBOXILASA

El resultado de la fig 16, es (+) positivo puesto que se observa el medio de un color purpura turbio por lo que si hubo descarboxilacin de la lisina. ROJO DE METILO

Fig 14. Resultado de la prueba de la prueba de descarboxilasa para colonia sembrada proveniente de EMB El resultado para la prueba de descarboxilasa fue (-) negativo puesto que el medio se observa del mismo color al inicial. (fig 15)

Fig 16. Resultado de Rojo de metil de la colonia sembrada del medio EMB

Fig 15. Resultado de prueba de descarboxilasa aplicada a la colonia sembrada en el medio LIA extraida del Medio McConkey

Fig 17. Resultado de Rojo de metilo a la colonia sembrada extraida del medio McConkey En las figuras 17 y 18 podemos observar los resultados (+) positivos para Rojo de metilo de los medios empleados.

VOGES PROSKAUER

RESULTADOS EXPERIMENTALES Prueba EMB McConkey TSI A/A H2S KIA Alc/A H2S y A/A Indol No Negativo Motilidad y H2S Positivo Positivo Descarboxilasa Positivo Positivo Rojo de metilo Negativo Negativo Voges proskauer Negativo Negativo
Cuadro N1

Fig 18. Resultado de la voges proskauer para EMB

RESULTADOS TEORICOS Prueba Resultado TSI A/A KIA A/A Indol Negativo Motilidad y H2S Positivo Descarboxilasa Positivo Rojo de metilo Negativo Voges proskauer Positivo
Cuadro N 2. CONCLUSIN El objetivo principal de este trabajo no fue realizado de forma exitosa ya que la Enterobacter aerogenes aislada de una muestra de queso obtenida en el corregimiento de Berastegui no creci, esto puede afirmarse puesto que al observarse en el microscopio ptico se no se observaron bacilos Gram (--). Tambin existen pruebas bioqumicas realizadas las cules no fuero consecuentes con la literatura tales pruebas fueron: RECOMENDACIONES Mantener el rea de trabajo desinfectada para evitar la contaminacin de diversos microorganismos que pueden modificar las condiciones de crecimiento del microorganismo que desea aislar.

Fig 19. Resultado de voges proskauer para McConkey Tanto en la fig 19 como en la fig 20 no observamos buenas practicas de pruebas por ende los resultados no seran los que esperamos. Aqu intuimos que el resultado el (-) negativo ya que no hay formacion de anillo rojo pero tampoco tenemos en si el resultado (-) negativo puesto que en el literatura de pruebas (guias) nos dice que el resultado (-) se interprenta cuando hay color amarillo por el reactivo. Los anteriores resultados los condensados en el siguiente cuandro. hemos

 Se debe utilizar los medios de cultivos adecuados para as poder evidenciar si existe o no crecimiento de la bacterias deseada. Trabajar cuidadosamente para as evitar riegos de accidentes con dichas bacterias. Utilizar adecuadamente todos los implementos necesarios (bata blanca, guantes de ltex, tapa bocas, cubre cabellos) para la realizacin practica y as evitar la contaminacin de los mismos. BIBLIOGRAFIA Allen, Koneman, Procop, Schreckenberger Winn y Woods. Diagnostico microbiolgico. Texto y At las color. Editor ial Medica PANAMERI CANA, 6da Ed, pg. 738 Garca, A. 1998. Manual Microbiologa Mdica. Facultad de Estudios Superiores ZARAGOSA, pg. 33. Negroni. Microbiolog a Estomatolgica. Fundamentos y gua prct ica. Edit orial Mdica PANAMERICANA, 2da Ed, Pg. 383.