UNIVERSIDAD CATOLICA BOLIVIANA FACULTAD DE ENFERMERIA ELIZABETH SETON

GUIA DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

AUTOR: Dr. Ricardo Vi !"a# Na$a Co a%oraci&': o Lic. C a(dia S)'c*!+ o Lic. ,($i'#-a Sa i'a# o E#.. /a.ri' Lo0a o E#.. 1'"! a Aro o E#.. Mar !'2 Or0ac*!a o E#.. 3!'d2 Arc! o E#.. A i#o' V! a+co o E#.. Lor!'a Vi ca

Coc*a%a0%a 4 Bo i$ia

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PROLOGO

Cochabamba, Agosto 2004 H'a. Mar8a 1'"! !# Go'+) !+ DECANA FACULTAD DE ENFERMERIA

UNIVERSIDAD CATOLICA BOLIVIANA

INTRODUCCI9N El presente Curso Prctico de Microbiologa es un texto que ha sido preparado como un manual destinado a las estudiantes de en ermera! "a en ermera se constitu#e en un miembro importante del equipo de salud, por lo tanto debe tener conocimientos prcticos en lo que se re iere a como pre$enir la en ermedad # entender los procedimientos de diagn%stico desde el punto de $ista laboratorial! &uestro ob'eti$o es el de capacitar a los estudiantes en el campo $elo(mente cambiante de la Microbiologa, con conocimientos bsicos # que le ser$irn en la prctica, principalmente en lo que se re iere a la toma de muestras, culti$os, quimioterapia antimicrobiana, esterili(aci%n, desin ecci%n, puri icaci%n # pre$enci%n! El proceso educati$o exige, adems de una programaci%n adaptada al educando, el material docente que acilite el aprendi(a'e sin ma#ores di icultades, poniendo al alcance de los alumnos los elementos bsicos para que el es uer(o combinado con el docente pueda superar las exigencias que los estudios demandan! Estos requerimientos de material de apo#o docente son ms necesarios cuando $an dirigidos a estudiantes que se inician en una disciplina, siempre con un ob'eti$o como el de ampliar su campo de conocimiento! Existen muchos textos de microbiologa que contienen abundantes conocimientos te%ricos que ser$irn como una base para que el estudiante pueda iniciarse dentro de la prctica de esta disciplina que la presentamos en orma ordenada # sistemtica, con el prop%sito de coad#u$ar # complementar el aprendi(a'e te%rico de la materia #, de esta manera capacitarlo para la e'ecuci%n e interpretaci%n de las pruebas de laboratorio para el diagn%stico de las principales en ermedades in ecto)contagiosas!

El contenido total est agrupado en seis prcticas* la Prctica n+ ,, nos da una $isi%n general sobre el material utili(ado en laboratorio- la Prctica n+ 2, los undamentos de la %ptica # como mane'ar un microscopio- "a Prctica n+ ., sobre la asepsia, antisepsia # bioseguridad- la Prctica n+ 4, nos ense/a a emplear # describir los m0todos # t0cnicas para la obtenci%n adecuada de muestras para el diagn%stico microbiol%gico- la Prctica n+ 1, sobre el estudio microsc%pico de las bacterias- la Prctica n+ 2, sobre los culti$os de bacterias # las distintas t0cnicas! Cada prctica, se la desarrolla con la su iciente claridad para que el estudiante pueda reali(arla cilmente, estas acti$idades sern desarrolladas ba'o super$isi%n del catedrtico colaborado por las auxiliares de prcticas!

ORIENTACI9N PARA EL ESTUDIANTE 3eg4n el 5eglamento de E$aluaci%n Contnua, 6Es el proceso contnuo # sistemtico que permite la $aloraci%n de los conocimientos, capacidades, destre(as, habilidades # $alores7actitudes que adquieren # desarrollan los8as9 estudiantes como resultado del proceso educati$o:! 6El ob'eti$o de la acti$idad e$aluati$a es el me'oramiento del proceso de ense/an(a # aprendi(a'e, # se reali(a a tra$0s de di erentes acti$idades, como los controles de lectura, e$aluaciones parciales, exposiciones grupales, traba'os de in$estigaci%n, :r)c.ica#; etc!, que tienen la unci%n de $alorar el grado en que se $an alcan(ando los ob'eti$os planteados por cada asignatura:! En este sentido el estudiante deber cumplir con los siguientes requisitos para asistir # cumplir con este curso prctico* Presentarse a reali(ar sus prcticas con guardapol$o blanco! Asistir con puntualidad # al grupo que ue asignado! Cumplir con el ,00; de prcticas Estudio del tema que corresponda a cada prctica <ebe ser e$aluado en la totalidad de las prcticas 5eali(aci%n de la prctica por el estudiante 5esponder al cuestionario de cada prctica # dibu'ar en el presente cuadernillo de practicas! Presentar el cuadernillo llenado con las respuestas a los cuestionarios # con los dibu'os correspondientes a la prctica anterior! Estudio del tema que corresponda a cada prctica "os traba'os de grupo que se asignen debern ser presentados en la echa correspondiente!

PRACTICA No. <

MATERIAL DE LABORATORIO OBJETIVOS: Conocern los distintos instrumentos utili(ados en laboratorios Conocer el uso correcto # el material de que est elaborado cada instrumento 5eali(ar el uso correcto de los mismos MARCO TERICO: Aro So:or.!: =nstrumento de laboratorio, que se emplea como soporte) de otros materiales anexado al soporte uni$ersal! Ba &': Es un recipiente de $idrio pirex, que sir$e para preparar soluciones o reacciones qumicas, los balones son es 0ricos # tambi0n de ondo plano! B(r!.a#: =nstrumento cilndrico de $idrio graduado alargado, que termina en una lla$e para poder controlar el lu'o del lquido que se $a ha medir! 3e usa en operaciones que, se necesita $ol4menes con gran exactitud! C):#( a d! :orc! a'a: material de laboratorio de porcelana, que se utili(a para la preparaci%n de me(clas, por e$aporaci%n # para someter al calor si sustancias que requieran de ele$adas temperaturas! Cri#.a i+ador: instrumento de laboratorio que se utili(a para la preparaci%n de cristales! E#:).( a: Aparato de laboratorio que sir$e para sacar las sustancias s%lidas de los recipientes que las contengan! Gradi a: Material de madera o de hierro, que se utili(a como soporte de los tubos de ensa#os! Ma.ra+ d! Er !'0!2!r: $asi'as o recipientes de $idrio de di$ersas ormas que se emplean en el laboratorio para calentar lquidos citando ha# peligro de p0rdida de $aporaci%n, o para titular en el anlisis cuantitati$a! Ma.ra+ a=orado o Fio a: =nstrumento de $idrio de cuello largo # angosto se usa para preparar soluciones!

M!c*!ro: Es un instrumento de metal o de $idrio destinado a proporcionar combusti%n, los mas usados son alcohol # de los de gas, principalmente el de bunsen- consta de un tubo metlico $ertical su'eto a un pie de peso con$eniente, unciona a gas cu#a entrada se e ect4a por un tubo lateral interrumpido por una lla$e de paso en la parte in erior existe un doble ori icio par permitir la entrada de aire, cu#a apertura se puede regular! Este se utili(a para esterili(ar el asa, la boca de los tubos de ensa#o, matraces, etc! Mor.!ro: material de laboratorio de porcelana o de $idrio que se usa para moler o reducir el tama/o de las sustancias que consta de dos partes el ma(o # el mortero, Pi'+a# :ara .(%o: =nstrumento de laboratorio de madera o metal, que, se usa para coger los tubos de ensa#o! Pi:!.a: 3on instrumentos de $idrio que se usan para medir los lquidos con ma#or exactitud! Pro%!.a "rad(ada: =nstrumento de $idrio, que se emplea, para medir el $olumen de los lquidos! Pi+!.a o =ra#co a$ador: 3on instrumentos de $idrio o de plstico que se llenan con agua destilada R!>i a: material de metal que puede estar o no, cubierto con un crculo de asbesto, se usa para proteger el uego directo, el material de $idrio que $a a su rir calentamiento! R!=ri"!ra'.!: 3e usa para condensar los $apores que se desprenden del $al%n de destilaci%n por medio de un lquido re rigerante que circula por este! So:or.! ('i$!r#a: =nstrumento de metal, que se usa como base soporte para el monta'e de di$ersos aparatos por e'emplo los que usan en destilaci%n #, iltraci%n etc! T!r0&0!.ro: instrumento que mide la temperatura en grados centgrados! T(%o# d! !'#a2o: para disol$er, calentar o hacer reacciones peque/as cantidades de sustancias lquidas o s%lidas # preparaci%n de culti$os! Estos pueden ser grandes medianos # peque/os! Va#o :r!ci:i.ado: preparar, disol$er o calentar sustancias! Pi'+a :ara %a &': sir$e para su'etar balones So:or.! ('i$!r#a : posee una base rectangular, adems de metal rgido de 20 cm! este aparato es empleado para colocar # i'ar los anillos de las pin(as de la bureta # sostener matraces # re rigerantes! Tr8:od!: este puede ser i'o o desmontable, se utili(a para colocar matraces # recipientes en obser$aci%n, o para poner estos al uego # aumentar su temperatura! E0%(do: 3ir$e para tras$asar lquido de un recipiente a otro, e$itando que se derrame lquido, tambi0n se utili(a en operaciones de iltraci%n! E#co%i a: 3ir$e para limpiar el material de laboratorio! Vari a d! $idrio: sir$e como agitador, son de $idrio para que no se oxiden, corroen ni reaccionan con las sustancias # miden de 20 a .0 cm! Ta:o'!#: sir$en para cubrir rascos, tubos de ensa#o, matraces o probetas! Algunos tienen per oraciones para colocar term%metros o $arillas de $idrio!

Ca>a d! :!.ri: son recipientes de $idrio o de plstico de orma cilndrica compuestos de ca'a # tapa, recipientes destinados a contener medios de culti$os s%lidos cuando se desea disponer de una gran super icie! A#a#: estn construidas por un alambre de platino # mango, se utili(a para tomar peque/as muestras de material contaminado, por e'emplo hongos # bacterias! >alan(a de precisi%n* Medir masas de sustancias s%lidas Por.ao%>!.o#: son lminas rectangulares de $idrio, de bordes biselados que miden ?2 mm de largo, 22 mm de ancho # , mm de espesor! 3on utili(ados para reali(ar preparaciones microsc%picas coloreadas o sin colorear! C(%r!o%>!.o#: son laminillas delgadas de $idrio, de tama/os $ariados, de orma cuadrada o redonda, son empleados para cubrir preparaciones # acilitar la obser$aci%n microsc%pica del material que se desea examinar! Fra#co# "o.!ro#: son botellas de $idrio que tiene la capacidad de 10 a 20 ml con tap%n gotero de $idrio! 3e utili(an para el mane'o de soluciones colorantes!

ACTIVIDADES DE LA PRACTICA DE MATERIAL DE LABORATORIO <.? Di%(>a @ 0a.!ria !# d! a%ora.orio ! i'dica a =('ci&' A(! .i!'!'

5.? Co oca ! 'o0%r! a o# #i"(i!'.!# 0a.!ria !# d! a%ora.orio ! i'dica a =('ci&' A(! .i!'! cada ('a

PRACTICA No. 5
MICROSCOPIA OBBETIVOS: =denti icar las partes del microscopio @tili(ar correctamente el mismo Conocer los cuidados correctos del microscopio MARCO TEORICO: PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO

3istema %ptico o AC@"A5* "ente situada cerca del o'o del obser$ador! Ampla la imagen del ob'eti$o! o A>BEC=DA* "ente situada cerca de la preparaci%n! Ampla la imagen de 0sta! o CA&<E&3A<A5* "ente que concentra los ra#os luminosos sobre la preparaci%n! o <=AE5AFMA* 5egula la cantidad de lu( que entra en el condensador! o EACA* <irige los ra#os luminosos hacia el condensador! 3istema mecnico o 3APA5CE* Mantiene la parte %ptica! Ciene dos partes* el pie o base # el bra(o! o P"AC=&A* "ugar donde se deposita la preparaci%n! o CA>EGA"* Contiene los sistemas de lentes oculares! Puede ser monocular, binocular! o 5EDH"DE5* Contiene los sistemas de lentes ob'eti$os! Permite, al girar, cambiar los ob'eti$os! o CA5&=""A3 <E E&EAI@E* Macrom0trico que aproxima el en oque # microm0trico que consigue el en oque

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MANEBO , USO DEL MICROSCOPIO 9PTICO ,! Colocar el ob'eti$o de menor aumento en posici%n de empleo # ba'ar la platina completamente! 3i el microscopio se recogi% correctamente en el uso anterior, #a debera estar en esas condiciones! 2! Colocar la preparaci%n sobre la platina su'etndola con las pin(as metlicas! .! Comen(ar la obser$aci%n con el ob'eti$o de 4x 8#a est en posici%n9 o colocar el de ,0 aumentos 8,0x9 si la preparaci%n es de bacterias! 4! Para reali(ar el en oque* a! Acercar al mximo la lente del ob'eti$o a la preparaci%n, empleando el tornillo macrom0trico! Esto debe hacerse mirando directamente # no a tra$0s del ocular, #a que se corre el riesgo de incrustar el ob'eti$o en la preparaci%n pudi0ndose da/ar alguno de ellos o ambos! b! Mirando, ahora s, a tra$0s de los oculares, ir separando lentamente el ob'eti$o de la preparaci%n con el macrom0trico #, cuando se obser$e algo ntido la muestra, girar el microm0trico hasta obtener un en oque ino! 2! Pasar al siguiente ob'eti$o! "a imagen debera estar #a casi en ocada # suele ser su iciente con mo$er un poco el microm0trico para lograr el en oque ino! 3i al cambiar de ob'eti$o se perdi% por completo la imagen, es pre erible $ol$er a en ocar con el ob'eti$o anterior # repetir la operaci%n desde el paso .! El ob'eti$o de 40x en oca a mu# poca distancia de la preparaci%n # por ello es cil que ocurran dos tipos de percances* incrustarlo en la preparaci%n si se descuidan las precauciones anteriores # mancharlo con aceite de inmersi%n si se obser$a una preparaci%n que #a se en oc% con el ob'eti$o de inmersi%n! .! Empleo del ob'eti$o de inmersi%n* a! >a'ar totalmente la platina b! 3ubir totalmente el condensador para $er claramente el crculo de lu( que nos indica la (ona que se $a a $isuali(ar # donde habr que echar el aceite! c! Firar el re$%l$er hacia el ob'eti$o de inmersi%n de'ndolo a medio camino entre 0ste # el de x40! d! Colocar una gota mnima de aceite de inmersi%n sobre el crculo de lu(! e! Cerminar de girar sua$emente el re$%l$er hasta la posici%n del ob'eti$o de inmersi%n! ! Mirando directamente al ob'eti$o, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite! En ese momento se nota como si la gota ascendiera # se adosara a la lente! g! En ocar cuidadosamente con el microm0trico! "a distancia de traba'o entre el ob'eti$o de inmersi%n # la preparaci%n es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es mu# grande! h! @na $e( se ha#a puesto aceite de inmersi%n sobre la preparaci%n, #a no se puede $ol$er a usar el ob'eti$o 40x sobre esa (ona, pues se manchara de aceite! Por tanto, si desea en ocar otro campo, ha# que ba'ar la platina # repetir la operaci%n desde el paso .! i! @na $e( inali(ada la obser$aci%n de la preparaci%n se ba'a la platina # se coloca el ob'eti$o de menor aumento girando el re$%l$er! En este momento #a se puede retirar la preparaci%n de la platina! &unca se debe retirar con el ob'eti$o de inmersi%n en posici%n de obser$aci%n! '! "impiar el ob'eti$o de inmersi%n con cuidado empleando un papel especial para %ptica!

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MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES ,! Al inali(ar el traba'o, ha# que de'ar puesto el ob'eti$o de menor aumento en posici%n de obser$aci%n, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma # de'arlo cubierto con su unda! 2! Cuando no se est utili(ando el microscopio, ha# que mantenerlo cubierto con su unda para e$itar que se ensucien # da/en las lentes! 3i no se $a a usar de orma prolongada, se debe guardar en su ca'a dentro de un armario para protegerlo del pol$o! .! &unca ha# que tocar las lentes con las manos! 3i se ensucian, limpiarlas mu# sua$emente con un papel de iltro o, me'or, con un papel de %ptica! 4! &o de'ar el portaob'etos puesto sobre la platina si no se est utili(ando el microscopio! 1! <espu0s de utili(ar el ob'eti$o de inmersi%n, ha# que limpiar el aceite que queda en el ob'eti$o con pa/uelos especiales para %ptica o con papel de iltro 8menos recomendable9! En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido # con sua$idad! 3i el aceite ha llegado a secarse # pegarse en el ob'eti$o, ha# que limpiarlo con una me(cla de alcohol)acetona 8?*.9 o xilol! &o ha# que abusar de este tipo de limpie(a, porque si se aplican estos disol$entes en exceso se pueden da/ar las lentes # su su'eci%n! 2! &o or(ar nunca los tornillos giratorios del microscopio 8macrom0trico, microm0trico, platina, re$%l$er # condensador9! ?! El cambio de ob'eti$o se hace girando el re$%l$er # dirigiendo siempre la mirada a la preparaci%n para pre$enir el roce de la lente con la muestra! &o cambiar nunca de ob'eti$o agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est obser$ando a tra$0s del ocular! J! Mantener seca # limpia la platina del microscopio! 3i se derrama sobre ella alg4n lquido, secarlo con un pa/o! 3i se mancha de aceite, limpiarla con un pa/o humedecido en xilol! K! Es con$eniente limpiar # re$isar siempre los microscopios al inali(ar la sesi%n prctica!

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ACTIVIDADES DE LA PRACTICA DE MICROSCOPIA <.? Co oca a# :ar.!# a 0icro#co:io ! i'dica #( =('ci&'.

5.? CD! A(! #i#.!0a# co'#.a ! 0icro#co:ioD M!'ci&'a o#.

E.? CC() !# #o' o# :a#o# a #!"(ir :ara ! 0a'!>o d! 0icro#co:ioD

7.? CF(G c(idado# d!%!# .!'!r co' ! 0icro#co:ioD

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PRACTICA No. E
ASEPSIA , ANTISEPSIA OBBETIVOS: Conocer # mane'ar correctamente las t0cnicas de asepsia # antisepsia! <i erenciar asepsia m0dica # asepsia quir4rgica! Aprender la aplicaci%n de las t0cnicas de aislamiento! Mane'ar correctamente e indicar la s $enta'as # des$enta'as de los distintos m0todos de esterili(aci%n! MARCCO TEORICO: D!=i'ici&': A#!:#ia: es la ausencia de microorganismos, un estado libre de g0rmenes! Con'unto de procedimientos que impiden la llegada de microorganismos a un medio, por e'emplo* t0cnicas de aislamiento, etc! A'.i#!:#ia: proceso de destrucci%n de los microorganismos contaminantes de los te'idos $i$os! Con'unto se procedimientos destinados a destruir a los g0rmenes pat%genos o no pat%genos, por e'emplo* antis0pticos, etc! A'.i#G:.ico#: son antimicrobianos que s se pueden aplicar en te'ido $i$o, pero s%lo localmente, de orma t%pica, en piel # mucosas! "os antis0pticos no pueden ser administrados por $a parenteral u oral para tratar in ecciones porque las dosis de antis0pticos a las cuales se obtiene un e ecto antimicrobiano e ecti$o son altamente t%xicas! Al ser sustancias que se utili(an en te'idos $i$os requieren de propiedades especiales! "as caractersticas ideales de un antis0ptico son* ,! %(!' 8'dic! .!ra:G(.ico* es la relaci%n que existe entre la concentraci%n germicida # la concentraci%n t%xica local # sist0mica! Mientras menor es la acci%n germicida # ma#or la acci%n t%xica, me'or es el ndice terap0utico! 2! ms germicida que germisttico .! a0: io !#:!c.ro d! acci&' 8$irus, esporas, hongos, proto(oos # bacterias9! 4! E ecto de inicio rpido # duraci%n prolongada 1! So (ci&' d! %a>a .!'#i&' #(:!r=icia para que penetre bien en todos las irregularidades del te'ido 2! ac.i$o =r!'.! a 0a.!ria or")'ica 8pus o sangre en heridas in ectadas9 Bac.!ricida: agente capa( de destruir a las bacterias! Bac.!rio#.).ico: es todo agente que inhibe la reproducci%n de bacterias! @n agente puede ser usado como bacteriosttico o bactericida dependiendo de su concentraci%n, el tiempo de acci%n, etc! SG:.ico: presencia de microorganismos pat%genos en los te'idos $i$os! I'=!cci&': es la entrada # multiplicaci%n de un agente pat%geno en el organismo! D!.!r"!'.!#: los detergentes son sustancias tenso)acti$as, que por sus propiedades qumicas a$orecen el proceso de emulsi%n de las grasas en agua! Por ello se los usa

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como productos de limpie(a #a que acilitan el desprendimiento # posterior eliminaci%n de la suciedad tanto de los ob'etos como de la piel! Co'.a0i'ado: se re iere a toda super icie, animado o inanimada, que se sabe alo'a microorganismos! D!#i'=!cci&' d! a .o 'i$! : proceso de desin ecci%n de destru#e esporas D!#i'=!cci&' .!r0i'a : proceso mediante el cual un rea u ob'eto se desin ecta luego de que ha ocurrido alguna contaminaci%n! Li0:i!+a: reducci%n sustancial del contenido microbiano, sin que llegue a la desaparici%n completa de los microorganismos pat%genos F('"(icida: agente que destru#e a los hongos E#.!ri i+aci&': la esterili(aci%n es la destrucci%n total de todos los microorganismos, incluso de las ormas ms resistentes como esporas bacterianas, $irus no lpidicos # hongos! Con el uso de los procedimientos sicos o agentes qumicos! "os m0todos se esterili(aci%n son los siguientes* ,! Por calor* S!co: a! <irecto* lameado o incineraci%n b! =ndirecto* aire caliente 8Pupinel9 HH0!do: a! Calor h4medo discontinuo* tindali(aci%n b! Dapor a presi%n* autocla$e 2! 5adiaci%n =oni(ante Fas %xido de etileno Flutaraldehido acti$ado E#.!ri i+aci&' co' ca or #!co: la acci%n bactericida del calor seco se debe a la oxidaci%n sica d ruin procedimiento lento e coagulaci%n de la protena bacteriana por quemadura! En ausencia de humedad se necesita una temperatura ms alta, #a que en esta orma los microbios son destruidos al absorber el calor! Pueden ser dos tipos*

Esico

Iumico

<irecta* lameado o incineraci%n ms utili(ada en laboratorios # en algunos hospitales peque/os! =ndirecto* aire caliente u horno de Pasteur con temperatura de ,20+C a ,J0+C por , a 2 horas siendo el ms e ica( # seguro el el0ctrico!

V!'.a>a#: El aire caliente penetra ciertos materiales que no se pueden esterili(ar en el autocla$e Puede utili(arse en laboratorios para la esterili(aci%n de artculos de $idrio El calor seco da protecci%n en esterili(aci%n de instrumentos delicados con punta o ilo al que da/ara el $apor El acero no se corroe o decolora

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D!#$!'.a>a#: 3e requiere ms tiempo de acci%n, porque el aire penetra con lentitud # uni ormidad El tiempo # la temperatura $aran seg4n el tipo de material "a sobre exposici%n puede da/ar alg4n producto <estru#e telas o material de caucho

E#.!ri i+aci&' co' ca or *H0!do: el calor h4medo es la orma de $apor saturado a presi%n es e ica( para la destrucci%n de todas las ormas microbianas, incluso espora! "a muerte de las bacterias es causada por la desnaturali(aci%n # coagulaci%n de su protena o su sistema intercelular en(ima)protena! Estas reacciones son catoli(adas por medio del agua! Estas pueden de dos tipos*

Calor h4medo discontinuo* algunos medios de culti$o que contiene carbohidratos como la gelatina, leche, etc! no soportan temperaturas ele$adas # se reali(a mediante los siguiente procedimientos* ,! Ti'da i+aci&': hace uso del calor h4medo, para una buena esterili(aci%n se debe reali(ar a ,00+C por L hora 8por tres $eces discontinuas9 durante , da! 2! E%( ici&': es el paso de un lquido al estado de $apor! El agua en ebullici%n representa en orma e ica( # prctica de proporcionar una desin ecci%n de alto ni$el de instrumentos # guantes que entren en contacto de las membranas mucosas, si bien al her$irlos por 20 minutos se aniquilan todas las ormas $egetati$as de las bacterias, los $irus, las le$aduras # los hongos, pero no destru#e a las esporas! .! Pa#.!(ri+aci&': elimina a todos los microorganismos no esporulados se puede $ariar las temperaturas por e'emplo* 22+C por .0 min- ?0+C por ,1 min! 3e utili(a para preser$ar alimentos como ser leche, cer$e(a!

Dapor a presi%n* conocido como autocla$e, que posee todos los requisitos indispensables como grados de temperatura # tiempo de exposici%n, que 'unto con el tama/o del autocla$e # el lu'o del $apor, la densidad # el tama/o de la carga en la cmara aumentan la tasa se muerte de los microorganismos, en una temperatura de ,2,+C M ,.2+C durante ,1 minutos o ms! V!'.a>a#: Es ms cil segura # e ica( El uso del $apor es el procedimiento ms rpido, el ciclo total de tiempo es ms corto Es ms barato # de obtenci%n ms cil "a ma#ora de las autocla$es poseen controles automticos # dispositi$os de control D!#$!'.a>a#: 3e requiere mucho cuidado en la preparaci%n # con ecci%n de bultos, en la carga # mane'o del autocla$e, as como el secado de los artculos "os artculos a esterili(ar deben estar limpios, sin grasa ni aceite El $apor tiene que estar en contact% directo con todas las partes de los artculos "os ciclos de tiempo se a'ustan seg4n el tipo de material # tama/o de la carga El $apor puede no ser puro

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E#.!ri i+aci&' :or radiaci&': la ioni(aci%n por radiaci%n genera iones al liberar electrones de los tomos, estos se desprenden $iolentamente con tomos ad#acentes # se une a ellos, o bien se desprenden del segundo tomo! "a energa liberada se trans orma en energa t0rmica o qumica la cual causa la muerte de los microorganismos al romper la mol0cula del A<& e impide la di$isi%n molecular # la propagaci%n de la $ida! "as principales uentes de radiaci%n ioni(ante son las partculas >eta # ra#os gamma! V!'.a>a#: Penetra la mor parte de todos los materiales para esterili(arlos con con iabilidad Es el m0todo de esterili(aci%n ms e ica( &o genera radiaci%n residual Penetran en ob'etos grandes # $oluminosos

E#.!ri i+aci&' :or "a# oIido d! !.i !'o: este es un gas incoloro, soluble en agua # en sol$entes comunes, se emplea para esterili(ar ob'etos sensibles al calor, este proceso es relati$amente lento! El poder bactericida depende de la concentraci%n del mismo gas, temperatura, humedad # tiempo de exposici%n! "a acti$idad esporicida se produce por aniquilaci%n de los grupos terminales hidroxilo, carboxilo, amino # sul ridrilo! V!'.a>a#: Es un buen sustituto e ica( cuando los artculos no pueden ser esterili(ados por calor Es anticorrosi$o # no da/a el material Penetra totalmente todo el material poroso &o de'a pelcula sobre los instrumentos D!#$!'.a>a#: Es un proceso complicado por lo que se debe usarse indicadores biol%gicos "a esterili(aci%n lle$a ms tiempo, es un proceso lento # largo &ecesita equipo especial # costoso Puede ormar productos secundarios t%xicos &ecesita ser $entilado por lo menos 24 horas Por recuentes esterili(aciones pueden ormar # aumentar residuos totales de gas en artculos porosos En contacto con la piel produce $esculas # a4n quemaduras 3i se inhala puede ser irritante para las mucosas E#.!ri i+aci&' :or " (.ara d!*ido: la soluci%n acuosa de glutaraldehido acti$ado # amortiguado al 2;, destru#e a los microorganismos por desnaturali(aci%n de la protena! Es pre erida para esterili(ar instrumentos que no pueden esterili(arse al $apor o no se cuenta con otro m0todo de esterili(aci%n!

&o es absorbible por caucho ni plstico Es poco $oltil de modo que puede reutili(arse Es e ica( a la temperatura ambiente Es anticorrosi$o, no mancha # e ica( para esterili(ar instrumentos Ciene una tensi%n super icial ba'a Grado d! d!#i'=!cci&' esterili(ante ni$el alto ni$el ba'o Ti!0:o d! i'0!r#i&' ,2 horas .0 min ,0 min

V!'.a>a# Amplio espectro

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D!#$!'.a>a#: Puede ser irritante, por lo tanto se debe en'uagar exhausti$amente con agua est0ril Es una soluci%n con olor Es costoso

D!#i'=!cci&': es el uso de procedimientos sicos o qumicos para destruir a la ma#ora de los microorganismos* bacterias # otros microorganismos relati$amente resistentes por e'emplo m#cobacterias, $irus lipdicos, hongos! D!#i'=!c.a'.!#: son sustancias qumicas capaces de destruir un germen pat%geno que debido a su alta toxicidad celular se aplican solamente sobre te'ido inanimado, es decir material inerte! 3eg4n el grado de desin ecci%n tenemos* ,! desin ecci%n de ni$el alto 2! desin ecci%n de ni$el intermedio .! desin ecci%n de ni$el ba'o Ti:o <esin ecci%n de ni$el alto <esin ecci%n de intermedio <esin ecci%n de ni$el ba'o A"!'.!# A(! 'o ! i0i'a F)r0aco algunas esporas Eormalaldehido Flutaraldehido Nipoclorito de sodio ,; ni$el esporas Alcohol etlico ?0; Esporas, C>C, D=N # Compuestos de amonio DN> Cuaternario Principales antisptic s "esin#ectantes:

DGJ?SOLUCION: <etergente, germicida, unguicida! Moderno # poderoso germicida desin ectante, ha demostrado una acti$idad ,20 $eces ms rpida que las sales de mercurio # 10 $eces ms e ica( que el enol, #odo, alcohol, ormol, etc! Aparte de destruir los microbios es mu# acti$o contra las ormas ungosas 8pie de atleta9, penetra pro unda mente en los intersticios de la piel # alcan(a los g0rmenes aislados en las (onas ocultassigue actuando por su e ecto residual luego de su largo lapso de su aplicaci%n no tiene olor, no es custico, no mancha la piel ni ropa, no es t%xico a diluciones habituales! AGUA OKIGENADA LH5O5M: Es un antis0ptico de amplio espectro germicida, pero tiene la gran des$enta'a que es inacti$ado rpidamente por los te'idos mediante la en(ima catalasa! @sos* 3e utili(a en heridas pro undas por dos moti$os* el A2 liberado del catabolismo es t%xico para las bacterias anaerobias que recuentemente a ectan este tipo de heridas #, adems es 4til #a que a#uda a eliminar detritus celulares # te'idos des$itali(ados que a$orecen la in ecci%n! "a acci%n del agua oxigenada es a tra$0s de la ormaci%n de radicales libres!

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CLORHEKIDINA: Es un antis0ptico de la piel de uso ms limitado en consultorios # hospitales debido a su costo, utili(ndose ms en clnicas pri$adas! Es un antis0ptico de ba'o espectro de acci%n, actuando exclusi$amente sobre bacterias, Fram 8O9 # Fram 8)9, aunque ha# cepas de pseudomona que pueden ser resistentes! &o es $iricida ni tampoco esporicida, sin embargo es capa( de inhibir su germinaci%n! "as $enta'as que 'usti ican el uso de clorhexidina son la acci$n %er&ici"a r'pi"a # su "(raci$n pr l n%a"a gracias a que esta sustancia tiene gran adhesi$idad a la piel, tiene un buen )n"ice terap(tic # al c &*inarl c n alc + l al ?0; su acci%n germicida aumenta! @sos* ,l(c nat "e Cl r+e-i"ina en soluci%n acuosa con detergente* se utili(a en limpie(a pre)operatoria de piel, en ciruga plstica # en pacientes al0rgicos al #odo! Cl r+e-i"ina al ./01 en etan l al 2.1* se usa para el la$ado de manos ,ODO: Existen dos tipos de soluciones que contienen #odo! En primer lugar las soluciones de #odo propiamente tales que son dos, el alcohol yodado 80,, gr de #odo en ,00 ml de alcohol al ?0;9 # la tintura de yodo 8, gr de #odo en ,00 ml de alcohol etlico al ?0;9! El segundo tipo es un #od% oro, la povidona yodada al 10%! @n #od% oro es un comple'o en que el #odo est unido a una mol0cula orgnica # se $a liberando progresi$amente a la soluci%n! El primer grupo corresponde a soluciones alcoh%licas de #odo # la segunda es una soluci%n acuosa del i%n! "os . tipos mencionados tienen la misma acci%n germicida! 3u acci%n antis0ptica se clasi ica entre ni$el alto # el ni$el intermedio! 3on letales en minutos para las bacterias, hongos, $irus, proto(oos, quistes amebas # esporas! 3in embargo, rente a esporas secas requiere de un ma#or tiempo de exposici%n 8horas9! El #odo es mucho me'or antis0ptico que el alcohol! El alcohol #odado es la orma de alcohol que se usa con ma#or recuencia debido a su potenciaci%n! 5especto al uso, para la antisepsia pro ilctica de piel # el la$ado de manos se usa el alcohol #odado # la po$idona, mientras que para la limpie(a de heridas # de mucosas se utili(a la po$idona exclusi$amente! El alcohol en estos casos es mu# irritante! "os antis0pticos #odados tienen la $enta'a de ser baratos! ALCOHOL ETILICO O ETANOLN6O: @na condici%n particular del etanol es que s se usa como antis0ptico en una soluci%n pura, al ,00;, carece casi por completo de acci%n germicida! Esto se debe a que el etanol act4a precipitando las protenas del germen exclusi$amente en medio acuoso! El alcohol debe estar diluido para tener e ecto! "a clnica ha demostrado que la soluci%n germicida ms e ecti$a es el alcohol al 70%! 3oluciones ms concentrados que se $enden en el comercio tienen menor e ecti$idad! El etanol ?0; es un desin ectante de ni$el intermedio! Es letal para bacterias inclu#endo el bacilo de Poch, es un irregular ungicida # $iricida, # no act4a sobre las esporas! El alcohol etlico tiene un uso limitado, particularmente como antis0ptico pro ilctico en la piel pre$io a la introducci%n de agu'as! 3in embargo, para obtener los resultados germicidas esperados, deberamos esperar 2 minutos como mnimo 8latencia de acci%n9! El alcohol es un buen antis0ptico pero no es el me'or! &o debe ser administrado en heridas #a que es irritante! Atra caracterstica del etanol es que al combinarlo con antis0pticos de otro grupo se potencia su acci%n germicida! Bi*li %ra#)a: ,! Cie'ten "#nda Pre$enci%n de las =n ecciones 2! AtQinson "uc# Tcnicas de Quirfano &ue$a Editorial =nteramericana 3!A! M0xico ,KK.

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.! <ugas >e$erl# Tratado de Enfermera Pr ctica &ue$a Editorial =nteramericana M0xico ,KKK

ACTIVIDADES DE LA PRACTICA DE ASEPSIA , ANTISEPSIA <.? CC() !# #o' o# 0G.odo# d! !#.!ri i+aci&'D

5.? C() !# a d!=i'ici&' d! o# #i"(i!'.!# .Gr0i'o#: A#!:#ia: E#.!ri i+aci&': F('"icida: Bac.!rio#.).ico: A'.i#!:#ia: D!.!r"!'.!#: E.? CC() !# #o' o# "rado# d! d!#i'=!cci&' 2 A(! a"!'.!# #o' ! i0i'ado# !' cada "radoD

7.? R!a i+a o# do# .i:o# d! a$ado d! 0a'o# .a'.o A(irHr"ico 2 0GdicoP C2 !' A(! ca#o #! r!a i+a cada ('oD

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@.? CC()'.o# .i:o# d! ca +ado d! "(a'.!# !Ii#.!'; 0!'ci&'a o# 2 :o#.!rior0!'.! d!0(G#.ra oD

PRACTICA No. 7
MANEBO DE MUESTRAS OBBETIVO GENERAL: "os estudiantes de laboratorio aprendern # pondrn en prctica las t0cnicas correctas para una buena extracci%n, mane'o # trasporte de muestras!

OBBETIVOS ESPECQFICOS: "os estudiantes sern capaces de* 3aber que tipo de muestras es necesario # como de obtiene para el estudio microbiol%gico de las distintas patologas! Conocer los m0todos de obtenci%n de las muestras mas caracteri(adas como 8orina, heces, exudados9! Conocern como se trasportan las muestras, # los m0todos que dispone para ello! =ndicar que tipo de muestras # sustancias orgnicas pueden ser extrados para la muestra! 5e erir el tipo de muestras que se solicitan # para que estudios son utili(ados!

MATERIAL: <os pares de guantes Beringas de 1 o .cc! <os ba'a lenguas # una linterna! Cuatro hisopos 8 cotonetes9 @n par de porta # cubre ob'etos 8 para la muestra de esputo # de heces9! Corundas secas # con alcohol! Cinta adhesi$a 8para la muestra de oxiuriasis9! Erascos colectores de esputo! Erascos est0riles # limpios para muestras de orina # heces >istur! Cermo con paquetes ros Algod%n e hisopos 'ab%n o 'aboncillo abundante agua # toallas

DEFINICION:

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"a toma de muestra es el con'unto de procedimientos destinados a obtener una parte representati$a cualitati$amente # cuantitati$amente a partir de un todo, en nuestro caso, el paciente, es el medio ambiente!

CONSIDERACIONES GENERALES PARA LA TOMA DE MUESTRA: <. <ebemos saber FUE $amos a tomar como muestra 8esputo, sangre, etc!9 5. PORFUE $amos a tomar la muestra 8con ines de diagnostico, in$estigaci%n9 E. COMO $amos a tomar la muestra 8punci%n, raspado, etc!9 7. DONDE $amos a tomar la muestra 8piel, aringe, etc!9 @. CUANDO $amos a tomar la muestra 8a#uno, etc!9 CARACTERQSTICAS DE UNA MUESTRA: 3er obtenida del lugar donde asiente la patologa! Feneralmente tomada de los bordes de la lesi%n! 3er cualitati$amente optima para su estudio! Alcan(ar cuantitati$amente un $olumen ra(onable En la ma#ora de los casos ser de emisi%n reciente! En algunos casos haber sido obtenida cuando el paciente esta atra$esando determinadas instancias e$oluti$as de su patologa! ?! Abtenida siguiendo criterios anat%micos # uncionales! J! Per ectamente en$asada, e$itando recipientes que potencialmente puedan producir contaminaciones accidentales! K! En$iada inmediatamente al laboratorio para su estudio o si tiene que transcurrir alg4n tiempo ser en$iada en recipientes especiales o en medios de culti$o de transporte! ,0! Abtenida con material esterili(ado # en condiciones de asepsia! PROCEDIMIENTO PARA LA TOMA DE MUESTRAS: El rasco en el aislamiento de un germen se debe, ms a menudo, a una mala toma de muestras o a de iciencias en el transporte de las mismas que a unos allos en las t0cnicas de culti$o! Por ello, es mu# importante la estudiante que $a#a a reali(ar la toma de muestras est0 bien in ormado d las normas a seguir! =nstrucciones generales # especi icas a seguir para lograr una buena toma de muestras! ,! "a toma de muestras debe reali(arse antes de iniciar el tratamiento con antimicrobianos, #a que este inter iere en la obser$aci%n directa del germen, as como en posterior aislamiento del mismo en los medios de culti$o! ,! 2! .! 4! 1! 2!

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2! "a toma de muestras debe reali(arse en los lugares donde sea ms probable es encontrar el microorganismo con la menor contaminaci%n externa posible! .! 5ecoger la muestra en el estadio de la en ermedad ms apropiado! 4! "as muestras deben recoger es cantidades su icientes para permitir un examen completo- deben colocarse en recipientes est0riles # remitirse lo ms pronto posible el laboratorio! 1! Es un requisito indispensable que el laboratorio recibe la su iciente o t0cnicas adecuas! 2! El personal debe recha(ar las muestras que no se han recogido de orma adecuada # los especialistas deben apo#ar esta actitud! ?! 5ecordando* "a toma de muestras debe reali(arse antes de iniciar el tratamiento antimicrobiano! Es mu# importante seguir las normas necesarias para e$itar la contaminaci%n externa! "a cantidad debe ser su iciente # es undamental que se utilice un recipiente! CLASIFICACION DE 3e clasi ican en* MUESTRAS SUPERFICIALES MUESTRAS DE CAVIDADES MUESTRAS ESPECIALES. LA TOMA DE MUESTRAS:

MUESTRA SUPERFICIALES: Aqu consignamos a las muestras de la piel, pelo, u/as!

<. PIEL: Cenemos dos posibilidades de obtener la muestra, #a sea procediendo a al(ar a los g0rmenes con el asa bacteriologa, por simple raspado ligero o con la a#uda de bistur proceder a raspar algo energ0ticamente los bordes de la lesi%n, de manera no solo obtendremos los microorganismos sino tambi0n las capas super iciales de la piel, esto es pro$echoso en el caso de ciertas determinaciones! Einalmente puede ser que en determinados casos se pretenden n%dulos los cuales estn por deba'o de la piel, siendo ms palpable que $isibles- en este caso procedemos tambi0n a raspar con el bistur el lugar de la lesi%n llegando hasta el n%dulo de manera que una $e( obtenida la pulpa, esta puede ser procesada # as llegar a obser$ar al microbio! 5. PELO: Cambi0n ha# dos posibilidades, la primera cuando los g0rmenes se hallan locali(ados en el olculo piloso, en este caso ser su iciente proceder a raspar la regi%n con el asa bacterol2gca pre$io de la (ona con agua destilada, tambi0n se podr arrancar el pelo a in de aislar al germen a partir del olculo piloso!

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"a segunda posibilidad se $era cuando el tallo del pelo este atacado 8micosis9 en esta situaci%n proceder acortar el pelo para su obser$aci%n o posterior procesamiento en culti$o! E. URAS: 3e utili(an dos t0cnicas, de acuerdo al sitio atacado! "a primera se utili(a cuando la lesi%n asienta en el lecho ungueal, en esta t0cnica despla(amos el asa bacteriol%gica, pre$io la$ado de la regi%n con agua destilada por el lecho ungueal con un solo tra(o irme # seguro! 3i la u/a se halla atacada por microorganismos 8hongos9 entonces procedemos a cortar a#udados de un bistur a in de continuar luego con el culti$o # el diagnostico a tra$0s de la microscopia! MUESTRA DE CAVIDADES: Consignamos las muestras de mucosas, conducto auditi$o externo, esputo, orina, heces ecales! <. MUCOSAS.? El instrumento que sir$e de como denominador en la obtenci%n de estas muestras es el hisopo, es decir un aplicada de madera que posee es uno de sus extremos un engrosamiento de algod%n # que ob$iamente debe ser esterili(ado! 3i $amos describiendo las mucosas de arriba hacia aba'o, encontramos lo siguiente* 5. MUCOSAS CONBUNTIVAL.? @samos un hiposo est0ril aunque algunas escuelas pre ieren utili(ar el asa bacteriol%gica, luego ubicamos la con'unti$a in ectada o aquella que presente ma#or exudado si la muestra a ni$el del ngulo interno del o'o a ectado! El hisopado debe ser cuidadoso # sua$e para ri% producir ma#or traumatismo! E. MUCOSA NASAL.? <e igual orma utili(amos un hisopo si la lesi%n es $isible a simple $ista procedemos entonces a obtener la muestra, si la lesi%n es mucho ms interna! Entonces ser necesario que un especialista la obtenga con instrumental que nosotros #a no poseemos! Na# otras oportunidades en que es preciso utili(ar un cincel delgado # largo que podemos abricar a partir de un su'etador de papel 8clip9 el cual es con$ertido en alambre rectilneo # posteriormente aplastando uno de los extremos obtendremos un peque/o cincel, con el cual # una $e( esterili(ado procedemos a raspar lesiones sospechosas! 7. MUCOSA ORAL.? En esta ca$idad es sencillo tomar cualquier nuestra pues tenemos gran $isibilidad All podemos obser$ar donde se locali(an una lesi%n # posteriormente utili(ando el hisopo lle$ar a cabo la toma de muestra! Por otra parte para ines de in$estigaci%n podemos escoger cualquier segmento de la mucosa oral puesto, que esta posee una lora $ariada de microorganismos! @. MUCOSA GENITAL FEMENINA.? Aun debemos considerar dos posibilidades ms # son aquellas que se presentan en el caso de una mu'er con himen intacto # otra que ha#a tenido contacto sexual! En la mu'er con himen intacto tan solo debemos esperar que las secreciones se $iabilicen al exterior para as ser obtenidas! En la mu'er des lorada utili(aremos el especulo es decir dos $al$as que una $e( introducidas en el canal $aginal pueden ser separadas a $oluntad, brindndonos de esta orma un campo de acci%n # obser$aci%n ideales luego procederemos a hisopar las

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regiones escogidas, haciendo hincapi0 en las $ecindades del ori icio cer$ical externo, pues all se acumularan las secreciones! MUESTRAS ESPECIALES.? ESPUTO.? El esputo es la colecci%n de secreciones patol%gicas pro$enientes del rbol traqueo)bronquial! "a muestra podemos obtenerla a tra$0s de di erentes t0cnicas, entre las cuales citaremos las ms importantes* <. FORMA NATURAL DE ELIMINACI9N DEL ESPUTO: Esta es la t0cnica ms utili(ada, se aplica a pacientes que pueden entender # aplicar las instrucciones que se les d0! Entregamos al paciente un recipiente especial para esta muestra # le indicamos que al despertara proceda a reali(ar un en'uague bucal con un antis0ptico, luego debe proceder a expectorar directamente dentro de recipiente, llegando a acumular por lo menos tres esputos 8 lemas9! Posteriormente se sierra herm0ticamente el en$ase # deber ser en$iado a laboratorio debidamente rotulado 8nombre completo, edad # sexo9 adems de la numeraci%n correspondiente # echa! 5. LAVADO G1STRICO.? Esta t0cnica se prctica en pacientes que no $an ha poder reali(ar lo anterior, los ni/os 8por que degluten el esputo9, ancianos, en ermos mentales inalmente mu'eres 8por que tambi0n degluten el esputo! E. LAVADO TRAFUEAL.? Esta t0cnica consiste en instalar suero isiol%gico tibia hacia el rbol traqueo) bronquial de manera que pro$oquemos el acceso de tos al despertar o excitar ese re le'o, en esa circunstancia debemos estar bien protegidos con barbi'o, gorro, mandil # guantes! 7. FORMA POSTURAL.? Este m0todo tambi0n es 4til en pacientes que no pueden eliminar en orma espontnea la muestra! Procedemos a colocar al paciente en dec4bito $entral sobre una camilla 8o cualquier super icial que cumpla la misma unci%n 9 con una almohada deba'o de ala regi%n abdominal inalmente la cabe(a queda colgado en una de los extremos la camilla al igual que los bra(os lateralmente* de esta orma por simple acci%n de la gra$edad la secreciones se $iabili(aran al exterior, directamente al recipiente RECOGIDA DE ORINA. ? "a toma de muestras se reali(ar en un rasco est0ril que no deber abrirse antes de la recogida! "a recogida de orina puede reali(arse de tres ormas* <. RECOGIDA DE LA PORCI9N MEDIA DE LA MICCI9N.? Es aconse'able que la orina recogida sea de la primera hora de la ma/ana! El paciente debe la$arse meticulosamente los genitales externos con agua # 'ab%n en'ugndose inalmente con agua limpia! =niciar la micci%n desprecindose la primera parte! A continuaci%n, # sin detener la micci%n, debe recogerse la segunda mitad de la misma en un rasco est0ril de unos 20, .1 m, e$itando tocara el interior o borde de , rasco!

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5. SONDABE VESICAL 6 PUNCI9N DE SONDA.? El sonda'e $esical debe utili(rselo menos posible #aque con lle$a el riesgo de pro$ocar una in ecci%n por introducir microorganismos del exterior! 3e e ectuara en condiciones de rigurosa asepsia # por personal cuali icado! El en ermo portadores de sonda permanente debe recogerse la muestra a trabes de la sonda # nunca dir!c.a0!'.! d! a %o #a. E. PUNCION SUPRAPSVICA.? Esta t0cnica permite extraer la orina directamente de la $e'iga mediante una 'eringa con agu'a asegurando una muestra libre de contaminaciones! Este m0todo puede reali(arse con mu# poco riesgo en lactantes, ni/os # adultos con $e'iga llena! <ado que la orina es un excelente medio de culti$o para la ma#or parte de las bacterias, la muestra debe re rigerarse inmediatamente despu0s de la extracci%n! A 40+ C el recuadro de bacterias permanece constante durante 24 horas! 7. TTCNICA DE RECOLECCI9N EN 57 HORAS.? 3e usa cuando la patologa esta situada en los ri/ones! Consiste en recolectar durante 24 horas toda la orina eliminada de manera que aumentemos las posibilidades de coleccionar el agente etiol%gico! Carac.!r8#.ica# d! r!ci:i!'.! :ara r!co !c.ar ori'a. a! "a capacidad mnima es de 210 cc! b! <ebe poseer boca ancha! c! <ebe poseer sistema de rosca # tapa que asegure con este sistema! d! <ebe ser est0ril! e! <ebe ser construido de material susceptible de esterili(aci%n! ! <e pre erencia ser transparente a in de obser$ar ciertas caractersticas macrosc%picas! g! Ciene que consignar el nombre, edad, sexo del paciente, adems de la echa # el correspondiente n4mero de registro! HECES FECALES.? Cenemos dos posibilidades* heces diarreicas # heces s%lidas! <. HECES DIARREICAS.? En este caso obtenemos un $olumen similar al de una cuchara sopera lo que ms o menos $iene a ser una cantidad de ,0 cc! Estas muestras deben procesarse dentro de un margen de tiempo prudencial pues al acidi icarse muchos g0rmenes pat%genos se lisan! 5. HECES S9LIDAS.? 3e toma un $olumen similar al de una pepa de dura(no! Carac.!r8#.ica# d! r!ci:i!'.! :ara r!co !c.ar *!c!# =!ca !#. a! "a capacidad mnima es de .0 ml b! <ebe poseer sistema de rosca # tapa que asegure con este sistema, o en su de ecto un tap%n que asegure herm0ticamente!

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c! En lo posible debe ser est0ril, aunque se puede utili(ar un en$ase bien la$ado! d! Podr ser construido de material susceptible de esterili(aci%n, 8polipropileno, policarbonato, $idrio9 e! &o debe ser abricado de cart%n pues deshidrata la muestra! En 4ltimo caso se podr utili(ar recipientes de cart%n para inado! ! Ciene que consignar el nombre, edad, sexo del paciente, adems de la echa # el correspondiente n4mero de registro!

MUESTRAS ESPECQFICAS ,! EKTRACCI9N DE SANGRE PARA CULTIVOS: "a t0cnica de extracci%n consta de una serie de pasos que deben rigurosamente, con ob'eto de reducir al mximo el riesgo de contaminaci%n! Colocar una ligadura en el antebra(o! Escoger la $ena tocando la piel antes de la desin ecci%n! "impiar la piel con alcohol 8?0;9 sobre el sitio de la $enopuntura en un rea se unos 1 cm rotando $igorosamente! Aplicar #odo)po$i dona 82 ;9 desde el centro hacia a uera, hasta haber saturado todo el circulo! 3e de'ara que el #odo se seque, durante un minuto como mnimo, Este tiempo es undamental # se debe cronometrar! 3i despu0s de desin ectada, el lebotomista debe tocar la piel, deber desin ectarse los dedos que $a a usar para la palpaci%n o bien utili(ar guantes est0riles! 3e insertara la agu'a en la $ena a # se reali(ara la extracci%n! 3e cambiaran las agu'as antes de in#ectar la sangre en las botellas de culti$o! <espu0s e retirar la agu'a, la piel del paciente se desin ectara otra $es con alcohol al ?0; , #a que muchos en ermos son sensibles al #odo! @na $es inoculadas, las botellas de hemoculti$os deben remitirse inmediatamente al laboratorio para iniciar lo ms pronto posible su procesamiento! &o es aconse'able extraer sangre a tra$0s de una deri$aci%n 0 cat0ter, #a que estos dispositi$os pueden estar coloni(ados por bacterias que no estn presentes en la sangre el paciente por lo tanto, estos hemoculti$os podran dar resultados alsos positi$os! Cambi0n se aconse'a reali(ar la toma por deba'o de las tubuladuras intra$enosas #a que la sangre tomada por encima e ella estar diluida por el lquido trans undido! 3e recomienda . muestras en 24 h con un inter$alo entre ellas superior a , h! 3in embargo se acepta 2 o . extracciones separadas .0 min! Cada 24h, para cada hemoculti$o, se extraern lA ml de sangre # se inocular a partes iguales en dos rascos 81ml en cada uno9 uno para aislamiento de g0rmenes aerobios # otro para anaerobios!

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5.

LIFUIDO

CEFALORRAFUQDEO: Esta muestra se obtiene a partir de una punci%n lumbar que se practica entre el .er! R 4to! Espacio inter$ertebral lumbar! Esta es una t0cnica prctica operatoria # se la debe reali(ar con todos los cuidados necesarios teniendo en cuenta las contraindicaciones! "a cantidad necesaria es de . ) 1ml! # siempre se debe reali(ar un estudio microsc%pico antes de entrar al estudio microbiol%gico! "a presi%n ms importante es de procesar el liquido ce alorraqudeo dentro de un margen de tiempo mnimo desde la toma de muestra, pues muchos g0rmenes se lisan transcurrido cierto tiempo- dndonos de esta manera un resultado negati$o! E. MUESTRA CAPILAR: .Gc'ica#. 5eali(ar la antisepsia del lugar elegido 8l%bulo de la ore'a, pulpe'o del dedo anular, planta del pie en lactantes! Euncionar con rapide( # irme(a de tal manera que ingrese toda la punta de la lanceta! <escartar la primera gota! 5ecoger la sangre que lu#e libremente llenando las tres cuartas partes del capilar! Presionar sua$emente el lugar de punci%n con un algod%n empapado en alcohol! "a punci%n cutnea o capilar se emplea para* S Erotis S Micro hematocrito S Frupo sanguneo S 5ecuento de l%bulos blancos S R otros!

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CONCLUSI9N.? &o solo se puede obtener de los segmentos mencionados, en determinado momento cualquier regi%n del cuerpo humano se presta a ser tributarla de este procedimiento!

EBERCICIOS DE EVALUACI9N LEI.racci&' d! 0(!#.ra#M <.? CF(G carac.!r8#.ica# d!%! .!'!r ('a 0(!#.ra i'diA(! JD RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT 5.? CPor A(G !# i0:or.a'.! o%.!'!r a 0(!#.ra co' 0a.!ria !#.Gri 2 co' a#!:#iaD R!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! E.? CPor A(G !# i0:or.a'.! r!=ri"!rar a 0(!#.ra d! ori'a i'0!dia.a0!'.! d!#:(G# d! a !I.racci&'D RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT 7.? CC() !# #o' a# carac.!r8#.ica# d! =ra#co :ara r!co !c.ar a ori'aD

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RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT! TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT!!!!!!!!! @.? CC() d! a# #i"(i!'.!# 0(!#.ra# 'o d!%!' "(ardar#! !' a '!$!ra c(a'do #! r!A(i!r! r!a i+ar (' c( .i$o 0icro%io &"icoD S(%ra2a a r!#:(!#.a 2 >(#.i=8ca a. a9 Esputo b9 Arina c9 "iquido c0 alo raqudeo d9 Neces PorqueTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT J.? CPara A(G !#.(dio #! !0: !a a :('ci&' c(.)'!a o ca:i arD RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT N.? CD! A(! !#:acio i'.!r$!r.!%ra #! o%.i!'! a 0(!#.ra d! L8A(ido CG=a o RaA(8d!o 2 :orA(!D RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT U.? CF(G :a#a co' a# *!c!# c(a'do #! a# d!>a 0(c*o .i!0:o #i' r!=ri"!rar#! 2 #i' co'#!r$a'.!#D RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT V.? CPor A(G 'o !# aco'#!>a% ! !I.ra!r #a'"r! d! ('a d!ri$aci&' o ca.G.!rD R TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT <6.? CF(G 0!dida# d! #!"(ridad d!%! .!'!r a :!r#o'a A(! r!co !c.a c(a A(i!r .i:o d! 0(!#.ra 2 :orA(!D R TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT!

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TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT!!!!

PRACTICA No. @
TINCIONES

OBBETIVO GENERAL: "os estudiantes de laboratorio aprendern # pondrn en prctica las t0cnicas correctas de las tinciones # su importancia!

OBBETIVOS ESPECQFICOS: ,!) Conocer la mor ologa de los elementos en sangre aquellos que son normales # los producidos por patologas! 2!) Aprender la t0cnica de extensi%n reali(ando la gota gruesa # un extendido delgado para la obser$aci%n del parsito! .!) Conocer los parsitos de la sangre en caso de Malaria! 4!) Conocerla t0cnica de tinci%n de "eishman! 1! Conocer las causas que puede dar error en una tinci%n! DEFINICI9N.? "as tinciones ueron desarrolladas ilogen0ticamente para poder di erenciarlos tipos de elementos existentes en el torrente sanguneo como ser Fl%bulos 5o'os, Fl%bulos >lancos, Plaquetas # todos los elementos que puedan existir de acuerdo a las en ermedades presentes!

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MATERIAL.? ! ! ) ! ) <os $arillas de $idrio Erasco "a$ador Cron%metro Fradilla para secarlos porta ob'etos Porta ob'etos

REACTIVOS.? Colorante de "eishman >u er o Agua ale alcalina FUNDAMENTO.? "as Cinciones Nematol%gicas, se undamenta en la coloraci%n de los elementos ormes de la 3angre! Elementos Celulares* a9 Fl%bulos 5o'os o eritrocitos b9 Fl%bulo s >lancos o leucocitos c9 Plaquetas o Crombocitos "as c0lulas de la sangre tienen un origen com4n en la m0dula %sea de los huesos! Canto los Fl%bulos 5o'os como >lancos # Plaquetas pro$ienen de una calda pluripotencial llamada 3tem)Cell, o c0lula troncal las que por acci%n de di erentes hormonas # respondiendo a las necesidades del organismo progresan en $arias =neas de di erenciaci%n! Lo# G &%( o# Ro>o#.? 3on elementos ms abundantes en la sangre circulante # le dan su caracterstico color ro'o se produce en la medula %sea # salen a la circulaci%n en orma de discos bic%nca$os sin n4cleo! "a unci%n primordial del Fl%bulo 5o'o es transportar el Axgeno! Lo# G &%( o# B a'co# o L!(coci.o#.? "os leucocitos son c0lulas encargadas de la de ensa contra las in ecciones cuando ha# una agresi%n de un agente pat%geno los leucocitos acuden al lugar de la agresi%n # destru#en al in$asor secretando sustancias que los inhiben 8anticuerpos9 o digiri0ndolos 8Eagocitosis9 o por 4ltimo destru#0ndolos por contacto 8Cito toxicidad9 "os leucocitos se di$iden en tres clases di erentes, a pesar de deri$ar de una c0lula com4n en la m0dula %sea! Estos tres tipos di erentes de leucocitos son* a9 Franulocitos &eutr% ilos, Eosin% ilos # >as% ilos b9 Monocitos c9 "in ocitos "in ocitos > "in ocitos C

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El n4mero normal d e leucocitos son* de 2000 a J000 por mm. P aA(!.a#.? 3on c0lulas mu# peque/as sin n4cleo que pro$ienen de la m0dula %sea, tiene una $ida media de ? das # su tama/o es de 2 a 4 micrones! "os colorantes colorean el elemento ingresando a tra$0s de la pared celular adquiriendo una coloraci%n caracterstica, tanto el n4cleo en caso de un gl%bulo >lanco, coloreando tambi0n la Nemoglobina o los elementos que se puedan ormar dentro de los eritrocitos! En caso de la coloraci%n de >acilos cada colorante tiene su principio # colorea de acuerdo a las caractersticas de membrana de cada bacilo que se especi ica en la prctica respecti$a! Existen adems soluciones decolorantes que permiten en una misma placa di erenciar dos tipos de >acterias! PROCEDIMIENTO.? ,!)Preparar un extendido de 3angre en caso decoloraci%n Nematol%gica esto consiste en una capa delgada, 4nica, de c0lulas sanguneas! Esto acilita la obser$aci%n de las caractersticas mor ol%gicas de los de los parsitos presentes en los gl%bulos ro'os! <epositar la gota en un extremo # con un extensor poner en ngulo de 41+ reali(ar el extendido! 2!) 5eali(ar la gota gruesa reali(ando la des ibrinaci2n para deshemoglobini(ar # nos permita $er me'or el hemato(oario! .! ) Cabe mencionar que la placa se i'a con el metanol existente en el colorante! 4!) <epositar el colorante sobre la placa cubriendo en su totalidad 1!) Nomogenei(ar el colorante soplando la placa por el lateral de la misma! 2!) Cronometrar el tiempo exacto que la t0cnica prescribe por el lapso de 4 minutos! ?!) <e'ar caer unas 4 a 1 gotas de agua alcalina o bu er homogeni(ar soplando la placa por uno de los laterales! J!) <e'ar por el lapso de ,2 minutos! K!) "a$ar con abundante agua para eliminar los excesos de colorante! ,0!) <e'ar secar el extendido #a te/ido ,,!) Examinar al microscopio! INTERPRETACI9N.?

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"os parsito s de la Malaria toman con la coloraci%n de "eishman en la gota gruesa # en el extendido, que permite el reconocimiento del tama/o # orma del parsito! "a identi icaci%n de la especie # del estadio se basa, principalmente, en el aspecto del n4cleo # del citoplasma del parsito* El n4cleo del parsito 8la cromatina9 es generalmente redonda # se colorea de un ro'o intenso 8ro'o grosella9! El citoplasma tomas di erentes ormas, desde una orma de anillo a una totalmente irregular, # se colorea siempre de color a(ul $iolceo o cielo, aunque la totalidad puede $ariar ligeramente!

Para el reconocimiento de la especie # el estadio de los plasmo dios, el extendido permite obser$ar me'or las caractersticas del parsito, aunque a $eces se pueda hacer diagnostico de especie de la gota gruesa! RESULTADOS.? El resultado debe dar una descripci%n detallada de los elementos o g0rmenes que se pueda obser$arlos mismos deben ser super$isados por un >ioqumico en dichos resultados se debe hacer constar* ,!) Mor ologa de los elementos en sangre 2!) =ndicar la presencia del hemato(oario como 3PP .!) =ndicarla cantidad de los F! 5o'os, F! >lancos, Plaquetas por recuento en ,00 elementos! CAUSAS DE ERROR.? ) Erotis mu# grueso ) Erotis te/ido antes de i'ar ) Colorante no iltrado 8precipitando cristales9 ) Colorantes mu# concentrados!

Ti'ci&' )cido?a co*o r!#i#.!'.!

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bacilo de Qoch

Microscopio Portaob'etos Cubreob'etos Asa de siembra Cubeta de tinci%n Culti$o bacteriano Pin(as Erasco la$ador Mechero de alcohol Papel de iltro a(ul de metileno ucsina) enol me(cla de cido # alcohol

REALIZACI9N ,! Prepara un rotis bacteriano! 2! Cubrir la preparaci%n con carbo ucsina! .! Calentar la preparaci%n en un mechero >unsen durante 1 min! &o debe her$ir! 3i se e$apora, se a/ade ms carbo uxina para que no se seque en ning4n momento! 4! "a$ar con agua el resto de colorante! 1! <ecolorar con la me(cla cido)alcohol! 2! "a$ar con agua para que no prosiga la decoloraci%n! ?! Ce/ir con a(ul de metileno , min! J! "a$ar con agua el resto de colorante! K! 3ecar la preparaci%n! ,0! Examinar al microscopio! Ti'ci&' GRAM: Bac.!ria# Gra0?Po#i.i$a#

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M0todo de identi icaci%n de bacterias mediante una tinci%n espec ica! <esarrollado por el m0dico dan0s Nans Christian Boachim Fram, es un procedimiento utili(ado uni$ersalmente! En un primer momento las bacterias se ti/en con $ioleta de genciana 8deri$ado metilado anilnico9 # despu0s se tratan con la soluci%n de Fram 8, parte de #odo, 2 partes de #oduro potsico # .00 partes de agua9- por 4ltimo se la$an con alcohol etlico, # unas bacterias retienen el uerte color a(ul de la $ioleta de genciana # otras se decoloran por completo! A $eces se a/ade una contratinci%n con ucsina o eosina para te/ir las bacterias decoloradas de color ro'o # hacerlas ms $isibles! 3e denominan bacterias Fram positi$as a aquellas que retienen la tinci%n a(ul # bacterias Fram negati$as a las que quedan decoloradas! Algunas bacterias presentan capacidad $ariable de tinci%n de Fram # se llaman Fram $ariables! >acterias Fram positi$as tpicas son los esta ilococos que producen or4nculos- Fram negati$as representati$as son la Escherichia coli de la lora intestinal o los bacilos de la tos erina- Fram $ariables son los bacilos de Poch de la tuberculosis!

Coco# Gra0?:o#i.i$o#

Racimos: aureus

forma sp,

tpica como

de S.

Staphylococcus

Cadenas:

forma sp,

tpica como

de S.

Streptococcus B

pneumoniae, Streptococcus grupo

Gruesos: forma tpica de Clostridium sp, como C. perfringens, C. septicum

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Racimos: forma tpica Staphylococcus sp, como aureus

de S.

Ramificados:

forma

tpica

de

Actinomycetes y Nocardia, como A. israelii

Tincin Negativas

GRAM:

Bacterias

Gram-

Cocos Gram-negativos

Curvados: forma usual de Vibrio sp, Forma de aguja fina: forma usual de como V. cholerae, y Fusobacterium sp Campylobacter sp, como C. jejuni

Tincin GRAM: Bacterias Gram-Negativas

Cocos Gram-negativos

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Diplococos: forma usual de Neiseria sp, como N. meningitidis Tambi n Moraxella sp Acinetobacter sp aparecen morfologa de diplococos! y con

Acinetobacter puede ser pleom"rfico, y a veces aparece como coco Gram#positivo!

EBERCICIOS DE EVALUACI9N LTi'cio'!#M <.? CF(G o%>!.i$o .i!'!' a# .i'cio'!#D

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RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT 5.? CPor A(G !# i0:or.a'.! co'oc!r a 0or=o o"8a d! o# ! !0!'.o# d! a #a'"r!D R!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! E.? CC() !# #o' a# :ri'ci:a !# ca(#a# d! !rror !' a# .i'cio'!# 2 :or A(! #! d!%! .!'!r 0(c*o c(idado !' 'o co0!.!r !rror!#D RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT 7.? CM!'cio'! E di=!r!'cia# !'.r! a# %ac.!ria# "ra0 '!"a.i$a# 2 :o#i.i$a#D RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT! TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT!!!!!!!!! @.? La .i'ci&' d! Zi! * 4 N!! #!' !# a 0a# (.i i+ada !' ! dia"'o#.ico d!W a9 M#cobacterium tuberculosis b9 M#cobacterium bo$is c9 M#cobacterium s(ulga# d9 Micobacterium "eprae e9 a # d son ciertos 9 &inguno J.? La co oraci&' d! Zi! * 4 N!! #!' (.i i+a co0o co ora'.! :ri'ci:a W. a9 b9 c9 d9 e9 Dioleta cristal Eucsina enicada bsica A(ul de metileno 3a ranina Eucsina cida

N.? CC&0o #! i'.!r:r!.a' o# r!#( .ado# d! a .i'ci&' d! Zi! * 4 N!! #!' !' ! ca#o d! a .(%!rc( o#i#. RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT

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TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT U.? CPor A(G !# i0:or.a'.! d!#*!0o" o%i'i+ar o# " &%( o# ro>o#D RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT V.? CD! A(! co or #! .iX! ! 'Hc !o d! : a#0odi(0 2 :or A(!D R TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT <6.? CF(G =or0a# .o0a ! ci.o: a#0a d! : a#0odi(0 2 d! A(! co or #! .iX!D R TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT! TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT!!!!

PRACTICA No. J
CULTIVOS OBBETIVOS:

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Conocer los distintos medios de culti$os conocer sus usos # materiales 5eali(ar un culti$o correcto Conocer que en ermedades se diagnostican con el apo#o de los culti$os =nterpretar el crecimiento de las colonias!

MATERIALES: Muestras de bacterias Fram 8M9 # Fram 8O9 Nisopos est0riles Asa de culti$o Agar sangre Fuantes Porta # cubreob'etos Microscopio Mechero MARCO TEORICO: C(lti3 s *acterian s: Colonias de bacterias Escherichia coli 8ms grande, rosa9 # Proteus vul"aris 8ms peque/a, de color casta/o9 que crecen 'untas en una placa Petri! En circunstancias normales estas bacterias son ino ensi$as # habitan en el intestino humano a$oreciendo la digesti%n, si bien pueden con$ertirse en pat%genas # producir in ecciones del tracto urinario! "os cient icos # m0dicos lle$an a cabo culti$os bacterianos # estudian sus caractersticas con el in de adquirir conocimientos respecto a las en ermedades bacterianas # su pre$enci%n

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS OBBETIVO GENERAL:

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"os estudiantes de laboratorio aprendern # pondrn en prctica las t0cnicas correctas para una buena extracci%n, mane'o # trasporte de muestras!

OBBETIVOS ESPECQFICOS: "os estudiantes sern capaces de* S Conocer en que se basa la elecci%n de un antimicrobiano para el tratamiento de una in ecci%n # los moti$os por los que se reali(an las pruebas de sensibilidad # cuando 0sta indicado hacerlas! 3aber interpretar el antibiograma de acuerdo a los t0rminos =ntermedio, 3ensible # 5esistente! Conocer los principales grupos de antibacterianos disponibles # su mecanismo de acci%n! Conocer el por qu0 se hace resistente el microorganismo rente a un determinado antibi%tico! Entender el undamento del antibiograma, el modo en que se debe reali(ar # las principales uentes de error!

S S

ANTIBIOGRAMA.? @n consiste en poner en contacto al germen que hemos culti$ado con distintos antibi%ticos para $er la sensibilidad de cada uno de ellos para dar el tratamiento correcto! 3e culti$an en ca'as Pettr# que contiene el medio adecuado 86Muller Ninton:9, que a$orecen el crecimiento de los microorganismos, se adiciona posteriormente los discos de sensibilidad 8 <iscos embebidos del antibi%tico9 de acuerdo al germen identi icado 8Fram! 8O9 o 8)9 9! "uego de 24 horas, # en algunos casos, 4J horas, obser$aremos el grado de inhibici%n del antibi%tico sobre la bacteria representado por alta de crecimiento bacteriano alrededor del disco 8 Nalo inhibitorio9! 3e procede posteriormente a medir el tama/o del Nalo con la a#uda de una regla la lectura es del dimetro del halo existiendo tablas para $er la sensibilidad o resistencia del germen!! Nemos de escoger por tanto aquel que tenga ma#or inhibici%n # con 0l # las propias de ensas del organismo se intentar erradicarlo, es decir, curar la in ecci%n bacteriana!

El antibiograma tiene cuatro utilidades principales*

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"a utilidad bsica del antibiograma es la instauraci%n de un tratamiento antibi%tico correcto al paciente! Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la in ecci%n posee mecanismos que le con ieran inmunidad rente a alg4n antibi%tico para no incluirlo como terapia! En cuanto al tratamiento el antibiograma no s%lo es necesario en la instauraci%n, tambi0n resulta 4til en el seguimiento e incluso en la con irmaci%n de tratamientos empricos! En ocasiones la en ermedad in ecciosa resulta gra$e # se comien(a el tratamiento antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa! El antibiograma tiene que con irmar, o en su caso corregir el tratamiento! Atra aplicaci%n de las t0cnicas de estudio de resistencia es la epidemiologa! Es necesario detectar el aumento de los ni$eles de resistencia en los aislamientos clnicos para tomar medidas correctoras! Por otro lado tambi0n puede tener utilidad diagn%stica porque el per il de resistencia puede en alg4n caso orientar en la identi icaci%n bacteriana!

ANTIBI9TICO.) Es una sustancia orgnica producida por microorganismos capaces de inhibir o destruir el desarrollo de otro microorganismo debiendo tener las siguientes condiciones* a9 Especi icidad o U Espectro de acci%nU b9 Ele$ada potencia biol%gica que se re iere a la CM= c9 Coxicidad selecti$a!) Iue es la capacidad de inhibir el microorganismo sin producir toxicidad al organismo 3e clasi ican por* Arigen >iol%gicos, sint0ticos # semisint0ticos Estructura Iumica 3on amilias con caractersticas similares ormando grupos por matices E'! V "actamicos, Macrolidos, sul as, nitro urantonas, etc! Acti$idad ))W Amplio espectro, menos amplio # corto siendo adems* a9 >acteriostticos!) re$ersible b9 >actericida !) =rre$ersible

ACCION DE LOS ANTIBI9TICOS SOBRE LAS BACTERIAS EN GENERAL a9 3obre coco # >acilos Fram! 8O9 # 8)9 AMP"=A E3PECC5A! Fentamicina, 3ul ametoxsa(ol, trimietoprin 8>actrin9, Cipro loxacina, Ce otaxima, Cioran encol, tetracclinas! b9 3obre cocos # bacilos Fram! 8O9 ME&A3 E3PECC5A! Penicilinas, Dancomicina, Eritromicna, la Ce alotina, &itro urantoina, etc!

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e9 3obre >acilos Fram! 8)9 CA5CA E3PECC5A!) Ampicilina, Cloran enicol, Ce alotina, ms otras ce alosporinas, Polimixina > # E! MECANISMO DE ACCI9N.? Para actuar debe llegar al oco in eccioso =ngresar al interior de la bacteria Alcan(ar una concentraci%n intracelular!

En el aspecto molecular act4an* ,9 =nhibiendo la pared celular 29 Alteran la membrana Citoplasmtica .9 =nhiben la sntesis proteica 49 >loqueo de la sntesis de los cidos nucleicos!

FUNDAMENTO.? El antibiograma por el m0todo de di usi%n en agar es una prueba en la que se en renta la bacteria inoculada sobre la super icie del medio de agar a una soluci%n antibi%tica absorbida en discos de papel iltro! Darios actores a ectan el halo de inhibici%n* ) "a carga de antibi%tico en los discos ) "a di usi%n del antibi%tico en el medio de culti$o ) "a cantidad del in%culo bacteriano ) "a composici%n o grosor del medio de culti$o debe ser de 4 a 2 ) El tiempo de incubaci%n ! 3e usa normalmente el medio de M4ller)Ninton porque permite el crecimiento de casi toda clase de bacterias # sin C02, El in%culo bacteriano debe tener una turbide( similar al estndar de Mc)Earland! "a inoculaci%n se puede e ectuar con hisopo de algod%n est0ril, la placa se debe incubar a .?+C en aerobiosis por el lapso de ,J a 24 hrs! 3i el tiempo es ms prolongado puede dar lecturas err%neas del tama/o del halo! El tratamiento antimicrobiano es uno de los pilares undamentales para combatir las en ermedades in ecciosas! "a elecci%n de un determinado agente est condicionada por una serie de actores entre los que destacan* ) ) ) Conocimiento de la sensibilidad del microorganismo in ectante! Propiedades Earmacol%gicas Eactores relacionados con el paciente 8Patologa de base, inmunidad!!!9

"os dos 4ltimos puntos son ms dirigidos a la parte clnica siendo el medico quien tenga que reali(ar la elecci%n de un determinado medicamento! MATERIAL.?

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S Cepa >acteriana S Placas de agar de M4ller)Ninton S 3oluci%n salina est0ril S @n estndar de Mc!Earland S <iscos comerciales de antibi%ticos S Nisopos est0riles S Pin(as de laboratorio S Asa de platino S Estu a de incubaci%n a .?+C S 5egla! PROCEDIMIENTO.? ,!) Preparar el culti$o de 24 hrs! anteriormente sembrado # anali(ado con un Fram! El tipo de bacteria! 2!) =nocular . o 4 colonias de las >acterias en 1 ml!! de soluci%n salina est0ril hasta una turbide( equi$alente a la de Mc!Earland

$!# @tili(ando un hisopo de algod%n, sumergirlo en el in%culo # eliminar el exceso

presionndolo sobre la pared interna del tubo que lo contiene!

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4!) =nocular la super icie de una placa de agar de MXller)Ninton con el hisopo pasndolo uni ormemente por toda la super icie en tres direcciones! Por 4ltimo pasar el hisopo por el reborde de la placa de agar de'ar secar unos minutos!

%!# Colocar los discos de antibi%ticos sobre la super icie del agar utili(ando unas pin(as
est0riles # apretndolos sua$emente sobre la super icie del agar! "os discos no deben estar a menos de ,1 mm de los bordes de la placa # lo bastante separados entre ellos para que no se superpongan las (onas de inhibici%n!

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&!) =ncubar la placa en posici%n in$ertida a .?+C durante ,J a 24 hrs!

?!) Medir los dimetros de la (ona de inhibici%n con una regla!

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INTERPRETACI9N.? "os dimetros de los halos de inhibici%n se traducen a las categoras de 859, =ntermedio 8=9 # 3ensible 839 de acuerdo a los criterios interpretati$os de la tabla! <imetro del Nalo de inhibici%n 5 , Y ,4 Y ,2 Y ,4 Y ,4 Y ,4 Y ,. Y ,2 Y ,0 Y ,0 YK ,1),2 ,.),? ,1),? ,1),2 ,4),? ,.),4 ,,),2 ,,),1 ,0),,

Agente antimicrobiano Ampicilina Cloran enicol Ce alotina Cipro loxacina, Ce otaxma Eritromicina Fentamicina Penicilina 3u atrimetroprin Dancomicina

3 Z ,? Z ,J Z ,J Z ,? Z 2. Z ,J Z ,1 Z ,. Z ,2 Z ,2

CONCLUSI9N.? Podemos concluir indicando que la prctica ha cumplido con los ob'eti$os propuestos!

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EBERCICIOS DE EVALUACI9N LA'.i%io"ra0aM <.? CF(G o%>!.i$o .i!'!' ! a'.i%io"ra0aD RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT 5.? CPor A(G !# i0:or.a'.! r!a i+ar #i!0:r! (' a'.i%io"ra0a d! dar (' .ra.a0i!'.o =ar0aco &"icoD R!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! E.? CC() !# #o' a# :ri'ci:a !# ca(#a# d! !rror !' a# .i'cio'!# 2 :or A(! #! d!%! .!'!r 0(c*o c(idado !' 'o co0!.!r !rror!#D RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT 7.? CC() !# #o' a# 7 (.i idad!# :ri'ci:a !# d! a'.i%io"ra0aD RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT! TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT!!!!!!!!! @.? CF(G 0!dica0!'.o# .i!'! acci&' #o%r! o# "ra0 '!"a.i$o#D RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT J.? CF(G 0!dica0!'.o# .i!'! acci&' #o%r! o# "ra0 :o#i.i$o#D RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT

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N.? CF(G co'dicio'!# i0:or.a'.!# d!%! .!'!r (' a'.i%i&.icoD RTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT U.? CF(G 0!dica0!'.o# !# d! a0: io !#:!c.roD a9 b9 c9 d9 e9 Cloran enicol Penicilina Ampicilina Fentamicina Cloran enicol

V.? CPor A(G #! d!%! .!'!r 0(c*a a#!:#ia !' ! :roc!di0i!'.o d! #i!0%ra 2 a co ocaci&' d! di#co# 2 a A(! di#.a'cia d!%!' !#.ar o# di#co#D R TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT <6.? CC&0o #! 0id! ! di)0!.ro d! (' *a o 2 :orA(! .i!'! A(! 0!dir#! a'.!# d! 7U *r#.D R TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT! TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT!!!!

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