7/22/2011

Introduo ao Microambiente Tumoral

Rede de interao entre clulas

Paulo Roberto Del Valle

Orientadora: Prof Maria Aparecida Azevedo Koike Folgueira Ttulo da Dissertao: Perfil Transcricional de fibroblastos de tumor primrio, linfonodo e medula ssea de pacientes com cncer de mama

Por qu?

Apesar do grande nmero de clulas no corpo humano (10 trilhes), e do grande contato com carcingenos, a maioria das pessoas vivem vidas livres de tumores por dcadas
Bissel e Hines 2011

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Por qu?
Como explicar, no caso de cncer de mama e BRCA1 mutado, os tumores no so apenas tecidoespecficos, mas originados de apenas uma ou poucas clulas desse tecido?

Bissel e Hines 2011

Por qu?

Exame de prstatas de homens que morreram com doena no correlata

34% com neoplasia intraepitelial prosttica aos 40 anos

Sark et al, 1993

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Por qu?
Apesar de muitos portarem clulas potencialmente malignas, por que no conhecemos mais pessoas com cncer?
Bissel e Hines 2011

Da transformao (iniciao) ao crescimento (promoo)

Longo caminho
Ausncia de sinais ambientais que favorecem a progresso
Citocinas Hormnios

Vigilncia imunolgica

Fatores de crescimento

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Da transformao (iniciao) ao crescimento (promoo)

Semente Semente e e solo solo
Paget, 1889

A lgica dos tecidos

Todos os tecidos possuem necessidades e caractersticas:
Renovao de populao celular

Nutrio e oxigenao

HOMEOSTASE

Cicatrizao

Eliminao de metablitos

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Foras supressoras
Arquitetura tecidual

MEC tecido-especfica Clulas mioepiteliais Macrfagos teciduais Inibidores de MMP Metabolismo normal Antioxidantes Fibroblastos

Adaptado de Bissel e Hines 2011

Microambiente

Tumorignese
Adaptado de Bissel e Hines 2011

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Foras promocionais

Bissel e Hines 2011

a. Epitlio normal Estroma quiescente

b. Displasia pr-maligna Estroma ativado

c. Carcinoma Estroma reativo ao tumor

Adaptado de Mueller e Fusenig 2004

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As populaes das clulas tumorais

As populaes das clulas tumorais

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Diversidade das populaes tumorais

Diferentes graus de diferenciao Instabilidade Genmica Renovao da populao tumoral

Hiperproliferao

Clulas filhas Distintas

Invasividade

Eventos epigenticos
Resistncia quimioterapia

Agressividade tumoral

Sinalizao Proliferativa Sustentvel

Resistncia a morte celular

Escape de supressores de crescimento

Induo de angiognese

Invaso e metstase

Imortalidade replicativa

Adaptado de Hanahan e Weinberg 2011

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Diversidade das populaes tumorais

Clulas Tronco Tumorais Clulas Dormentes Clulas invasivas Clulas proliferativas Clulas Circulantes

Clulas em Hipxia Clulas em Apoptose

Clulas Metastticas

Clulas diferenciadas Clulas em Necrose Clulas resistentes quimioterapia

Diversidade das populaes tumorais

Clulas Tronco Tumorais Clulas invasivas Clulas proliferativas Clulas Dormentes Transio epitliomesnquima Clulas Circulantes

Clulas em Hipxia Clulas em Apoptose

Clulas Metastticas

Clulas diferenciadas Clulas em Necrose Clulas resistentes quimioterapia

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Clulas tronco tumorais Cancer Stem Cell (CSC)

Presente em muitos tipos de tumores Habilidade de formar novos tumores em camundongos CSC Marcadores comuns s clulas tronco do tecido normal

Auto-renovao

Geram clulas diferenciadas a grande massa tumoral

Clulas tronco tumorais Cancer Stem Cell (CSC)

CSC

mCSC

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Transio epitlio-mesnquima (EMT)

Clulas epiteliais adquirem caractersticas de clulas mesenquimais (estroma)

Processo fisiolgico: embriognese e cicatrizao

Clulas epiteliais tumorais (90% tumores): Migrao/Invaso Resistncia a apoptose Disseminao

Clulas metastticas adquirem caratersticas EMT

Clulas epiteliais no tumor primrio so firmemente unidas

Clulas metastticas viajam pela corrente sangunea Clulas metastticas saem da circulao e invadem um novo rgo

Leford 2011

Clulas perdem caractersticas mesenquimais e formam um novo tumor

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EMT: Clulas com capacidade de invaso

Perda de expresso de Citoqueratina;
Represso direta de E-caderina; Expresso de proteases de matriz;

Fatores de transcrio: Snail, Slug, Twist, Zeb1/2:

Perda de Junes aderentes

Mudana de morfologia

O que ativa EMT?

Thiery et al 2009

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Componentes do tumor
Clula Tronco Tumoral

Fibroblastos associados ao tumor

Clula Tumoral

Clula Endotelial Clulas inflamatrias do sistema imune

Pericito

Clulas tronco e clulas progenitoras locais e derivadas da medula ssea Clulas invasiva
Adaptado de Hanahan e Weinberg 2011

a. Mama Normal

b. Cncer de Mama

Seta: Ducto mamrio Asterisco: Tecido adiposo

Asterisco: Colgeno associado a fibroblastos Cabea de setas: Capilares e vasos sanguneos Setas verdes: Estruturas glandulares aberrantes Seta preta: Cordo de clulas tumorais
Adaptado de Bhowmick et al 2004

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Interao Epitlio Estroma: Fibroblastos

Principal constituinte do estroma

Citoesqueleto composto por: Vimentina Desmina Alfa-actina de msculo liso Protenas associadas a filamentos intermedirios

Clulas no vasculares
No epiteliais No inflamatrias Morfologia fusiforme

Fibroblastos - Funes

Remodelamento Manuteno da matriz extracelular Cicatrizao

Produo de protenas de adeso: beta1-integrina Produo de protenas de contrao: alfa-actina de msculo liso Fatores solveis

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Fatores solveis
HGF IGF-1 IGF-2 EGF TGF-a TGF-b1 TGF-b2 TGF-b3 FGF7 KGF FGF2 FGF10 NGF LIF CXCL12 IL6 MSP Wnt1 Wnt3 MMP-1 MMP7

Fibroblastos

Clulas Epiteliais

Morfognese

Proliferao

Transformao

Inibio de apoptose

Fatores solveis
HGF IGF-1 IGF-2 EGF TGF-a TGF-b1 TGF-b2 TGF-b3 FGF7 KGF FGF2 FGF10 NGF LIF CXCL12 IL6 MSP Wnt1 Wnt3 MMP-1 MMP7

Fibroblastos

Clulas Epiteliais

Morfognese

Proliferao

Transformao

Inibio de apoptose

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Fatores solveis
HGF IGF-1 IGF-2 EGF TGF-a TGF-b1 TGF-b2 TGF-b3 FGF7 KGF FGF2 FGF10 NGF LIF CXCL12 IL6 MSP Wnt1 Wnt3 MMP-1 MMP7

Fibroblastos

Clulas Epiteliais

Morfognese

Proliferao

Transformao

Inibio de apoptose

Fatores solveis
HGF IGF-1 IGF-2 EGF TGF-a TGF-b1 TGF-b2 TGF-b3 FGF7 KGF FGF2 FGF10 NGF LIF CXCL12 IL6 MSP Wnt1 Wnt3 MMP-1 MMP7

Fibroblastos

Clulas Epiteliais

Matriz Extracelular Inibio de apoptose

Morfognese

Proliferao

Transformao

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Mas o que acontece no cncer? Mas o que acontece no cncer?

Fibroblasto Fibroblasto Ativado Miofibroblasto

Injria tecidual Clulas tumorais

Adaptado de Kalluri e Zeisberg 2006

Mas o que acontece no cncer? Mas o que acontece no cncer?

Fibroblasto Fibroblasto Ativado Miofibroblasto

Injria tecidual Clulas tumorais

No clula maligna No sarcoma

Adaptado de Kalluri e Zeisberg 2006

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Fibroblastos associados ao tumor

Carcinoma Invasivo Clulas Epiteliais

Clulas endoteliais
Fibroblastos Ativados

Clulas inflamatrias

Pericitos
Adaptado de Kalluri e Zeisberg 2006

Modelo de estudo Co-cultura Co-cultura de Fibroblastos

Modelo de estudo da interao epitlio mesnquima no cncer

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Fibroblastos estimulam a proliferao de clulas de cncer de mama

Santos et al 2011

Fibroblastos modulam o perfil transcricional de clulas de cncer de mama

Santos et al 2011

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Fibroblastos modulam o perfil transcricional de clulas de cncer de mama

Spint2 (HAI-2)

Migrao
Adaptado de Liang et al 2005

Fibroblastos modulam o perfil transcricional de clulas de cncer de mama

Santos et al 2011

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Fibroblastos modulam a migrao de clulas de cncer de mama

Santos et al 2011

Fibroblastos modulam a migrao de clulas de cncer de mama

0h 24 h

Clula Tumoral isolada

Clula Tumoral em co-cultura com fibroblastos de linfonodo comprometido

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Componentes do tumor
Clula Tronco Tumoral

Fibroblastos associados ao tumor

Clula Tumoral

Clula Endotelial Clulas inflamatrias do sistema imune

Pericito

Clulas tronco e clulas progenitoras locais e derivadas da medula ssea Clulas invasiva
Adaptado de Hanahan e Weinberg 2011

Angiognese
Angiognese fisiolgica Iniciao Resoluo

Estmulo angiognico Hipxia

Perfuso estabelecida

Adaptado de Chung et al 2010

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Angiognese patolgica (oncogene-induzida)

Iniciao Falha na Resoluo

Adaptado de Chung et al 2010

Angiognese: A funo dos pericitos

Vaso maduro e quiescente

Estabilizao do vaso e maturao

Desestabilizao do vaso

Pericitos e a angiognese tumoral

Crescimento de novo vaso

Adaptado de Raza et al 2010

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Angiognese patolgica: Desequilbrio de fatores

Inibidores: Trombospondina-1 As estatinas: Angiostatina Endostatina Canestatina Tumestatina Ativadores: VEGFs FGFs PDGFB EGF LPA

Adaptado de Berges e Benjamin 2003

Angiognese patolgica: Arquitetura anormal dos vasos

Adaptado de Ellis e Hicklin 2008

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Componentes do tumor
Clula Tronco Tumoral

Fibroblastos associados ao tumor

Clula Tumoral

Clula Endotelial Clulas inflamatrias do sistema imune

Pericito

Clulas tronco e clulas progenitoras locais e derivadas da medula ssea Clulas invasiva
Adaptado de Hanahan e Weinberg 2011

A ferida que nunca cura

Adaptado de Schfer e Werner 2008

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A ferida que nunca cura

Adaptado de Schfer e Werner 2008

A ferida que nunca cura

Adaptado de Schfer e Werner 2008

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Adaptado de Schfer e Werner 2008

Atrativos do sistema imune

Balkwill 2008

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Progresso neoplsica
Iniciao

Citocinas pr inflamatrias
Migrao de clulas dendrticas e apresentao de antgenos
Resposta imune inata Protenas do soro

Promoo tumoral Pr-crescimento Expanso tecidual Converso maligna Inibio de morte Instabilidade genmica Ativao de fibroblastos Metabolismo de matriz Angiognese

rgos linfoides secundrios e resposta imune adaptativa

Ao Anti-tumoral Citotoxicidade mediada por clulas T (FAS perforina ou vias de citocinas) Citotoxicidade mediada por anticorpos Lise mediada por complemento

Adaptado de Visser et al 2006

Anti-tumoral Pr-tumoral

CARCINOGNESE

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O Microambiente metasttico

Microambiente do tumor primrio

Microambiente do tumor invasivo

Microambiente da metstase

Adaptado de Hanahan e Weinberg 2011

O Microambiente metasttico
Tumor Primrio

Invaso Extravasamento

Estroma Reativo Colonizao Mestasttica

Dormncia

Adaptado de Hanahan e Weinberg 2011

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O Microambiente metasttico
S100 quimiocinas Lisil oxidase Fibroblastos ativados Fibronectina estromal Clulas progenitoras mieloides VEGFR1+ Integrinas Clulas tumorais metastticas Fatores de crescimento Metaloproteinases de matriz Clulas progenitoras endoteliais Fatores de crescimento angiognicos Cluas mielides associadas ao tumor Clulas estromais: fibroblastos
Adaptado de Hanahan e Weinberg 2011

Pr-metasttico

Micrometasttico

Macrometasttico

O Microambiente metasttico

Parnquima

Clulas de cncer Incipientes (& CSC)

Clulas de cncer (& CSC)

Clulas de cncer Invasivas (& CSC)

Clulas de cncer (& CSC) na micrometstase

Clulas de cncer invasivas (& CSC) da macro-metstase

2 onda de metstase

Estroma

Estroma nos tecidos e medula ssea

Estroma nascente do tumor primrio

Estroma de suporte do tumor primrio

Estroma normal +/nicho permissivo

Estroma nascente da metstase

Estroma de suporte da metstase

Tumorignese primria

Metstase

Adaptado de Hanahan e Weinberg 2011

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Microambiente: Uma rede de interaes

Hanahan e Weinberg 2011

Microambiente: Uma rede de interaes

Obrigado!

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