CUENTA DE PLAQUETAS CON CMARA DE NEUBAUER

OBJETIVO Realizar e interpretar la tcnica para la cuenta de trombocitos o plaquetas en la cmara de Neubauer. FUNDAMENTO Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemosttico del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 , de bordes irregulares, pero pueden tener forma esfrica u ovalada, carecen de ncleo y son muy frgiles. Provienen de una clula gigante que mide de entre 50-100 de dimetro llamada megacariocito. Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los mecanismos de la hemostasia (Hemos=sangre, stasis=detencin) adhirindose entre ellas y a las paredes de los vasos sanguneos lesionados, para formar as el trombo plaquetario o tapn hemosttico. El lquido diluyente puede ser una solucin estril de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo (85 milimolar) y cloruro de sodio (31 milimolar). Este lquido se provee listo para usar y su conservacin es indefinida en refrigerador (2 - 10 C) o puede ser tambin oxalato de amonio al 1%. El fundamento del mtodo consiste en la produccin de hemlisis por la utilizacin de un lquido hipotnico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas y sin agrumar por la presencia de paminobenzoato de dietilaminoetilo. MATERIAL Pipeta de Thoma para glbulos rojos (perla roja) Equipo para venopuncion (Tubo lila) Boquilla roja Tubo de goma Tubos de ensayo Papel parafilm Cmara de Neubauer Cubrehematimetro Microscopio Gasas Caja de Petri Papel filtro SUSTANCIAS Alcohol al 70% Sangre venosa Diluyente de plaquetas PROCEDIMIENTO 1. Obtener 10 ml de sangre venosa, en un tubo con anticoagulante EDTA 2. Agitar la sangre de manera suave en el tubo para mezclarla con el anticoagulante

3. Llevar la sangre hasta la marca 1.0 de la pipeta de Thoma. Limpiar la punta con una gasa

4. Aforar con liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 101 de la pipeta (Dilucin 1:100) 5. Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto

6. Colocar la Cmara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el cubrehematmetro sobre las mesetas 7. Descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la cmara, depositndola entre la meseta y el cubrehematmetro y dejarla difundir por capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen burbujas o se derrame el lquido hacia los surcos

8. Colocar la cmara de Neubauer ya cargada en el interior de una caja de Petri, con papel filtro humedecido en agua para evitar la evaporacin, dejar en reposo de 10 a 15 minutos

9. Observar al microscopio contando en la cuadricula central (para glbulos rojos) las plaquetas que aparecen mucho ms pequeas que los hemates, redondas, alargadas u ovales, altamente refringentes 10. El cuadro central de la cuadricula mide 1.0 mm por lado y est dividido en 16 cuadritos ms pequeos, de tal manera que el nmero total de estos ltimos es de 400, mismos en los que se lleva a cabo el recuento de plaquetas. OBSERVACIONES

Cmara de Neubauer, 10x Enfocando la cuadricula central se aprecian los 25 cuadros centrales, con una gran cantidad de plaquetas en ellos. Se pueden distinguir solo algunos eritrocitos, mucho mayores que las plaquetas, que desprenden gran brillo

Cmara de Neubauer, 40x Uno de los cuadros centrales, lleno de plaquetas, de forma redonda la mayora u ovalada.

RESULTADOS Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos, se expresan como concentraciones, que en este caso seran nmero de clulas por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3 Despus de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el nmero obtenido se multiplica por el factor de dilucin de la siguiente manera: N de plaquetas x mm3 = No. De plaquetas contadas X dilucin X 10 Dilucin: 1:100 Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm3 ya que el volumen de la cmara es de 0.1 mm3 El nmero de plaquetas fue de 535, por lo que al realizar los clculos quedaron as: No. de plaquetas = 535 X 100 X 10= 535 000 plaquetas por mm3, lo que indica un ndice elevado de plaquetas. VALORES DE REFERENCIA (Millones de clulas/mm3) Hombres y Mujeres:..150 000 - 450 000 CONCLUSIN El recuento de plaquetas es de suma importancia y es parte del recuento celular de la sangre como prueba de rutina. El paciente con un trastorno hemorrgico, clnicamente significativo, acude al mdico con algunos tipos de sntomas hemorrgicos, con lo que se puede indicar la parte

defectuosa del mecanismo de coagulacin, y dentro de estas causas pueden estar la cantidad inadecuada de plaquetas. La hemorragia de vasos sanguneos subcutneos en piel intacta se puede ver como petequias o equimosis. Cuando se encuentran equimosis en gran cantidad y sin traumatismo aparente, el trastorno se conoce como Ditesis Hemorrgica y puede ser producida por anormalidades en los vasos sanguneos, por la disminucin en el nmero de plaquetas o por el mal funcionamiento.

La disminucin de plaquetas se denomina Trombopenia o prpura trombocitopnica y se debe a lo siguiente:

Enfermedades autoinmunitarias (el organismo produce anticuerpos contra sus propias plaquetas) Aplasia medular Radioterapia y quimioterapia por cncer Leucemia aguda Coagulacin intravascular diseminada Anemia hemoltica microangioptica Hiperesplenismo Prpura trombocitopnica idioptica Prtesis de vlvula coronaria Transfusin de sangre Choque anafilctico Algunas infecciones vricas Algunos frmacos Y el aumento se denomina trombocitosis:

Anemia por dficit de hierro

Traumatismos Tumores Trombocitosis esencial Policitemia vera Leucemia mieloide crnica Tras esplenectoma Enfermedad de Kawasaki