Revista de Cincias Farmacuticas Bsica e Aplicada

Journal of Basic and Applied Pharmaceutical Sciences

Rev. Cinc. Farm. Bsica Apl., vol. 29, n.1, p. 17-28, 2008 ISSN 1808-4532

Caracterizao de biotrios, legislao e padres de biossegurana

Politi, F.A.S.1; Majerowicz, J.2; Cardoso, T.A.O.3; Pietro, R.C.L.R.1; Salgado, H.R.N.1*
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Departamento de Frmacos e Medicamentos, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, Araraquara, So Paulo, Brasil. 2 Centro de Criao de Animais de Laboratrio, Fundao Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil. 3 Ncleo de Biossegurana, Escola Nacional de Sade Pblica, Fundao Oswaldo Cruz Rio de Janeiro, Brasil. Recebido 03/06/2008 Aceito 18/07/2008

RESUMO O emprego de animais de laboratrio, em conjunto com estudos realizados em humanos, fornece uma base para a compreenso de vrios processos fisiolgicos e patolgicos importantes. Alm disso, os resultados de estudos experimentais asseguram uma melhor compreenso e segurana para o desenvolvimento de tcnicas cirrgicas na clnica mdica. Por se tratar de material biolgico vivo, devemos garantir sua integridade fsica, levando-se em considerao a gentica, a nutrio, as contaminaes microbiolgicas e a correta manipulao, a fim de se evitar que ocorram concluses invlidas nos experimentos ou que se aumente desnecessariamente o nmero de animais utilizados. Em paralelo s preocupaes e legislaes sobre o uso de animais de laboratrio, desenvolveu-se tambm a preocupao com o bem estar e a segurana das pessoas que manuseiam os animais de laboratrio, uma vez que estas correm riscos de adquirirem doenas ocupacionais pela presena de contaminaes zoonticas ou por desenvolvimento de reaes alrgicas. A preveno requer a aplicao de modernos avanos tecnolgicos no desenho do biotrio e nas rotinas de trabalho. Infelizmente poucos estabelecimentos do pas apresentam recursos humanos com formao apropriada e infra-estrutura bsica de pesquisa que inclua os centros de criao de animais de laboratrio, equivalentes queles existentes nos Estados Unidos e Europa. Palavras-chave: Animais de laboratrio. Legislaes. Biotrio. Segurana. BREVE HISTRICO H sculos os animais so utilizados pelo homem, seja na alimentao, na fora fsica ou em consrcio com a cincia na busca por avanos na rea de sade. Neste sentido, a melhoria e a padronizao das condies de manuteno e de experimentao tornam-se fatores imprescindveis para o controle dos resultados e o avano das tcnicas empregadas. Neste artigo realizada uma reviso sobre biotrios, dando nfase caracterizao, legislao e aos critrios de biossegurana, com o intuito
*Autor correspondente: Profa. Dra. Hrida Regina Nunes Salgado Departamento de Frmacos e Medicamentos, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade Estadual Paulista, UNESP - Rodovia Araraquara/Ja - km 1 - CEP.14801-902 Araraquara SP telefone: (16) 33016967 Fax: (16) 33220073 - e-mail: salgadoh@fcfar.unesp.br

de orientar os profissionais e alunos que atuam nesta rea e destacar a importncia dos cuidados com os animais. Os trabalhos cientficos na rea biolgica do conhecimento contribuem de forma inquestionvel para o bem estar tanto do homem quanto dos animais. Porm, as informaes necessrias para o avano de determinadas pesquisas no podem ser obtidas somente pela observao e pelo registro daquilo que ocorre e, por isso, a experimentao cientfica faz-se necessria para que o conhecimento perpetue-se. O uso de animais para estudos cientficos uma prtica comum, h muito tempo utilizado, e para que seja aceitvel, necessrio buscar uma postura tica em todos os momentos do desenvolvimento das pesquisas (Paiva et al., 2005). Atualmente, apesar de todos os esforos da comunidade cientfica a fim de reduzir e substituir a utilizao de animais de laboratrio na experimentao biolgica, ainda no foi possvel abandonar o uso deles na avaliao da farmacocintica e seguridade dos mais diferentes produtos (CCAC, 1993; FELASA, 1999; CPCSEA, 2003; Marona & Lucchesi, 2004). Assim sendo, a preocupao com o bem-estar animal encorajou experimentos, inclusive por nosso grupo de estudos, com a inteno de melhorar as condies de manuseio, objetivando a melhor padronizao de parmetros necessrios para a realizao dos ensaios biolgicos (Marona & Lucchesi, 2003; Marona & Lucchesi, 2004; Chorilli et al., 2007). Marona & Lucchesi (2003) descreveram a adaptao da tcnica clssica para a determinao da motilidade intestinal, diminuindo o tempo de jejum a que os animais so submetidos, objetivando assim a minimizao do estresse do animal. Os mesmos autores desenvolveram, em 2004, um novo ensaio de trnsito intestinal em camundongos, no qual no h a necessidade de sacrificar os camundongos para a avaliao da motilidade intestinal dos produtos analisados. Chorilli et al. (2007) realizaram o compilamento bibliogrfico sobre o emprego de camundongos na experimentao animal, abordando sua biologia geral, fisiologia de reproduo, sistemas de criao, gentica, habitao, alimentao, manejo, dor e eutansia, tcnicas de risco desenvolvidas na experimentao, coleta de sangue, experimentos farmacolgicos e toxicolgicos. Embora tendncias atuais preconizem a utilizao de mtodos alternativos (estudos in vitro, culturas de clulas, etc.), os

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modelos animais, como os camundongos, apresentam como principal vantagem o fornecimento de informaes sobre o organismo como um todo, fato que no conseguido com outras tcnicas, o que ainda possibilita o seu emprego em pesquisas cientficas. No sculo XVI, na Inglaterra, Francis Bacon fez uma reflexo sobre a experimentao animal, onde afirma que o avano da cincia se faz atravs de suas observaes, na sua obra intitulada Proficience and Advancement of Learning Divine and Human, publicada em 1605 (Davilla et al., 2008). A partir da publicao e divulgao das idias contidas no livro A Origem das Espcies de Charles Darwin, em 1859, estabeleceram-se os pressupostos da relao existente entre as diferentes espcies animais em um nico processo evolutivo. Com isto, comearam a serem encorajadas as extrapolaes dos dados obtidos em pesquisas com modelos animais para seres humanos (Paiva et al., 2005). Durante muitos anos as pesquisas que utilizam modelos animais sofreram poucos questionamentos, devido, sobretudo, ao seu impacto na sociedade, trazendo melhorias e benefcios sade pblica tais como as vacinas contra raiva, ttano e difteria, alm dos interesses econmicos defendidos pelas poderosas indstrias farmacuticas. Por outro lado, nesta mesma poca surgiram inmeras sociedades de proteo aos animais (Paiva et al., 2005). Em 1959, a publicao do livro Principles of Human Experimental Technique, pelos bilogos William M. S. Russell e Rex L. Burch exps uma nova alternativa na utilizao de animais para experimentao. Os autores estabeleceram o conceito dos trs Rs: Replace (substituir), Reduce (reduzir) e Refine (refinar). Segundo os autores, tal proposta no impediria a utilizao de modelos animais em experimentao, mas realizaria uma adequao no intuito de humaniz-la (Paiva et al., 2005). Em 1975, com a publicao do livro Animal Liberation, escrito pelo professor australiano Peter Singer, houve o ressurgimento da discusso sobre a utilizao de animais em pesquisas e em outras atividades, causando muita polmica, sobretudo por descrever as condies as quais os animais eram submetidos pela indstria de cosmticos e pelos criadores rurais (Paiva et al., 2005). No dia 27 de janeiro de 1978 a Assemblia da UNESCO, realizada em Bruxelas na Blgica, influenciada pela grande repercusso gerada pelo livro do professor Singer, proclamou a Declarao Universal dos Direitos dos Animais (Schnaider & Souza, 2003). No Brasil, a primeira manifestao legal sobre o bem estar dos animais foi o Decreto Federal n 24.645, de 1934, que estabelecia penas que variavam de multas a prises para aqueles que praticassem atos de abuso ou crueldade, seja em pesquisas ou apenas no trato cotidiano dos animais (Brasil, 1934). Em 1979, a Lei Federal n 6.638 promulgada, estabelecendo normas para a prtica didticocientfica de vivissecao de animais, porm, como no foi regulamentada, no pde ser aplicada (Brasil, 1979). Em 1991, o ento Colgio Brasileiro de Experimentao Animal (COBEA), atual Sociedade Brasileira de Cincia de Animais de Laboratrio (SBCAL), filiado ao International Council for Laboratory Animal Science (ICLAS), visando suprir a ausncia de uma lei que protegesse os profissionais

envolvidos com esta prtica e regulamentasse o uso de animais em experimentos, elaborou 12 artigos intitulados Princpios ticos na Experimentao Animal (COBEA, 1991). Em 1998, entrou em vigor a Lei de Crimes Ambientais (Lei n 9.605), devidamente regulamentada pelo Decreto n 3.179, de 1999, a qual adotou, parcialmente, as noes contidas no conceito dos trs Rs (Brasil, 1998). Atualmente, aps tramitar por 13 anos, foi aprovada a Lei n 11.794, em 8/10/2008, regulamentada pelo Decreto n 6.899, em 15/7/2009, estabelecendo a implantao do CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentao Animal, das CEUAS - Comisses de tica no Uso de Animais, alm dos procedimentos e as responsabilidades para uso de animais de laboratrio (Brasil, 2008; Brasil, 2009). Desde 1995 pode-se dizer que o Brasil efetivamente atua na rea de pesquisas e desenvolvimento biotecnolgico de Organismos Geneticamente Modificados, ou simplesmente, transgnicos (Oda, 2001). As instituies produtoras de imunobiolgicos e frmacos carecem de uma grande quantidade de animais saudveis e com constituio gentica definida, para serem utilizados no controle de qualidade, pois o produto final, por exigncias farmacopeicas e de manuais da Organizao Mundial da Sade deve ser testado in vivo (Silva et al., 2003). Alm das grandes indstrias, universidades e outros centros de pesquisa tambm requerem animais de boa procedncia para a conduo de seus experimentos. Para suprir esses centros de pesquisa, surgiram os biotrios, que so definidos como reas destinadas criao e manuteno de animais de laboratrio em condies sanitrias, dentro de padres rigorosamente estabelecidos, respeitando as normas ticas e as leis de manipulao e vivisseco (Cardoso, 2001). Podem-se separar os biotrios segundo a finalidade a que se destinam. Os biotrios de criao so aqueles onde so produzidas e mantidas as matrizes das linhagens, com controle rigoroso da sade dos animais e esquemas especiais de cruzamentos para manuteno das caractersticas genticas, assegurando os padres de qualidade. Os biotrios de produo so aqueles onde se criam grandes quantidades de animais para atender s pesquisas, recebendo matrizes dos biotrios de criao e, por fim, os biotrios de experimentao que se destinam a receber os animais dos biotrios de produo para utilizlos na experimentao, funcionando como infectrio (Cardoso, 2001). CARACTERIZAO GENTICA DOS ANIMAIS A disponibilidade de animais de laboratrio por si s no garante que a pesquisa ao qual sero utilizados seja realizada com sucesso. preciso atentar que certas caractersticas biolgicas so imprescindveis para que os animais desempenhem suas funes eficazmente. Os animais produzidos com a finalidade de serem utilizados em trabalhos cientficos devem possuir caractersticas genticas e sanitrias avaliadas regularmente, visando assegurar padres pr-estabelecidos (Majerowicz, 2005). De acordo com a caracterizao gentica dos animais, existem dois tipos de linhagens: inbred e outbred. As criaes chamadas de outbred so caracterizadas como linhagens geneticamente heterozigotas para muitos dos pares allicos, sendo mantidas em sistema de cruzamentos

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aleatrios. Por outro lado, as criaes chamadas de inbred, so obtidas por acasalamentos entre irmos por mais de 20 geraes, sendo homozigotas para quase todos os pares allicos (Jonas, 1976; Festing, 1993; Majerowicz, 2005). Segundo Afif e Rosenkranz (1990), 98,6% o mnimo de homozigose entre pares de genes allicos, requerido para linhagens distintas sejam consideradas consanguneas. Para o uso de animais em biotrios de criao devem ser consideradas as caractersticas genticas, que so de grande importncia no que se refere seleo e ao manejo dos animais utilizados em pesquisas na rea da sade. Vrios tipos de avaliaes podem ser feitos para monitorar e controlar este tipo de variabilidade, tais como simulaes computadorizadas, marcadores bioqumicos, imunolgicos e de DNA, ou anlises genticas quantitativas (NRC, 2003; Majerowicz, 2005). Outro aspecto importante est relacionado confiana e reprodutibilidade de dados obtidos com linhagens de animais de experimentao, as quais, sendo padronizadas, possibilitam-nos simular in vivo as interaes entre rgos e sistemas, reagindo a um determinado tipo de tratamento qumico ou biolgico, favorecendo a compreenso de eventos relacionados ao desenvolvimento de determinada doena. Porm, experimentos realizados com animais contaminados trazem um vis, comprometendo a exatido dos resultados, dificultando sua interpretao ou fornecendo falsos positivos, tornando o animal inadequado como modelo experimental (Passos, 2003). CARACTERIZAO SANITRIA A preocupao com as medidas de higiene e combate de patgenos no trato com animais de experimentao nem sempre foi prioridade. At a dcada de 1960, pouca importncia era dada ao controle de doenas para evitar a contaminao dos animais. Na verdade, havia um desconhecimento da ocorrncia natural de doenas em roedores que podiam interferir no resultado das pesquisas. O elevado ndice de mortalidade de cobaias de laboratrio por doenas que ocorriam naturalmente durante os procedimentos experimentais era visto como parte inerente do processo cientfico. Porm, a partir dos anos 60, foram estabelecidas algumas tcnicas para melhor controlar as condies sanitrias, destacando-se o uso da tcnica de cesrea assptica como um meio de repor estoques de animais infectados com filhotes no-infectados, eliminandose, a transmisso vertical (Baker, 1998; Majerowicz, 2005). A partir dos anos 80, houve uma reduo significativa da incidncia de patgenos em animais de experimentao. Com a utilizao de testes sorolgicos de anticorpos especficos, foi possvel determinar os animais contaminados e evitar que cruzassem com animais sadios, padronizando as linhagens (Baker, 1998). Atualmente, os critrios na pesquisa cientfica exigem animais com padro sanitrio definido, e desta forma tm sido feitos investimentos na melhoria da estrutura dos biotrios, principalmente os de criao. Com a padronizao microbiolgica, tem-se conseguido diminuir o nmero de animais usados, sobretudo poder diminuir as variaes nos grupos de animais-teste, contribuindo tanto para o bem estar dos animais quanto dos profissionais

envolvidos no processo, uma vez que diminuem os riscos de zoonoses (FELASA, 1999; Majerowicz, 2005). Majerowicz (2005) apresenta em seu trabalho os seguintes padres sanitrios (Figura 1): Animais convencionais: os animais so criados em sistemas de gaiolas abertas com fluxo livre de pessoas e materiais, o que no confere qualquer tipo de barreira sanitria adequada para impedir a introduo de agentes externos, tornando-os susceptveis a contaminaes e infeces; Animais livres de microrganismos patognicos especficos (specific pathogen free - SPF): os animais so criados em biotrios com eficientes barreiras sanitrias ou so mantidos em acomodaes que lhes privam de contato com potenciais agentes patognicos, tornando sua microbiota controlada. Esse padro de sade depender de uma lista individual de excluso de micro-organismos; Animais axnicos: os animais so criados e mantidos em isoladores que os mantm livres de quaisquer tipos de microrganismos ou outras formas de vida associadas; Animais gnotobiticos: os animais so criados e mantidos como os animais axnicos, porm, geralmente apresentam alguma forma de vida, no patognica, adicional; Animais com microbiota definida associada: os animais so criados como axnicos, porm, posteriormente so infectados intencionalmente com um ou mais microrganismos, patognicos ou no; Animais mantidos em barreiras: os animais so criados como tendo a microbiota definida, porm, posteriormente so removidos dos isoladores e alocados em um biotrio com barreiras sanitrias definidas, para que sejam monitorados quanto presena de microorganismos deliberadamente inoculados ou acidentalmente adquiridos; Animais monitorados: os animais so criados e alojados em sistema de barreira de baixa segurana e que, por monitoramento peridico, revelam-se livres da maioria de patgenos;
Animais convencionais

Animais SPF

Animais monitorados

Animais axnicos

Animais gnotobiticos

Animais com microbiota definida associada

Animais mantidos em barreiras

Figura 1. Padres sanitrios de criao.

A qualidade sanitria em um biotrio imprescindvel para seu funcionamento regularizado. O risco de introduo de uma infeco em colnias de roedores sempre muito alto no recebimento de novos animais. A introduo de um nico animal infectado pode causar doena epidmica, trazendo diversos transtornos, tanto com a perda de tempo, j que a eliminao da contaminao de um patgeno no biotrio torna-se um processo lento e custoso, como a interferncia direta nos dados levantados

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na pesquisa. Como a introduo de novos animais prtica comum, e por vezes necessria, na realizao de determinados projetos, ideal que se minimizem os riscos de contaminao com medidas de precauo como exames do padro de sade para todos os novos animais adquiridos, definindo-se o padro microbiolgico e parasitrio destes (Jonas, 1976; NRC, 1976; FELASA, 1999; IVIS, 2003). O correto que os biotrios de criao sejam edificados com barreiras sanitrias adequadas e possuam programas de vigilncia de sade que certifiquem que suas colnias so livres de patgenos especficos, indicando ainda, quais microrganismos so monitorados (Jonas, 1976; IVIS, 2003). Com relao ao padro microbiolgico dos animais em um biotrio, nem sempre infeco sinal de doena. A infeco indica que determinado animal portador de algum microrganismo, no necessariamente patognico, podendo este estar apenas estabelecendo uma relao comensal com seu hospedeiro. Porm, para efeito de pesquisas, mesmo estes microrganismos no expressando manifestaes clnicas, podem interferir nos resultados dos experimentos. Sendo assim, animais muitas vezes considerados saudveis, por no apresentarem sintomatologia aparente ou quaisquer alteraes comportamentais, podem ser inadequados para pesquisas por conterem alguma forma de vida associada, como por exemplo, vrus, bactrias ou protozorios (Baker, 1998). Devem-se assegurar os padres microbiolgicos dos animais e do ambiente do biotrio. Para tanto, a quarentena passa a ser um requisito importante para a verificao do padro microbiolgico de novos animais a fim de no acarretar danos sade dos outros animais, dos profissionais e do ambiente do biotrio (Rehg & Toth, 1998). Dessa forma, a quarentena consiste na manuteno isolada de animais recm-adquiridos para caracterizar o seu perfil sanitrio, segregando aqueles que forem suspeitos de estarem infectados, ou ainda, aqueles que forem de espcies incompatveis (USA, 1971; CCAC, 1993; NRC, 2003). Segundo o trabalho de Hesller & Moreland (1984) e o que foi exposto pelo International Veterinary Information Service (2003), o tempo de quarentena e os tipos de exames dependem da espcie animal, da origem da colnia, do modo de transporte, do sistema de barreiras de segurana, dos exames de vigilncia e da destinao dos animais nas novas instalaes. Um ponto importante a ser destacado na segurana microbiolgica dos animais refere-se aos profissionais bioteristas e o prprio ambiente em si, que so os vetores biolgicos de origem externa, que podem transmitir contaminaes (Small, 1984; FELASA, 1999). Hbitos, como higiene das mos, reduzem a disseminao de doenas. Desta forma, a higiene pessoal extremamente importante na manuteno da sade dos animais (Mezadri et al., 2004). A adoo de barreiras sanitrias adequadas, para os diversos tipos de acessos em um biotrio, alm da adoo de medidas de controle de infestao por agentes externos, deve ser priorizada, a fim de minimizar estes e outros riscos de contaminaes (FELASA, 1999). CARACTERIZAO AMBIENTAL

Devemos considerar que a condio sanitria determinada no somente por fatores como a origem dos

animais e meio ambiente em que esto vivendo, os quais afetam diretamente suas respostas biolgicas, fisiolgicas e comportamentais. Assim, desde a elaborao e aprovao do projeto inicial, os biotrios devem atender s recomendaes para minimizar os efeitos do meio ambiente nestas variveis dos animais (WHO, 2001; Chorilli et al., 2007). Instalaes adequadas para os padres necessrios criao e manuteno de animais de laboratrio devem possuir programas de gerenciamento das condies fsicas e ambientais, garantindo cuidados que favoream o desenvolvimento e a reproduo dos animais, mantendo a sanidade e bem-estar, bem como minimizando as variaes que podem interferir nos resultados dos ensaios (NIH, 2002). Um erro comum a expectativa de que os animais utilizados respondam fisiologicamente da mesma forma aos interferentes externos, independentemente de onde estejam alojados (Lang & Vessel, 1976). Embora um ambiente constante em todos os parmetros recomendados seja o ideal, isso difcil de ser alcanado (De Luca et al., 1996). Entende-se como microambiente o espao fsico mais prximo ao animal, ou seja, a gaiola, com parmetros prprios para temperatura, umidade relativa, composio de gases e partculas do ar. Por outro lado, o macroambiente constitui o ambiente fsico secundrio, em torno do microambiente, representado, por exemplo, pela sala, o estbulo ou qualquer outro hbitat externo. Embora ambos estejam relacionados, o ambiente na gaiola pode ser bem diferente do secundrio e sofre influncias pelas caractersticas prprias desta interface (NRC, 1976). Segundo Lang & Vessel (1976) e Besch (1980), os fatores fsicos ambientais que mais influenciam as respostas biolgicas dos animais so a temperatura, umidade relativa, ventilao, iluminamento, fotoperodo, rudos, gases e substncias particuladas. A maioria dos animais de laboratrio tolera a mesma faixa de temperatura do homem, sendo em sua maioria, homeotrmicos, porm a temperatura do macroambiente deve ser mantida ideal para os animais em detrimento do conforto dos bioteristas. O controle de temperatura para as salas de animais deve possuir ajustes individuais de acordo com a finalidade que se destinam os animais, seja para criao ou experimentao. Segundo Majerowicz (2005), a temperatura no interior das gaiolas geralmente superior em alguns graus do ambiente e varia em funo da rea e nmero de animais alojados. Variaes extremas de temperatura so mais prejudiciais do que temperaturas constantes prximas ao limite de tolerncia, que resultam em alteraes metablicas compensatrias, as quais afetaro os padres normais de circulao, excreo alm de alteraes comportamentais (Clough, 1982; De Luca, 1996; Majerowicz, 2000a). Por vezes, a exposio dos animais s temperaturas desfavorveis, sem acesso a abrigos ou outras formas de proteo, podem induzir enfermidades, conferindo risco de mortes. Alguns animais conseguem se adaptar s interferncias trmicas, porm, estas alteraes fisiolgicas ou morfolgicas requerem tempo e nem sempre so eficazes, o que provavelmente afetar os resultados dos ensaios (Lang & Vessel, 1976). Por se tratarem de ambientes fechados, e de pouca ventilao, os biotrios podem apresentar odores ofensivos no s para os tcnicos, mas principalmente,

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para os prprios animais, afetando suas respostas fisiolgicas e farmacolgicas em experimentos. Para combater esses odores, o correto seguir as normas de boas prticas laboratoriais, adotando medidas de higienizao sem empregar produtos qumicos que possam ser txicos (NRC, 1976). Como a maioria das espcies de animais de laboratrio incapaz de promover sudao, o excesso de calor eliminado com o aumento da frequncia respiratria. Caso no haja um ajuste adequado na ventilao da sala de manuteno destes animais, certos produtos metablicos comearo a se acumular no ambiente, prejudicando a sade deles. O acmulo de amnia, por exemplo, produto nitrogenado oriundo da ao de bactrias urease positivas sobre as excretas dos ratos, por exemplo, pode afetar o sistema respiratrio destes animais, favorecendo a incidncia de infeces secundrias (Majerowicz, 2000b). O controle da umidade relativa do ar outro parmetro fundamental na manuteno de um ambiente ideal, embora no interfira de modo to rigoroso no metabolismo dos animais (NRC, 1976; De Luca, 1996). Variaes e extremos na umidade relativa podem, alm de favorecerem o aparecimento de doenas, alterarem o consumo de rao e gua, gerando conflitos entre os animais (Clough, 1982; De Luca, 1996). A maioria dos roedores mais sensvel a altas intensidades luminosas por possurem hbitos noturnos. Os ratos albinos, por exemplo, so mais ativos nos perodos menos iluminados do dia e podem ficar cegos quando expostos a muita luz (NRC, 2003). Segundo Majerowicz (2005), uma iluminao que propicie boa visibilidade, seja uniforme e o mais prxima possvel da luz natural, na ordem de 200 lux, adequada reproduo e assegura um comportamento normal para a maioria dos roedores. Durante as pesquisas, fundamental manteremse os perodos de claro-escuro sem interrupo, pois do contrrio, os animais podem sofrer estresse que desencadear alteraes metablicas e comportamentais, tais como modificaes do ciclo circadiano, ciclos reprodutivos, efetividade de drogas, etc (Majerowicz, 2005). Alm disso, segundo Clough (1982), variaes no fotoperodo, em funo da durao dos dias ou estaes do ano, influenciam o comportamento reprodutivo, tempo de durao do parto e podem aumentar a incidncia de tumores. recomendvel que o controle do iluminamento nas salas seja feito de modo automtico e programado, pois o controle manual, invariavelmente, pode resultar em uma pequena variao nos perodos de claro/escuro (Majerowicz, 2000a). O que tambm pode interferir na quantidade e intensidade de luz que chega aos animais e prejudicar os resultados dos experimentos a localizao das gaiolas nas estantes e confiar que a iluminao obtida atravs de janelas ou vidraas natural. Este tipo de luz apresenta um espectro mais vermelho, para o qual os animais so insensveis, e que, alm de elevar a carga trmica do recinto, aumenta os custos com equipamentos de ventilao (USA, 1971). Segundo Clough (1982) e De Luca (1996), outros dois interferentes importantes do bem-estar dos animais

so a intensidade e frequncia dos sons no ambiente do biotrio. Segundo dados do National Research Council (1976), a exposio a sons acima de 85 dB pode causar tanto efeitos auditivos quanto sistmicos, tais como: eosinopenia, aumento do peso das supra-renais, fertilidade reduzida em roedores e aumento de presso arterial em primatas no humanos. Alm dos sons na faixa audvel, os animais de biotrios esto expostos a rudos ultra-snicos, da ordem de 80 kHz, como, por exemplo, telefones, rangidos de portas, gotejamento de torneiras, ventiladores, aparelhos de ar-condicionado, etc, constituindo fatores de estresse (Sales et al., 1998). Alm dos fatores fsicos, outro fator importantssimo para a manuteno de um ambiente saudvel para os animais so os insumos alimentares e os produtos utilizados para a higienizao dos materiais e do ambiente. A aquisio, transporte, estocagem e manipulao dos alimentos devem ser feitos cuidadosamente, de maneira a evitar riscos de contaminaes qumicas ou biolgicas nas instalaes do biotrio, que poderiam conferir quadros de doenas ou intoxicaes (NRC, 1976). Alm disso, o bioterista deve estar sempre atento s quantidades de rao e gua nas gaiolas, para evitar conflitos e disputas entre os animais. A fim de evitar alteraes nos resultados dos dados experimentais, o material utilizado para as camas dos animais deve ser padronizado. A maravalha, ou cepilho, subproduto do beneficiamento da madeira, o material mais utilizado para forrar as gaiolas, com a finalidade de absorver a umidade proveniente das fezes e urina, bem como manter o equilbrio trmico do ambiente, devendo ser isenta de compostos qumicos nocivos, sejam eles naturais ou no, como por exemplo, os hidrocarbonetos aromticos desprendidos pelo cedro. Uma alternativa bastante simples para eliminar tanto as substncias qumicas txicas quanto os microrganismos, alm de diminuir o contedo de resinas e leos essenciais, a esterilizao. Atualmente h outros materiais que podem ser utilizados como cama, tais como palha de arroz, palha de trigo, bagao de cana-de-acar e sabugo de milho. Com a exceo deste ltimo, que tem mostrado boa eficcia na absoro, configurando assim, uma diminuio no nmero de trocas de material contaminado por semana, conferindo maior economia, os demais materiais citados podem ser ingeridos pelos animais e so mais susceptveis a contaminaes por fungos (Majerowicz, 2000a). A gaiola outro ponto fundamental para se obter as condies ideais de conforto e bem estar dos animais. O material de construo varia de acordo com a espcie animal alojada, sendo preferencialmente de material leve, durvel e isolante trmico, evitando-se materiais que dificultem a higienizao e esterilizao, como a madeira. Alm disso, a arquitetura deve facilitar o acesso dos animais gua e ao alimento, de forma a propiciar conforto e bem estar e evitar competio entre indivduos. As gaiolas utilizadas na experimentao com animais convencionais de laboratrio tendem a manter dimenses padronizadas. Paiva et al. (2005) estabelecem o nmero ideal de animais por caixa bem como suas dimenses (Tabela 1).

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Tabela 1. Nmero de animais por caixa para diferentes espcies

Fonte: Curso de Manipulao de Animais de Laboratrio, Paiva, 2005.

INSTALAO DE BIOTRIOS E BIOSSEGURANA Um ponto importante para a instalao de um biotrio a localizao, que est diretamente relacionada sua finalidade. Alm disso, as edificaes devem apresentar certas facilidades para estacionamento, local adequado para carga e descarga de animais e insumos (Merusse & Lapichick, 1996). Para os biotrios de experimentao, conveniente que a edificao esteja prxima ao laboratrio de pesquisa, com a instalao de barreiras sanitrias de proteo, tanto para o bioterista quanto para o meio ambiente. Com relao aos biotrios de criao, apropriado que sejam instalados em reas distantes de centros urbanos, isolando os animais de agentes biolgicos que possam infect-los ou contamin-los, assegurando-se assim, o cumprimento das normas sanitrias adequadas de criao e manuteno (FIOCRUZ, 1998; Cardoso, 2001). Cardoso (2001) prope que os biotrios podem ser implantados de duas formas: pavilhonar ou em bloco nico. O sistema pavilhonar possui separao espacial entre a rea destinada ao alojamento dos animais e as demais dependncias de apoio, localizadas centralmente, favorecendo o fluxo operacional (Figura 2). Os animais so facilmente separados por espcie e por categoria, em edificaes prprias, contendo anexos comuns. Nas reas dos animais encontram-se os equipamentos mecnicos e os depsitos de rao e suprimentos. Nas reas de controle encontram-se a recepo, escritrios e sala com equipamentos para lavagem e desinfeco. Um inconveniente que os investimentos na construo e manuteno deste tipo de biotrio so muito altos (Cardoso, 2000). O sistema de construo em bloco nico rene todas as dependncias em uma s edificao, separadas atravs de barreiras, podendo possuir um nico corredor ou um sistema de dois corredores. No primeiro caso, que o tipo convencional, a circulao de pessoas, material limpo, lixo contaminado e outros materiais, so feitos atravs de um nico corredor, aumentando os riscos de haverem contaminaes (Figura 3a). No segundo caso, o acesso de material limpo para as salas bem como o trfego de pessoas feito por um corredor, chamado de corredor limpo, e a sada de material sujo ou contaminado feito por outro corredor, chamado de corredor sujo (Figura 3b) (Cardoso, 2001).

Figura 2. Sistema pavilhonar de construo. Fonte: Bol. Centr. Panam. Fiebre Aftosa, 64-67, 1998-2001.

Independente do tipo de construo adotado para a instalao de um biotrio necessrio que este seja implantado em reas dotadas de todos os servios pblicos de apoio, que capacitem seu perfeito funcionamento (De Luca, 1996). O manejo dos animais de biotrio confere aos profissionais alguns riscos, como o de infeco, causado pelo contato direto, contato com excretas, saliva, sangue ou tecidos coletados em necrpsias ou autpsias de espcies contaminadas, resposta alrgica, promovida de forma indireta pela inalao de aerossis contaminados ou de poeiras originada da maravalha das gaiolas, e traumas, gerados por arranhes ou mordidas (Seamer & Wood, 1981). Segundo o National Research Council (2003), no que se refere ao manejo seguro de espcies animais, especial ateno deve ser dada aos procedimentos de tora dos animais, manuseio e armazenamento de agentes de risco, dosagem e administrao de medicamentos, inoculao intranasal, manuseio de tecidos e fluidos corporais, necropsias, eliminao de excretas e carcaas, alm do uso correto de equipamentos de proteo individual e coletiva, capacitao e treinamento (NRC, 2003). A biossegurana demonstrada mediante o planejamento estrutural das instalaes, determinao dos nveis de conteno fsica, utilizao apropriada de equipamentos de proteo individual e emprego dos procedimentos de boas prticas laboratoriais (CDC, 1979; WHO, 2003). Segundo Simas (1996), os nveis de

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conteno fsica so parmetros diretamente relacionados avaliao de risco, determinando a classificao dos laboratrios de experimentao em quatro nveis. (1) Laboratrios de experimentao animal de nvel de biossegurana 1 (NBA 1): so aqueles utilizados no ensino bsico e que no demandam nenhum tipo de cuidado especial a no ser o cumprimento das boas prticas laboratoriais, tanto para implantao quanto para manuteno, sendo apropriado para o alojamento da maioria dos estoques de animais aps a quarentena e para animais inoculados com agentes biolgicos da classe de risco 1; (2) Laboratrios de experimentao animal de nvel de biossegurana 2 (NBA 2): so aqueles que manipulam animais infectados com microrganismos da classe de risco 2 e que, alm do atendimento s normas de boas prticas laboratoriais, demandam alguns requisitos fsicos na sua construo; (3) Laboratrios de experimentao animal de nvel de biossegurana 3 (NBA 3): requerem desenho e construo mais especializados que os anteriores, com sistemas de barreiras mais eficientes. Alm disto, os tcnicos devero receber treinamentos especficos quanto ao manuseio seguro de microrganismos; (4) Laboratrios de experimentao animal de conteno mxima, nvel de biossegurana 4 (NBA 4): s devem funcionar sob o controle direto das autoridades sanitrias e, devido ao alto grau de complexidade de atividades, recomenda-se elaborao de manuais operacionais padro previamente testados e aprovados por profissionais autorizados de procedimento de trabalho testado previamente por exerccios de treinamento (Cardoso, 2001; Neves & Guinski-Chaguri, 2001; Majerowicz, 2005).

O Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial (Inmetro) define em sua norma n NIT-DICLA-028, de setembro de 2003, Critrios para o credenciamento de laboratrios de ensaios segundo os princpios BPL (Boas Prticas de Laboratrio). Esses critrios renem normativas para o estabelecimento de um padro de qualidade que englobe o planejamento, gerenciamento, desenvolvimento, monitoramento e histrico dos estudos realizados, promovendo um instrumento diretivo que assegure uma fcil abordagem gerencial, incluindo conduta, informao e arquivamento dos estudos de laboratrio (WHO, 2001; INMETRO, 2003). No Brasil, so aplicados os critrios contidos na Norma Inmetro NIT-DICLA-028 (INMETRO, 2003), e as BPL so recomendadas pela legislao ambiental do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovveis (IBAMA), sendo obrigatrias aos laboratrios das reas de toxicologia, ecotoxicologia e ecossistemas (Silva, 2004). Toda Unidade Organizacional (UO) deve ter Procedimentos Operacionais Padro (POP) escritos, revisados, numerados e aprovados, como atestado da qualidade, pela Unidade da Garantia da Qualidade (UGQ), garantindo-se assim condies tcnicas para que os ensaios que compem uma pesquisa estejam de acordo com os critrios preconizados pelas BPL (INMETRO, 2003; Majerowicz, 2005). A composio de um sistema de POPs um trabalho moroso e cuidadoso, porm, imprescindvel para o sucesso do estudo (WHO, 2001).

Figura 3. Biotrio de corredor nico (3a) e biotrio com dois corredores (3b). Fonte: Adaptado de Bol. Centr. Panam. Fiebre Aftosa, 64-67, 1998-2001.

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Os princpios das boas prticas, os conceitos da garantia da qualidade, as legislaes, as recomendaes de biossegurana no manejo de animais de laboratrio representam, portanto, uma etapa fundamental para o estabelecimento da qualidade, reprodutibilidade e confiabilidade nos experimentos realizados em quaisquer biotrios, alm de garantir a segurana dos trabalhadores e do meio ambiente. BIOTERISMO No Brasil recente a preocupao com a qualidade dos biotrios. Mesmo com o desenvolvimento do nvel cientfico alcanado pelo pas nos ltimos tempos, colocando-o em dcimo terceiro colocado mundial em nmero de produes cientficas, a ateno dada e a conscientizao da importncia de termos nossos biotrios adaptados aos padres de qualidade exigidos por guias internacionais, ainda incipiente. Na maioria das vezes, as instalaes fsicas e os equipamentos de segurana destinados aos animais de laboratrio so imprprios e no atendem aos requisitos mnimos de segurana, conforto e higiene, faltando inclusive, qualificao tcnica dos profissionais bioteristas. Como os peridicos de grande visibilidade e prestgio internacional exigem dos autores dos trabalhos com animais a declarao de que suas pesquisas foram efetuadas segundo os requisitos dos manuais e legislaes recomendados pelas autoridades internacionais, o nmero de trabalhos publicados pelos pesquisadores brasileiros nesta rea acaba sendo reduzido (Duarte, 2003). Os primeiros trabalhos em bioterismo no pas datam da dcada de 1940 e so de autoria de Jos Ribeiro do Valle e Jos Leal Prado. Trinta anos depois, no final da dcada de 1970, um trabalho internacional demonstrou a precria situao dos biotrios dos pases em desenvolvimento, alcanando grande impacto junto s publicaes internacionais (Rosenkranz, 1978). Houve grande repercusso na comunidade cientfica brasileira que passou ento a rever, em conjunto com as agncias de fomento, os antigos programas existentes para a Cincia de Animais de Laboratrio. Na dcada de 1980, a necessidade de se elaborar um diagnstico e um planejamento sobre as atividades relacionadas ao bioterismo no Brasil passou a ocupar lugar central nas primeiras discusses entre o COBEA, fundado em 1983, a Academia Brasileira de Cincias (ABC) e a Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP). As recomendaes tcnicas e apoio financeiro das agncias de fomento na segunda metade da dcada de 1980 foram fundamentais para a constituio de centros de referncia na produo de modelos animais em pesquisa e desenvolvimento tecnolgico, tcnicas cirrgicas e produo de frmacos e imunobiolgicos, adotando os parmetros preconizados e certificados por entidades internacionais tais como ICLAS (International Council for Animal Laboratory Science), AALAS (American Association for Laboratory Animal Science) e FELASA (Federation of European Laboratory Animal Science Associations). Os novos padres difundiram-se para outras instituies que tambm seriam reconhecidas internacionalmente e diversos especialistas brasileiros

receberam treinamento em centros dos Estados Unidos e da Europa. Consolidavam-se assim, no pas, os chamados Centros de Bioterismo, com o apoio, sobretudo, da FINEP, CNPq e FAPESP. Porm, o declnio progressivo do FNDCT (Fundo Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico), na dcada de 1990, veio a ter conseqncias negativas sobre essas atividades, assim como para todas as demais, consideradas como partes integrantes da infraestrutura de pesquisa e desenvolvimento no pas. Seguiu-se um longo perodo de escassez de recursos e descontinuidade nos investimentos. Somente em 2001, com a criao dos Fundos Setoriais, o tema voltaria a merecer destaque e os investimentos voltariam a ser empregados (CGEE, 2003). Em 2003, o Centro Multidisciplinar para Investigao Biolgica (CEMIB) da UNICAMP, atendendo a uma solicitao do CT-Infra (Fundo de Infra-Estrutura) e do CGEE (Centro de Gesto e Estudos Estratgicos), realizou um levantamento para caracterizar a situao dos biotrios no Brasil. Foram coletados dados referentes a 120 biotrios brasileiros, sendo 62 biotrios de produo e 58 biotrios de experimentao. Assumindo-se como universo de referncia os atuais 250 biotrios filiados ao COBEA, esse cadastro, denominado Cadastro Nacional de Biotrios de Produo e Experimentao, no momento da anlise, abarcava 48% do total. Essas informaes cadastrais, ainda que no condizentes com a totalidade dos biotrios brasileiros, representaram uma atualizao em relao ao ltimo levantamento semelhante efetuado no pas, patrocinado pelo COBEA, realizado em 1996 (CGEE, 2003). Com exceo de poucos centros de pesquisa localizados na regio Sul e Sudeste, que recebem juntos aproximadamente 86% do total de investimentos nesta rea, a maioria dos biotrios do pas no apresenta infraestrutura bsica adequada para pesquisa, tanto no que se refere s instalaes quanto no que se refere ao preparo e qualificao dos recursos humanos, deixando o Brasil longe da excelncia apresentada por empresas internacionais de grande porte como Charles River, Taconic, Harlan, Jackson Laboratory, Wistar Institute, National Institute of Health, entre outras. Na regio Nordeste, as condies existentes para produo e fornecimento de animais de laboratrio so incompatveis com a competncia cientfica instalada na regio. A falta de investimentos importantes nos biotrios, seja de criao ou de experimentao, torna esses locais inapropriados para a manuteno de linhagens livres de contaminaes, representando um impeditivo para o desenvolvimento das pesquisas nas reas biomdicas e constituindo uma barreira na produo de medicamentos, vacinas, testes toxicolgicos, etc (CGEE, 2003). Segundo dados do Centro de Gesto e Estudos Estratgicos (2003), considerando apenas os biotrios de produo, o investimento necessrio estimado para adequao s normas sanitrias dos guias internacionais algo em torno de R$ 69.697.300,00. Segundo Duarte (2003), a alternativa mais vivel para o emprego destes recursos a implantao de uma rede de biotrios, que consistiria em um biotrio de criao central, que produziria animais de qualidade com padres genticos e sanitrios definidos, associado a um conjunto de biotrios de experimentao de diferentes instituies. A instalao de um biotrio central abastecendo uma rede

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regional de biotrios permitiria racionalizao dos custos, j que evitaria duplicao do nmero de animais reservados para procriao, assim como a padronizao da qualidade dos animais utilizados e tambm dos funcionrios, que passariam a empregar procedimentos uniformes de manuseio, condies de higiene, etc, economizando custos com treinamento individual. CONCLUSO No h dvidas sobre as vantagens advindas da organizao de redes de biotrios como uma forma de se contribuir para acelerar a melhoria da infra-estrutura de biotrios e, portanto contribuir para o fortalecimento das pesquisas na rea da sade e de cincias biolgicas. Num pas que j alcanou um determinado nvel de excelncia e reconhecimento internacional no que diz respeito qualidade das pesquisas cientficas, imperativo e urgencial procurarmos alternativas para melhorar as condies de instalao e funcionamento dos biotrios. Como metas principais, devemos buscar a qualificao de profissionais bioteristas (pesquisadores, veterinrios, zootecnistas, tcnicos de biotrio, assistentes, etc.), com padronizao das normas de manejo; obteno de insumos de fornecedores com padro de qualidade pr-estabelecido, assim como obteno de novas cepas ou linhagens de animais com padro sanitrio definido; implantao das normas de biossegurana; consolidao das comisses de tica, estimulando a obrigatoriedade de aprovao dos protocolos experimentais, procurando minimizar ao mximo a quantidade de animais utilizados nas pesquisas, adotando tcnicas e mtodos alternativos (Duarte, 2003). Os avanos conquistados nestes ltimos anos devem servir de incentivo busca de novos conhecimentos na descoberta de frmacos, medicamentos e tratamentos para a melhoria da sade humana e animal. AGRADECIMENTOS Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) pelo auxlio financeiro. ABSTRACT Animal housing: characterization, legislation and biosafety standards The use of laboratory animals together with studies accomplished in human patients has been supplying a base for the understanding of several physiologic and pathological important processes. Besides, the results of experimental studies make possible a better understanding and safety for the development of surgical techniques in the medical clinic. As alive biological material, it should guarantee its physical integrity, being taken into account the microbiological contaminations, the genetic, the nutrition and the correct manipulation, in order to avoid those incorrect conclusions in the

experiments or the increase of number of used animals unnecessarily used. In parallel to the concerns and legislations on the use of laboratory animals grew also the concern with the welfare and the peoples safety that handle the laboratory animals, once these take the risks of they acquire occupational diseases for the presence of zoonotic contaminations or for development of allergies. The prevention requests the application of modern technological progresses in the design of the biotery and in the work routines. Unfortunately few stablishments in Brazil present human resources with appropriate formation and a basic infrastructure of research that it includes the centers of creation of laboratory animals, equivalent to those existent ones in the United States and Europe. Keywords: Laboratory animals. Legislations. Biotery. Safety. REFERNCIAS Afif MO, Rosenkranz A. Guia para el uso de animales de laboratorio, parte I. Bogot: Universidad Nacional de Colombia; 1990. Baker DG. Natural pathogens of laboratory mice, rats, and rabbits and their effects on research. Clin Microbiol Rev. 1998; 11(2):231-266. Besch EL. Environmental quality within animal facilities. Lab Anim Sci. 1980; 30(2):385- 406. Brasil. Decreto-Lei n 24.645, de 10 de Julho de 1934. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, 14 jul. 1934. Brasil. Lei n 6.638. Estabelece normas para a prtica didtico-cientfica da vivisseco de animais e determina outras providncias. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, 10 maio, 1979. Brasil. Lei n 9.605. Dispe sobre as sanes penais e administrativas derivadas de condutas e atividades lesivas ao meio ambiente, e d outras providncias. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, 13 fev. 1998. Brasil. Presidncia da Repblica. Lei n 11.794, de 8 de outubro de 2008. Regulamenta o inciso VII do pargrafo 1 do artigo 225 da Constituio Federal, estabelecendo procedimentos para o uso cientfico de animais; revoga a Lei n 6.638, de 8 de maio de 1979; e d outras providncias. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, 9 de out. 2008. Brasil. Presidncia da Repblica. Decreto n 6.899, de 15 de Julho de 2009. Dispe sobre a composio do Conselho Nacional de Controle de Experimentao Animal

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- CONCEA, estabelece normas para o seu funcionamento e de sua Secretaria Executiva, cria o Cadastro das Instituies de Uso Cientfico de Animais - CIUCA, mediante a regulamentao da Lei 11.794, de 8 de outubro de 2008, que dispe sobre procedimentos para o uso cientfico de animais, e d outras providncias. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, 16 jul. 2009. CCAC. Canadian Council on Animal Care. Guide to the Care and Animal Use of Experimental. 2nd. ed. Ottawa: CCAC; 1993. 1 v. Cardoso TAO. Programa arquitetnico de biotrios. In: Teixeira P, org. Curso de Aperfeioamento em Biossegurana. Rio de Janeiro: EAD/Ensp; 2000. p.21-42. Cardoso TAO. Consideraes sobre a biossegurana em arquitetura de biotrios. Bol. Centr. Panam. Fiebre Aftosa, 2001; 64-67:3-17. CDC. Centers for Disease Control. Laboratory safety. Atlanta, US: Dep. Health, Education and Welfare/Public Health Service; 1979. (HEW Publication, CDC79-818). CDC. Center for Disease Control and Prevention & National Institutes of Health (NIH). Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. 3rd. ed. Washington: HHS; 1993. (Publication n 93-8359)

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