Hidrlisis de la Gelatina: En este experimento se inocularon dos tupos de microorganismos.

Escherichia Coli (gram -) y bacilo Cereus (gram +), despus se colocaron a temperatura ambiente. En los resultados a las 24 horas, el tubo que contena la siembra de E. Coli no hidroliz, el gel se mantuvo gelificado. El que contena la siembra de Bacilo cereus, si hidroliz, dio positivo, la licuefaccin se dio a perfeccin

Prueba: Licuefaccin de la gelatina Principios: Muchas hidrolasas hidrolizan la gelatina y destruyen el gel. Mtodo: Incubar un caldo de 12% de gelatina. Enfriar para comprobar la formacin de gel. Si se hidroliza la gelatina, el tubo permanece lquido cuando se enfra. Utilizacin mas frecuente: Ayuda a la identificacin de serratia, pseudomonas, flavobacterium, clostridium. Bacterias liberan exoenzimas que hidrolizan la gelatina, si uno de estos organismos se inocula en un tubo de gelatina nutritiva, las gelatinas cercana a las bacterias sern hidrolificadas y pasarn del estado coloidal al estado cristaloide (aminocido)

>S. aureus es positivo con gelatina!

La mayora de los polmeros son demasiado grandes para ser transportados dentro de las clulas. Las bacterias excretan enzimas extracelulares que hidrolizan esos polmeros transportando al interior de la clula en monmeros que les sirven para crecer. La produccin de proteasas es evaluada por incorporacin de una protena (gelatina o casena) en un medio slido en placa. La placa se inunda con cido que precipita la proteina no hidrolizada.

Prueba de Gelatinasa

Permite medir la presencia de gelatinasa. Si luego de cierto tiempo de refrigeracin, la gelatina sigue en estado lquido, es indicativo de que la prueba result positiva y por tanto la bacteria tiene gelatinasa al licuar el medio. En este caso, el B. subtilis no posee la enzima gelatinasa, y por ende, el medio se solidific en refrigeracin.

Agar de hierro y triple azcar (TSI) El agar TSI es uno de los ms usados para ver la fermentacin de carbohidratos en la familia Enterobacteriaceae. Se pueden tener varias posibilidades de fermentacin de acuerdo a las caractersticas metablicas del microorganismo como son: Utilizacin de glucosa sola. Los microorganismos que fermentan solo la glucosa provocan en este medio una reaccin alcalina en la superficie ( roja) sobre un fondo cido (amarillo, k/a) debido a que realizan una degradacin aerbica de la glucosa en la superficie, convirtiendo el piruvato en agua y dixido de carbono. Despus de 18 a 24 horas de incubacin como la concentracin de glucosa es baja (0.1%), los microorganismos empiezan a utilizar las peptonas que se encuentran en el medio, causando la liberacin de amoniaco y produciendo un pH alcalino ( rojo) gracias al rojo de fenol que tiene el medio como indicador de pH. En el fondo, como no hay oxgeno, se realiza una degradacin anaerbica y el piruvato se convierte en lactato con lo cual el pH disminuye quedando el pH cido ( amarillo). Utilizacin de lactosa y/o sacarosa. Algunos microorganismos tienen la facultad de fermentar la glucosa y la lactosa resultando una reaccin cida en la superficie (amarilla) y

cida en el fondo (amarilla, a/a). En este caso despus de 18 a 24 hrs como la concentracin de lactosa es alta (1.0%), o sea 10 veces ms que la de la glucosa presente, no se ha utilizado completamente y la acidez persiste tanto en el fondo como en la superficie. En el caso de usar sacarosa la reaccin sera la misma. Sin utilizacin de ninguna de las anteriores. En el caso de no utilizar ninguno de los carbohidratos presentes (glucosa, lactosa y sacarosa), lo que se usara seran las peptonas, ya sea aerbicamente o anaerbicamente. Slo utilizndolas aerbicamente dara una superficie alcalina (roja, k) sobre un fondo sin cambio (sc) o sea k/sc). Si las usara aerbicamente dara una superficie alcalina (rojo) sobre fondo alcalino (rojo) o sea k/k. En este medio tambin es posible detectar la produccin de gas por la formacin de burbujas dentro del medio, y la produccin de cido sulfhdrico, el cual reaccionar con un indicador con base de fierro dando un color negro debido al sulfuro de hierro formado. Resultados 1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares. 4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico. Microorganismo Pico/Fondo Produccin de gas + + + + Produccin decido sulfhdrico + + + -

E. coli ATCC 25922 A/A K. pneumoniae ATCC A/A 700603 P. mirabilis ATCC K/A 43071 S. typhimurium ATCC K/A 14028 S. enteritidis ATCC K/A 13076 S. flexneri ATCC K/A 12022 P. aeruginosa ATCC K/K 27853 FERMENTACION DE CARBOHIDRATOS

A. FUNDAMENTO Triple azcar agar hierro (TSI) es un medio diferencial que contiene sacarosa a la lactosa, una pequea cantidad de glucosa (dextrosa), sulfato ferroso, y el rojo fenol, indicador de pH. Se utiliza para diferenciar entricos basa en la capacidad de reducir los hidratos de carbono de azufre y la efervescencia. Al igual que con los caldos de fermentacin rojo fenol, si un organismo puede fermentar ninguno de los tres azcares presentes en el medio, el medio se vuelve amarillo. Si un organismo slo puede fermentar la dextrosa, la pequea cantidad de glucosa en el medio es utilizado por el organismo dentro de las diez primeras horas de incubacin. Despus de ese tiempo, la reaccin que produce el cido revierte en las

reas aerbica de la inclinacin, y el medio en esas reas se convierte en rojo, lo que indica condiciones alcalinas. D. RESULTADOS Una vez finalizado este periodo se pudo observar que en el TSI con S. Aureus y el TSI con E. Coli ocurri el viraje de color de rojo fenol (indicador), ya que la fermentacin disminuye el pH, a un color amarillo causada por la acidez.

S. Aureus E. Coli Adems observamos en el tubo de TSI con E. Coli la formacin de gas provocado por la produccin de gas (CO2) como uno de los productos finales del desdoblamiento de piruvato en el proceso de gluclisis. A diferencia del tubo con pseudomona areuginosa que no hubo cambio de color (no hubo fermentacin).

Test del triple azcar-hierro En este test se utiliza el medio de cultivo TSI y proporciona varios datos fisiolgicos importantes para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar la glucosa, la lactosa o la sacarosa y si produce gas o cido sulfhdrico. Pueden obtenerse los siguientes resultados: a) Fermentacin de glucosa. Los microorganismos capaces de fermentar la glucosa darn lugar a la formacin de cidos que bajan el pH del medio, haciendo que el fondo del tubo aparezca de color amarillo y el pico de color rojo. Ej: Shigella. b) Fermentacin de glucosa y lactosa (o sacarosa). Los microorganismos capaces de fermentar ambos azcares darn lugar a la formacin de cidos que bajan el pH de todo el

medio, haciendo que tanto el fondo como el pico del tubo aparezca de color amarillo. Ej: Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Vibrio. 3Universidad Nacional del Nordeste - Facultad de Medicina - Microbiologa e Inmunologa 4 c) Incapacidad de fermentacin de glucosa. Los microorganismos incapaces de fermentar la glucosa no darn lugar a la formacin de cidos que bajen el pH pero utilizarn las protenas presentes bajando el pH por formacin de aminas haciendo que el pico del tubo aparezca de color rojo. Ej: Pseudomonas. d) Produccin de cido sulfhdrico: Los microorganismos capaces de formar SH2 se manifiestan por la aparicin de un color negro en fondo del tubo debido a la formacin de sulfuro ferroso. Ej: Salmonella, Proteus, Citrobacter. e) Produccin de gas: Los microorganismos capaces de formar gas producen la aparicin de burbujas y/o la ruptura del medio de cultivo. Ej: Escherichia.