INTRODUCCION N UESTRA experiencia en la de- terminacin de glucosa en l- quido cfalo-raqudeo, fruto del gran nmero de determinaciones practicadas en el Laboratorio de la Ctedra de Pediatra en el trans- curso de 10 aos, nos ha llevado a divulgar una serie de datos es- tadsticos acumulados en los aos citados, ya que hemos observado que est muy generalizado entre la mayora de pediatras el consi- derar como normales, cifras de glucosa que si bm son ciertas pa- ra el adulto, no lo son, en modo alguno, para los nios menores de 10 aos. La glucosa del lquido cfalo-ra- qudeo procede, como es sabido, de la sangre y pasa a travs del ple- xo coroideo y de los capilares ro- deados por las prolongaciones de los espacios subaracnoi'deos. Cual- quier variacin patolgica que mo- tive una varian en la cantidad de glucosa sangunea o una mayor o menor permeabilidad de los ple- xos coroideos producir, como con- secuencia, una variacin en las ci- fras de glucosa en el liquor. Un factor importante que debe tener en 'cuenta el anali'sta es que en ell- quido en reposo, una vez extrado, se producen fenmenos de gluco- lisis,es decir, que para que el exa- men de glucosa se verifique con to- das las garantas debe hacerse lo ms rpidamente posible y, a po- der ser, estando el enfermo en ayunas, para evitar que una hi- perglicemia alimenticia traiga co- mo consecuencia una hipergluco- rraqui'a que haga pensar al mdico en una posible encefalitis; La cantidad normal de glucosa en el liquor oscila entre 40 y 70 mg. por cien, en el adulto, y entre 70 y 90 mg. por cien, en los nios hasta los 10 aos de edad. Hemos subrayado las cifras corres- pondientes a la glucorraquia en el nio, porque, segn hemos dicho anteriormente, una parte conside- rable de pediatras consideran co- mo procesos posIblemente encefa- lticos aquellos que presentan glu- corraquias por encima de 70 mg. por cien, cuando en realidad di- cha cifra es el mnimo normal en el nio. Antes de pasar al estudio de las variaciones en ms o en menos del azcar en el lquido cfalo-raqu- deo, vamos a exponer las diversas Acadmico Corresponsal. Jefe del Laboratorio de la Ctedra de Pediatra de la Universidad de Barcelona. 262 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA Vol. XXXIX. N." 154 tcnicas macro y microscpicas empleadas para su investigacin, ya que de la exactitud y sencillez de las mismas depende, en gran manera, la orientacin que puede dar el analista al pediatra. Insisti- mos nuevamente sobre la impor- tancia que tiene el hacer el examen inmediatamente despus de la ex- traccin, para evitar los rpidos fenmenos de glucolisis "in vitro". TECNICAS DE INVESTIGACION Mtodo de Folin Wu Este mtodo se funda en la for- macin de un precipitado de xido cuproso al reaccionar el filtrado li- bre de protena con una solucin cprica alcalina bajo la accin del calor .. El precipitado cuproso es di- suelto por una solucin de cido fosfomolbdico y la reduce. La so- lucin resultante se compara colo- rimtricamente con otra patrn de glucosa sometida a igual trata- miento. Reactivos l. Solucin alcalina de cobre.- Se disuelven 40 gr. de carbonato sdico, en 400 cm. 3 de agua. Sepa- radamente, se disuelven 7,5 gr. de cido tartrico, en 300 cm. 3 de agua. Tambin por separado, se disuelven 4,5 gr. de sulfaJto cpri- co, en 200 cm. 3 de agua. En cada caso se apresura la disolucin por la accin del calor. Djense enfriar a la temperatura ambiente y a- dase la solucin de cido tartrico a la de carbonato; luego, adase la de sulfato cprico. Dilyase hasta un litro y mzClese. Transcu- rridas una o dos semanas, puede aparecer un sedimento rojo, en este caso, decntese el lquido claro o fltrese por papel de buena -cali- dad. El reactivo se conserva inde- finidamente. Il. Solucin de cido fosfomo- lbdico. - Se disuelven 40 gr. de hidrxido sdico, en 400 cm. 3 de agua. Se aaden 70 gr. de cido molbdico, 10 gr. de tungstato s- dico y 400 cm. 3 de agua. La solu- cin se calienta durante media ho- ra, se deja enfriar y se diluye has- ta 700 cm. 3 Se aaden 250 cm. 3 de cido fosfrico y se completa con agua hasta un litro. Mzclese. III. Solucin de cido benzoico. En un litro de agua caliente se disuelven 2,5 gr. de cido benzoico, se deja enfriar la solucin y se traslada a un frasco. Se conserva indefinidamente. Fltrese si fuera necesario. IV. Soluciones tipo de glucos1a. Patrono - Se pesa 1 gramo de glucosa (muestra nm. 41 del Bu- rea of Standards) con una balanza analtica. Se traslada a un frasco volumtrico de 100 cm. 3 ; se disuel .. ve y se completa hasta la marca con la solucin de cido benzoico. Esta solucin patrn al1 % se con- serva de modo permanente. SI. _ Solucin tipo que contiene 1959 ANALES DE MEDICINA Y CIR.UGIA 263 10 mgr. de glucosa por cm. 3 Usan- do una pipeta, se toman 5 cm. 3 de la solucin patrn y se trasladan a un frasco volumtrico de 500 em. 3 ; se diluyen hasta la marca con la so- lucin de cido benzoico. SIl. Solucin tipo que contiene 20 mgr. de glucosa por cm. 3 Con una pipeta se toman 10 cm. 3 de la solucin patrn y se trasladan a un frasco volumtrico de 500 cm. 3 ; se dl1uyen hasta la seal con la solu- cin de cido benzoico. Ambas soluciones tipo se conser- van durante seis meses. Tcnica 1. Con una pipeta, tmense 2 cm. 3 del filtrado libre de prote- nas y pngase en un tubo de Fo- lino Rotlese B. 2. En un tubo anlogo se ponen 2 cm. 3 de la solucin SI. Rotle .. se SI. 3. En un tercer tubo de Folin se ponen 2 cm. 3 de la solucin SU. Rotlese. SIL 4. A cada tubo se aade 2 cm.'S de la solucin cprica alcalina. 5. Trasldense los tubos a un bao mara en ebullicin y cahin- tense durante 8 minutos. 6. Enfrense durante dos a tres minutos sin agitarlos. 7. Adanse a cada tubo 2 cm. s de la solucin de cido fosfomolb- dico. 8. Djense reposar 3 minutos. Dilyase la solucin resultante has- ta la seal de 25 cm. 3
9. Tpense todos los tubos con tapn. de goma y agtense. 10. Despus de 10 minutos, comprese en. el colormetro con el patrn ms prximo. Clculo B = Lectura de la muestra de sangre. 100 SI 200 SU X= oX=---- B B Cuando se emplea la solucin ti- po SI, colquese la muestra a la al- tura de 20 mm., en cuya caso, X = 5.S!. Cuando se utiliza la solucin SIl, colquese la muestra a la altura de 10 mm., y entonces, X = 20.SU. La comparacin de color puede hacerse en el colormetro fotoelc- trico empleando el mtodo anterior con un filtro de luz nm. 42. Al contrario que en la colorimetra vi- sual, los colores son estrictamente proporcionales a lasconcentracio- nes hasta la de 400 mgr. por 100 y slo hay que preparar un patrn. Hay que compararlos ajustando el cero al agua. Tanto la lectura en blanco de los rea'Ctivos como la del patrn permanecen constantes de modo indefinido, y slo se tendrn 264 ANALES DE MEDICINA Y CIR.UGIA Vol. XXXIX. N.o 154 que comprobar .cuando se utilicen nuevos reactivos. Si se emplea la solucin tipo SU, el clculo ser: 200 -------- (Factor X lec- Lectura del patrn tura del problema = mgr. X 100 centmetros cbicos de sustancias reductoras en la sangre original. Mtodo de Crescelius-Seilfert modificado Reactivos Acido pcrico al 1,5 %. Sosa al 20 %. Glucosa al 0,75 % y al 2 %. Tcnica Para cada glucorraquia tomamos 3 tubos de centrfuga, y en cada uno' d ellos colocamos: 7,2 cm. 3 de agua destilada. 4 cm. 3 de cido pcrico al 1,5 %. Los numeramos: P O '75 patrn de 0,75. P 2 patrn de 2. P r problema. En el P r colocamos 0,8 cm. 3 dEi L. C. R. En el P O '75 colocamos 0,8 cm. 3 de glucosa al 0,75 %. .En el P 2 colocamos 0,8cm. 3 de glucosa al 2 %. Los 3 tubos los centrifugamos a 2.000 r.p.m., durante 5 minutos. Colocamos en 3 tubos de ensayo 0,4 cm. 3 de sosa al 20 % (cada uno de ellos numerados como los que hemos centrifugado). Sacamos de la centrfuga los tubos. Colocamos en cada uno de los tubos de ensayo 4 centmetros cbicos del centrifu- gado. As, en el P 0'75 colocaremos 4 cm. 3 de lo centrifugado en el tu- bo sealado con P O '75, haciendo lo mismo con los otros dos. Una vez hechas las mezclas, se hierven los tubos 60 segundos. Se dejan en- friar. Despus hacemos la Lectura Se hace con el fotocolormetro "Meteor", modo S. Se 'coloca el fil- tro azul. Tomamos un tubo de fotocolori- metra y lo llenamos de agua desti- lada. Llevamos la aguja a 100 en la es- cala de transmisin. Al introducir los tubos, tngase cuidado de limpiarlos exteriormen- te, para eliminar la grasa adherida por contacto de la mano. Esto po- dra darnos resultados falsos. Retiramos este tubo y colocamos las sustancias P O '75, P 2 Y Pro Lee- mos en la escala de transmisin lo que nos seala cada una de ellas en el aparato. Si el problema da un % de glu- cosa bajo, tomamos como patrn el de 0,75. Si es alto, tomamos como patrn el de 2. Clculo En glucosas normales o bajas: 0,75 por patrn ------- = grs. glucosa %, Problema Julio-Agosto 1959 ANALES DEMEDIClNA y ClRUGlA 265 Para glucosas altas: 2 por patrn , " - t Estos se hacen facilmente de tubos de ensayo de cristal blanco 10 X 75 = grs. glucosa, %0 milmetros. Los tlibos para los Problema Micrometro para la defermil,lacin de la glucosa cuantitativa en L. C. R. en el laboratorio Para habilitar una rpida valo- racin cuantItativa de la glucosa en lquidocfaloraqudeo, se ha empleado la siguiente adaptacin del mtodo de LEWIS' y BENEDICT l cido pcrico para glucosa. Bas- ta una sola muestr de 0'25 cm 3 de lquido para la determinacin. Los resultados se expresan como miligramos por ciento de glucosa y, usualmente no se diferencian de ros resultados obtenidos con 'el m- todo de FOLIN al ferrocianur sico en ms de 5 mgs. %. '. Reactivos . Solucin acuosa de picrato de so- dio al 1 %. Esta se prepara exenta del cido picrmico. Solucin acuosa de carbonato de sodio al 10 %. Esta y la anterior se guardan en frascos stock de des- age por gravedad, con cuentago- tas en la extremidad de los tubos. Solucin standard de glucos de 200 mgr. %. De esta solucin se ha- eri 10 diluciones adicionales de 10 a',100 mgr.%. Material Standards de standards permanentes y para la 'reaccin debern ser del mismo dimetro interior. Este puede me- dirse con un calibre o vertiendo agua en varios tubos con una pi- peta de 1 cm. 3 Las soluciones eolo- readas permanentes se hacen aa- diendo al tubo cantidades iguales de standards de glucosa y diluclo- nes, solucin al 10 % de carbona- to de sodio y solucin al 1 % de bicrato. El tubo se pone en agua hirviendo durante 8 minutos. Las 11 soluciones coloreadas, as prepa-. radas, se introducen con un cuenta- gotas en los tubos 10 X 75, estira- dos en punta, que luego se cierran a la llama. Con esto se tienen 11 standards' permanentes e.titre 10. Y 200 mgrs. % de glucosa, que pe- den ser guardados en un block comparador de madera.' Como tubos de reaccin se em- ple'an tubos de ensayo pirex 10 por 75 mm. Procedimiento Con una pipeta graduada de 1 cm. 3 , se ponen 0,25 cm. 3 de lqui- do cfaIoraqudeo en' un tubo de reaccin. Despus se aaden 0,25 cm. 3 de solucin de picrato de. so- dio al 1%, y una cantidad de solu- cin al 10 % de carbonato desodio. Un procedimiento a ?>lternar, que evita el empleo de pipetas, ,es cali- brar, los tubos de reaccin marcan- 266 ANALES DE MEDICINA Y Cll?UGIA Vol. XXXIX. - N.Q 154 do en ellos con un diamante una se- al a 0,25 cm. 3 , 0,50 cm. 3 y 0,75 cm. 3 El l.c.r. y las soluciones pue- den entonces aadirse 'con cuenta- gotas medicinales limpios. Agitar. Poner en agua hirviendo durante 8 minutos. Meter en el block compa- rador y comparar con los standards permanentes. Expresar los resul- tados como mm. % de glucosa. VARIACIONES DE LA GLUCOSA EN EL L1CUOR Una vez reseadas las principa- les tcnicas de determinacin de la glucorraquia, vamos a estudiar las variaciones que experimenta la glu- cosa en el liquor. N os referiremos exclusivamente a las determinaciones practicadas ~ lquiq.os extrados por puncin lumbar, ya qw; las observaciones de DUBOIS, DAILEY, DE W ALD y otros autores demuestran 'que no hay ninguna diferencia apreciable entre la glucorraquia ventricular y lumbar, excepto, como veremos ms adelante, en los casos de M. T. La glucosa en el l.c.r. se halla li- geramente aumentada en la polio- mielitis y algo ms en las diversas encefalitis. En los procesos menin- goencefalticos est disminuda de- bido a la alteracin menngea. Queremos insistir aqu en lo que hemos recalcado al principio de es- te trabajo, es o.ecir, considerar nor- mal en el nio hasta los 10 aos, la cifra de 70 a 90 mgr. por cien de glucosa. La hiperglucorraquia en lquidos que no presentan simultneamente otras modificaciones en su composi- cin (clulas, globulinas, etc.) no tienen, a nuestro juicio, ningn va- lor, sobre todo si el aumento de glucosa es debido a una hiperglu- cemia, que es, realidad, la causa de dicho aumento. De mayor importancia que la hi- perglucorraquia es la disminucin de glucosa en el liquor, ya que es uno de los datos de ms valor en las meningitis y muy particular- mente en la meningitis tuberculo- sa. En relacin con dicha enferme- dad,se han realizado trabajos muy interesantes, que demuestran que la relacin glucemia-glucorraquia en ayunas est muy aumentada en la M. T., debido a la intensa dismi- nucin en la glucosa del l.c.r., sien- do esta disminucin un dato de va- lor, no slo para el diagnstico de la M. T., sino tambin para seguir el curso de la enfermedad, ya que, segn estudios de DUBOIS y colabo- radores, que seguan el curso de las M. T. cada ocho das, se desprende que las recadas en el curso de la enfermedad iban precedidas de una glucorraquia manifiesta y las ~ joras, de un aumento de la glu- cosa del l.c.r. Dichos autores tambin estudia- ron en 1949 la relacin de la glu- cosa en los lquidos ventricular y lumbar, y observaron que las glu- corraquias lumbares eran en la M. T. ms bajas que lac;; ventricu- lares, siendo esta variacin ms pequea a medida que la enferme- Julio-Agosto 1959 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA 267 dad progresaba hacia la curacin. Por otra parte, parece que la di- sociacin es exclusiva de la gluco- sa, ya que las cifras de cloruros y urea no son afectadas por una di- sociacin del mismo orden. En uno de los nios afectos de M. T. se lleg, en un momento da- do, a una glucorraquia ventricular de 61 mgr. por 100 y una lumbar de O. Los cloruros eran, respectiva- mente, 7'12 y 6'65 gr. por litro. De todo ello se deduce el gran valor que la glucorraquia tiene en el estudio de las diversas enferme- dades del sistema, nervioso y, sobre todo, de la necesidad de practicar las determinaciones en la forma que hemos des'crito, as como de va- lorar de una manera totalmente distinta los datos en los nios de hasta diez aos de los que se obten- gan en enfermos por encima de es- ta edad. BIBLIOGRAFA BALTCH, A.: Inquiry into cavies of lowered spinal fluid sugar contento Jour. Lab. Clin. Med., 49, 882, 1957. CASTAIGNE: Sem. des. Hop., 26, 4.453-5B, 1950. DUBOIs, R.: Observations sur la glycorachie. Sch. Med. Woch., 32, 401. 1952. DUNGAN, W. T.: Low cerebrospinal fluid glocose associated with meningeal neo- plasia. Jour. of Pediatrics, 51, 186, 1957 GARRIDO, A.: La dosificacin de la glucosa en sangre por la decoloracin del ferro- cianuro potsico Mtodo de Hawkins. HUNT, S. A.: Enzyme test for the detection of glucose. 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