PRÁCTICA Nº 1

TEMA: “Generalidades”

OBJETIVO: Conocer el funcionamiento del laboratorio, sus equipos,

insumos e instalaciones así como las normas de bioseguridad.

FUNDAMENTOS DE LA PRÁCTICA:
Actualmente sabemos que los microorganismos patógenos se encuentran
en todas partes y la relación que existe con la enfermedad, depende de la
ruptura del crecimiento equilibrado de aquellos, por eso de la importancia
del estudio de la Microbiología.
Varios son los organismos microscópicos que se van a observar e identificar
(bacterias, hongos, levaduras, virus, protozoos y algas microscópicas), para
la consecución de este objetivo son necesarios varios equipos entre ellos:
microscopio, incubadoras, esterilizador, cámara de flujo laminar, además
pruebas de diagnóstico pruebas de ASTO, pruebas de PCR, pruebas de
VDRL, pruebas de MICROELISA, etc.

En el laboratorio de microbiología disponemos además de varios

implementos que son detallados a continuación:

 Frascos tapa rosca, que contienen los medios de cultivo en polvo para
preparar
 Cajas petri estériles, tienen la capacidad para 15 ml de medio de
cultivo aproximadamente, en el cual al ser sembrado crecen los
microorganismos, se incuba en posición invertida.
 Asas de inoculación, compuestas de mango y filamento de platino o
nicromo que terminan en aguja o aro calibrado para tomar volúmenes
de 0,01 y 0,001 ml.
Aplicadores de algodón estériles, que sirven para tomar
la muestra.
 Mechero Bunsen, encargado de suministrar la fuente de calor durante
las siembras, además de esterilizar las asas para transferir cultivos
vivos de un recipiente a otro.
  Placas portaobjetos y laminillas cubreobjetos, para llevar a cabo los
frotis y su observación microscópica.

MEDIDAS DE PREVENCIÓN Y BIOSEGURIDAD

En los procesos de diagnóstico microbiológico es necesario llevar una
disciplina de seguridad, observando las normas que para el efecto se han
determinado. La realización de procedimientos en el laboratorio expone al
personal a riesgos de tipo físico, químico y biológico, en todo caso todas las
muestras deben ser manejadas como material potencialmente infeccioso
por lo que se deben seguir las siguientes medidas de prevención:

• Precauciones Estándares o Universales: Lavado de manos;

en el lugar de trabajo no ingerir alimentos, no maquillarse, no fumar,
no beber, no manipular lentes de contacto, no ingresar prendas
personales, no pipetear con la boca; informarse de la toxicidad, riesgo
y antídoto de los reactivos. Tener siempre a la vista elementos de
seguridad como lavaojos, ducha, extintor, salida de emergencia.

• Uso de barreras o equipo de protección del personal: uso

de guantes, protección ocular y mascarilla, protección corporal con
mandil.

• Medios de eliminación de material contaminado: Los

desechos generados deben ser separados en tres tipos: Generales o
comunes (funda negra), Corto punzantes (recipiente plástico grueso
de boca ancha: jeringas, agujas, lancetas, tubos de vidrio rotos), e
 Infecciosos (funda roja: torundas, gasas, pruebas usadas); luego se
deben eliminar de acuerdo a las normas de bioseguridad vigentes.

Derrame accidental de una muestra.- Si se produjo salpicaduras de

muestras y reactivos deberá ser cubierto con papel u otro material
absorbente al que se le agrega un desinfectante líquido y se comunica al
responsable de laboratorio.

Que es un (AES)? Accidente de exposición a sangre o fluido corporal:

Se denomina a todo contacto con sangre o fluido corporal y que lleva
una solución de continuidad (pinchazo o herida cortante) o un contacto
con mucosas con la piel lesionada (eczema, excoriación, etc.) La
asistencia de un accidente de exposición a sangre o fluido corporal
permite definir:
- La víctima o personal de salud accidentado.
- El material causante del accidente.
- El procedimiento determinante del mismo.
- Sangre o fluido potencialmente contaminado.

Conducta frente a un (AES).- Avisar inmediatamente al responsable del

laboratorio, registrar la fecha, identificar el personal que participó y el
material biológico involucrado

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
La evolución de la ciencia ha permitido utilizar de diferente manera a
bacterias en beneficio del hombre, sin embrago muchos agentes que
forman parte de la flora normal pueden causar infecciones y para ello
tienen que superar las defensas externas del huésped y penetrar por vías
respiratorias, tubo digestivo, vías genitourinarias o a través de la piel.

No todos los microorganismos que penetran en el huésped causan infección

y enfermedad, en algunos casos colonizan el huésped permaneciendo
latentes hasta que las defensas del huésped disminuyan y puedan ejercer
una acción patógena.

El medico debe seleccionar con gran cuidado los métodos de laboratorio y

buscar la corroboración de un diagnostico etiológico en el lapso mas breve,
con el costo mas bajo posible y con el menor numero de molestias al
paciente. El laboratorio de microbiología debe ser un aliado en el cometido
diagnostico.

El éxito del diagnóstico acertado de cualquier enfermedad, depende de la

óptima obtención de la muestra, que permita el aislamiento del agente
infeccioso causante, la supervivencia y proliferación del mismo. La
identificación del microorganismo potencialmente patógeno debe
considerarse en el contexto del lugar de obtención y de la flora normal de
cada sitio en particular; los resultados deben correlacionarse con la
información clínica, para dar una interpretación significativa.
Métodos directos de diagnóstico:
• Microscopía de Frotis fresco
• Microscopía de Frotis con tinciones diferenciales
• Cultivo
• Identificación genética mediante biología molecular
Métodos indirectos de diagnóstico:
• Pruebas que valoran la reacción Antígeno (bacteria, virus) - Anticuerpo: Ej.
Técnicas simples: precipitación, aglutinación, fijación del complemento,
etc.
Técnicas con conjugados: Inmunofluorecencia (I-F)
Radioinmunoensayo (R.I.A)
Inmunoenzimoensayo (ELISA).

• Pruebas que valoran la inmunidad celular: Tuberculina, Histoplasmina,

Lepromina, etc.
• Efecto citopático de los microorganismos. Ej. Disminución de los CD4 por
el VIH; Coilocitos por infección del Papiloma virus en cérvix.

METODOS DE ESTERILIZACION:

Glutaraldehido

1. Métodos físicos.
• Esterilización por calor húmedo (autoclave).
• Esterilización por calor seco (estufas).
• Esterilización por radiación gamma.
2. Métodos químicos:
• Esterilización por óxido de etileno (Eto).
• Esterilización por ácido peracético.
• Esterilización por plasma de peróxido de hidrógeno.
• Esterilización por formaldehído y glutaraldehído.

TEMA DE CONSULTA:
Otros métodos de esterilización.
Efectividad del uso de las mascarillas en la prevención de la influenza
AH1N1

BIBLIOGRAFÍA
• Jawetz Ernest, Microbiología médica, 17ª edición en español, Manual
moderno, México, México 2002.
• Bailey & Scott, Diagnóstico microbiológico, 11ª edición, Editorial
Panamericana, Buenos Aires – Argentina, 2 004.
• Salazar Wilson, Guías de práctica de Laboratorio de Microbiología, Depart.
de publicaciones de la Facultad de Ciencias Médicas, Quito – Ecuador,
2007.
• Lynch, Raphael, Mellor, ET. AL., Métodos de laboratorio, Segunda edición,
Nueva editorial Interamericana, México - México, 1.972, 924, 925.
• Sanchez Carlos, Romero Fernando. Manual de Urianálisis. 1996. U. Central
p: 11-12
• http://books.google.com.ec/books?
vid=ISBN8466513760&id=WB3lngLAYjAC&pg=RA1-PA192&lpg=RA1-
PA192&ots=TrAt71pbCc&dq=laboratorio+de+microbiologia+microbiologi
a&sig=_jD5YfPjLSsdc46UXQD2JbcxGHk
• http://books.laboratorio+de+microbiologia+microbiologia&sig=uL9wA6g
Mr2b6FN7B1gOXH4loZx
• Harrison T, Principios de medicina interna, 17ª edición en español, Mc
Graw Hill interamericana editores, México D.F, 2009
• Gracia F, guía para el manejo de la exposición ocupacional del VHI, VHB Y
VHC y recomendaciones para profilaxis post-exposición, hallado en:, MSP
PANAMA, Edición 2002