Repblica Bolivariana de Venezuela Universidad del Zulia Facultad de Medicina Escuela de Bioanlisis Ctedra: Anlisis Instrumental

entri!u"aci#n

Esquema
1. Definicin de Centrifugacin 2. Principios Fsico-Qumicos Sedimentacin: Principio de Arqumedes Principio de Sto es !. Fuer"as que inter#ienen en e$ proceso Fuer"a Centrfuga Fuer"a Centrpeta Fuer"a Fricciona$ %. Componentes de $a Centrfuga &otor 'otor C(mara de )aco Contro$ de )e$ocidad* +iempo , +emperatura -. )aria.$es que afectan $a Centrifugacin 'asa , densidad de $a partcu$a Densidad de$ medio Ace$eracin de $a gra#edad Coeficiente de Difusin +iempo +emperatura Presin , )e$ocidad /. +ipos de Centrfuga Centrfugas simp$es Centrfuga de a$ta #e$ocidad 0$tracentrfugas 'icrfugas 1. +ipos de Centrifugacin Centrifugacin Ana$tica Centrifugacin Preparati#a: Diferencia$ , en gradiente de densidad 2. 3mportancia de $a Centrifugacin en $a separacin , an($isis de muestras.

1. Definicin de Centrifugacin
4s un m5todo por e$ cua$ se pueden separar s$idos de $quidos de diferente densidad mediante una centrifugadora* $a cua$ imprime a $a me"c$a un mo#imiento rotatorio con una fuer"a de ma,or intensidad que $a gra#edad* pro#ocando $a sedimentacin de$ s$ido o de $as partcu$as de ma,or densidad. 4ste es uno de $os principios en $os que se .asa $a densidad: +odas $as partcu$as* por poseer masa* se #en afectadas por cua$quier fuer"a 6origen de una ace$eracin7. 8a centrifugacin impone* gracias a $a ace$eracin centrfuga* un efecto parecido a$ gra#itaciona$: 8as partcu$as e9perimentan una ace$eracin que $as o.$iga a sedimentar. 8a centrifugacin puede di#idirse en primera instancia en dos grandes grupos: 8a preparati#a , $a ana$tica. 4n $a primera* se o.tienen grandes cantidades de$ materia$ que se desea estudiar* mientras que en $a segunda se procede a$ an($isis de $as macromo$5cu$as en una u$tracentrifugacin. 49isten di#ersos m5todos de centrifugacin , una e9tensa #ariedad de t5cnicas deri#adas de esta. 4$ o.:eti#o de $a centrifugacin es separar partcu$as de diferentes caractersticas. Para e$$o* se ap$ica un fuerte campo centrfugo* con $o cua$ $as partcu$as tender(n a desp$a"arse a tra#5s de$ medio en e$ que se encuentren con $a ace$eracin ;. ;<#e$ocidad angu$ar2 9 radio de giro. = otra formu$a es ;<#e$ocidad angu$ar > radio 2. Principios Fsico-Qumicos +odas $as partcu$as suspendidas en un $quido tienden a separarse espont(neamente* en funcin de$ tiempo de una manera natura$* por accin de un fenmeno $$amado sedimentacin* de.ido a $a gra#edad terrestre. 0n so$uto suspendido en un $quido por accin de $a gra#edad terrestre se separa , pasa a ocupar e$ fondo de$ recipiente que $a contiene* quedando e$ $quido en $a parte superior. - Principio de Arqumedes: es un principio fsico que afirma que un cuerpo tota$ o parcia$mente sumergido en un f$uido est(tico* ser( empu:ado con una fuer"a igua$ a$ peso de$ #o$umen de f$uido desp$a"ado por dic?o o.:eto. De este modo cuando un cuerpo est( sumergido en e$ f$uido se genera un empu:e ?idrost(tico resu$tante de $as presiones so.re $a superficie de$ cuerpo que act@a siempre ?acia arri.a a tra#5s de$ centro de gra#edad de$ cuerpo de$ f$uido desp$a"ado , de #a$or igua$ a$ peso de$ f$uido desp$a"ado. 4sta fuer"a se mide en AeBtons 6en e$ S37 , su ecuacin se descri.e como:

Donde f , s son respecti#amente $a densidad de$ f$uido , de$ s$ido sumergidoC V e$ #o$umen de$ cuerpo sumergidoC , g $a ace$eracin de $a gra#edad.

- Principio de Stokes A$gunos de $os principios .(sicos en $a teora de $a sedimentacin se deri#an de $a !e" de Stokes. Para simp$ificar e$ pro.$ema se sue$e considerar que $as partcu$as a ais$ar en Dio$oga son esferasC cuando 5stas se encuentran en un campo gra#itaciona$ , a$can"an una #e$ocidad constante* $a fuer"a neta so.re cada esfera es igua$ a $a fuer"a de resistencia que opone e$ $quido a su mo#imiento. 4n este caso particu$ar de #a #e" de Stokes se comprue.a qu5: - 8a #e$ocidad de sedimentacin de cada partcu$a es proporciona$ a su tamaEo* - 8a #e$ocidad de sedimentacin es proporciona$ a $a densidad de $a partcu$a , a $a de$ medio* - 8a #e$ocidad de sedimentacin es nu$a cuando am.as densidades se igua$an* - 8a #e$ocidad de sedimentacin disminu,e a$ aumentar $a #iscosidad de$ medio* , - 8a #e$ocidad de sedimentacin aumenta a$ aumentar e$ campo de fuer"a. Si $as partcu$as est(n ca,endo #ertica$mente en un f$uido #iscoso de.ido a su propio peso puede ca$cu$arse su #e$ocidad de cada o sedimentacin igua$ando $a fuer"a de friccin con $a fuer"a de gra#edad.

donde: Vs es $a #e$ocidad de cada de $as partcu$as 6#e$ocidad $mite7 g es $a ace$eracin de $a gra#edad* p es $a densidad de $as partcu$as , f es $a densidad de$ f$uido. $. Fuer%as que inter&ienen en e# proceso

Fuer%a centrfuga Es $a que tiende a a$e:ar $os o.:etos de$ centro de rotacin mediante $a #e$ocidad tangencia$* perpendicu$ar a$ radio* en un mo#imiento circu$ar.

8a fuer"a centrfuga es una de $as fuer"as ficticias que parecen actuar so.re un o.:eto cuando su mo#imiento se descri.e seg@n un sistema de referencia en rotacin. 8a fuer"a centrfuga surge cuando ana$i"amos e$ mo#imiento de un o.:eto desde un sistema de referencia no inercia$* o ace$erado* que descri.e un mo#imiento circu$ar uniforme. 8a fuer"a centrfuga ser( e$ producto de $a masa por $a ace$eracin centrfuga* en un sistema de referencia no inercial.

Fuer%a centrpeta Se $$ama as a $a fuer"a que tira de un o.:eto ?acia e$ centro de un camino circu$ar mientras que e$ o.:eto sigue dic?a tra,ectoria a una rapide" constante 6siendo $a rapide" $a magnitud de $a #e$ocidad7.

4$ t5rmino centripeta pro#iene de $as pa$a.ras $atinas centrum 6centro7 and petere 6dirigirse ?acia...7* , puede ser deri#ada a partir de $as $e,es descu.iertas por 3saac AeBton. 8a fuer"a centrpeta siempre act@a en forma perpendicu$ar a $a direccin de mo#imiento de$ cuerpo so.re e$ cua$ se ap$ica. 4n e$ caso de un o.:eto que se mue#e en tra,ectoria circu$ar con rapide" cam.iante* $a fuer"a neta so.re e$ cuerpo puede ser descompuesta en un componente perpendicu$ar que cam.ia $a direccin de$ mo#imiento , uno tangencia$* para$e$o a $a #e$ocidad.

Fuer%a fricciona# 8a fuer"a de friccin a #eces tam.i5n es conocida como resistencia a$ ro"amiento. 4sta es $a fuer"a fricciona$ que se genera en $a superficie de$ tu.o de ensa,o 6con una muestra7 causada por e$ mo#imiento de$ aire a$rededor de esta. 4s por e$$o que $as muestras en una centrfuga de.en estar en un tu.o de ensa,e grueso* , $iso 6$o mas esta.$e posi.$e7* porque si no estos se romperan. 4sto a,uda a minimi"ar $a fuer"a de friccin.

So.re una macromo$5cu$a en so$ucin* sometida a un campo de fuer"a centrfugo o gra#itatorio* act@an tres fuer"as: $a fuer"a de$ campo* e$ empu:e de$ so$#ente , $a fuer"a de friccin 6$as dos @$timas se oponen a $a primera7. '. Componentes de #a centrfuga 0na centrifuga es un dispositi#o para separar partcu$as en una so$ucin de acuerdo a su tamaEo* te9tura* densidad* #iscosidad de$ medio , #e$ocidad de$ rotor. Sus componentes son:

(otor Dispositi#o que gira , en e$ que se co$ocan $os tu.os.

49isten #arios tipos

) (otor *ascu#ante 8os tu.os se co$ocan en un dispositi#o 6cesti$$a7 que* a$ girar e$ rotor* se co$oca en disposicin perpendicu$ar a$ e:e de giro. As pues $os tu.os siempre giran situados perpendicu$armente a$ e:e de giro. )(otor de +ngu#o fi,o 8os tu.os se insertan en orificios en e$ interior de rotores maci"os. 4$ caso e9tremo es e$ de $os rotores #ertica$es en $os que e$ tu.o se sit@a para$e$o a$ e:e de giro. 4ste tipo de rotores es tpico de u$tracentrfugas , se emp$ea en separaciones de mo$5cu$as en gradientes de densidad autogenerados 6por e:. de c$oruro de cesio7. -otor 4s e$5ctrico , capa" de girar a docenas de mi$es de #eces por minuto. Permite que $a t5cnica sea e:ecutada. C+mara de .aco 4s una pie"a cnca#a que sir#e para contener dentro de e$$a e$ rotor , su respecti#o soporte que $o une o conecta con e$ motor. Contro# de .e#ocidad/ 0iempo " 0emperatura &egu$a $a #e$ocidad de$ dispositi#o a$ igua$ que e$ dispositi#o regu$ador de $a temperatura necesaria para $a centrifugacin de $as muestras. 1. .aria*#es que afectan #a Centrifugacin -asa " densidad de #a partcu#a

Son propiedades fsicas caractersticas que pueden afectar directamente $a centrifugacin. 8a masa es conocida como $a cantidad de materia contenida en un cuerpo o sustanciaC mientras que $a densidad es $a cantidad de masa contenida en un #o$umen determinado. Densidad de# medio

8os medios mu, densos o pocos densos afectan a $a centrifugacin. 8a sacarosa* si su concentracin aumenta* esto ?ace que aumente $a densidad de$ medio , $a #iscosidad de$ mismo. Si e$ medio es muc?o m(s denso afectara en $a determinacin de$ aumento de $a densidad de$ medio por $a sacarosa. Ace#eracin de #a gra&edad

Se re$aciona con $a fuer"a de atraccin de $a tierra so.re $os o.:etos. A$ aumentar $a gra#edad aumenta $a #e$ocidad. Coeficiente de Difusin

4s $a faci$idad con que cada so$uto en particu$ar se mue#e en un so$#ente determinado. 4sto depender( de $a consistencia de$ medio $quido. 0iempo

8a centrifugacin de.e ?acerse en e$ tiempo :usto* ,a que en e$ proceso se pierden e$ementos de gran importancia para e$ estudio. 0emperatura

D(sicamente $o mismo que en e$ tiempo. 4sto tam.i5n depender( de$ tipo de an($isis que se desea rea$i"ar.

Presin " .e#ocidad

8a presin #iene siendo $a re$acin que e9iste entre una fuer"a , $a superficie donde se ap$ica. 8a #e$ocidad* en cam.io* $a magnitud con $a que se cam.ia a posicin de un o.:eto. Am.as afectan a $a centrifugacin ,a que e$ aumento o disminucin de $as mismas pueden ?acer perder componente importantes de $o que se quiere ana$i"ar. 2. 0ipos de Centrfugas

Centrfugas de *a,a &e#ocidad/ de so*remesa o c#nicas 3simp#es4 PequeEo tamaEo. Sin refrigeracin. '(9ima #e$ocidad: -FFF rpm. Gti$ para partcu$as grandes 6c5$u$as* precipitados de sa$es inso$u.$esHetc.7 Centrfugas de a#ta &e#ocidad. )e$ocidad entre 12FFF , 2-FFF rpm. &efrigeradas* a$gunas con sistema de #aco. Gti$es en $a separacin de fracciones ce$u$ares. 3nsuficientes para $a separacin de ri.osomas* #irus o macromo$5cu$as. 5#tracentrfugas. )e$ocidad: a partir de -FFFF rpm. Presentan sistemas au9i$iares: sistemas de refrigeracin* sistemas de a$to #aco. 2 tipos: - Ana$ticas: o.tencin de datos precisos de propiedades de sedimentacin 6s* P'7. -Preparati#as: ais$amiento de partcu$as de .a:o S 6microsomas* #irus* macromo$5cu$as7. -icrfugas variante de las anteriores. )e$ocidades a$tas: m(s de 1FFFF rpm , tu.os cortos. )o$@menes mu, pequeEos. Gti$es en Dio$oga 'o$ecu$ar.

6. 0ipos de Centrifugacin Centrifugacin Ana#tica

Se pretende es estimar propiedades fsicas 6coeficiente de sedimentacin o peso mo$ecu$ar7 de a$guna partcu$a en concreto: sus propiedades ?idrodin(micas. Para poder ap$icar $a tecno$oga de $a centrifugacin ana$tica de.en cump$irse una serie de requisitos:

Que se ap$ique a sustancias $o m(s puras posi.$e* no a grandes me"c$as. Que presenten una ma,or capacidad de giro* en torno a $as 1FF.FFF r.p.m. 4n cuanto a$ tipo de rotores* se necesita que $as paredes de$ tu.o se encuentren a$ineadas con $as $neas de fuer"a , est5n pro#istos de sistemas pticos capaces de detectar $a sedimentacin de $a partcu$a en cada momento.

8as mo$5cu$as se o.ser#an en un sistema ptico durante $a centrifugacin* para detectar $as macromo$5cu$as en so$ucin a medida que se mue#en en e$ campo gra#itaciona$. 8as muestras se centrifugan en ce$das con #entanas que se disponen en e$ p$ano para$e$o a$ sentido de giro de$ rotor. A medida que e$ rotor gira* $as im(genes de $a ce$da* se pro,ectan en un sistema ptico so.re un fi$m o una computadora. 8a concentracin de $a so$ucin en #arios puntos en $a ce$da se determina por $a a.sorcin de $u" de $a $ongitud de onda apropiada. Centrifugacin Preparati&a Diferencia# " en gradiente de densidad 4$ o.:eti#o de $a centrifugacin preparati#a es ais$ar partcu$as especficas. 49isten dos m5todos de separacin Diferencia$ , 4n gradiente de densidad. en centrifugacin preparati#a:

Centrifugacin diferencia$: 4s e$ m5todo m(s com@n de separacin* , es rara $a purificacin en"im(tica que no $o uti$i"a. 4n este m5todo* e$ tu.o de centrfuga se $$ena con una me"c$a uniforme pro.$ema. +ras $a centrifugacin se o.tienen dos fracciones: un pe$$et que contiene e$ materia$ sedimentado , un so.renadante con e$ materia$ no sedimentado. 4$ m5todo es .astante inespecfico* , a priori no se puede sa.er si $a partcu$a .uscada quedar( en e$ so.renadante* en e$ pe$$et o repartido entre am.osC sin em.argo es una t5cnica mu, @ti$* so.re todo para ais$amiento de c5$u$as , org(nu$os su.ce$u$ares. Centrifugacin en gradiente de densidad: 4ste m5todo es a$go m(s comp$icado que $a centrifugacin diferencia$* sin em.argo presenta #enta:as que compensan e$ tra.a:o aEadido. 8a t5cnica no so$o permite $a separacin de #arios* si no todos* $os componentes de $a muestra* sino que tam.i5n permite rea$i"ar medidas ana$ticas. 4$ m5todo de gradiente de densidad imp$ica $a uti$i"acin de un soporte f#uido* cu,a densidad aumenta desde $a "ona superior a $a inferior. 4$ gradiente se consigue con un so$uto preferi.$emente de .a:a masa mo$ecu$ar en un so$#ente en e$ que $a muestra a ana$i"ar pueda ser suspendida. 8a muestra se sit@a en $a parte superior de$ gradiente como una fina .anda. 8a separacin de $os componentes de $a muestra se presenta como diferentes .andas o "onas. 49isten dos #ariaciones dentro de $a centrifugacin en gradiente de densidad:

- Centrifugacin %ona# 8a muestra a ana$i"ar se deposita en $a parte superior de un gradiente de densidad preformado. Da:o fuer"a centrfuga

$as partcu$as comen"ar(n a sedimentar a tra#5s de$ gradiente* mo#i5ndose cada partcu$a a diferentes #e$ocidades dependiendo de su masa. - Centrifugacin de equi#i*rio en gradiente o isopcnica Separa $as partcu$as con .ase en sus densidades diferentes* $a muestra puede ser cargada directamente so.re un gradiente de densidad preformado , $a centrifugacin $$e#ada a ca.o. 'ientras en $a centrifugacin "ona$ $a densidad de$ gradiente no de.e e9ceder a $a de $as partcu$as a separar* en $a centrifugacin de equi$i.rio en gradiente $a condicin fundamenta$ es que $a densidad m(9ima de$ gradiente fina$ de.e siempre e9ceder a $a densidad de $as partcu$as. 8a centrifugacin de equi$i.rio en gradiente permite que $as especies sedimentantes se mue#an por e$ gradiente ?asta que a$can"an un punto donde su densidad , $a de$ gradiente son id5nticas* por $o cua$ tam.i5n se $e $$ama centrifugacin isopcnica. 4n este punto no se producir( una sedimentacin posterior de.ido a que f$otan so.re un Ico$c?nI de materia$ que posee una densidad superior que $a su,a propia.

Centrifugacin %ona# Centrifugacin isopcnica Co#ocacin de #a Parte superior de un8a muestra se disue$#e en muestra gradiente de densidaduna so$ucin isocr(tica. preformado. Separacin en 'asa de $a partcu$a. Densidad de $a partcu$a. funcin de

7. 8mportancia de #a Centrifugacin en #a separacin " an+#isis de muestras. 8a centrifugacin es mu, importante en e$ (rea de $a sa$ud* especficamente es uti$i"ada para o.tener suero de sangre comp$eta , as o.tener de$ mismo resu$tados #eraces. 'uc?os de $os an($isis no necesitan de suero , pueden rea$i"arse sin necesidad de $a centrifugacin* pero en e$ caso de $os an($isis de ?ormonas* qumica sangunea* e$ectro$itos* inmuno$oga* sero$oga* entre otros* se uti$i"a 5sta t5cnica.

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