PRCTICA N 02 TEMA: MORFOLOGA BACTERIANA Y PRINCIPALES TINCIONES 1.

OBJETIVOS: Reconocer los diferentes tipos de estructuras bacterianas en sus tres grandes divisiones: Cocos, bacilos y espirilos Entender el fundamento de las tcnicas de Tincin: Gram, WirtzConklin, Hiss, Azul de metileno de Loeffler y Fontana. Tener la habilidad de diferenciar microscopicamente entre una bacteria gran positiva y una gram negativa. 2. FUNDAMENTACIN MORFOLOGA: .Desde el punto de vista microscpico, la diferencia ms importante entre las bacterias es su forma, existiendo tres tipos morfolgicos claramente distinguibles: Formas esfricas o cocos.- Son bacterias esfricas, presentando un dimetro medio de 0,6 a 1,0 m. La forma no siempre es exactamente esfrica, observndose como ms comunes las siguientes variaciones: Formas lanceoladas, grano de caf y cocobacilares (achatadas). Las diferencias entre los subtipos de cocos se basan en los agrupamientos celulares. Los cocos que se separan completamente despus de la divisin aparecen individualmente, y a esta forma se le llama coco. Cuando hay una ligera tendencia a que las clulas hijas permanezcan unidas y la divisin celular ocurre en un solo plano, los cocos se agrupan predominantemente en pares, llamados diplococos. Si la unin es ms marcada, se ven largas cadenas de cinco cocos o ms; estos agrupamientos se conocen como estreptococos. Cuando los cocos se dividen en varios planos, y hay una elevada tendencia a que permanezcan unidos, aparecen racimos irregulares de cocos, semejantes a racimos de uvas; estafilococos. Formas alargadas o bacilos.- Las diferencias en anchura, longitud y forma de los extremos de la clula proporcionan una considerable heterogeneidad a la forma bacilar. Aunque son hasta cierto punto caractersticos, los agrupamientos de clulas bacilares no tienen la misma importancia morfolgica que el agrupamiento de cocos.

Forma helicoidal o espirilos.- El tercer tipo morfolgico es la forma espirilar, que puede considerarse como un bacilo que se ha torcido adoptando la forma de hlice. Aunque la curvatura se observa ocasionalmente en muchas formas bacilares, en el gnero Vibrio es suficientemente constante como para tener importancia diferencial. Los vibrios pueden presentar una forma espirilar si las clulas permanecen unidas por sus extremos. Las verdaderas bacterias espirilares pueden ser de dos tipos: con espira rgida o con espiraflexible. Al conjunto de las formas espirilares flexibles se le conoce como espiroquetas.

TINCIONES: TINCIN DE GRAM: Es una coloracin diferencial que permite diferenciar a las bacterias en Gram positivas y Gram negativas, segn la estructura y composicin de la pared celular. En las Gram negativas, el peptidoglucano tiene una sola capa y las cadenas no estn entrelazadas; en las Gram positivas la mayora presenta muchas capas de peptidoglucano. TINCIN DE WIRTZ-CONKLIN: Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen formas de resistencia: Endosporas. Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables formndose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporognesis, la clula

vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio ptico como estructuras refringentes y de difcil tincin. TINCIN HISS: Mezclar 5 mL de solucin alcohlica satura de violeta de genciana en 95 mL de agua destilada. Sobre una lmina portaobjetos mezcle partes iguales del material a teir con suero especfico. Haga un frotis fino y djelo secar al aire. Fije la preparacin a la llama del mechero. Cubra el frotis con el colorante de Hiss. Proceda a pasar la llama del mechero por debajo de la lmina hasta que el colorante se caliente y empiece a emitir vapores. Esperar de 5 a 10 segundos. Lavar el colorante con solucin acuosa de sulfato de cobre al 20%. Dejar que la preparacin se seque al aire y examinar al microscopio. TINCIN DE AZUL DE LOEFFLER: es uno de los reactivos ms valiosos que se tienen para la tincin de bacterias. Es excelente para las bacterias del gnero Curto bacterium donde puede demostrar el perlado y los grnulos. En los bacilos esporulados (Bacillus), teidos con este reactivo, las esporas aparecen como cuerpos no teidos dentro de clulas azules. TINCIN FONTANA: Para la observacin se debe partir de cultivos jvenes (6-12 horas). Entre los reactivos tenemos mordiente de Rhodes y el AgNO3 amoniacal .Los cilios y flagelos se observan en el precipitado negro que ha depositado alrededor de la estructura. 3. MATERIALES Lminas preparadas con las diferentes bacterias Microscopios Material de bioseguridad

4. COLORANTES Y REACTIVOS T. Gram: Violeta, lugol, alcohol y safranina T. Wirtz-Conklin: Verde de malaquita y safranina T. Hiss: Cristal violeta y sulfato T. Azul de metileno de Loeffler: Azul de metileno de Loeffler T. Fontana: Rhodes y el AgNO3 amoniacal

5. TCNICA PARA LA T. DE GRAM a. Limpiar el portaobjetos con gasas y encender el mechero. Colocar una gota de solucin salina sobre el portaobjetos y luego esterilizar el asa bacteriolgica. b. Tomar una pequea muestra de la cepa y diluirla en el portaobjetos. Posteriormente esterilizar el asa. c. Fijar la muestra al calor flamendola en el mechero, cuidando no quemar la muestra 10 seg. Colocar el portaobjetos sobre un soporte. d. Cubrir la muestra con cristal violeta. Esperar que transcurra 10 segundos. Escurrir y enjuagar. e. Cubrir la muestra con solucin de lugol y esperar que transcurra 10 seg. Escurrir y enjuagar. f. Cubrir la muestra con alcohol cetona. Esperar que transcurran 10 segundos. Escurrir y enjuagar. g. Cubrir la muestra con safranina, y esperar que transcurra 10 seg. Escurrir y enjuagar. h. Dejar secar la muestra. Agregar una gota de aceite de inmersin y observar en el microscopio a 100x.

6. LMINAS