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UNIVERSIDAD DEL ATLNTICO FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA ASIGNATURA: BIOQUMICA-LABORATORIO- SEMESTRE III Profesor: Dra. Carmia L. Vargas Z.

PRACTIVA 1. TALLER TEORICO PRCTICO DE BIOSEGURIDAD SEMINARIO TALLER BIOSEGURIDAD: SALUD OCUPACIONAL Y SEGURIDAD

Definicin de salud ocupacional y seguridad Objetivo. Falla de seguridad en el laboratorio, Accidentes de trabajo o enfermedades profesionales: Causas Antecedentes Histricos de la salud ocupacional y seguridad en lugares de trabajo y en laboratorio, Qu periodos de la historia de la bioseguridad se distinguen Marco Legal en Colombia Agentes de riesgos: Definicin, causas, clasificacin Hablar de cada uno de los agentes de riesgos (qumicos, fsicos, biolgicos, ergonmicos, sicosociales, de seguridad industrial ): definicin, clasificacin, vas de absorcin, forma de actuacin. Normas generales de seguridad en el laboratorio

PRACTICA 2.

ESPECTROFOTOMETRIA

REACTIVOS: - Solucin rojo fenol 0,01 mg/ml, agua destilada. MATERIALES (por grupo): 7 tubos de ensayos de aprox. 15ml, pipetas pasteur plsticas, espectrofotmetro, 1-gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO: A)- Determinar el espectro de absorcin del rojo fenol: 1- Colocar 2 ml. de la solucin diluida de rojo fenol en la cubeta y medir la absorbancia en las siguientes longitudes de onda 415, 445, 460, 490, 520, 535, 550, 580, 610, 640 nm. Luego haga un grfico de las lecturas de las absorbancia vs. longitud de onda y determine la longitud de onda de mayor absorcin. Tambin se puede realizar directamente en el espectrofotmetro que contiene esa opcin B) Construccin de una curva patrn: 1- Seguir el protocolo abajo utilizando la solucin de rojo fenol 0.01 mg/ml
TUBO B 1 2 3 4 5 SOL. ROJO FENOL 0,01 mg/ml 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 Agua destilada (ml) 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 Absorvancia (------ nm) Concentracin

2- Leer las absorbencias de cada tubo en la longitud de onda seleccionada, utilizando el agua destilada como blanco de reaccin. Calibrar antes el espectrofotmetro. 3- Hacer el grfico absorbancia Vs. Concentracin del rojo fenol y analizar los resultados 4- Determinacin del factor de la curva C) Determinacin de la concentracin de una solucin problema o muestra 1- A una solucin problema o muestra dada por la profesora determine la absorbancia en la longitud de onda seleccionada y determine la concentracin de la muestra empleando el factor de la curva: Absorbancia de la muestra X factor de la curva = concentracin de la solucin problema o muestra.

GUIA DEL SEMINARIO INVESTIGATIVO


-Definicin de espectrofotometra, radiacin electromagntica, espectro electromagntico, clases de espectrofotometra, definicin, caractersticas, usos, funciones de cada una. Espectrofotmetro, definicin, Componentes de un espectrotmetro (fotocolormetro), definicin, funciones y usos de cada componente, definicin de absorbancia y transmitancia, Ley de Lamber Beer, determinacin de un espectro de absorcin, determinacin de una curva patrn, determinacin de la concentracin de una solucin problema. Procedimiento para realizar una curva patrn, interpretacin de la misma, Cmo determino una concentracin de una solucin desconocida?

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PRACTICA 3.

EXTRACCION

DE

SANGRE VENOSA Y SEPARACIN DE SUERO Y PLASMA

REACTIVOS: - Alcohol antisptico; -Solucin de EDTA 10%; MATERIALES (por grupo) 2-Jeringas desechables, torniquete, 2 tubos de ensayos de aprox. 5 ml de dimetro pequeo, 2 tubos de ensayos medianos o grandes de aprox. 10 ml, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado de aprox. 15 cm., centrfuga, 1 gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador PROCEDIMIENTO 1- Extraer aproximadamente 6 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar la mitad de la sangre extrada cuidadosamente en un tubo mediano conteniendo 50 microlitros (L) de EDTA, homogenizar, y la otra mitad en el otro tubo mediano y seco sin anticoagulante. 2- Homogenizar cuidadosamente el tubo con anticoagulante. 3- Dejar el tubo sin anticoagulante en reposo esperar formarse el coagulo despus Remover el coagulo mediante la varilla de alambre 4- Centrifugar los tubos por 5 minutos, separar el suero y el plasma respectivamente en tubos de ensayos por separado, anotar las observaciones GUIA PARA EL SEMINARIO INVESTIGATIVO Qu es la sangre?, constitucin, composicin qumica, estructura, Factores de coagulacin, Tiempo de coagulacin, mecanismo de coagulacin de la sangre, descrbalo. Anticoagulantes, definicin, clases, funciones, usos, los anticoagulantes ms usados para determinaciones bioqumicas en plasma. Diferencia entre suero y plasma Mecanismo de extraccin de sangre venosa. Que otros tipos de extracciones de sangre hay? Cuidados que se deben tener durante la extraccin de sangre. Procedimiento para obtener el suero y el plasma de una muestra de sangre Problemas relacionados con la extraccin de la sangre en pacientes especializados.

UNIVERSIDAD DEL ATLNTICO FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA ASIGNATURA: BIOQUMICA-LABORATORIO- SEMESTRE III Profesor: Dra. Carmia L. Vargas Z. PRACTICA 4. DETERMINACION DEL HEMATCRITO Y HEMOGLOBINA

REACTIVOS: - Alcohol antisptico; -Solucin de EDTA 10%; -solucin patrn de hemoglobina; - reactivo de color de hemoglobina MATERIALES (por grupo) 2-Jeringas desechables, torniquete, 3 tubos de ensayos de aprox. 5 ml de dimetro pequeo, 2 tubos de ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado de aprox. 15 cm. Hemocentrifuga, espectrofotmetro., 1 gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador PROCEDIMIENTO 1- Extraer 3 ml. sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla cuidadosamente en un tubo de ensayo mediano conteniendo 50 microlitros (L) de EDTA, homogenizar. 2- Llenar homogneamente 2 capilares, limpiar la superficie externa del capilar con papel higinico y sellar los capilares con plastilina blanca. 3- Homogenizar la sangre y alcuotar por duplicado 10 microlitros (L) de sangre total, colocar en tubos de ensayos limpio y seco separadamente. DETERMINACIN DEL HEMATCRITO 1- Centrifugar los capilares en la hemocentrifuga manteniendo el equilibrio. 2- Medir la longitud del plasma y de los glbulos rojos 3- Calcular el % del hematcrito. DETERMINACION DE LA HEMOGLOBINA 1- Alcuotar tambin, 10L de la solucin patrn de hemoglobina en un tubo de ensayo limpio y seco. 2- Aadir a las alcuotas (10L) de sangre total y patrn, 2,5 ml de reactivo de trabajo, homogenizar bien y reposar por 5 minutos. 3- Leer absorbancia en todos los tubos a 540nm, calibrando el equipo con el blanco reactivo (reactivo de color). 4- Calcular la concentracin de hemoglobina en todas las muestras. Discuta todos los resultados. GUIA PARA EL SEMINARIO INVESTIGATIVO Que es la hemoglobina?, estructura, funciones, propiedades fisicoqumicas, mecanismo de accin, clases de hemoglobina, Qu es el hematocrito?, importancia clnica de la determinacin del hematocrito y de la hemoglobina, procedimiento de determinacin, qu contiene el reactivo de trabajo para la determinacin de hemoglobina, fundamento del procedimiento, valores normales de los valores de hemoglobina en hombres, mujeres y nios. Valores normales del hematocrito en hombres, mujeres y nios. Enfermedades relacionadas con las alteraciones tanto altos como bajos de los valores de hemaglocina, asi como del hematocrito, hablar de cada alteracin o enfermedad. Con respecto a la anemia: Definicin, clasificacin, causa de cada clase, sntomas, diagnstico y tratamiento, consecuencias

UNIVERSIDAD DEL ATLNTICO FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA ASIGNATURA: BIOQUMICA-LABORATORIO- SEMESTRE III Profesor: Dra. Carmia L. Vargas Z. PRACTICA 5. DETERMINACION DE ENZIMAS EN SUERO

REACTIVOS: - Alcohol antisptico; - reactivo de trabajo presente en el kit para la determinacin de la enzima MATERIALES (por grupo) 2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubos de ensayos de aprox. 5 ml de dimetro pequeo, 2 tubos de ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado de aprox. 15 cm. Cronmetro, espectrofotmetro, 1 gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador PROCEDIMIENTO 1- Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en un tubo pequeo limpio y seco, reposar para coagular2- Remover el coagulo mediante la varilla de alambre 3- Centrifugar los tubos por 5 minutos, 4- Separar cuidadosamente el suero 5- Tener cuidado tener todos los reactivos de trabajo a temperatura ambiente 6- Pipetar en una cubeta 2 ml del reactivo de trabajo y 100 l de suero, mezclar e insertar la cubeta en el fotmetro, poner el cronmetro en marcha. 7- Al minuto medir la absorbancia, anotar la absorbancia inicial, continua anotando la absorbancia a los 2 minutos y a los 3 minutos. 8- Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio 9- Calcular la concentracin de la enzima en la muestra. NOTA: Las reacciones enzimticas se harn en orden, grupo por grupo. No mezclar los reactivos hasta cuando llegue el turno del grupo GUIA PARA EL SEMINARIO INVESTIGATIVO Enzimas: definicin, estructura, funciones, factores que influye en su accin, clasificacin, enzimas de importancia clnica, funciones y uso. Cmo se expresa la concentracin de una enzima?. Qu es la aspartato aminotransferasa y la alanin-aminotransferrasa?, Cmo se determina en suero?. Valores normales en hombres, mujeres y nios. Enfermedades o alteraciones metablicas que se encuentran implicadas estas enzimas, como influye la concentracin srica en estas alteraciones. Hablar de cada alteracin o enfermedad Cirrosis heptica: definicin, clasificacin, causa, diagnostico, sntomas, tratamiento, consecuencias

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REACTIVOS:- Alcohol antisptico; - reactivo de trabajo presente en el kit para la determinacin de la glucosa en suero MATERIALES (por grupo) 2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubos de ensayos de aprox. 5 ml de dimetro pequeo, 2 tubos de ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado de aprox. 15 cm. Cronmetro, espectrofotmetro, 1 gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador PROCEDIMIENTO 1- Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en un tubo pequeo limpio y seco, reposar para coagular2- Remover el coagulo mediante la varilla de alambre 3- Centrifugar los tubos por 5 minutos, 4- Despus de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero con coagulo 5- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente 6- Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero y colocar 20 microlitros de suero. 7- Otro tubo marcar como patrn (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la solucin patrn presente en el kit 8- A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo, agitar bien los tubos y dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 15 minutos. 9- Calibrar el espectrofotmetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer absorvancia en los tubos (muestras y patrn). 10- Determinar la concentracin de glucosa en las muestras GUIA PARA EL SEMINARIO INVESTIGATIVO Qu son los carbohidratos?, clasificacin Qu es la glucosa?, estructura, caracterstica fisicoqumicas, funciones, reacciones metablicas implicadas Importancia de la determinacin de glucosa en sangre. Mtodos utilizados para la determinacin cualitativa y cuantitativa de glucosa en materiales biolgicos, fundamento de cada mtodo Fundamento del mtodo utilizado en la prctica. Valores normales de referencia en hombres, mujeres y nios. Qu es la curva de tolerancia a la glucosa?, que se puede diagnosticar con esta prueba, importancia que tiene. Implicaciones metablicas relacionadas con concentraciones altas y baja de la glicemia. Hablar de esas alteraciones o enfermedades. Diabetes Mellitus: Definicin, clasificacin, causa, diagnostico, sntomas, tratamiento, consecuencias

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PRACTICA 7.

DETERMINACION DE COLESTEROL

REACTIVOS:- Alcohol antisptico; - reactivoS de trabajo presente en el kit para la determinacin deL glucosa en suero MATERIALES (por grupo) 2-Jeringas desechables, torniquete, 2- tubos de ensayos cnicos de aprox. 15 ml de dimetro para centrifugar la sangre, 2 tubos de ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado de aprox. 15 cm. Cronmetro, espectrofotmetro, 1 gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador PROCEDIMIENTO 1. Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en un tubo pequeo limpio y seco, reposar para coagular2. Remover el coagulo mediante la varilla de alambre 3. Centrifugar los tubos por 5 minutos, 4. Despus de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero 5. Separar el suero con cuidado y con ayuda de la pipeta pasteur, colocarlo en otro tubo cnico limpio y seco 6. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente 7. Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero para colesterol total y colocar 20 microlitros de suero. 8. Otro tubo marcar como patrn (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la solucin patrn presente en el kit 9. A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo ( para colesterol total), agitar bien los tubos y dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 15 minutos. 10. Calibrar el espectrofotmetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer absorvancia en los tubos (muestras y patrn). 11. Determinar la concentracin de colesterol total en suero en las muestras, mediante la siguiente reaccin: Absorbancia de la muestra x concentracin del patrn Absorbancia del patrn 12. Repetir el mismo procedimiento en otros tubos desde el item 6 para determinar Colesterol HDL GUIA DE ESTUDIO Y PARA EL INFORME Qu es el colesterol?, caracterstica, funciones, transporte en la sangre, que son las lipoprotenas, qu es el colesterol HDL?, reacciones metablicas implicadas del colesterol en el organismo Importancia de la determinacin de la concentracin del colesterol total y HDL en sangre. Mtodos utilizados para la determinacin cualitativa y cuantitativa del colesterol en materiales biolgicos. Fundamento del mtodo utilizado en la prctica. Valores normales de colesterol total y de HDL en hombres, mujeres y nios. Que se puede diagnosticar con esta prueba, importancia que tiene. Implicaciones metablicas relacionadas con concentraciones altas y baja de colesterol, hablar de esas alteraciones o enfermedades. Aterosclerosis: Definicin, clasificacin, causas, diagnostico, sntomas, consecuencias, tratamiento

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PRACTICA 8.

DETERMINACION DE TRIGLICRIDOS

REACTIVOS:- Alcohol antisptico; - reactivoS de trabajo presente en el kit para la determinacin deL glucosa en suero MATERIALES (por grupo) 2-Jeringas desechables, torniquete, 2- tubos de ensayos cnicos de aprox. 15 ml de dimetro para centrifugar la sangre, 2 tubos de ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado de aprox. 15 cm. Cronmetro, espectrofotmetro, 1 gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador PROCEDIMIENTO 1. Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en un tubo pequeo limpio y seco, reposar para coagular2. Remover el coagulo mediante la varilla de alambre 3. Centrifugar los tubos por 5 minutos, 4. Despus de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero 5. Separar el suero con cuidado y con ayuda de la pipeta pasteur, colocarlo en otro tubo cnico limpio y seco 6. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente 7. Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero para colesterol total y colocar 20 microlitros de suero. 8. Otro tubo marcar como patrn (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la solucin patrn presente en el kit 9. A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo ( para triglicridos), agitar bien los tubos y dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 15 minutos. 10. Calibrar el espectrofotmetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer absorvancia en los tubos (muestras y patrn). 11. Determinar la concentracin de colesterol total en suero en las muestras, mediante la siguiente reaccin: Absorbancia de la muestra x concentracin del patrn Absorbancia del patrn GUIA DE ESTUDIO Y PARA EL INFORME Qu son los lpidos?, clasificacin, funciones, clasificacin Qu son los triglicridos?, caracterstica, funciones, estructura, reacciones metablicas implicadas Importancia de la determinacin de la concentracin de triglicridos en sangre. Mtodos utilizados para la determinacin cualitativa y cuantitativa de triglicridos en materiales biolgicos. Fundamento del mtodo utilizado en la prctica. Valores normales de referencia en hombres, mujeres y nios. Que se puede diagnosticar con esta prueba, importancia que tiene. Implicaciones metablicas relacionadas con concentraciones altas y baja de triglicridos. Hablar de esas alteraciones o enfermedades. Lipoproteinemias: Definicin, clasificacin, causas, sntomas, diagnsticos, tratamiento, consecuencias

UNIVERSIDAD DEL ATLNTICO FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA ASIGNATURA: BIOQUMICA -LABORATORIO- SEMESTRE III Profesor: Dra. Carmia L. Vargas Z. PRACTICA 9. DETERMINACION DE PROTENAS TOTALES EN SUERO

REACTIVOS:- Alcohol antisptico; - reactivo de Biuret, patrn de protena. MATERIALES (por grupo) 2-Jeringas desechables, torniquete, 2- tubos de ensayos cnicos de aprox. 5 ml de dimetro pequeo, 2 tubos de ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado de aprox. 15 cm. Cronmetro, espectrofotmetro, 1 gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador PROCEDIMIENTO 1. Extraer 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en el tubo cnico limpio y seco, reposar para coagular2. Remover el coagulo mediante la varilla de alambre 3. Centrifugar los tubos por 5 minutos, 4. Despus de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco. 5. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente 6. Marcar dos tubos de ensayo con la muestra y colocar 30 microlitros de suero. 7. Realizar la curva patrn (solo el grupo responsable) por duplicado colocar 5, 10, 20, 30 y 40 microlitros de la solucin patrn de protenas, a cada tubo colocar el reactivo de Biuret teniendo cuidado que todos los tubos alcance a 2030 microlitros de volumen total. 8. A los tubos muestras colocar 2 ml de reactivo de Biuret mezclar homogneamente los tubos y dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 10 minutos. 9. Calibrar el espectrofotmetro a 545 nm con el blanco reactivo (Biuret) y leer absorbancia en los tubos (muestras y curva patrn). 10. Determinar el factor de la curva patrn (concentracin en cada duplicado expresadas en g o mg dividido por la media de las absorbancia) y de esta relacin de cada duplicado determinar la media total (factor de la curva) 11. Determinar la concentracin en cada muestra multiplicando Absorbancia de la muestra x factor de la curva; expresando los valores en g/dl muestra GUIA DE ESTUDIO PARA PREPARACION DEL SEMINARIO Y PARA EL QUIS Qu son las protenas?, propiedades, caractersticas, funciones, estructura, constitucin, clasificacin, protenas que se encuentran en el organismos, clasificacin de las protenas plasmticas, funciones que ejercen Mtodos que se utilizan para cuantificar las protenas, fundamento de cada mtodo, cual es el mas usado, importancia de determinar la concentracin de protenas en el suero o plasma, valores normales en hombres, mujeres y nios. Que alteraciones metablicas estn relacionados con valores altos o bajos de las concentraciones de protenas en suero o plasma. Desnutricin: Definicin, clasificacin, causas, diagnstico, sntomas, tratamiento, consecuencias.

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PRACTICA 10.

DETERMINACION DE CREATININA EN SUERO Y ORINA

REACTIVOS:- Alcohol antisptico; - , patrn de creatinina; reactivo de trabajo para creatinina MATERIALES (por grupo) 2-Jeringas desechables, torniquete, 2- tubos de ensayos cnicos de aprox. 5 ml de dimetro pequeo, 2 tubos de ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado de aprox. 15 cm. Cronmetro, espectrofotmetro, 1-gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador PROCEDIMIENTO 1- Extraer 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en el tubo cnico limpio y seco, reposar para coagular2- Remover el coagulo mediante la varilla de alambre 3- Centrifugar los tubos por 5 minutos, 4- Despus de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco. 5- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente 6- Marcar dos tubos de ensayo como muestra. 7- Colocar 2.0 ml de reactivo de trabajo 8- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra. 9- Leer absorvancia a 30 segundos y a 90 segundos 10- Hacer el mismo procedimiento para patrn (solo el grupo responsable) 11- Reste Absorbancia 2- absorvancia 1 12- Hacer los clculos como indica el inserto de la prctica (tcnica de Biosystems) 13- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrn (solo el grupo responsable)

GUIA DE ESTUDIO PARA PREPARACION DEL SEMINARIO Y PARA EL QUIS Definicin, estructura, propiedades, funciones, sntesis en el organismo, metabolismo Importancia clnica, valores de referencia en hombres, mujeres y nios, alteraciones metablicas en valores altos o bajos en el laboratorio. Mtodos de cuantificacin, fundamento del mtodo utilizado en el laboratorio. Investigar sobre la funcin renal: Que es el rin, estructura macroscpica y microscpica, funcin, enfermedades relacionada con la excrecin de la creatinina, como se diagnostica, causas, tratamiento, consecuencias

UNIVERSIDAD DEL ATLNTICO FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA ASIGNATURA: BIOQUMICA -LABORATORIO- SEMESTRE III Profesor: Dra. Carmia L. Vargas Z. PRACTICA 11. DETERMINACION DE ACIDO URICO EN SUERO

REACTIVOS:- Alcohol antisptico; - , patrn de cido rico; reactivo de trabajo para cido rico. MATERIALES (por grupo) 2-Jeringas desechables, torniquete, 2- tubos de ensayos cnicos de aprox. 5 ml de dimetro pequeo, 2 tubos de ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado de aprox. 15 cm. Cronmetro, espectrofotmetro, 1-gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador PROCEDIMIENTO 1- Extraer 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en el tubo cnico limpio y seco, reposar para coagular2- Remover el coagulo mediante la varilla de alambre 3- Centrifugar los tubos por 5 minutos, 4- Despus de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco. 5- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente 6- Marcar dos tubos de ensayo como muestra. 7- Colocar 2.0 ml de reactivo de trabajo 8- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra. 9- Leer absorbancia a 30 segundos y a 90 segundos 10- Reste medias de las absorbancia 2- media de las absorbancia 1 11- Hacer el mismo procedimiento para el patrn (solo el grupo responsable) 12- Hacer los clculos como indica el inserto de la prctica (tcnica de Biosystems) 13- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrn (solo el grupo responsable)

GUIA DE ESTUDIO PARA PREPARACION DEL SEMINARIO Y PARA EL QUIS Definicin, estructura, propiedades, funciones, sntesis en el organismo, metabolismo Importancia clnica, valores de referencia en hombres, mujeres y nios, alteraciones metablicas en valores altos o bajos en el laboratorio. Mtodos de cuantificacin, fundamento del mtodo utilizado en el laboratorio. Gota: Definicin, clasificacin, causas, sntomas, diagnostico, tratamiento, consecuencias.

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PRACTICA 12.

DETERMINACION DE REA EN SUERO

REACTIVOS:- Alcohol antisptico; - , patrn de Urea, reactivos de trabajo para Urea A y B. MATERIALES (por grupo) 2-Jeringas desechables, torniquete, 2- tubos de ensayos cnicos de aprox. 5 ml de dimetro pequeo, 2 tubos de ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plsticas, algodn, torniquete, pedazo de alambre delgado de aprox. 15 cm. Cronmetro, espectrofotmetro, 1-gradilla Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador PROCEDIMIENTO 1- Extraer 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en el tubo cnico limpio y seco, reposar para coagular2- Remover el coagulo mediante la varilla de alambre 3- Centrifugar los tubos por 5 minutos, 4- Despus de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco. 5- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estn a temperatura ambiente 6- Marcar dos tubos de ensayo como muestra. 7- Colocar 2.0 ml de reactivo A de trabajo 8- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra, homogenizar y dejar reposar por 10 minutos. 9- Adicione 2.0 ml de reactivo B de trabajo, homogenizar y dejar reposar por 10 minutos 10- Leer absorvancia a 600mn frente al blanco reativo 11- Hacer el mismo procedimiento para el patrn (olo el grupo rsponsable) 12- Hacer los clculos como indica el inserto de la prctica (tcnica de Biosystems) 13- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrn (solo el grupo responsable)

GUIA DE ESTUDIO PARA PREPARACION DEL SEMINARIO Y PARA EL QUIS Definicin, estructura, propiedades, funciones, sntesis en el organismo, metabolismo Importancia clnica, valores de referencia en hombres, mujeres y nios, Alteraciones metablicas en la sntesis de la urea. Alteraciones metablica relacionados con los valores altos o bajos en suero. Mtodos de cuantificacin, fundamento del mtodo utilizado en el laboratorio. Deficiencias de las enzimas del ciclo de la rea: Ornitina transcarbamoilasa, argininosuccinato sintetasa y liasa, deficiencia de arginasa. Definicin, causa, sntomas, diagnostico, tratamiento, consecuencias de cada una

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