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Estructura de Macromolculas. Dpto. de Qumica Fsica. Facultad de Ciencias.
Universidad de Granada
179
III.10. RMN BIDIMENSIONAL.

III.10.1 Introduccin.

A travs de sus mtodos multidimensionales la RMN se ha convertido en la tcnica
ms importante para resolucin de estructuras, estudios de dinmica y reacciones de los
biopolmeros en disolucin. Aunque los espectrmetros comerciales actualmente
disponibles incluyen automatizaciones avanzadas que facilitan el uso de un amplio
conjunto de diferentes experimentos y mejoran rpidamente, no es trivial seleccionar el
experimento mas adecuado al problema que queremos resolver y establecer los valores
ptimos de los numerosos parmetros experimentales y de procesamiento de datos. Por
otro lado tampoco es trivial la interpretacin rigurosa de los espectros. Por ello es
ineludible comprender en suficiente profundidad los fundamentos de la moderna FT-RMN
para usarla con la necesaria fiabilidad.
La descripcin de los experimentos de RMN bidimensional mediante un modelo
vectorial es bastante engorrosa y limitada, no pudindose explicar todos los aspectos de
estos mtodos. Afortunadamente el formalismo de los operadores producto con un diseo
preciso de las rutas de transferencia de coherencia, hoy plenamente desarrollado,
proporciona un marco terico de gran exactitud, simple y con la rigurosidad de la
Mecnica Cuntica. No obstante, la explicacin de este formalismo basado en el concepto
de matriz densidad desborda los lmites de lo que se pretende en esta asignatura; por ello
nos limitaremos a plantear conceptos generales y describir fenomenolgicamente algunos
experimentos bsicos.
El concepto de espectroscopia de RMN bidimensional fue propuesta por primera
vez por Jean Jeener en una Ampere International Summer School que tuvo lugar en
Basko Polje (antigua Yugoslavia) en 1971. Curiosamente la comunicacin de J eener nunca
fue publicada e incluso su propuesta no fue comprobada experimentalmente hasta 1975.
Los primeros experimentos fueron publicados por Aue, et al. (1976).
Andrew E. Derome en su ampliamente difundido libro Modern NMR Techniques
for Chemistry Research introduce la RMN bidimensional describiendo lo que el autor
califica como remarkably silly experiment pero idneo para ilustrar cualitativamente los
conceptos bsicos y facilitar la iniciacin a la RMN multidimensional. Adoptamos aqu el
mismo criterio considerando el espectro de
1
H de una muestra con una simple lnea
Estructura de Macromolculas. Dpto. de Qumica Fsica. Facultad de Ciencias. Universidad de Granada

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espectral, como podra ser una disolucin de cloroformo en disolvente deuterado, con una
diferencia respecto a la frecuencia del sistema de referencia de ejes rotatorios, O(Ver
Apndice del tema). El experimento, esquematizado en la Figura III.10.1 en la que solo se
destaca la magnetizacin transversal, consiste en dos pulsos de radio frecuencia de 90
separados por un intervalo de tiempo t
1
. El primer pulso pone la magnetizacin en el plano
XY y se crea coherencia de forma que una componente transversal neta de la
magnetizacin precesiona a la frecuencia angular O. Transcurrido un tiempo t
1
despus
del pulso esta componente transversal habr barrido un ngulo
1
t 2 O t radianes y la
magnetizacin transversal puede descomponerse en las componentes especificadas en la
Figura III.10.1. El segundo pulso rota la componente transversal al plano XZ de forma que
la componente cosenoidal o componente sobre el eje y aparece sobre el eje z en direccin
z, mientras que la componente senoidal se conserva. Despus de este segundo pulso
comienza la adquisicin de los datos que describen la atenuacin libre de la induccin
magntica (FID) como una funcin de la variable temporal t
2
. Si realizamos una serie de
experimentos en los que se repite la adquisicin de la FID durante el tiempo t
2
, para
valores discretos del tiempo t
1
distribuidos a intervalos regulares desde cero hasta un cierto
valor para el cual prcticamente desaparece toda coherencia creada con el primer pulso,
tendremos un conjunto de datos que corresponderan a una cierta funcin de dos variables
temporales independientes, S(t
1
, t
2
); es decir, una superficie cuyas intersecciones con
planos perpendiculares al plano t
1
-t
2
y paralelos al eje t
2
seran las FIDs de amplitud
modulada, y paralelos al eje t
1
seran oscilaciones peridicas exponencialmente atenuadas,
llamadas interferogramas, completamente anlogas a las FIDs, Figura III.10.2-A. La
transformacin de Fourier (T.F.) del juego completo de datos para pasar del dominio de la
variable t
2
al

dominio de la frecuencia F
2
, da lugar a un conjunto de espectros con un pico
simple a la frecuencia relativa O; pero cuya amplitud estar modulada por la funcin
peridica ) t 2 ( Msen
1
O t , que a su vez se atena exponencialmente con el tiempo de
relajacin T
2
, S(t
1
, F
2
) en la Figura III.10.2-B. Una segunda T.F. para pasar del dominio de
la variable t
1
al

dominio de la frecuencia F
1
produce un pico bidimensional centrado en
(O,O), Figura III.10.2-C.

181

Figura III.10.1: Evolucin de la magnetizacin transversal correspondiente a una
muestra con una simple lnea espectral durante una secuencia de pulsos:

x
2
|
.
|
\
| t
------ t
1
------
x
2
|
.
|
\
| t
----- t
2
(adquisicin)----

x
z
y
x
z
y
x
z
y
z
x
y
M
0

X
|
.
|
\
|
2
t
X
|
.
|
\
|
2
t
1
t
2
t
x
-x
y
-y
2
1
0
T
t
e M M
=
1
2 t O t
) 2 cos(
1
t M O t
) 2 (
1
t sen M O t

182

Figura III.10.2: A: Conjunto de datos S(t
1
,t
2
) obtenidos al digitalizar las FIDs en el
dominio de la variable t
2
para valores discretos regularmente separados de la variable
t
1
. B: S(t
1
,F
2
), espectros obtenidos por FFT en el dominio t
2
cuyas amplitudes estn
moduladas en el dominio t
1
. C: S(F
1
,F
2
), espectro bidimensional obtenido por doble FFT
de S(t
1
,t
2
) y mapa de contornos del espectro bidimensional.
A
S(t
1
, t
2
)
t
1

t
1

t
2

t
2

S(t
1
, f
2
)
B
t
1

f
2

t
1

f1
f2
C

f1
f2
O
O
S(f
1
, f
2
)

FFT sobre la dimensin t
2

FFT sobre la dimensin t
1

Interferograma
) t 2 ( Msen
1
O t
183
La representacin usualmente adoptada para el anlisis de los espectros
bidimensionales es la de un mapa de contornos en el que los picos estn representados por
curvas de nivel, y el significado de los ejes ortogonales del plano dependen del tipo de
espectro, como veremos posteriormente. En la Figura III.10.2-D se muestran los elementos
esenciales del caso considerado; el eje horizontal representa la frecuencia F
2
(la escala
normalmente va de derecha a izquierda), el eje vertical la frecuencia F
1
(la escala
normalmente va de arriba abajo), con lo cual existe una diagonal (valores de frecuencia
idnticos de cada eje) desde el vrtice superior derecho al inferior izquierdo sobre la que se
proyecta el espectro monodimensional; en este caso las curvas de contorno del pico estn
centradas sobre la diagonal en (O ,O ). El experimento que acabamos de describir no
representa ninguna aportacin relevante en relacin con un buen espectro
monodimensional; la causa de su poca utilidad radica en que la frecuencia de precesin de
la magnetizacin y la frecuencia de modulacin de la FID es la misma; la utilidad de la
RMN-2D se pone claramente de manifiesto cuando los picos se corresponden con
diferentes frecuencias en cada eje, es decir cuando aparecen fuera de la diagonal.

III.10.2. Esquemas experimentales para las tcnicas de RMN-2D.

El trmino RMN-2D abarca un amplio conjunto de tcnicas que tienen en comn el
uso de secuencias especficas de pulsos de radiofrecuencia para manipular la evolucin de
la magnetizacin de una muestra, modificando el Hamiltoniano del sistema en cada
periodo delimitado por los pulsos de la secuencia.
El esquema general para un experimento de RMN-2D puede considerarse formado
por cuatro periodos de tiempo o bloques a los que llamamos preparacin, evolucin,
mezcla y deteccin, figura III.10.3.
El periodo de preparacin, t
p
, es un tiempo de retardo cuyo propsito es asegurar
que la magnetizacin de equilibrio se ha restablecido antes de repetir la secuencia de
pulsos en el proceso acumulativo que usualmente se realiza para mejorar la relacin
seal/ruido. Este periodo termina con la aplicacin de uno o ms pulsos para crear
coherencia. El periodo de evolucin, t
1
, que sigue al de preparacin corresponde a la 2
dimensin de los espectros bidimensionales; durante este periodo la coherencia evoluciona
hasta alcanzar un estado que depende del valor t
1
.

184

Figura III.10.3: Esquema experimental general para los experimentos de RMN-
2D. Ejemplo del NOESY.

El periodo de mezcla, t
m
, incluye uno o varios pulsos de radiofrecuencia y tiempos
de retardo; este periodo se disea con el propsito de transferir coherencia entre espines.
Durante el periodo de deteccin, t
2
, el sistema evoluciona y se registra la FID cuya T.F.
generar la dimensin F2 del espectro bidimensional. En un experimento completo los
tiempos de preparacin, mezcla y deteccin son fijos en cada medida, mientras que el
tiempo de evolucin se incrementa a intervalos regulares entre medidas. En los espectros
bidimensionales obtenidos por doble T.F. del juego de datos S(t
1
, t
2
), las frecuencias de
precesin durante t
1
y t
2
determinan las coordenadas de los picos. El espectro de RMN-2D
es por consiguiente una representacin de los procesos de transferencia de coherencia,
donde cada uno de los picos aparece a las frecuencias caractersticas de las coherencias
interconectadas, la intensidad de los picos est determinada por la eficacia del proceso de
transferencia que, a su vez, depende de factores estructurales y dinmicos de las molculas
bajo estudio.
Con diferentes configuraciones de los cuatro periodos descritos se disea un amplio
conjunto de espectros 2D, cada uno optimizado para obtener un determinado tipo de
informacin y resolver diferentes tipos de problemas. La diversidad de experimentos de
RMN-2D es consecuencia de la variedad de procesos de transferencia de coherencia. Los
experimentos ms ampliamente usados responden a procesos de correlacin que, de forma
Preparacin Evolucin Mezcla Deteccin
t
1
t
m
t
2

t
p

H
m
H
p

H
e

H
d

90 90
NOESY
t
1
t
m

90
185
genrica, podemos clasificar en tres tipos: 1) correlacin a travs de acoplamientos
homonucleares, 2) correlacin a travs de acoplamientos heteronucleares y 3) correlacin a
travs del Efecto Nuclear Overhauser. A continuacin describimos algunos de los
experimentos bsicos de la espectroscopia que se utilizan con mas frecuencia y que solo
representan un reducido nmero de las muchas secuencias de pulsos que resultan en
experimentos tiles.
Otro importante concepto en RMN, tanto 1D como 2D, es el Ciclado de fases. En
un ciclado de fases una secuencia de pulsos se repite, variando de forma sistemtica las
fases de los pulsos de excitacin y la fase del detector, mientras que el resto de parmetros
permanece invariable; para cada incremento de t
1
se suman todos los FIDs. El propsito de
este proceso es eliminar seales artefactuales no deseadas que provienen de imperfecciones
instrumentales, de transferencia de magnetizacin longitudinal a transversal como
consecuencia de los mltiples pulsos (picos axiales), etc. Estos ciclados de fase solamente
son tiles cuando los artefactos se cancelan mientras que las seales deseadas se acumulan.

III.10.3 Los experimentos bidimensionales de correlacin escalar: COSY
(COrrelated SpectroscopY) y TOCSY (TOtal Correlation SpectroscopY).

COSY: Fue el primer experimento de RMN-2D propuesto por el fsico belga Jean
Jeener en el ao 1971. Es uno de los ms simples y tiles experimentos bidimensionales.
El esquema de la secuencia de pulsos se muestra en la Figura III.10.4; un primer pulso no
selectivo de radiofrecuencia de 90 crea magnetizacin transversal, despus del tiempo de
evolucin variable t
1
, un segundo pulso mezcla los estados de los espines transfiriendo
magnetizacin entre espines acoplados; el periodo de deteccin comienza inmediatamente
a continuacin del segundo pulso; coincide por consiguiente con el experimento que hemos
descrito para introducir la RMN-2D. Es uno de los experimentos mas cortos, en un
espectrmetro convencional necesita un mnimo de 4 pasos para el ciclado de fases pero en
un espectrmetro dotado de gradientes se reduce a un solo paso; un experimento COSY
puede realizarse as en pocos minutos (5-10 min.)
El espectro COSY presenta, adems de los picos sobre la diagonal, picos fuera de la
diagonal y distribuidos simtricamente respecto a sta, conocidos como picos de cruce, que
son consecuencia de la transferencia de coherencia entre espines acoplados escalarmente.

186

Figura III.10.4: Esquema de pulsos de un experimento tipo COSY.

En los espectros monodimensionales, bajo circunstancias normales, todos los picos
tienen la misma fase y podemos ajustarla para que todos aparezcan en modo de pura
absorcin; sin embargo mediante el formalismo de los operadores producto puede
demostrarse fcilmente que las fases de los picos de la diagonal y de los picos de cruce del
COSY deben siempre diferir en 90. La consecuencia inmediata es que ambos picos tienen
formas distintas y disponemos de dos opciones, ajustar la fase para que los picos de cruce
aparezcan en modo absorcin y los picos de la diagonal en dispersin, o viceversa. Dado
que los picos de cruce son los ms informativos lo usual es optar por la primera opcin.
As la forma que presentan los dos tipos de picos se muestra en la Figura III.10.5 en una
representacin pseudo 3D y como mapa de contornos. En sus comienzos y para
experimentos de rutina los espectros COSY se representan en modo de valor absoluto
suprimiendo la informacin asociada a los signos deliberadamente; para un anlisis
detallado del espectro es aconsejable preservar esta informacin y cuando as se hace se
usa el trmino COSY sensible a la fase.
Para ilustrar estas caractersticas consideremos el esquema del espectro COSY
sensible a la fase para un sistema de dos espines, dbilmente acoplados; que se muestra en
la Figura III.10.6. Transiciones dentro del mismo multiplete, a las que llamaremos
paralelas, no producen desplazamiento de fase; las transiciones entre multipletes, a las que
llamaremos conectadas, producen desplazamientos de fase de 90 . Una vez ajustada la
fase, los picos de cruce, que provienen de las transiciones conectadas, forman dos pares de
picos de signo contrario en los vrtices de un cuadrado que llamamos multiplete en
antifase. Los picos sobre o cerca de la diagonal, que provienen de magnetizacin no
90
90
COSY
t
e

t
2

187
A
B
transferida o de transiciones paralelas, tienen la forma dispersiva indicada en la Figura
III.10.5-B.

El propsito que generalmente se persigue con un COSY sensible a la fase es medir
las constantes de acoplamiento directamente de los picos de cruce. En molculas muy
complejas donde se solapan fuertemente los picos, esta tarea no es fcil; especialmente en
aquellos picos de cruce que estn cerca de la diagonal, pues dado el carcter dispersivo de
los picos en la diagonal sus extendidas colas hacen muy difcil observar tales picos. Otro
problema importante es la cancelacin mutua de picos cuando su anchura es del mismo
orden de magnitud que las constantes de acoplamiento; esto ocurre tanto en seales en fase
como en seales antifase, aunque es mucho ms marcada en el segundo caso. Si la anchura
de lnea es suficientemente grande la cancelacin incrementa aparentemente la separacin
entre lneas espectrales y puede disminuir la amplitud de los picos de cruce hasta
confundirlos con el ruido. En general hay una gran diferencia de intensidades entre las
seales de la diagonal y de los picos de cruce.

Figura III.10.5: A: Pico en modo absorcin; perspectiva 3D a la izquierda y
mapa de contorno a la derecha. B: Pico en modo dispersin; perspectiva 3D a la
izquierda y mapa de contorno a la derecha donde las lneas de trazo discontinuo
corresponden a valores negativos.

188

Figura III.10.6: A: Esquema de un espectro COSY sensible a la fase de un sistema de dos
espines IS acoplados, con los picos de la diagonal en modo dispersin y los picos de cruce en
modo absorcin. Los circulos rellenos y huecos representan picos positivos y negativos,
respectivamente. Los dobletes en modo dispersin de los picos de la diagonal estan representados
por los triangulos rellenos y huecos. B: Esquema de una seccin transversal, paralela al eje F
2

mostrando un doblete sobre la diagonal (Izquierda) en modo dispersin y un doblete de un pico
de cruce en modo absorcin(derecha).C: Estructuras multiplete de los picos de cruce de los
sistemas de espn de
1
H AX, AMX, A
3
X, y A
3
MX. Los crculos rellenos representan seales
positivas y los crculos huecos seales negativas. El rea de los crculos es proporcional a la
intensidad de los picos. Los acoplamientos se indican con corchetes (Figura extraida del libro
NMR of Proteins and Nucleic Acids de Kart Wthrich. Ed. John Wiley & Sons).
A
B
C
189

Figura III.10.6_2. Espectro
1
H COSY de una disolucin en D
2
O del inhibidor K de
proteasa, a una concentracin 0.01M, pD = 3.4 y 25 C. Representacin de espectros
apilados (Figura extraida del libro NMR of Proteins and Nucleic Acids de Kart
Wthrich. Ed. John Wiley & Sons).


190
COSY con filtro de doble cuanto o DQF-COSY: Es una variante del COSY que
se caracteriza por presentar tanto los picos de cruce como los de la diagonal en forma de
absorcin en antifase, eliminando de esta forma el inconveniente derivado de las colas
dispersivas y disminuyendo la diferencia de intensidad entre los dos tipos de seales. La
secuencia de pulsos para el DQF-COSY est esquematizada en la Figura III.10.7, donde
apreciamos que un tercer pulso sigue inmediatamente a la secuencia convencional despus
de un pequeo (pocos s ) retardo.

El DQF-COSY es una tcnica sensible a la fase. La secuencia de pulsos crea
momentneamente coherencia de doble cuanto y la transforma en coherencia observable de
simple cuanto con el ltimo pulso. Un ciclado de fases de 8 pasos cancela la magnetizacin
que no sigue la ruta adecuada, no obstante si el espectrmetro dispone de gradientes solo
ser necesaria una etapa.

TOCSY: Es la abreviatura de TOtal Correlation SpectroscopY. El TOCSY con
bloqueo anisotrpico de espines se llam inicialmente experimento HOHAHA,
abreviatura de HOmonuclear HArtmann HAhn; hoy TOCSY y HOHAHA se usan como
sinnimos (Braunschweiter & Ernst, 1983; Bax & Davies, 1985).
La principal aplicacin del TOCSY, como la del COSY y sus variantes, es la
asignacin de protones en molculas orgnicas y/o biopolmeros; sin embargo los
mecanismos de transferencia de coherencia en uno y otro caso son completamente
90 90
DQF-COSY
t
1

t

90
Figura III.10.7: Secuencia de pulsos para COSY con filtro de doble cuanto
(DQF-COSY).
191
diferentes y el primero presenta ventajas respecto al segundo, especialmente porque
consigue la transferencia de coherencia homonuclear en fase de todo un sistema de espines,
facilitando notablemente la asignacin de seales que provienen de un mismo sistema de
espines.
La secuencia de pulsos comienza, como en otros experimentos bidimensionales,
con un pulso de 90 para crear magnetizacin transversal que evoluciona durante el tiempo
variable t
1
. Como en los otros experimentos entre el periodo de evolucin y el periodo de
deteccin hay un periodo de mezcla para transferir coherencia, pero en este caso consiste
en un tren de pulsos formando una serie repetitiva de pulsos de elevada potencia con
determinadas longitudes y fases (MLEV-17,WALTZ16, DIPSI-2), ver Figura III.10.8.

Figura III.10.8: Secuencia de pulsos para TOCSY/HOHAHA con un tren de
pulsos.

El objetivo principal de este tren de pulsos es convertir un sistema de espines dbilmente
acoplados en un sistema de espines fuertemente acoplados, situacin que se conoce por bloqueo
de espines. Bajo estas condiciones las diferencias en los desplazamientos qumicos se hacen
insignificantes, el acoplamiento escalar domina el proceso y la coherencia de un espn est en
resonancia con la de los otros espines del sistema (incluso con aquellos que no estn
directamente acoplados) y la magnetizacin se comporta como la de un sistema de espines
fuertemente acoplados que evoluciona como un espn colectivo. Hay dos tipos de bloqueo de
espn, isotropico y anisotropico. El bloqueo de espn isotropico (WALTZ o MLEV16) permite
transferir todos los componentes de la magnetizacin, as para un sistema de dos espines 1 y 2 las
transferencias posibles son:
Z 2 Z 1 Y 2 Y 1 X 2 X 1
I I ; I I ; I I . Ernst y Braunschweiter
90
TOCSY/HOHAHA
t
1

Secuencia de
bloqueo de espines
t
2


192
demostraron que es posible conseguir que toda la magnetizacin de un espn se convierta
peridicamente en magnetizacin de un segundo espn, si ambos estn escalarmente acoplados y
bajo condiciones de mezcla isotropica, de ah el nombre que recibe este experimento; en sistemas
reales con ms de dos espines acoplados la transferencia completa no es posible y la
magnetizacin se distribuye por todo el sistema de espines. Como al final del periodo de
evolucin hay componentes de la magnetizacin en modo de absorcin y en modo dispersin,
esta modalidad de bloqueo de espines incluye importantes contribuciones dispersivas. Como
consecuencia, actualmente slo se utilizan secuencias de bloqueo anisotropicas (MLEV-17,
DIPSI) que slo transfieren una componente transversal y la componente Z, as para un sistema
de dos espines, por ejemplo:
Z 2 Z 1 X 2 X 1
I I ; I I . Los picos de cruzamiento presentan una
alta proporcin del modo absorcin aunque con una contribucin pequea del modo dispersin.

III.10.4 Los experimentos bidimensionales de correlacin dipolar: NOESY
(Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY) y ROESY (Rotating frame Overhauser
Effect SpectroscopY).
Espectroscopa de efecto nuclear Overhauser, NOESY:
Como su propio nombre indica esta tcnica de RMN est basada en el efecto NOE
anteriormente explicado, es decir, se fundamenta en procesos de relajacin a travs de
interaccin dipolar directa de los espines nucleares (Macura & Ernst, 1980). J uega un
papel muy importante en la determinacin de estructuras tridimensionales por RMN
porque en este tipo de experimentos se obtiene informacin acerca de las distancias entre
protones prximos en el espacio (Neuhaus & Wilianson, 1989). La secuencia de pulsos
bsica consiste en tres pulsos de 90 y est incluida en la Figura III.10.3. El proceso puede
describirse cualitativamente mediante un sencillo modelo vectorial, esquematizado en la
Figura III.10.9 para un sistema con tres espines I, J y K con diferentes desplazamientos
qumicos y con acoplamiento dipolar directo (a travs del espacio). El primer pulso de 90
convierte la magnetizacin longitudinal de equilibrio M
0
en magnetizacin transversal
sobre el eje Y. Durante el tiempo de evolucin cada espn precesiona a su frecuencia de
Larmor (su offset en el sistema de coordenadas giratorio), as el segundo pulso de 90, al
final del periodo de evolucin, generar magnetizacin longitudinal diferente para cada
espn, en proporcin a la correspondiente componente sobre el eje Y en el instante de
aplicar el pulso. La poblacin de estados justo despus del pulso ser diferente de la
193
distribucin de Boltzmann de equilibrio, as, durante el periodo de mezcla el sistema
sufrir un doble proceso de relajacin por interaccin con el entorno y por interaccin
dipolar directa con otros ncleos cercanos; este ltimo, que es el fundamento del NOE,
recibe el nombre de relajacin cruzada. El tiempo de mezcla concluye con el tercer pulso
de 90 que convierte la magnetizacin longitudinal existente en el momento de aplicar este
ltimo pulso en magnetizacin transversal observable.

X
|
.
|
\
|
2
t

1
t
x
z
y
x
z
y
M
0

x
z
y
K
J
I
X
|
.
|
\
|
2
t

m
t
Relajacin
cruzada
X
|
.
|
\
|
2
t

x
z
y
M
z
x
y
y
z
x
J
K
I
Figura III.10.9: Representacin vectorial del comportamiento de un sistema de
tres espines I, J y K con interaccin dipolar mutua en el sistema de coordenadas
giratorio. En el esquema superior-derecha, por simplicidad, solamente se han dibujado
las proyecciones sobre el plano XY de los vectores magnetizacin individuales y en el
esquema inferior-derecha solamente se han dibujado las componentes longitudinales que
aparecen al girar 90 sobre el eje X las proyecciones de los vectores magnetizacin
individuales sobre el eje Y.

194
La intensidad de la seal asociada a un ncleo I que experimenta un proceso de
relajacin cruzada con otro ncleo S estar modulada por los cambios en la magnetizacin
longitudinal de este ltimo. Por consiguiente, la intensidad del pico a la frecuencia
I
e (dominio temporal t
2
) en funcin del tiempo de evolucin t
1
presentar una amplitud
modulada a la frecuencia
S
e , y existir un pico de cruzamiento a las frecuencias (
I
e ,
S
e )
en el espectro bidimensional. El volumen de este pico proporciona informacin cuantitativa
sobre la velocidad del proceso de relajacin cruzada de la que se puede deducir
informacin sobre la distancia que separa ambos ncleos. La secuencia de pulsos en
NOESY produce coherencias que no estn relacionadas directamente con el efecto NOE y
la discriminacin ha de realizarse con un ciclado de fases adecuado. Desafortunadamente
la transicin de cuanto cero en COSY comparte la misma ruta de coherencia y no es
posible cancelarla con ciclos de fase; no obstante, obteniendo el espectro sensible a la fase
la contribucin del COSY a la integracin de los picos de cruzamiento debe idealmente
anularse debido a su naturaleza antifase.
El experimento ROESY (Rotating frame Overhauser Effect SpectroscopY) (Bax
& Davies, 1985b)
El ROESY es un experimento diseado para obtener, como el NOESY,
informacin sobre distancias entre ncleos. Est basada en el ROE que consiste en NOE en
los ejes de referencia rotatorios. La secuencia de pulsos es casi idntica a la del TOCSY,
as para evitar los artefactos TOCSY se reduce la potencia usada para lograr el bloqueo de
los espines y se aumenta el periodo de mezcla. En el experimento ROESY la relajacin de
los espines no ocurre en el campo esttico B
0
a lo largo del eje z, sino en el campo
transversal generado por la secuencia de pulsos de radiofrecuencia que producen el
bloqueo de los espines; es decir, en el proceso de relajacin la magnetizacin transversal
de un espn se convierte en magnetizacin transversal de espines vecinos por relajacin
cruzada mientras estn bajo el campo de bloqueo de espines. Las caractersticas del
ROESY en comparacin con el NOESY pueden resumirse en los siguientes puntos:
- Mientras que los NOEs dependen fuertemente del tiempo de correlacin,
anulndose para 1
C 0
~ t e , los ROEs presentan una dbil dependencia.
195
- Los picos de cruzamiento NOESY tienen el mismo signo u opuesto a los picos
de la diagonal, para NOEs negativos y positivos, respectivamente; sin embargo
los ROEs son siempre positivos y como consecuencia lo picos de cruzamiento y
los de la diagonal son siempre de signo contrario.
- En NOESY los picos que provienen del intercambio qumico tienen el mismo
signo que la diagonal y como consecuencia son indistinguibles de los NOEs
negativos. En ROESY los picos del intercambio qumico tienen el mismo signo
que la diagonal y se distinguen fcilmente de los ROEs positivos.
- Mientras que no hay efectos de offset (desplazamiento de la lnea base sobre
cero) en NOESY en ROESY el offset siempre tiene que corregirse para
integrar picos.
- No hay contribucin ROESY en NOESY pero si aparecen interferencias NOE
en ROE (excepto cuando se cumple 1
C 0
~ t e )
- La integracin de los picos NOESY no est afectada por contribuciones
TOCSY de los acoplamientos escalares, sin embargo no podemos decir lo
mismo de los picos ROESY con el resultado de posibles errores en las
distancias.


196
Apndice: El sistema de coordenadas rotatorio.

Las ecuaciones de Bloch, y por consiguiente la visualizacin del movimiento de
precesin de la magnetizacin en torno a un campo magntico que rota y cambia su
inclinacin a su vez, se simplifican adoptando como sistema de referencia un sistema de
ejes ortogonales (x, y, z), con el eje z comn, que rota respecto al sistema de coordenadas
ortogonales que hemos utilizado anteriormente (x, y, z) (al que llamaremos ejes del
laboratorio) a la misma frecuencia angular con que rota la componente ) (
1
e + B
de
radiofrecuencia, frecuencia a la en los sucesivo llamaremos
rf
e . En este sistema de
referencia rotatorio el campo de radiofrecuencia parece esttico, pero la magnetizacin M,
que en el sistema de referencia del laboratorio precesiona en torno al eje z a la frecuencia
angular
0 0
B = e , precesiona ahora con una frecuencia angular:
rf
e e = O
0
.
Este movimiento correspondera a la precesin de la magnetizacin con un campo
magntico aparente:
e e
rf rf
ap
B B =
=
O
=
0
0

En el sistema de referencia rotatorio el campo efectivo B
ef
, en torno al cual
precesiona la magnetizacin,

es la suma vectorial de B
ap
y B
1
:

En el Sistema
de referencia
del laboratorio
En el Sistema
de referencia
rotatorio
B
0

B
1

B
eff
B
ap

B
1

B(t)

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Estructura de Macromolculas. Dpto. de Qumica Fsica. Facultad de Ciencias.

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