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ESPECTROFOTOMETRIA

ASIGNATURA Laboratorio Qumica Analtica

DOCENTE Ing. Walter Nez

ESTUDIANTE Daniel carrion Saavedra

AULA 415 B TURNO Noche PROGRAMA DE FORMACIN GENERAL - REA DE LABORATORIO

INTRODUCCIN

Por ser la radiacin electromagntica una herramienta fundamental en el campo de la medicina y tambin por estar presente en toda sala de radiodiagnstico, el tcnico debe conocer como se producen estas radiaciones, que efectos causan a nivel celular y somtico as como la manera de protegerse l y los pacientes. La presente tiene como objetivo darnos a entender que son las radiaciones electromagnticas, como se originan, los tipos de radiaciones que existen en el universo y como se diferencian unas de las otras en cuanto a su poder de ionizacin al interactuar con la materia. No pretendemos con este que se formen como expertos en radiaciones electromagnticas pero si conocer con que trabajamos, como sacar el mayor provecho de estas ondas y que medidas tomar en beneficio de nuestra seguridad integral y de los pacientes.

OBJETIVOS: Aprender a utilizar adecuadamente el espectrofotmetro Hallar en dos compuestos (DNS y azul de bromo fenol) la longitud de onda ptima por medio de sus curvas espectrales. Establecer la relacin entre la transmitancia y absorbancia con la concentracin de una solucin. Evaluar la veracidad y estabilidad de un espectrofotmetro con una longitud de onda de 500 505 nm. Relacionar los resultados obtenidos en la prctica de laboratorio con los principios en los que se fundamentan las mediciones espectrofotomtricas y los mtodos de verificacin metrolgica de los equipos.

Principio terico
La espectrofotometra: Es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una

cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo. La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida. Un espectrofotmetro es un instrumento usado en la fsica ptica que sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones. LA RADIACIN ELECTROMAGNTICA La Radiacin Electromagntica es una forma de Energa radiante que se propaga en forma de ondas. En este fenmeno ondulatorio se define: a) Longitud de onda (l): es la distancia entre dos mximos de un ciclo completo del movimiento ondulatorio. Se expresa, segn el S.I. en nanmetros (nm) y sus equivalencias son: 1nm = 1mm =10 A0 = 10-9 m. b) Frecuencia (n): es el nmero de ciclos por segundo. Es inversa a la longitud de onda. Su frmula es: n = c/l, y se mide en ciclos por segundo o hertzios. c) Fotones: la luz est formada por fotones, y estos son paquetes discontinuos de E. La E de un fotn depende de la frecuencia y de la longitud de onda, segn la siguiente expresin: E = h x n = h x c/n (h = Cte. de Planck = 6,62.10-27erg/seg.). La Energa Electromagntica se mide el Ergios. La relacin entre la longitud de onda y la Energa es inversa, por lo tanto a menor longitud de onda mayor Energa y viceversa. d) Espectro Electromagntico: cubre un amplio intervalo de E radiante, desde los rayos g de longitud de onda corta hasta las ondas de radio, de longitud de onda larga. Se divide en varias regiones, las ms interesantes para nosotros son:

Regin Ultravioleta: l = 10-380 nm Regin Visible: l = 380-780 nm Regin Infrarroja: l = 780-30.000 nm En la Regin Visible, la luz se descompone en colores. La luz blanca contiene todo el espectro de longitudes de onda. Si interacciona con una molcula puede ser dispersada o absorbida.

LEYES DE ABSORCIN Cuando un haz de luz pasa a travs de un medio, se registra una cierta prdida de intensidad, debido a la absorcin por parte de la sustancia. Se llama TRANSMITANCIA (T) a la relacin entre la luz incidente y la luz transmitida: T = Is / I0 ; %T = (Is / I0 ) x 100. Se puede perder intensidad por la interaccin con la cubeta o el solvente. Para evitar este error se hace una primera medida con una solucin de referencia o BLANCO, que contiene todos los posibles compuestos que intervienen en la lectura menos el que vamos a medir. Todas las medidas que se hagan con posterioridad sern referidas a esta medida inicial y se harn en la misma cubeta que se utiliz en la medida del blanco. La Transmitancia se usa poco, se emplea ms la Absorbancia (A) porque la relacin entre A y la concentracin de una solucin es directamente proporcional y la de la T es inversamente proporcional. La relacin entre la absorbancia y la transmitancia es la siguiente:

Si el %T = 100 A = 2-log T = 2-log 100 = 0 Si el %T = 0 A = 2-log 0 = En los aparatos que se usan actualmente se presentan absorbancias, pero el aparato lo que mide realmente es %T que luego transforma a absorbancia.

LEY DE BEER La absorbancia de una solucin es directamente proporcional ala concentracin y a la longitud del paso de la luz. A = e . b. cSiendo: A: absorbancia. No tiene unidades. e: el coeficiente de extincin molar, tambin llamado coeficiente de absorcin. Es constante para un compuesto dado siempre que se fijen condiciones de longitud de onda, de pH, de temperatura, de solventes, etc. Sus unidades son 1/ (mol/cm). b: es la longitud de paso de la luz, en cm. c: es la concentracin del absorbente. Se mide en mol/L. La aplicacin prctica de la Ley de Beer es, que conociendo la absorbancia de una sustancia podemos averiguar su concentracin y esto lo podemos hacer de dos formas: 1. Por comparacin con una solucin conocida: si tenemos 2 soluciones, una problema (P) y una estndar (S), podemos establecer la siguiente relacin matemtica entre ellas: 2. A travs de una curva de calibracin: la curva de calibracin es la representacin grfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas) frente a la Concentracin (eje de abcisas). Se ensayan varias soluciones de concentracin conocida y se determinan sus A, construyndose la curva de calibrado, que es una recta. Una vez ensayadas las soluciones problemas, su concentracin se averigua por interpolacin de las A de las soluciones problema en la curva de calibracin. Hay que tener en cuenta la LINEALIDAD, que es el intervalo de concentraciones del cromgeno entre las cuales existe una relacin lineal entre Absorbancia y Concentracin. Cuando la concentracin del cromgeno sobrepasa los lmites de linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer, convirtindose la recta en una curva. La lectura de la Absorbancia fuera de los lmites de linealidad se traduce en una concentracin falsamente baja de cromgeno. En esta situacin, hay que diluir la muestra para que su concentracin entre en los lmites de la linealidad.

3. Empleo de los Factores de Calibracin: Para reactivos estables y sistemas fotomtricos estables, este factor se puede mantener constante, siendo slo necesario ensayar las muestras problema multiplicando la A resultante por el factor F

Parte experimental
Preparar una curva de calibracin para nitritos ( NO2 ) Se prepara la siguiente concentracin de nitritos 0.002 ppm 0.005 ppm 0.02 ppm 0.05 ppm Se le realiza una curva de calibracin AB

1. PROCEDIMIENTO: - Con 5 soluciones y 5 celdas

Cada solucin echamos en una celda luego colocamos en la maquina la primera muestra la parte lisa mirando al espejo, y as sucesivamente en la mquina, dejando la primera solucin, colocamos la segunda prueba y sale el valor y as sucesivamente.

RESULTADOS: Nos damos cuenta que cada valor anotado en la maquina disminuye en una cierta cantidad.

N 1 2 3 4 -

1 1 1 1

Abs -0,014 -0.04 -0.097 -0.172

K - Abs -0,014 -0.04 -0.097 -0.172

CONCLUSION: - Nos damos cuenta que cada solucin disminuye en su valor. RECOMENDACIONES: - Usar los implementos de seguridad para que no ocurra problema alguno como: quemaduras derrame de elementos txicos, etc. - Trabajar con mucho cuidado sin romper algn material de laboratorio. - Trabajar en equipo para adquirir un mejor conocimiento en prctica ya que esto nos servir en un futuro. - Tener responsabilidad y tomar conciencia que podemos salir lastimados porque trabajamos con reactivos toxico.

BIBLIOGRAFIA: www.hannachile.com Noticias, Artculos y Consejos Artculos es.answers.yahoo.com ... Ciencias y Matemticas Qumica

CUESTIONARIO 1. Investigue que otros iones espectrofotmetro UV-visible se puede analizar con el

La espectrometra UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa de soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos orgnicos muy conjugados. Soluciones de iones metlicos de transicin Las soluciones de iones metlicos de transicin pueden ser coloreadas (es decir, absorben la luz visible) debido a que los electrones en los tomos de metal se pueden excitar desde un

estado electrnico a otro. El color de las soluciones de iones metlicos se ve muy afectado por la presencia de otras especies, como algunos aniones o ligandos. Por ejemplo, el color de una solucin diluida de sulfato de cobre es muy azul; agregando amonaco se intensifica el color y cambia la longitud de onda de absorcin mxima. Compuestos orgnicos Los compuestos orgnicos, especialmente aquellos con un alto grado de conjugacin, tambin absorben luz en las regiones del espectro electromagntico visible o ultravioleta. Los disolventes para estas determinaciones son a menudo el agua para los compuestos solubles en agua, o el etanol para compuestos orgnicos solubles. Los disolventes orgnicos pueden tener una significativa absorcin de UV, por lo que no todos los disolventes son adecuados para su uso en espectrometra UV. El etanol absorbe muy dbilmente en la mayora de longitudes de onda. La polaridad y el pH del disolvente pueden afectar la absorcin del espectro de un compuesto orgnico. La tirosina, por ejemplo, aumenta su mximo de absorcin y su coeficiente de extincin molar cuando aumenta el pH de 6 a 13, o cuando disminuye la polaridad de los disolventes. Aunque los complejos de transferencia de carga tambin dan lugar a colores, stos son a menudo demasiado intensos para ser usados en mediciones cuantitativas. La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la concentracin de la solucin. Por tanto, la espectrometra UV/VIS puede usarse para determinar la concentracin de una solucin. Es necesario saber con qu rapidez cambia la absorbancia con la concentracin. Esto puede ser obtenido a partir de referencias (las tablas de coeficientes de extincin molar) o, con ms exactitud, determinndolo a partir de una curva de calibracin. El espectrofotmetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (CLAR). La presencia de un analito da una respuesta que puede ser proporcional a la concentracin. Para resultados precisos, la respuesta del

2.

instrumento al analito debe compararse con la respuesta a un estndar, lo que es muy similar al uso de curvas de calibracin. La respuesta (por ejemplo, el pico de altura) para un concentracin particular se conoce como factor de respuesta. Investigue los lmites permisibles de nitritos de consumo humano

3. Mencione otros 3 mtodos instrumentales para determinar muestras contaminantes 4.Elabore un cuadro de las diferentes longitudes de onda de los rayos UVA ,UVB Y UVC Cules son peligrosos para la piel? Explique 5.Una muestra problema de nitritos tiene una absorbancia de 0,15 Cul ser su concentracin? Obtener este valor de la curva de calibracin