Vitrificacin embrionaria.

Aspectos prcticos
Jess Aguilar, PhD.

IVI-Vigo, Spain jesus.aguilar@ivi.es

www.ivi.es

Tasa de cancelacin muy baja Tcnica altamente eficiente.

Como optimizar los resultados en el programa de criopreservacin?

1. Laboratorio 2. Dispositivos Sistemas Abiertos Sistemas cerrados 3. Mtodo a. Vitrificacin b. Almacenaje i. Procedimientos ii. Control de equipos 4. Envos

Como optimizar los resultados en el programa de criopreservacin?

1. Laboratorio 2. Dispositivos Sistemas Abiertos Sistemas cerrados 3. Mtodo a. Vitrificacin b. Almacenaje i. Procedimientos ii. Control de equipos 4. Envos

Controles de Calidad en el Laboratorio de Reproduccin Asistida

Un laboratorio estara en riesgo si:

RRHH 1. Infradimensionado 2. Personas con poca experiencia 3. Poca responsabilidad 4. Mucha carga clnica

Controles de Calidad en el Laboratorio de Reproduccin Asistida

Un laboratorio estara en riesgo si:

RRHH 1. Infradimensionado 2. Personas con poca experiencia 3. Poca responsabilidad 4. Mucha carga clnica

Equipamiento 1. Recursos inadecuados 2. Fallo de los equipos 3. Fallo de suministro elctrico

Laboratorio de criopreservacin: equipos

Controles de Calidad en el Laboratorio de Reproduccin Asistida

Un laboratorio estara en riesgo si:

RRHH 1. Infradimensionado 2. Personas con poca experiencia 3. Poca responsabilidad 4. Mucha carga clnica Organizacin 1. Inexistencia de witnessing 2. PNT inadecuados 3. Mejoras no autorizadas 4. Omisiones

Equipamiento 1. Recursos inadecuados 2. Fallo de los equipos 3. Fallo de suministro elctrico

WITNESSING IVI VIGO TRANSFER CONGELADOS

AO Transfer Congelados (n) Error cometido Error detectado

2010 284 4 -

* 2011
420 2 4

2012 421 1 5

2013 480 0 6

2014 31 0 1

1.5%
7
6 5 4 3 2 1 0 2010 2011 2012 2013 2014

1.5%

Error cometido Error detectado

Controles de Calidad en el Laboratorio de Reproduccin Asistida

Un laboratorio estara en riesgo si:

RRHH 1. Infradimensionado 2. Personas con poca experiencia 3. Poca responsabilidad 4. Mucha carga clnica Organizacin 1. Inexistencia de witnessing 2. PNT inadecuados 3. Mejoras no autorizadas 4. Omisiones

Equipamiento 1. Recursos inadecuados 2. Fallo de los equipos 3. Fallo de suministro elctrico Comunicacin 1. Poca documentacin 2. Uso de productos inadecuados 3. No documentacin de algn incidente

Como optimizar los resultados en el programa de criopreservacin?

1. Laboratorio 2. Dispositivos Sistemas Abiertos Sistemas cerrados 3. Mtodo a. Vitrificacin b. Almacenaje i. Procedimientos ii. Control de equipos 4. Envos

Sistemas de vitrificacin

Saragusty; Reprod, 2011

Open systems
CTP EMG EMG CLF CTP CTP CTP CLF CTP

90 60 30 0

CTP

CLoop CLoop CTP

CTP

CTIP

VINGA CTP

08 Ke ns k in t.2 00 8

Al mo di n 20 10

Ri en zi 2 00 9

Na gy 20 09

Sh er 20 08

Gr i fo 20 10

Co bo 20

Survival rate

Implantationl rate

Pregnancy rate

Co bo 20

10

Como optimizar los resultados en el programa de criopreservacin?

1. Laboratorio Dispositivos 2. Sistemas Abiertos Sistemas cerrados 3. Mtodo a. Vitrificacin (correcta ejecucin) b. Almacenaje i. Procedimientos ii. Control de equipos 4. Envos 5. Bioseguridad

Buena prctica en el laboratorio de criopreservacin

Mecanismos de dao

Ice formation

Leibo et al Theriogenology 2007

Mechanisms of injury.

Ice formation LPT (cell membrane) Meiotic Spindle

Zenzes; Fertil Steril, 2001

Ghetler; Hum Reprod, 2005

Vitrification

Saragusty and Arav, Reproduction 2011

Mtodo Cryotop
Equilibrio

Paso de vitrificacin: lavado

Completa eliminacin de la solucin de equilibrio 15% CPAs (30%)

Carga del Cryotop

Desvitrificacin

Temperatura

37C 20-25C

Seki and Mazur, 2009

Desvitrificacin

Evitar la manipulacin durante el proceso de dilucin de los CPAs.

Leibo; Theriogenology, 2008

Muldrew et al in life in frozen state, CRC press; 2004

Dilucin de los CPAs

Minimizar shock osmtico

De TS a DS y de DS a WS

Lavado

Como optimizar los resultados en el programa de criopreservacin?

1. Laboratorio 2. Dispositivos Sistemas Abiertos Sistemas cerrados 3. Mtodo a. Vitrificacin b. Almacenaje i. Procedimientos ii. Control de equipos 4. Envos

Almacenaje
Nitrgeno fase lquida Nitrgeno fase vapor

Almacenaje de muestras criopreservadas

Procced with thewithin storage in the designated area Allow the LN fo fill the gobelet Place the CTPs the gobelet while <-180C maintaining the specimens always submerged into LN

inside dethe working area of the vapour storage tank, Be Once prepared with canister take out the Cryotops from the gobelet Place the LN container very close to the LN storage tank, Proceed the storage Adjust the gobelet intowith a metalic sleeveof the samples

Protocolo de desvitrificacin
Llenar una cubeta de Nitrgeno Lquido

Banco lquido.

Localizar las muestras en el banco y aproximar una cubeta con Nitrgeno

Sacar las muestras a la cubeta lo ms rpido posible, liberar el gobelet, sacar los CTPs.

Protocolo de desvitrificacin
Banco de vapor.

~ -170 y -180C

Llenar una cubeta de Nitrgeno Lquido.

Introducirla en el tanque de vapor

Localizar los CTPs.

Llevar los CTPs a la cubeta

Controles de Calidad en el Laboratorio de Reproduccin Asistida

Grandes y pequeos equipos

RRHH VOCs

Sistemas de validacin y/o calibracin Sistemas de cultivo

Calidad del aire Microorg

Pression +
Monitored

Bsqueda de indicadores

Como optimizar los resultados en el programa de criopreservacin?

1. Laboratorio de FIV 2. Dispositivos Sistemas Abiertos Sistemas cerrados 3. Mtodo a. Vitrificacin b. Almacenaje i. Procedimientos ii. Control de equipos 4. Envos

Protocolo de envo

CONCLUSIONES

1.- Plantilla y equipos adecuados, control de errores 2.- Warming rate 3.- Choque osmtico 4.- Correcta manipulacin del material vitrificado

Ana Cobo, PhD Laboratorio FIV IVI VIGO