UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE PESQUERA

CURSO

TEMA

MICROBIOLOGIA PESQUERA
:

PROFESORA

GRUPO

ALUMNA

COLIMETRIA

ING. NANCY MARTINEZ ORDINOLA

A*

ALVAREZ MURGUEYTIO, Claudia Vanessa

I.

INTRODUCCION:

El presente trabajo tiene como finalidad determinar la presencia o ausencia del grupo de
coliformes fecales y totales del agua, mediante la tcnica de colimetra usando el mtodo
del nmero mas probable, en cual no proporciona una estimacin de los organismos
viables existentes en un sustrato. Es un concepto derivado de la teora de probabilidades
aplicables a la enumeracin de microorganismos con ciertos parmetros
Algunas de las ventajas del mtodo de nmero mas probable son:
(i)

(ii)
(iii)
(iv)

II.

La capacidad de estimar tamaos poblacionales basados en atributos

relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinar la
densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una
muestra de suelo usando el mtodo de infeccin de plantas,
Provee una recuperacin uniforme de las poblaciones microbianas de suelos
diversificados,
Determina slo organismos vivos y activos metablicamente.
Suele ser ms rpido e igual de confiable que los mtodos tradicionales de
esparcimiento en platos de cultivo, entre otros.
REVISION BIBLIOGRFICA

Existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos presentes en

muestras lquidas y slidas. Dentro de las tcnicas ms comunes se encuentra el
recuento directo por microscopia de fluorescencia, as como los procedimientos basados
en diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintticos
slidos o lquidos, como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC)
o la estimacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP).
El mtodo del nmero ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente
sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para
estimar el nmero de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo,
se ha demostrado que tambin puede ser aplicado para la determinacin de
microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos
contaminados, por tanto este mtodo es aplicable para estimar el nmero de
microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como
anaerobias.
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar
la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados
por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se
encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se
considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se
denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas.
Esta es la caracterstica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de
los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos
es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH,
humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de

contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como una indicacin de que los

organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el
alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades.
En alimentos, la identificacin de una concentracin elevada de Coliformes Fecales en un
alimento es indicador de su contaminacin y por tanto su mala manipulacin, de ser esto
as, se debe declarar al alimento en cuestin como No Apto para el Consumo Humano.
La Organizacin Mundial de la Salud indica que la problemtica de la contaminacin de
mares y ros por aguas servidas y desages a puesto en alto riesgo a la poblacin
acutica de directo consumo humano, estando entre ellos los peces. La contaminacin
producida tambin contamina la carne de dichos animales, estando por tanto
contaminados en su mayor parte desde su fuente de extraccin. Es por tanto de mucha
importancia en la actualidad pruebas que descarten la presencia de microorganismos
contaminantes tan peligrosos como son los Coliformes Fecales.
Los niveles recomendados de bacterias coliformes fecales son:

Agua Potable: menos de 0 colonias por 100 ml de la muestra de agua

Natacin: menos de 200 colonias por 100 ml de la muestra de agua
Navegar/Pescar: menos de 1,000 colonias por 100 ml de la muestra de agua

E. coli : El aislamiento de esta bacteria en el agua da alto grado de certeza de

contaminacin de origen fecal, alrededor del 99%. No es absoluta porque se han aislado
cepas de E. coli que no tienen origen fecal, pero es un grado de certeza es ms que
razonable para certificar contaminacin con ese origen. Sin embargo, el aislamiento de
este microorganismo no permite distinguir si la contaminacin proviene de excretas
humanas o animales, lo cual puede ser importante, puesto que la contaminacin que se
desea habitualmente controlar es la de origen humano. Esto no significa menospreciar la
de origen animal, especialmente dada la existencia de zoonosis, enfermedades que son
comunes al hombre y animales, que tambin se pueden transmitir por el agua.
IV.

MATERIALES Y METODOS
4.1 MATERIALES:

Tubos de ensayo
Tubos Durham de 10 x 75 mm
Pipetas graduadas de 1.5 y 10 ml.
Incubadoras de 35C
Bao de agua mara 44,5C
Caldo verde brillante, bilis y lactosa
Solucin reguladora de pectona
Caldo de triptosa y sulfato de lauril
Agar PCA

4.2 METODOS:

4.2.1 NMP de coliformes totales

a. Prueba presuntiva:
Sembrar 1 ml de la muestra por quintuplicado en caldo laurel sulfato
triptosa(C.L.S.T.)
Incubar a 37C por 24 horas
Observar si hubo una reaccin positiva (produccin de gas en los tubos
de fermentacin que se encuentran en el medio de cultivo)
Anotar resultados
b. Prueba confirmativa
Agitar cada tubo de C.L.S.T presunto positivo y con una asa de Kole
previamente esterilizada extraer una asada del material.
Inocular en el tubo de caldo lactosado verde brillante bilis.
Incubar a 37C por 24 horas.
Pasadas las 24 horas proceder a la lectura, poniendo como positivos
los tubos donde se formo gas.
Anotar resultados
4.2.2

NMP de coliformes fecales

Calentar los tubos con medio EC en bao maria, durante 30 minutos a

una temperatura de 44.5C
Agitar los tubos con CLST positivos y con el asa de Kolle transferir un
inoculo desde el CLST a los tubos con EC.
Incubarlos en bao mara a 44.5C por 24 horas.
Luego de 24 horas anotar los resultados.
Se consideran positivos aquellos donde aparecieron burbujas de gas.
Anotar resultados y calcular el NMP

V.

RESULTADOS
5.1 Coliformes Totales:
En la prueba presuntiva: 5-4-4 para las diluciones 10-4, 10-5 y
10-6 respectivamente.
En la prueba confirmativa: 5-1-1 para las diluciones 10-4, 10-5
y 10-6 respectivamente.
5.2 Coliformes Fecales:
Los resultados fueron: 5-1-1. Utilizando la formula nos da por
el mtodo del numero mas probable 45261x105 por cada
100 ml.

VI.

DISCUSIONES

Los niveles recomendados de bacterias coliformes fecales son: Agua

Potable:
menos de 0 colonias por 100 ml de la muestra de agua, Natacin: menos de 200
colonias por 100 ml de la muestra de agua, Navegar/Pescar: menos de 1,000
colonias por 100 ml de la muestra de agua. Nuestro resultado tiene valores muy
altos en comparacin.
La cantidad de coliformes fecales nos indica que entre esas 45261x105 colonias
por mililitro calculadas indican que en el medio de cultivo se hallan principalmente
Escherichia coli (90%) y algunas bacterias de los gneros Klebsiella y Citrobacter.

VII. CONCLUSIONES
-

La presencia de coliformes en nuestra muestra, incluyendo los fecales es muy

grande por lo que esta agua no es apta para el consumo humano ni natacin, ni
pesca, ni navegacin.

Al haber estado la muestra muy contaminada quiz debimos a ver hecho una
mayor cantidad de diluciones.

VII. BIBLIOGRAFIA
-

Determinacin de Coliformes Totales y Fecales en Caballa. Microbiologa de Los

Alimentos . Disponible en: http://www.scribd.com/doc/6905491/Microbiologia-deAlimentos-Determinacion-de-coliformes-totales-y-fecales-en-caballa-

Manual de Ecologa Microbiana. Disponible en:

http://www.uprm.edu/biology/profs/massol/manual/p4nmpenumeracion.pdf

Coliforme. Wikipedia La Enciclopedia Libre. Disponible en:

http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme