Módulo Microbiología

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y Escuela de Ciencias Bsicas, Tecnologa e Ingeniera Contenido didctico del curso Microbiologa
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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA ESCUELA DE CIENCIAS BSICAS, TECNOLOGA E INGENIERA
201504 MICROBIOLOGA
CARMEN EUGENIA PIA LPEZ M.Sc. Ciencias Biolgicas MATERIAL AJUSTADO POR: MERY LILIANA LPEZ MARTNEZ Biloga, Especialista en Microbiologa
PASTO Septiembre de 2011
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ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

El contenido didctico del curso acadmico: Microbiologa, fue diseado en el ao 2004 por la Dra. Carmen Eugenia Pia Lpez, docente de la UNAD, de Bogot. M.Sc. Ciencias Biolgicas. Universidad Estatal de Jarkov (Ucrania), M.Sc. Docencia Universitaria. Universidad de la Salle. Bogot, Especialista en Nutricin Animal Sostenible. UNAD. Bogot, Especialista en Informtica y Multimedios. Fundacin Universitaria Los Libertadores. Bogot y quien actualmente se encuentra cursando el Doctorado en Tecnologa Instruccional y Educacin a Distancia (Nuevas Tecnologas) con la Universidad NOVA en Estados Unidos. El contenido didctico ha tenido actualizaciones anuales a partir de su creacin, las cuales fueron desarrolladas por la Dra. Marta Cecilia Vinasco. La versin desarrollada en el 2012 ha sido llevada a cabo por Mery Liliana Lpez Martnez, Biloga de la Universidad Nacional de Colombia, Especialista en Microbiologa de la Universidad Catlica de Manizales y Estudiante de Maestra en Ingeniera Ambiental de la Universidad Mariana de Pasto, Docente Auxiliar de la UNAD en el CEAD de Pasto. Este documento se puede copiar, distribuir y comunicar pblicamente bajo las condiciones siguientes: Reconocimiento. Debe reconocer los crditos de la obra de la manera especificada por el autor o el licenciador (pero no de una manera que sugiera que tiene su apoyo o apoyan el uso que hace de su obra). No comercial. No puede utilizar esta obra para fines comerciales. Sin obras derivadas. No se puede alterar, transformar o generar una obra derivada a partir de esta obra. Al reutilizar o distribuir la obra, tiene que dejar bien claro los trminos de la licencia de esta obra. Alguna de estas condiciones puede no aplicarse si se obtiene el permiso del titular de los derechos de autor Nada en esta menoscaba o restringe los derechos morales del autor.
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INTRODUCCIN
El presente modulo est dirigido a estudiantes de programas de pregrado que oferta la UNAD, bajo la modalidad de educacin superior a distancia. El curso consta de tres (3) crditos acadmicos equivalentes a 144 horas de estudio, distribuidas de la siguiente manera: Estudio independiente: Acompaamiento y seguimiento tutorial: 106 horas 38 horas
El campo de formacin corresponde a lo disciplinar bsico dentro de los crditos obligatorios del plan de estudios. El contenido de cada una de las partes fue seleccionado, teniendo en cuenta los saberes mnimos que se esperara debe alcanzar un estudiante de la Universidad Nacional Abierta y a Distancia en el campo de Microbiologa. El curso est orientado a la autogestin estudiantil de los conocimientos tericos necesarios para la comprensin de los enfoques tericos de la microbiologa moderna y las condiciones de manejo seguro de los microorganismos, a nivel de laboratorio y en los procesos de aplicaciones industriales. El Curso de Microbiologa, est diseado para estudiantes de educacin a distancia con aprovechamiento de ambientes virtuales de aprendizaje, por consiguiente hace nfasis en la autogestin formativa mediada, sin excluir interacciones directas entre tutor y estudiante y de los estudiantes entre s. De la misma manera, se proponen los fundamentos tericos necesarios para abordar el componente prctico (prcticas de laboratorio), que son importantes en la medida que se requiere verificar principios y teoras; adems, desarrollar habilidades propias de un curso metodolgico, es importante recordar que los cursos metodolgicos no son habilitables. El modulo se caracteriza porque en cada leccin se presentar ejemplos modelos del tema en estudio, al final de cada capitulo se exponen ejercicios; con respuesta, que permite a los estudiantes contextualizarse en diversas reas del conocimiento, con el fin de fortalecer las temticas propias del curso. Al final de cada unidad se presenta una Autoevaluacin de un nivel medio-alto, las cuales permiten verificar los alcances de los estudiantes en las temticas analizadas y detectar las debilidades y as centrarse en stas, con el fin de alcanzar las metas propuestas.
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Finalmente, el Material pretende servir como gua de aprendizaje autnomo, se recomienda apoyar este proceso por medio de lecturas especializadas, ayudas audiovisuales, visitas a sitios Web y prcticas de laboratorio; entre otros, as lograr una efectiva comprensin, interiorizacin y aplicacin delas temticas estudiadas. La microbiologa estudia los microorganismos u organismos generalmente microscpicos, aunque algunos pueden ser observados a simple vista. Su estudio comprende la identificacin y clasificacin de los microorganismos, su origen y evolucin, la dinmica del crecimiento, el rol interactivo de los microorganismos con el sistema inmunolgico, las enfermedades que pueden producir y su importancia en la produccin industrial. Hay muchos campos de estudio especfico en microbiologa: bacteriologa, protozoologa, micologa, virologa, microbiologa agrcola, microbiologa de alimentos, microbiologa ambiental, entre otras. El objeto material de la microbiologa viene delimitado por el tamao de los seres que investiga, lo que supone que abarca una enorme heterogeneidad de tipos estructurales, funcionales y taxonmicos: desde partculas no celulares como los virus, viroides y priones, hasta organismos celulares tan diferentes como las bacterias: eubacterias, arqueas, los protozoos, parte de las algas, los hongos y levaduras.
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INDICE DE CONTENIDO
PAGINA 11 1. UNIDAD 1: TENDENCIAS DISCIPLINARES DE LA MICROBIOLOGA 13 1.1. CAPITULO 1: INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA 14 1.1.1. Leccin 1: Definicin de Microbiologa 16 1.1.2. Leccin 2: Evolucin histrica 21 1.1.3. Leccin 3: Clasificacin de los Microorganismos 25 1.1.4. Actividades de Autoevaluacin del capitulo 1 26 1.2. CAPITULO 2: DIVERSIDAD MICROBIANA 27 1.2.1. Leccin 4: Organismos acelulares 1.2.2. Leccin 5: Microorganismo celulares procariotas: Las arqueobacterias 36 39 1.2.3. Leccin 6: Microorganismos celulares procariotas: Las eubacterias 57 1.2.4. Leccin 7: Microorganismo celulares eucariotas: Protistos 66 1.2.5. Leccin 8: Microorganismos celulares eucariotas: Hongos 76 1.2.6. Actividades de autoevaluacin del captulo 2 78 1.3. CAPTULO 3: GENETICA DE LOS MICROORGANISMOS 80 1.3.1. Leccin 9: Gentica Bacteriana 85 1.3.2. Leccin 10: Gentica de protistos y hongos 87 1.3.3. Leccin 11: Biotecnologa microbiana 89 1.3.4. Actividades de autoevaluacin del captulo 3 2. UNIDAD 2: CRECIMIENTO MICROBIANO 2.1. CAPITULO 4: CINTICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO 2.1.1. Leccin 12: Cintica del crecimiento microbiano 2.1.2. Leccin 13: Parmetros fsicos que afectan el crecimiento y desarrollo de los microorganismos 2.1.3. Leccin 14. Parmetros qumicos que afectan el crecimiento y desarrollo de los microorganismos 2.1.4. Leccin 15: Parmetros que afectan la supervivencia de los microorganismos en los alimentos 2.1.5. Leccin 16. Mecanismos de Control para el crecimiento microbiano 2.1.6. Actividades de autoevaluacin del captulo 4 2.2. CAPTULO 5: BIOSEGURIDAD Y EQUIPOS PARA LA PRCTICA DE LA MICROBIOLOGA 2.2.1. Leccin 17. Normas de bioseguridad 2.2.2. Leccin 18. Niveles de contencin en laboratorios 2.2.3. Leccin 19. Equipos y materiales utilizados en un laboratorio de microbiologa 2.2.4. Actividades de autoevaluacin del captulo 5 92 95 96 99 102 105 109 116 117 118 120 122 128
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2.3. CAPTULO 6: TCNICAS DE CULTIVO DE MICROORGANISMOS 2.3.1. Leccin 20. Medios de cultivo 2.3.2. Leccin 21. Condiciones generales para el cultivo de microorganismos 2.3.3. Leccin 22. Siembra de microorganismos 2.3.4. Leccin 23. Tcnicas de tincin 2.3.5. Leccin 24. Tcnicas de recuento bacteriano 2.3.6. Actividades de autoevaluacin del captulo 6 3. UNIDAD 3: ECOLOGA MICROBIANA Y MICROBIOLOGA INDUSTRIAL 3.1. CAPTULO 7: MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA 3.1.1. Leccin 25: Poblaciones en los ecosistemas 3.1.2. Leccin 26: Actividades biogeoqumicas de los microorganismos 3.1.3. Leccin 27: Microbiologa del suelo 3.1.4. Leccin 28: Microbiologa del agua 3.1.5. Ejercicios de repaso del captulo 7 3.2. CAPTULO. 8: MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS 3.2.1. Leccin 29: Las bacterias y su importancia en la produccin de alimentos 3.2.2. Leccin 30: Alteraciones microbianas en los alimentos 3.2.3. Leccin 31: Contaminacin de alimentos 3.2.4. Leccin 32: Microbiologa de la leche y productos lcteos 3.2.5. Actividades de repaso del captulo 8 3.3. CAPTULO. 9: NMUNOLGIA BSICA 3.3.1. Leccin 33: Epidemiologia 3.3.2. Leccin 34: Vacunas 3.3.3. Leccin 35: Productos farmacuticos de origen microbiano 3.3.4. Actividades de repaso del captulo 9
129 129 134 137 141 150 155 159 161 163 170 177 183 187 188 189 198 200 203 213 215 216 219 225 228
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INDICE DE TABLAS
Tabla 1. Comparacin de tamaos en el estudio microbiolgico Tabla 2. Ejemplo de clasificacin completa de un Microorganismo: la bacteria Neisseria meningitidis Tabla 3. Tabla de progresin de crecimiento microbiano Tabla 4. Tabla de clasificacin de microorganismos de acuerdo a su tolerancia al pH Tabla 5. Principales enfermedades causadas por microorganismos del agua sus sintomas y la fuente de contaminacin Tabla 6. Productos farmacuticos aplicados a la salud humana y que provienen de organismos genticamente modificados
PAGINA 15 24 96 100 186 227
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INDICE DE FIGURAS
PAGINA 17 18 22 27 34 35 37 40 41 44 46 47 48 52 53 57 58 60 60 61 62 62 64 67 69 70 71 72 80 82 84 86 97
Figura 1. Experimento de la teora de la generacin espontnea Figura 2. Experimento de Louis Pasteur Figura 3. Relaciones evolutivas entre los organismos vivos Figura 4. Imagen y representacin grfica de un virus Figura 5. Esquemas representativos de los Priones Figura 6. Esquema del poder infectivo de los priones Figura 7. Arqueas Figura 8. Esquemas representativos de diferentes tipos de bacterias Figura 9. Imgenes de la Spirulina mxima e Horminios en Spirulina Figura 10. Imagen de Micoplama Figura 11. Imagen de un micoplasma Figura 12. Representacin esquemtica de una bacteria Figura 13. Representacin esquemtica de una pared celular gram positiva y negativa. Figura 14. Representacin reproduccin de una bacteria Figura 15. Clasificacin Morfolgica de las bacterias Figura 16. Protozoos Figura 17. Esquema de un paramecio Figura 18. Entamoeba histoltica. Figura 19. Imagen del parsito Balantidium Colli Figura 20. Tripanosomas en sangre. Figura 21. Imagen de una Giardia lamblia Figura 22. Imagen de los Plasmodium Figura 23. Imgenes de algas Figura 24. Imagen de una especie de levaduras Figura 25. Imgenes de hifas de diferentes tipos de hongos Figura 26. Reproduccin asexual del hongo del pan: Rhizopus nigricans modificado e imagen de Conidios en Penicillium Figura 27. Reproduccin sexual de los hongos Figura 28. Imgenes de levaduras: Saccharomyces cerevisiaede la familia Ascomycota y Cryptococcus albidus, utilizadas para la fabricacin de pan Figura 29. Estructura del ADN Figura 30. Serratia marcescens Figura 31. Recombinacin gentica de bacterias Figura 32. Plasmodium falciparum Figura 33. Aspectos para el clculo del crecimiento microbiano
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Figura 34. Curva de crecimiento bacteriano Figura 35. Esquema de los parmetros de crecimiento microbiano Figura 36. Imagen y partes de una autoclave Figura 37. Horno Pasteur Figura 38. Destilador de agua Figura 39. Siembra en Cmara de Flujo Laminar Figura 40. Imgenes de equipos de incubacin Figura 41. Phmetro y contador de colonias Figura 42. El microscopio y sus partes Figura 43. Cultivo de bacterias y aislamiento de colonias Figura 44. Mtodo de aislamiento por siembra por estra en placa. Figura 45. Imagen de siembra por estras Figura 46. Imagen de la tcnica del microcultivo de microorganismos Figura 47. Cryptococcus neoformans en tincin con tinta china. Figura 48. Imgenes de diferentes tinciones de Gram Figura 49. Esquema del procedimiento de la tincin de Gram Figura 50. Pared celular de las bacterias Gram positivas y Gram negativas Figura 51. Mycobacterium tuberculosis Figura 52. Clostridium perfringens, microorganismo causante del ttano Figura 53. Recuento en placa dilucin de la muestra Figura 54. Contador de colonias Figura 55. Esquema de los elementos necesarios para el recuento de colonias Figura 56. Rhizobium, streptomyces griseus Figura 57. Ciclos biogeoqumicos Figura 58. Ciclo del carbono Figura 59. Ciclo del nitrgeno Figura 60. Esquema del ciclo del azufre Figura 61. Organismos del suelo Figura 62. Algas verdeazules Figura 63. Micelio (esporangios) de hongo Figura 64. Esquema de Las Bacterias y su importancia en la produccin de alimentos Figura 65. Lactobacillus bulgaricus Figura 66. Secuencia lgica para la aplicacin del sistema de haccp Figura 67. Ejemplo de hoja de trabajo del sistema de HACCP Figura 68. Trada epidemiolgica
97 108 122 123 123 124 124 126 127 131 139 140 141 144 145 146 147 148 149 152 153 154 167 171 172 173 175 178 179 180 190 205 210 211 217
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FICHA TCNICA
Nombre del curso: Palabras clave: Microbiologa cdigo 201504 Microorganismos, bacterias, hongos, algas, virus, crecimiento, cultivo y tcnicas de laboratorio, biotecnologa, seguridad microbiana, aplicaciones industriales Universidad Nacional Abierta y a Distancia -UNAD. Bogot Colombia Protocolo Carmen Eugenia Pia Lpez carmen.pina@unad.edu.co. Ajustado por: Marta Cecilia Vinasco Guzmn, marta.vinasco@unad.edu.co. Mery Liliana Lpez Martnez mery.lopez@unad.edu.co.
Institucin: Ciudad: Autora del Acadmico:
Ao: Unidad Acadmica: Campo de formacin: rea del conocimiento: Crditos acadmicos:
2011. Ciencias Bsicas Bsica disciplinar Ciencias Naturales. Tres (3), correspondiente a 144 horas de trabajo acadmico: 106 horas promedio de estudio independiente y 38 horas promedio de acompaamiento tutorial. Tipo de curso: Metodolgico. No Habilitable Destinatarios: Estudiantes de diversos programas de pregrado y cursos abiertos de la Universidad Nacional Abierta y a Distancia-UNAD-. Competencia general de El estudiante identifica y describe con propiedad los enfoques aprendizaje: tericos de la microbiologa, as como sus aplicaciones en los problemas del entorno, aspectos que configuran el campo terico de la microbiologa, mediante el anlisis de alternativas de uso seguro a nivel industrial apoyadas en experiencias previas de laboratorio y en procesos de investigacin formativa. Adems el estudiante potencia su capacidad de autodireccin del aprendizaje. Metodologa de oferta: A distancia. Formato de circulacin: Documentos impresos en papel, Web; CD-ROM. Se en el curso hipermedia se encuentran una serie de vdeos, animaciones. interactividades que potencian el autoaprendizaje Denominacin de las 1. Tendencias disciplinares de la microbiologa unidades didcticas: 2. Crecimiento Microbiano 3. Ecologa Microbiana y Microbiologa ambiental
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1. UNIDAD 1: TENDENCIAS DISCIPLINARES DE LA MICROBIOLOGA Esquema de la unidad
Ficha tcnica Unidad 1: Tendencias Disciplinares de la Microbiologa Palabras claves: Microorganismos, ciencia, interacciones, biotecnologa, clulas eucariotas y procariotas, gentica, bacterias, hongos, algas, virus. Horas de trabajo acadmico: El contenido de esta unidad corresponde a un crdito acadmico, que equivale a 12 horas de acompaamiento tutorial y 36 horas de trabajo independiente
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Introduccin: La microbiologa es una rama de la biologa que se encarga del estudio de los organismos vivos de tamao microscpico. Los microorganismos, algunos tiles y otros perjudiciales, son indispensables para la conservacin de la vida. Los determinantes ecolgicos (condiciones ambientales), establecen las caractersticas de los microorganismos presentes. Esas caractersticas se ven representadas en la gran variedad de especies, nmero poblacional, requerimientos nutricionales, utilizacin de oxgeno para su metabolismo, etc. Justificacin: Los estudiantes de carreras que tienen que ver con las ciencias de la vida, deben conocer los conceptos bsicos de la morfologa de los microorganismos, derivado del concepto de la ubicuidad de stos, puesto que se encuentran en cualquier lugar de su entorno. Intencionalidades formativas: El estudiante debe adquirir con el desarrollo de la presente unidad los conocimientos bsicos de la morfologa y la taxonoma de microorganismos como las bacterias, los protozoos, los virus, los hongos y las algas. Objetivos Identificar y describir los enfoques tericos de la microbiologa, as como sus aplicaciones en los problemas del entorno, aspectos que configuran el campo terico de la microbiologa Definir los trminos ms importantes en el campo de la microbiologa Conocer las principales diferencias entre los diferentes grupos de microorganismos Determinar la importancia que tienen para el hombre los microorganismos de uso industrial, en su vida cotidiana y su impacto en el medio ambiente.
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1.1. CAPITULO 1. INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA

Introduccin La Microbiologa, es una ciencia en constante avance por el proceso de interaccin entre los microorganismos y los humanos, plantas y animales, lo cual obliga a investigar las caractersticas de accin de cada tipo microbiano. Objetivos 1. 2. Identificar y describir los enfoques tericos de la microbiologa. Identificar la interrelacin de esta ciencia con diversos campos de estudio, desde una perspectiva cientfica y prctica
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1.1.1 Leccin 1. Definicin de Microbiologa
La microbiologa estudia los microorganismos u organismos generalmente microscpicos, aunque algunos pueden ser observados a simple vista. Hay muchos campos de estudio especfico en microbiologa: bacteriologa, protozoologa, micologa, virologa, microbiologa agrcola, microbiologa de alimentos, microbiologa ambiental, entre otras. El objeto material de la microbiologa viene delimitado por el tamao de los seres que investiga, lo que supone que abarca una enorme heterogeneidad de tipos estructurales, funcionales y taxonmicos: desde partculas no celulares como los virus, viroides y priones, hasta organismos celulares tan diferentes como las bacterias: eubacterias, arqueas, los protozoos, parte de las algas, los hongos y levaduras. La microbiologa es una disciplina que aporta tanto conceptos como tcnicas y metodologas tiles para la gestin industrial de muchos procesos que aprovechan la capacidad de los microorganismos para la produccin rpida de una serie de insumos y de transformaciones de materiales, necesarios para el desarrollo humano y econmico, tales como aumento y rendimiento de cultivos, biofertilizantes, biocontrol, vectores para transferencias de informacin gentica en el desarrollo de plantas transgnicas, produccin de compuestos qumicos y aditivos para alimentos, eliminacin de materiales contaminantes y residuos txicos del medio ambiente entre otras. Qu son los microorganismos? Son los seres ms numerosos que habitan en todas las regiones del planeta: suelo, aire, agua, hielo, rocas, cuerpo del hombre y de los animales, en plantas, alimentos. Sin ellos nuestro planeta no podra sobrevivir. La mayora son de tamao microscpico, aunque los hay visibles a simple vista como es el caso de algunos hongos y algas. Los microorganismos se adaptan a las condiciones en que ningn otro organismo podra sobrevivir (cidas, saladas, presin y temperaturas ms extremas en la tierra). A excepcin de los virus los microorganismos pueden existir como clulas individuales o como colonias de clulas. Una clula microbiana puede realizar de forma independiente todos los procesos metablicos necesarios para vivir. De acuerdo con su estructura celular los microorganismos pueden ser procariotas y eucariotas. Dentro de los procariotas se encuentran las bacterias: arqueas y eubacterias, dentro de los eucariotas
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se agrupan: los hongos filamentosos pluricelulares de mayor tamao y las levaduras unicelulares pertenecientes al reino Fungi, las algas (rojas, diatomeas y verdes.) y los protozoos pertenecientes al reino protista. Tambin encontramos microorganismos acelulares de tamao submicroscpico como son los virus, viroides y priones. Los microorganismos pueden ser: patgenos cuando son agentes causantes de enfermedades, no patgenos habitantes de la flora normal del cuerpo y microorganismos benficos utilizados en medicina, en la industria y en el control de la contaminacin. El papel de los microorganismos en el mantenimiento de los ecosistemas es de vital importancia, ya que son los responsables del reciclamiento de la materia. En los ciclos biogeoqumicos, todos los ecosistemas terrestres y acuticos dependen de los microorganismos para sostener sus requerimientos nutricionales. Tabla 1. Comparacin de tamaos en el estudio microbiolgico
Ciencia Virologa Bacteriologa Microorganismo Virus Nanobacterias ultramicrobacterias Arqueas Cianobacterias Bacterias Tamao 18 y 20 nanmetros de ancho 20 a los 200 nanmetros o 0.02 -0.20 m 0,5-5 m, 1 a 10 m Nanobacterias 0.05 m Micoplasmas 0.2 a 0.3 m Epulopiscium una bacteria de gran tamao 0.5 mm Equivalencia 1 nanmetro (m) = 1 millonsima parte de 1 milmetro 1000 nm = 1 m Micrmetro (m) = 1/1000 milmetros, es tambin conocido como micra (.) 1 m = 0,001 mm 1 mm = 1000 m
Micologa
Hongos
Ficologa Protozoologa
Algas Protozoos
E. coli 0.5 m de ancho por 2 m de largo Levaduras 2,5 -10 m de ancho y 4, 5-21 m. de largo hongos filamentosos 2 mm a 20 cm. de 1 m hasta las que se observan a simple vista 10 m a varios mm.
Transferencia
De los siguientes enunciados, indique cual es el ms exacto para definir un microorganismo: A. B. C. D.
Organismos Eucariotas, capaces de generar un beneficio para el hombre y en ocasiones ser trasmisores de enfermedades. Aquellos que ayudan a la produccin rpida de una serie de insumos y de transformaciones de materiales, necesarios desarrollo humano y econmico, tales como aumento y rendimiento de cultivos, biofertilizantes, biocontrol y vectores . Los seres ms numerosos que habitan en todas las regiones del planeta: suelo, aire, agua, hielo, rocas, cuerpo del hombre animales, en plantas, alimentos. Organismos Procariotas, capaces de generar un beneficio para el hombre y en ocasiones ser trasmisores de enfermedades
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1.1.2. Leccin 2. Evolucin histrica
La evolucin histrica de la microbiologa es muy interesante por los trabajos y descubrimientos de los grandes pioneros de esta disciplina. La primera invencin que abri la posibilidad de estudio de lo pequeo, fue la creacin del microscopio a comienzos del siglo XVII por el holands Antony van Leeuwenhoek. Hasta la segunda mitad del siglo XIV la gente crea que los organismos surgan espontneamente del suelo hmedo, del estircol o de la carne en descomposicin, a esto se le conoca como la Teora de la generacin espontnea. Una de las implicaciones de la invencin del microscopio y la posible observacin de estos minsculos seres vivos fue el inters de la comunidad cientfica por el origen de estos seres microscpicos.
Los italianos, Francisco Redi (mediados siglo XVII) y Lazzaro Spallanzani (mediados siglo XVIII), lograron desvirtuar la teora de la generacin espontnea. Redi coloc pedazos de carne en frascos abiertos y cerrados. Not que slo aparecan gusanos en los frascos abiertos y Lazzaro Spallanzani mediante sencillos experimentos, hirviendo un caldo que contena microorganismos en un recipiente de vidrio, y cerrndolo despus hermticamente para evitar la entrada de aire, impidi el crecimiento de microorganismos al mantenerse el caldo claro y estril.
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Figura 1. Experimento de la teora de la generacin espontnea
Tomado de: http://aportes.educ.ar/biologia/nucleo-teorico/recorrido-historico/como-seorigina-la-vida/los_primeros_experimentos.php En 1858 el alemn Rudolf Virchow contrapuso a la teora de la generacin espontnea la Teora de la Biognesis: toda clula viva proviene de otra clula viva. Louis Pasteur, en 1861 fue quien en definitiva logr refutar la teora de la generacin espontnea al demostrar experimentalmente que los microorganismos presentes en el aire, slidos y lquidos, eran los responsables de la contaminacin de la materia y que estos microorganismos podan ser destruidos por accin del calor. Pasteur utiliz recipientes con cuellos largos y curvos, en los que coloc un caldo que haba hervido durante algunos minutos. Al retirarlo del fuego, el aire entraba por el cuello, pero los microbios quedaban atrapados en l, lo que impeda que contaminaran el lquido y permita conservarlo estril indefinidamente. Solo cuando se rompa el cuello, aparecan organismos en el caldo.
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Figura 2. Experimento de Louis Pasteur
Tomado de: http://es.geocities.com/joakinicu/imagen0016.htm
La edad de Oro de la microbiologa tuvo lugar durante los aos 1857 a 1914, cuando se lograron innumerables avances que establecieron a la microbiologa como una ciencia. Algunos de estos avances son los aportados por Louis Pasteur sobre: la teora de la enfermedad infecciosa, el desarrollo de la pasteurizacin, la fermentacin por accin de levaduras, el desarrollo de las tcnicas de inmunizacin. Los desarrollados por Robert Koch como el descubrimiento del Bacillus anthracis causante del carbunco, del Mycobacterium turbeculosis, agente de la tuberculosis, de la bacteria Vibrio cholerae, causante del clera. En 1928 Alexander Fleming descubri de forma accidental un hongo al que llam penicilina, capaz de inhibir el crecimiento de las bacterias. Ms tarde este hongo fue identificado como Penicillium notatun. El cambio de enfoque que tuvieron los cientficos a comienzos del siglo XX influy en la independencia que obtuvo la microbiologa de la biologa general. Los principales
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intereses de los microbilogos en este periodo fueron la caracterizacin de enfermedades infecciosas, el estudio de la inmunidad y de sus funciones en la prevencin y curacin de las enfermedades, la bsqueda de agentes quimioteraputicos y el anlisis de las actividades qumicas de los microorganismos, mientras que los bilogos estaban concentrados en la organizacin de la clula y su papel en la reproduccin, el desarrollo y los mecanismos de herencia y evolucin de vegetales y animales. Gracias a los desarrollos alcanzados en la microbiologa se crearon nuevas ramas de esta ciencia como la virologa y la inmunologa. Aos despus, aportes importantes de la microbiologa en la bioqumica y la gentica pusieron fin a un largo aislamiento de sta entre las principales corrientes del pensamiento biolgico y establecieron la base para la segunda revolucin importante de la biologa: la biologa molecular. La relacin de la gentica microbiana con la biologa molecular dio origen a la tecnologa del ADN recombinante que permite obtener microorganismos modificados genticamente para:
Producir hormonas como la insulina humana utilizada en pacientes diabticos y que es obtenida a partir de la levadura transgnica de Saccharomyces cervisiae, o de bacterias como Escherichia coli modificadas genticamente; la hormona del crecimiento que se obtiene a partir de bacterias transgnicas. Elaborar frmacos, vacunas, anticuerpos. Fabricar aditivos para los alimentos como edulcolorantes, aminocidos. Producir enzimas utilizadas en la fabricacin de productos de panadera, en cervecera, en la fabricacin del queso. Degradar residuos compuestos txicos como los detergentes, como los hidrocarburos, por ejemplo las bacterias transgnicas de Pseudomonas utilizan como nutrientes compuestos polihalogenados, convirtindolos en productos inocuos para el medio ambiente. Esta tcnica se conoce como biorremediacin.
Campos de aplicacin y perspectivas La relacin de la microbiologa con otras disciplinas ha generado el desarrollo de otros campos del conocimiento como: La microbiologa de alimentos, estudia los microorganismos como productores de alimentos y como agentes de deterioro de alimentos. En el primer caso selecciona, mantiene, y mejora microorganismos tiles en la generacin de productos alimenticios, con nuevas caractersticas sensoriales: texturas, olores o sabores, en el segundo caso se encarga de desarrollar mecanismos para prevenir y controlar el contacto con los alimentos. La microbiologa industrial se encarga de estudiar y manipular los microorganismos a
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gran escala para que produzcan compuestos o realicen funciones tiles como la produccin y transformacin de alimentos, frmacos, vacunas, disolventes orgnicos. Por ejemplo la protena unicelular utilizada en la alimentacin animal y producida por microorganismos cultivados sobre desechos industriales da rendimientos muchsimo ms elevados que la producida en las cosechas. La microbiologa mdica estudia e identifica los agentes causantes de enfermedades y su proceso infeccioso, as como la respuesta inmunolgica del paciente (sistema inmune y proteccin ante agresiones externas), y la seleccin del tratamiento antimicrobiano. La microbiologa agrcola estudia los procesos microbianos tiles para el crecimiento de las plantas, adems de las enfermedades de las plantas causadas por hongos, bacterias, virus, viroides entre otros. La microbiologa Sanitaria desarrolla procesos de ingeniera a gran escala para el tratamiento de residuos. La microbiologa del agua potable investiga y aplica mtodos para eliminar las bacterias patgenas en redes de agua. Igualmente gracias al estudio de los microorganismos, en la actualidad, se han desarrollado otras ramas de la Biologa, como la Gentica Microbiana, la Ingeniera gentica y la Biotecnologa. Gentica microbiana estudia la funcin de los genes, su expresin y regulacin. La Ingeniera gentica con importante aplicacin tanto en la en la parte clnica y en la agricultura. Mediante tcnicas de ADN recombinante se han producido protenas como la insulina, la hormona del crecimiento, el interfern, el factor VIII de coagulacin, las beta endorfinas que suprimen el dolor, vacunas contra microorganismos causantes de enfermedades La biotecnologa microbiana se conoce como el manejo, modificacin gentica y propagacin de microorganismos vivos mediante el uso de tecnologas como el cultivo de tejidos y la ingeniera gentica, que dan como resultado la obtencin de microorganismos nuevos o mejorados.
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PREGUNTAS DE ANLISIS DE RELACIN Este tipo de preguntas consta de dos proposiciones as: Una Afirmacin y una Razn, unidas por la palabra PORQUE. Usted debe examinar la veracidad de cada proposicin y la relacin terica que las une. Para responder este tipo de preguntas, debe leerla completamente y sealar en la hoja de respuesta, la elegida de acuerdo con las siguientes instrucciones: Marque A si la afirmacin y la razn son VERDADERAS y la razn es una explicacin CORRECTA de la afirmacin. Marque B si la afirmacin y la razn y la razn son VERDADERAS, pero la razn NO es una explicacin CORRECTA de la afirmacin. Marque C si la afirmacin es VERDADERA, pero la razn es una proposicin FALSA. Marque D si la afirmacin es FALSA, pero la razn es una proposicin VERDADERA.
En la edad de Oro de la microbiologa se lograron innumerables avances que establecieron a la microbiologa como una ciencia PORQUE se desarroll la pasteurizacin, la fermentacin por accin de levaduras y el desarrollo de las tcnicas de inmunizacin.
1.1.3. Leccin 3. Clasificacin de los Microorganismos
La taxonoma de los microorganismos se refiere a las formas de clasificacin con sus respectivos mtodos. La taxonoma se encarga de la clasificacin, identificacin y nomenclatura de los organismos. La clasificacin se relaciona con la agrupacin de los organismos en grupos o taxones en funcin de semejanzas mutuas o del parentesco evolutivo filogenia. La nomenclatura se ocupa de la asignacin de nombres a grupos taxonmicos de acuerdo con normas establecidas. La identificacin determina a que taxn pertenece un determinado organismo. La base en que se fundamenta la taxonoma microbiana se origina en la investigacin de las relaciones filogenticas resultantes de la evolucin, la cual desemboc en las tres
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grandes categoras o dominios denominados por Carl Woese: Arqueobacterias o archaea, Eubacterias y Eucariotas. * Arqueobacteria o Archaea Son las bacterias ms antiguas que se conocen y estn adaptadas a vivir en ambientes extremos, son de estructura clulas procariota. * Eubacteria o Bacteria comprende las cianobacterias, los micoplasmas y las llamadas "bacterias verdaderas", son de estructura clulas procariota. * Eucariota o Eukarya a este domino pertenecen los microorganismos de los reinos Protisto: protozoos y algas y del reino Fungi: los hongos filamentosos y los unicelulares como las levaduras y los organismos del reino Plantas y del reino Animal, son de estructura celular eucariota. Estos 3 dominios agrupan a los microorganismos conocidos a excepcin de los entes acelulares como los virus, viroides y priones. La distancia entre cada uno de los grupos incluidos en cada dominio indica el grado de parentesco entre ellos. Figura 3. Relaciones evolutivas entre los organismos vivos
Fuente: Dra. Carmen Eugenia Pia
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Identificacin y clasificacin de los microorganismos Adems de comprender y valorar los orgenes filogenticos de los organismos celulares resulta importante, ser capaz de identificar y clasificar los microorganismos. Una identificacin rpida de un microorganismo causante de enfermedades en humanos o animales es esencial para establecer el tratamiento adecuado del paciente. Se han usado varios criterios para caracterizar microorganismos y, en la actualidad, se tienen en cuenta tanto caractersticas celulares como filogenticas para la clasificacin. Tras un estudio profundo de la estructura y funcin de un microorganismo, incluyendo su gentica, metabolismo, comportamiento y otras propiedades distintivas, es posible reconocer un cierto nmero de caractersticas nicas en un microorganismo dado. Una vez que el organismo ha sido definido en funcin de esa serie de caractersticas propias, recibe un nombre. Los microbilogos usan el sistema binomial de nomenclatura establecido inicialmente por Linneo para designar animales y plantas. El sistema binomial consta de dos nombres: el gnero y la especie. El gnero es un nombre que se aplica a ciertos organismos relacionados; dentro del gnero, cada tipo de organismo recibe un nombre de especie. Los nombres de gnero y especie se usan siempre juntos para describir un tipo especfico de organismo, ya sea una clula aislada o un grupo de clulas. La primera palabra corresponde al nombre cientfico del gnero y se escribe la primera letra con mayscula y en cursiva, mientras que la segunda palabra corresponde a la especie, la cual se escribe en minsculas y en cursiva. Por ejemplo, la bacteria Escherichia coli, o abreviadamente E. coli, tiene una designacin de gnero, Escherichia, y un nombre de especie, coli. En microbiologa la unidad taxonmica bsica es la especie microbiana, cepa o estirpe.
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Tabla 2. Ejemplo de clasificacin completa de un Microorganismo: la bacteria Neisseria meningitidis

Dominio Eubacteria Reino Mnera Phylum Proteobacteria Clase proteobacteria Orden Neisserriales Familia Neisseriaceae Gnero Neisseria Especie Neisseria meningitidis
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A cul de los dominios propuestos por Carl Woese, pertenece el microorganismo que se define a continuacin: Son las bacterias ms antiguas que se conocen y estn adaptadas a vivir en ambientes extremos, son de estructura clulas procariota: A. B. C. D. Eukarya Arqueobacteria o Archea Eubacteria Fungi.
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1.1.4. Actividades de Autoevaluacin del captulo 1 CRUCIGRAMA: TRMINOS IMPORTANTES EN MICROBIOLOGA

HORIZONTALES: 1. Se dice de la infeccin contrada en un hospital 4. Capacidad de un agente infeccioso de producir enfermedad en un husped susceptible 5. Indica el grado de patogenicidad de un microorganismo 6. Se dice de la enfermedad que est restringida a una zona determinada donde son habituales. 9. Proliferacin de microorganismos patgenos en alguna parte del cuerpo de un organismo. 10. Ausencia de toda clase de microorganismos patgenos. 11. Organismo, normalmente insectos, que transmiten un agente patgeno de un individuo enfermo a uno sano. 12. Enfermedades de los animales que se pueden transmitir al hombre.
VERTICALES: 2. Presencia de bacterias en la sangre con infeccin generalizada 3. Epidemia que afecta a mucha poblacin a nivel mundial. 7. Trmino propuesto para referirse a las enfermedades causadas por organismos que son de vida libre pero que ocasionalmente se comportan como parsitos facultativos. 8. Enfermedad infecciosa que afecta a un nmero elevado de personas de una zona en un periodo corto de tiempo.
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1.2. CAPITULO 2. DIVERSIDAD MICROBIANA

Introduccin El presente captulo aborda el estudio de los microorganismos para diferenciarlos por tipos y categoras especficas, lo cual permite la sistematizacin del conocimiento entre la red de investigadores a nivel mundial. Comprender la diversidad microbiana, requiere conocer las races evolutivas de las clulas. Debido a que la evolucin ha forjado todas las formas de vida en la Tierra, la diversidad estructural y funcional que apreciamos en las clulas representa un conjunto de xitos evolutivos que, a travs del proceso de la seleccin natural, confieren un valor de supervivencia (adaptabilidad) a los microorganismos de hoy. La diversidad microbiana puede ser apreciada en trminos de variaciones en el tamao celular y la morfologa, estrategias metablicas, movilidad, divisin celular, biologa del desarrollo, adaptacin a ambientes extremos y muchos otros aspectos estructurales y funcionales de la clula. Para poder comprender la gran diversidad de microorganismos existentes es preciso agruparlos y organizar los grupos generales en una estructura jerrquica sin superposiciones. De eso se encarga la Taxonoma, que es la ciencia de la clasificacin biolgica.
Objetivos Mostrar la diversidad microbiana desde el punto de vista sistemtico. Identificar y describir con propiedad los grupos acelulares conocidos como virus, viroides y priones. Identificar las enfermedades y las aplicaciones tiles o industriales de estos microorganismos
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1.2.1. Leccin 4. Organismos acelulares
Los virus se encuentran en todos los lugares: en el aire, agua, suelo, en todos los materiales, no como estructuras aisladas, sino parasitando las clulas de bacterias, hongos, plantas, animales, hombre a las que pueden infectar. Son organismos submicroscpicos (observables solo a travs del microscopio electrnico), de forma variable, pueden ser alargados, en forma de valos puntiagudos o de ladrillos con las esquinas redondas, otros son polidricos, icosadricos (polgono de 20 lados), otros tienen apariencia de cuerdas con bucles, otros como los bacterifagos que atacan a las bacterias, tienen forma ms compleja su estructura presenta cabeza y cola.
Figura 4. Imagen y representacin grfica de un virus
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Organizacin y composicin de los Virus Los virus contienen solamente un tipo de cido nucleico que puede ser: ADN (cido desoxirribonucleico) o ARN (cido ribonucleico), de banda sencilla o de doble banda. El cido nucleico est rodeado de una cubierta de protena denominada cpsida viral la cual tiene como funcin proteger el cido nucleico vrico y propiciar la unin del virus con los receptores de la clula a infectar. La cpsida a su vez est constituida por fragmentos de protenas llamadas cpsomeros. La cpsida constituye la mayor parte de la masa del virus. Algunos tipos de virus como el de la inmunodeficiencia humana (VIH), poseen una envoltura que envuelve la cpsida y est constituida por lpidos y protenas. La envoltura tiene su origen en la membrana de la clula infectada y es tomada en el momento en que el virus abandona la clula. La presencia de lpidos en la envoltura hace que los virus sean sensibles a disolventes de grasa como el ter. A esta estructura completa se la denomina partcula vrica o virin Los virus no tienen organizacin celular, carecen de de ribosomas, de sistemas productores de energa (ATP) y de sistemas enzimticos para la sntesis de cido nucleico y protenas, elementos necesarios para realizar sus procesos metablicos de manera independiente, como son su crecimiento y replicacin, para lo cual el genoma viral utiliza el metabolismo de la clula hospedadora, constituyndose los virus en parsitos intracelulares obligados. Motivo por el cual se les sita en el lmite entre lo vivo y lo no vivo. Los virus tienen especificidad por el tipo de clula a infectar. Por ejemplo un virus puede infectar una clula vegetal pero no una animal y solamente un tipo de clula dentro del organismo animal o vegetal. Algunos virus pueden existir en portadores sanos, pero al ser transmitidos a otro ser, este puede sufrir la infeccin. Es el caso del virus del SIDA.. Formas de accin viral. Los virus pueden actuar de dos formas distintas: Como agentes infecciosos productores de enfermedades en el hombre, las plantas y los animales. Se reproducen en el interior de las clulas que infectan de donde obtienen todo el material y los mecanismos requeridos para su replicacin. Al no poseer metabolismo propio son insensibles a los antibiticos y a otros frmacos que actan sobre las vas metablicas, siendo en su mayora susceptibles al interfern. Como agentes genticos que modifican el material hereditario de las clulas que
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infectan, al unirse a su material gentico y causar variabilidad gentica. Los virus que infectan a las bacterias se denominan bacterifagos. Mecanismo de replicacin de los virus. El mecanismo de replicacin de los virus depende la constitucin del virus (tipo de cido nucleico, presencia o ausencia de envoltura) y del tipo de clula husped. El proceso se inicia con la adhesin del virus a la clula. El virus penetra dentro de la clula e inyecta en ella su cido nucleico (material gentico). Si el cido nucleico del virus es ADN, este se inserta en el ADN de la clula hospedera. El ADN de la clula hospedera fabrica las protenas vricas y el cido nucleico viral se replica en la clula que parsita utilizando las enzimas, el material y los mecanismos de la clula que lo hospeda. Si el cido nucleico del virus es ARN, el virus debe primero cambiar su ARN en ADN, empleando la maquinaria de la clula hospedera para poder insertarse. Luego la clula hospedera fabrica las protenas vricas y el cido nucleico viral se replica en la clula que parsita utilizando las enzimas, el material y los mecanismos de la clula que hospeda. Cuando hay suficiente cantidad de cido nucleico viral este se ensambla con la protena vrica y abandona la clula. Los virus emplean las enzimas de la clula hospedera para fabricar nuevas cpsidas y otras protenas virales. Los nuevos genes virales y las protenas se ensamblan en nuevas partculas virales. Los nuevos virus son liberados de la clula hospedera. Ciclo Vital de los virus o mecanismo de replicacin ltico1 El ciclo vital de los virus consta de las siguientes cuatro fases: entrada en la clula, eclipse, multiplicacin y liberacin del virus. Veremos primero el ciclo vital de un virus, explicado de la forma ms general posible, para pasar a continuacin a estudiar las diversas modalidades que pueden presentarse en cada una de las fases del ciclo. 1. Entrada La entrada en la clula consta a su vez de dos etapas: la adsorcin o fijacin del virus en la superficie celular, y la penetracin a travs de la membrana. En la fase de fijacin el virus se une a la membrana de la clula hospedadora de forma estable. Hay una alta especificidad en la fijacin de un virus a la membrana de su clula
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Adaptado de: http://es.wikipedia.org/wiki/Ciclo_reproductivo_de_los_virus
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hospedadora, porque se ha de producir la unin entre determinadas protenas de la cpsida vrica y determinadas glicoprotenas de la membrana plasmtica de la clula que lo hospeda. A lo largo de un proceso evolutivo, cada virus ha ido adquiriendo sitios de unin especficos para anclarse en la membrana de un determinado tipo celular. La penetracin o inyeccin a travs de la membrana sigue diversas modalidades. Como resultado, bien el virus completo o bien solamente su cido nucleico, logra invadir el citoplasma celular. Por regla general, se necesita el concurso de muchos virus para que alguno de ellos logre penetrar en la clula. 2. Eclipse La fase de eclipse corresponde a un tiempo, despus de la penetracin, en que el virus parece desaparecer, pues no se advierte ningn indicio de su presencia ni de su actividad. Lo que ocurre en esta fase es que se da un desensamblaje de las piezas del virus (si es que ha penetrado completo), y su cido nucleico queda asimilado en las estructuras celulares aptas para los procesos de replicacin y trascripcin. Esta fase, variable de unos tipos de virus a otros. Durante esta fase se produce la sntesis del ARN, necesario para generar las copias de protenas de la cpsida. Tambin se produce la continua formacin de cidos nucleicos virales y enzimas destructoras del ADN bacteriano. Termina con la sntesis de los ARNm necesarios para que se sinteticen las protenas que actuarn en la multiplicacin del virus. 3. Multiplicaciny ensamblaje La multiplicacin del virus consiste tanto en la replicacin de su cido nucleico, como en la sntesis de las protenas de la cpsida. Los cidos nucleicos y las protenas recin sintetizadas se ensamblan rpidamente, producindose nuevas partculas vricas. En esta fase se produce la unin de los capsmeros para formar la cpsida y el empaquetamiento del cido nucleico viral dentro de ella. 4. Liberaciny Lisis La liberacin del virus consiste en la salida de las nuevas partculas vricas o viriones, que podrn infectar nuevas clulas iniciando un nuevo ciclo. Los viriones salen de la clula, mediante la lisis o ruptura enzimtica de la pared bacteriana que conlleva a la muerte celular. Los nuevos virus se encuentran en situacin de infectar una nueva clula. Modalidades de penetracin en la clula Los virus complejos producen una ruptura en la membrana bacteriana en uno de los puntos de anclaje, gracias a la presencia de algunas molculas de enzimas hidrolticas
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entre las protenas de la cpsida. A travs de la ruptura, el tubo central inyecta del ADN vrico, quedando la cpsida vaca en el exterior de la bacteria. La presencia de cpsidas en la superficie bacteriana es un buen indicio de que la bacteria ha sufrido una infeccin vrica. Otros virus sin envoltura lipdica, se introducen en la clula con cpsida y todo, lo cual puede realizarse de dos maneras: Por penetracin directa: despus de la fijacin, el virus abre una brecha en la membrana y se introduce en el citoplasma. Por endocitosis: la membrana forma una invaginacin en torno al virus, llegando a formar una vescula que penetra en la clula. Formada la vescula, el virus abre una brecha en la membrana de la misma con ayuda de algunas enzimas hidrolticas que l mismo transporta, penetrando as en el citoplasma. Los virus con envoltura lipdica burlan la barrera de la membrana celular porque su cubierta lipdica se funde con la membrana, ya que tienen la misma naturaleza. Esta fusin de membranas puede realizarse en dos lugares distintos: Fusin en la superficie celular: de manera que el virin penetra directamente en el citoplasma. Fusin con un lisosoma: se forma una vescula por endocitosis, a la que se une un lisosoma para digerir la partcula introducida; entonces, la cubierta lipdica del virus se funde con la membrana del lisosoma y el virin escapa hacia el citoplasma. Modalidades de fase de eclipse Segn la duracin de la fase de eclipse, se suelen distinguir dos modalidades de ciclo infeccioso de un virus: Ciclo Ltico: el cido nucleico vrico procede inmediatamente a la transcripcin de su mensaje gentico en los ARNm necesarios para su multiplicacin, y prosigue rpidamente el ciclo vital. Este tipo de ciclo es el ms extendido en la naturaleza. Ciclo lisognico: fue descubierto por Lwoff en bacterifagos. El ADN vrico se cierra por sus extremos generando un ADN circular. Este ADN se inserta en el ADN bacteriano en un lugar especfico en el que la secuencia de nucletidos bacterianos es semejante a alguna regin del ADN vrico. La bacteria prosigue sus funciones vitales sin que el virus realice ninguna accin, y cuando el ADN bacteriano se duplica tambin lo hace el ADN vrico, de manera que el genoma del virus pasa a las dos bacterias hijas. La multiplicacin bacteriana puede seguir
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durante generaciones sin que el virus se manifieste. Pero ante una alteracin de las condiciones ambientales, el ADN vrico se separa del bacteriano y prosigue entonces las restantes fases de ciclo infeccioso, produciendo la muerte de la bacteria y nuevos ejemplares del virus. Algunos virus que infectan clulas animales siguen tambin el ciclo lisognico, como los virus de las verrugas y algunos retrovirus que producen algunos tipos de cncer. En el caso de los retrovirus, conviene recordar que el cido nucleico es ARN monocatenario, por lo que la transcriptasa inversa ha de copiar el genoma vrico en forma de ADN antes de que pueda insertarse en el ADN celular. Enfermedades virales Los virus son causantes de enfermedades infecciosas en el hombre como son : la viruela, la gripe, la hepatitis, las paperas, la rabia, la poliomielitis, el SIDA, el sarampin, la encefalitis, la rubola, el herpes, la fiebre amarilla sta ltima transmitida por un vector; en los animales originan el moquillo, la rabia, la influenza, la encefalitis, el clera; y en las plantas enfermedades como el virus del mosaico del tabaco y el virus del mosaico amarillo del nabo entre otras. Los mecanismos de transmisin son diversos algunos por va respiratoria cuando la persona enferma estornuda o tose; otros a travs de picaduras de insectos es el caso de la fiebre amarilla; o por mordedura de animales enfermos como en el caso de la rabia; los que causan trastornos digestivos por va oral-fecal y por inoculacin con jeringas u objetos infectados, por transfusin de sangre contaminada, por relaciones sexuales sin proteccin y por ltimo a travs de la madre al hijo durante el embarazo o en el momento del parto. En el caso de las plantas la transmisin se hace por insectos o nematodos. Los medios para prevenir la infeccin viral son las vacunas que causan inmunidad, evitar el contacto con personas infectadas, esterilizacin de objetos, uso de jeringas desechables. Importancia biolgica de los virus Los virus sirven para adelantar investigaciones biolgicas relacionadas con su mecanismo de replicacin y as poder encontrar mecanismos para controlar su multiplicacin. Algunos virus atacan bacterias e insectos perjudiciales ayudando a mantener el equilibrio ecolgico. Los virus permiten la elaboracin de vacunas, fueron de los primeros modelos para estudio del funcionamiento del genoma, los bilogos utilizan los virus para estudiar el mecanismo de control de la informacin gentica y extrapolarlo a organismos ms
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complejos. Los virus sirven como mediadores en el intercambio gentico entre individuos de una misma o diferentes especies proporcionando variabilidad de los organismos y por ende disminuyen la susceptibilidad a ser infectados. Por ejemplo, las bacterias que han sido infectadas por virus -bacterifagos- pueden realizar funciones que en otras condiciones no podra realizar. Algunos virus se utilizan en medicina para introducir informacin a clulas animales que presenten defectos genticos o adquiridos y as lograr que funcionen normalmente. Se usan en la identificacin de bacterias peligrosas en alimentos o superficies, lo que facilita su rpida deteccin y la instauracin de medidas preventivas. Otras formas acelulares Viroides: Son molculas de ARN circular que carecen de cubierta viral o cpsida, son de tamao menor que los virus. Su ARN est formado por muy pocas bases: 246-399 con un alto contenido en estructura secundaria que guarda la informacin para su propia sntesis en un hospedador adecuado al que causa, frecuentemente, una alteracin patolgica. Se encuentran en clulas vegetales donde causan enfermedades. Debido a que los viroides no codifican para ninguna protena deben necesariamente reclutar protenas y vas metablicas de la clula hospedera para completar su ciclo infeccioso. Se les considera como la etapa primitiva de los virus. Algunos producen enfermedades en plantas como las papas, el pepino, el tomate, la naranja, la vid, el coco entre otros, causando importantes prdidas econmicas. Se describieron por primera vez hace 30 aos y, aunque no est completamente descartado, se piensa que no afectan a los animales. El pri mero que se identific fue el de la papa, y ahora la lista es de 28 especies de viroides, dice Ricardo Flores del Instituto de Biologa Molecular y Celular de Plantas de la Universidad de Valencia. Algunos de ellos, como el tiroidea que afecta a los naranjos, hacen que la planta sea mucho ms pequea que un naranjo normal, pero las naranjas siguen siendo del mismo tamao, por lo que podran permitir plantar el doble de naranjos por hectrea. Priones: Son protenas que se multiplican en la clula hospedadora donde generan graves alteraciones. Todas las enfermedades ocasionadas por priones son neurolgicas, por ejemplo el sndrome de las vacas locas. Los priones son agentes patgenos formados por una protena (protena del prin o PPr). Los priones, o las enfermedades producidas por priones, por un lado se transmiten verticalmente, como
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cualquier enfermedad hereditaria tpica, mientras que por otro lado se comportan de manera infectiva, transmitindose horizontalmente, mediante contagios que pueden darse entre individuos de distintas especies. La protena del prin (PrP) normal, tiene una secuencia de aminocidos, (estructura primaria) idntica a la protena del prin patgena. La diferencia entre las dos recae en las estructuras secundaria y terciaria. La protena normal es muy rica en hlices alfa, la protena patgena lo es en lminas beta. Figura 5. Esquemas representativos de los Priones
Fuente: http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/Dibulgeneral/LosPriones/LosPriones.htm Poder infectivo de los priones El cambio de configuracin de la protena del prin es crucial, ya que las protenas con lminas beta son muy resistentes a las enzimas proteolticas, al calor y no se disuelven en agua. Pero sobre todo, la protena alterada tiene una caracterstica nica: interacciona con una molcula de protena normal, le cambia la conformacin y la hace capaz de convertir las estructuras de ms protenas normales. Ah radica al parecer, el poder infectivo de los priones.
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Figura 6. Esquema del poder infectivo de los priones
Fuente: http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/Dibulgeneral/LosPriones/LosPriones.htm Puede ocurrir que la protena patgena infecte individuos que producen protena normal (a), como ha ocurrido por ejemplo al consumir las vacas piensos elaborados a partir de ovejas enfermas. En este caso la protena patgena origina un cambio conformacional de la protena normal (b), transformando las hlices alfa de su estructura proteica en lminas beta. Las nuevas protenas patgenas inducen el cambio en otras normales, lo cual produce un efecto de "cascada". Transferencia
Los priones son: A. Un tipo de virus B. Una secuencia de ADN extracelular que ataca a una clula C. Una secuencia de ARN anmalo D. Una protena anmala que induce un cambio en otra protena
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Para saber ms: Profundizacin sobre virologa Biologa de los virus, contiene informacin acerca de cmo estn conformados los virus, tipos, estructura, formas de reproduccin y enfermedades virales ms relevantes. El portal de la virologa, con informacin actualizada sobre temas de inters como la gripa AH1N1, gripe aviar, herpes, sida, entre otros. El gran libro de los virus, excelente recurso con imgenes de todo tipo de virus, en ingls
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1.2.2. Leccin 5: Microorganismos celulares procariotas: Las arqueobacterias
Las bacterias pertenecen al reino Procariota, estas aportan un gran potencial para su utilizacin por parte del hombre, especialmente algunas del grupo de las cianobacterias. En otros casos como el grupo de los micoplasmas se destaca su gran incidencia en la generacin de enfermedades. Carl Woese mediante la secuenciacin de la molcula de ARNr, comprob que los procariotas pertenecientes al reino Mnera se dividan en 2 grupos o dominios: al primero de ellos lo llam Eubacteria o bacterias verdaderas, al segundo grupo lo llam Arqueobacteria.
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Las arqueobacterias incluye las bacteriasque pueden crecer en condiciones extremas como los hielos antrticos -psicrfilas-, o en fuentes termales (a veces a temperaturas superiores a las de la ebullicin del agua), como las que habitan en las aguas hirvientes del parque de Yellowstone o dentro de volcanes, son las arqueas llamadas termfilas extremas, otras habitan en medios anaerobios, con pH muy cido-acidofilas-, o en suelos y aguas altamente alcalinas son las llamadas alcalofilas, algunas arqueas son productoras de gas metano -metangenas-, otras se desarrollan en medios salinos, o sea, las halobacterias o halfitas. Algunas arqueas son habitantes normales del intestino del hombre y animales. Forma y Estructura de las Arqueobacterias Presentan formas similares a la de las bacterias verdaderas: esfricas, individuales o en grupo, bacilares, filamentosas, lobuladas.
Figura 7. Arqueas
Estructura de las arqueobacterias
Pared Celular Formada por lpidos, protena o glicoprotena a diferencia de la pared celular de peptidoglucano de las eubacterias. La pared presenta simetra hexagonal y adquiere diferentes morfologas como respuesta a los diferentes ambientes en los cuales se desarrolla.
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Membrana Plasmtica Carece de cidos grasos, en su lugar tiene cadenas laterales compuestas de unidades repetitivas de isopreno unidas por enlaces ter al glicerol que constituyen el glicerolditer, cuando se distribuyen a manera de bicapa y el gliceroltetrater cuando es a manera de monocapa, este ltimo arreglo es muy estable a temperaturas altas por lo tanto, no es una sorpresa que se encuentre principalmente en las arqueas termoacidfilas. ARN El ARN y enzimas de arqueobacterias son diferentes a los de las bacterias verdaderas. Metabolismo Muchas especies de Arqueobacterias definen actualmente los lmites ms extremos de la tolerancia biolgica a factores fisicoqumicos. Algunas Arqueobacterias muestran tambin propiedades bioqumicas poco comunes, como los metangenos, que son procariotas que producen metano (gas natural) como parte esencial de su metabolismo energtico. Las arqueas absorben CO2, N2 o H2S y eliminan CH4. Las arqueobacterias presentan adems mecanismos de defensa contra las condiciones extremas que podran afectarlas. Por ejemplo ellas fabrican una variedad de molculas y enzimas protectoras. Las arqueas que viven en medio ambiente altamente cidos, poseen en su superficie celular unas molculas cuya funcin es ponerse en contacto con el cido para evitar que penetre en la clula y as evitar que el ADN se destruya. Las arqueas halfilas toman del exterior sustancias como el cloruro de potasio para equilibrar el interior de la clula y evitar que el agua salada penetre y destruya la clula. Se pueden encontrar en algunos tipos de alimentos en los que se han utilizado altas concentraciones de sal (salmueras) para su preservacin como es el caso de pescados y carnes, en donde se reconoce su presencia porque forman manchas rojas. Las arqueas obtiene energa a partir de compuestos como hidrgeno, dixido de carbono y azufre. Algunas lo hacen a partir de la energa solar a travs de la bacteriorodopsina, un pigmento que reacciona con la luz y permite que la arqueobacteria fabrique el ATP.
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Las arqueobacterias son uno de los grupos de organismos ms antiguos que se encuentran en el planeta tierra, son procariotas, viven en ambientes de condiciones extremas, lo cual no es sorprendente teniendo en cuenta el hecho que son uno de los primeros organismos que aparecieron sobre la tierra en el momento que el planeta estaba lleno con gases txicos y posea elevadas temperaturas, Las arqueobacterias se clasifican en 3 phyla: metangenos, halfilos y termoacidfilos. Las eubacterias, son las bacterias comunes, a las que nos referimos cuando estamos hablando en general sobre las bacterias, tambin son procariotas y viven en ambientes que se pueden considerar de condiciones neutras, se encuentran prcticamente en todos los ambientes que nos rodean. Segn la lectura anterior, en el Mar Muerto, en la Catedral de Sal de Zipaquir, en las minas de sal en Manaure y en el Gran Lago salado de Utah, el tipo de bacterias que esperaramos encontrar es del tipo: A. Eubactearias Alcalfilas B. Arqueobacterias Xerfilas C. Eubacterias Osmfilas D. Arqueobacterias Halfilas
1.2.3. Leccin 6: Microorganismos celulares procariotas: Las Eubacterias
A las eubacterias tambin se les conoce como bacterias verdaderas, son microorganismos procariotas, unicelulares de organizacin muy sencilla, su tamao vara entre 1 y 10 micrmetros. (1 micrmetro equivale a 1/1000mm). Dentro de Eubacteria se presentan varias ramas evolutivas, que incluyen a todos los procariotas causantes de enfermedades (patgenas) y a la mayor parte de las bacterias que se encuentran normalmente en el aire, suelo, aguas, tracto digestivo de animales y hombre. Comprende: Las bacterias verdaderas o eubacterias Los micoplasmas Las cianobacterias.
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Figura 8. Esquemas representativos de diferentes tipos de bacterias
Estructura y funcin de las Eubacterias A excepcin de los micoplasmas todas poseen pared celular de peptidoglucano. Carecen de membrana que rodee el material gentico el cual se halla ms o menos disperso en el citoplasma. Presentan ADN de cadena doble circular cerrado. No poseen histonas en el ADN. Poseen un solo cromosoma. Su citoplasma no posee estructuras membranosas. Presentan mesosomas. Los ribosomas son de menor tamao. No poseen citoesqueleto. No poseen organelos como mitocondrias, cloroplastos, retculo endoplasmtico, Aparato de Golgi, lisosomas. Su reproduccin es asexual por gemacin, conjugacin o biparticin, no presentan mitosis, ni meiosis. La movilidad no es universal, pero muchas bacterias se mueven en medios acuticos debido a unas estructuras llamadas flagelos, que nada tienen que ver con los flagelos eucariticos.
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Grupo 1. Cianobacterias Las cianobacterias, antiguamente conocidas como algas verdeazules, por su color verdeazulado (a veces rojizo, pardo o negro), son bacterias que han estado viviendo sobre nuestro planeta por ms de 3 mil millones de aos. Se caracterizan por que son procariotas (sin ncleo verdadero), auttrofos, unicelulares, con tamaos entre 1 m hasta varios micrmetros. Las cianobacterias crecen en ambientes lnticos (lagos y lagunas), suelos hmedos, troncos muertos, cortezas de rboles, algunas en aguas salobres y otras en aguas termales. Hace miles de millones de aos las haba en tan gran nmero, que eran capaces de aadir, a travs de la fotosntesis, suficiente oxgeno a la primitiva atmsfera de la Tierra, como para que los animales que necesitaban oxgeno pudieran sobrevivir. Figura 9. Imgenes de la Spirulina mxima e Horminios en Spirulina
Adaptado de: http://www.biologie.uni-hamburg.de/bonline/ibc99/botanica/botanica/cyanophy.htm Estructura Celular de Cianobacterias Presentan diversidad de formas: Unicelulares (como Gloeocapsa), pluricelulares filamentosas como Spirulina, filamentosas ramificadas (como Stigonema), no ramificadas (como Oscillatoria), con heterocistes (clulas vegetativas diferenciadas que se encuentran regularmente a lo largo de un filamento o en un extremo del mismo. Su pared celular es semejante a la pared celular de las bacterias gram negativas, no contiene celulosa pero es muy resistente debido a la presencia de polisacridos unidos a polipptidos. Adems secretan una sustancia mucilaginosa que les confiere la defensa contra predadores ya que puede ser txica. Por otra parte une grupos de clulas formando filamentos (cianobacterias filamentosas). Algunas especies forman clulas
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especiales con pared exterior engrosada (acinetos) que les permite permanecer latentes cuando las condiciones ambientales son desfavorables (sequa, oscuridad, congelacin). Estos acinetos se rompen durante la germinacin para dar paso a la formacin de nuevos filamentos vegetativos La membrana plasmtica puede presentar invaginaciones o mesosomas parecidos a los de las bacterias gram positivas, la membrana celular contiene cidos grasos con dos o ms enlaces dobles en la cadena hidrocarbonada a diferencia de los dems procariotes que poseen cidos grasos saturados. Protoplasma (citoplasma), separado en cromoplasma (perifrico y pigmentado) y centroplasma (central, granuloso e incoloro). Nucleoplasma contiene el ADN puede aparecer en forma de pequeos grnulos, pueden aparecer granos de volutina, cianoficina y ribosomas. Los pigmentos que se encuentran en el citoplasma son: clorofila a, c, carotenoides, ficoxantina, ficocianina C, de color azul, ficocianobilina, ficoeritrina C, de color rojo, ficoeritrobilina entre otros. Reproduccin Asexual, por biparticin, o por fragmentacin de filamentos dando origen a hormogonios que se separan de los filamentos originales y se mueven deslizndose. Algunas experiencias parecen confirmar que existen fenmenos que implican la recombinacin de material gentico, al igual que en las bacterias. Nutricin Las cianobacterias son capaces de realizar fotosntesis. Algunas contienen pigmentos que les permiten usar la luz como fuente de energa mediante un proceso llamado fotosntesis, otras dependen de compuestos orgnicos como fuente de energa, y algunas pueden usar incluso compuestos qumicos inorgnicos como combustible para realizar los procesos celulares. Movilidad Los gneros Oscillatoria, Spirulina y Rivularia presentan movimiento. Las especies planctnicas, se caracterizan por poseer vesculas de gas en su citoplasma que son las encargadas de mantener el organismo en flotacin para ubicarse en la zona de mxima iluminacin. Algunas han adquirido estructuras especiales, como esporas, para mejorar la supervivencia. Tanto los ambientes aerobios (que contiene O 2) como los anxicos o anaerobios pueden ser habitados por distintas especies de cianobacterias.
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Importancia biolgica de las cianobacterias2 Las cianobacterias son organismos antiguos que se caracterizan por conjugar el proceso de la fotosntesis oxgenica con una estructura celular tpicamente bacteriana. Al ser responsables de la primera acumulacin de oxgeno en la atmsfera, las cianobacterias han tenido una enorme relevancia en la evolucin de nuestro planeta y de la vida en l. En la actualidad presentan una amplia distribucin ecolgica, encontrndose en ambientes muy variados, tanto terrestres como martimos, e incluso en los ms extremos, siendo la fotoautotrofia (Fotosntesis), su principal forma de vida, y contribuyendo de manera importante a la productividad primaria global de la Tierra. Muchas cianobacterias son capaces de fijar el nitrgeno atmosfrico, siendo, a su vez, capaces de hacerlo en condiciones de aerobiosis (de hecho, ciertas cianobacterias representan los mayores fijadores en amplias zonas ocenicas contribuyendo de forma importante a la cantidad total de nitrgeno fijado en vida libre). La existencia conjunta de la fotosntesis y de la fijacin de nitrgeno ha requerido el diseo de estrategias que hagan posible el funcionamiento de ambos procesos antagnicos desde el punto de vista de sus requerimientos ambientales. Entre tales estrategias la separacin en el tiempo o en el espacio de ambas funciones permite el desarrollo normal de la clula en condiciones de bajos niveles de nitrgeno combinado. En este sentido, merece particular mencin la capacidad de algunas especies filamentosas de desarrollar unas clulas llamadas heterocistos, enormemente especializadas en la fijacin del nitrgeno en ambientes aerbicos. Heterocistos en cianobacterias Los heterocistos son clulas especializadas, distribuidas a lo largo o al final del filamento (cianobacterias multicelulares filamentosas), los cuales tienen conexiones intercelulares con las clulas vegetativas adyacentes, de tal manera que existe un continuo movimiento de los productos de la fijacin de nitrgeno desde los heterocistos hacia las clulas vegetativas y de los productos fotosintticos desde las clulas vegetativas hacia los heterocistos (Todar, 2004). Las bases moleculares del proceso de diferenciacin de los heterocistos y el establecimiento del patrn de distribucin de los mismos en el filamento cianobacteriano constituyen uno de los campos ms activos en el estudio actual de las cianobacterias y, asimismo, representa un modelo simple de establecimiento de patrones espaciales de
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Tomado de http://www.eez.csic.es/~olivares/ciencia/fijacion/cianobacterias.htm
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diferenciacin cuyo estudio puede abordarse con la gran variedad de herramientas desarrolladas para el anlisis gentico-molecular de las cianobacterias, que incluyen la construccin de especies y la disponibilidad de la secuencia completa de los genomas de varias de ellas. Muchas cianobacterias, por ejemplo, Anabaena azollae juegan un papel importante en el desarrollo de cultivos como el arroz. Anabaena azollae, en simbiosis con helechos, proporciona hasta 50 Kg. de nitrgeno/ha siendo la utilizacin de este sistema fijador general en muchas regiones del sudeste asitico. Grupo 2. Los Micoplasmas3 Son bacterias de gran inters evolutivo debido a la sencillez de su estructura celular y a su tamao que oscila entre 0,2 y 2 m. Poseen diversas formas debido a la carencia de una estructura rgida, lo que tambin ha generado inconvenientes al momento de medir su dimetro regular. Se pueden encontrar en un mismo cultivo formas cocoides (0.2 - 0.3 m), espiraladas, filamentosas con frecuencia ramificadas, "hinchadas", etc. Estn delimitadas solamente por una membrana celular flexible resistente a la lisis osmtica. Carecen de pared celular y gracias a ello pueden pasar fcilmente por filtros bacteriolgicos. El nombre micoplasma se deriva de la propiedad de producir formas filamentosas, con aspecto de hongo.Poseen menos de la mitad del ADN que la mayora de los otros procariotes y esta cantidad tan pequea es suficiente para codificar todas las propiedades esenciales de una clula. Figura 10. Imagen de Micoplama
Fuente: http://www.marcobueno.net/
Adapatado de: http://encuentro.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_03_07.htm
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Los micoplasmas son aerobios o anaerobios. Algunas especies se encuentran en el suelo, otras en aguas residuales y otras ms viven sobre las membranas mucosas de los cuerpos de los animales o en las plantas, pero por lo general no son patgenas. Enfermedades causadas por micoplasmas Dentro de las enfermedades causadas por micoplasmas se incluyen las infecciones del tracto urinario y algunas formas de neumona. Como presentan resistencia natural a la penicilina y a la cicloserina, se deben tratar con antibiticos que no acten sobre la sntesis de la pared celular, sino que inhiban la sntesis de protenas como por ejemplo con tetraciclina. En los vegetales la especie Spiroplasma citri causa la enfermedad conocida como "tristeza del naranjo" y en las plantas de maz el "raquitismo del maz". En los animales otras especies de Spiroplasma son responsables de enfermedades como la espiroplasmosis de la abeja melfera y las cataratas del ratn lactante. En medios protegidos osmticamente como son los organismos de los hospedadores (en los cuales hay cierta estabilidad o equilibrio), los micoplasmas suelen sobrevivir pues no existe para ellos la posibilidad de enfrentarse a lisis osmtica como sucedera con alguna otra clula carente de pared celular. Aunque no se tien con la coloracin de Gram, se clasifican como miembros de las bacterias Gram positivas, ya que genticamente se relacionan con las bacterias del tipo clostridios. Metabolismode los micoplasmas Con respecto a su metabolismo, los micoplasmas usan como fuente de energa principalmente los carbohidratos y requieren factores de crecimiento como las vitaminas, los aminocidos y las bases nitrogenadas. Algunas especies son oxidativas y producen ATP por fosforilacin a travs de la cadena de transporte de electrones. Otras especies son fermentativas y utilizan azcar para obtener cido lctico. Para su reproduccin recurren al mecanismo de divisin por gemacin, as las clulas permanecen unidas entre s por medio de hifas.
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Figura 11. Imagen de un micoplasma
Fuente: http://www.meteored.com/RAM/numero31/nano.asp
Algunos micoplasmas tienen tamaos que oscilan entre 0.2 a 0.3 micrmetros (m) de dimetro Escherichia coli habitante natural en el intestino humano mide aproximadamente 0.5 m de ancho por 2 m de largo. Grupo 3. Las Bacterias verdaderas El tamao microscpico de las bacterias est determinado genticamente, y depende de la cepa, de las condiciones ambientales (nutrientes, sales, temperatura, tensin superficial). La unidad de medida bacteriana es el micrmetro (m), que equivale a 1/1000 milmetros (10-3 mm = 1 micrmetro). Para darse una idea de su tamao se calcula que en un centmetro cbico cabe alrededor de un milln de billones de bacilos de tamao medio. El rango en el tamao de las bacterias es muy variado, existen bacterias como las nanobacterias de aproximadamente un 0.05 mm, o bacterias de un tamao mayor como Epulopiscium, un comensal del intestino del pez cirujano que mide 0.5 mm. Forma y Composicin de las bacterias4 Las bacterias difieren en la forma, las hay esfricas u ovales llamadas cocos, alargadas cilndricas en forma de bastn se les denomina bacilos, en forma de espiral o helicoidal, los espirilos, en forma de coma las llamadas vibrios y algunas en forma cuadrada con lados y esquinas en ngulo recto. La forma de la bacteria puede ser modificada por las condiciones ambientales.
Adaptado de: http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/01historia.htm
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Figura 12. Representacin esquemtica de una bacteria
Las bacterias estn constituidas por un 70% de agua y un 30% de materia seca, de esta materia seca el 70% corresponde a protenas, el 3% a ADN, el 12% a ARN, el 5% a azucares, el 6% lpidos y el 4% a minerales. La estructura celular se divide en dos grupos: la estructura externa que no se encuentra en todas las clulas y participa en funciones especializadas; y la estructura interna que se encuentra en todas las clulas procariotas y es probablemente esencial para su supervivencia. Dentro de las estructuras externas se encuentran: la pared celular, los flagelos, las esporas, las fimbrias o pelos y la cpsula. Estas estructuras no siempre se encuentran en todas las bacterias, razn por la cual se estima que no son esenciales.
* Pared celular Es una estructura rgida, se encuentra rodeando la membrana citoplasmtica de casi todas las bacterias, posee una gran rigidez lo cual le confiere gran resistencia. Se considera esencial para el desarrollo y divisin bacteriana; cumple con dos funciones importantes: mantener la forma de la clula y evitar que la clula colapse debido a las diferencias de presin osmtica por el constante intercambio de fluidos. El grosor de la pared oscila entre de 10 y 80 nanmetros. La pared celular constituye una porcin apreciable del peso seco total de la clula; dependiendo de la especie y de las condiciones de cultivo puede representar del 10 al 40 % del peso seco del organismo. En las Eubacterias la pared celular contiene peptidoglucano, compuesto que no se encuentra en las clulas eucariotas. En las bacterias Gram positivas se halla inmerso en una matriz aninica de polmeros azucarados, cido diaminopimlico y cido teicoico,
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mientras que en las bacterias Gram negativas est rodeada por una membrana externa, e inmersa en un espacio periplsmico. El prefijo Gram proviene de la tcnica de coloracin que se utiliza para la diferenciacin primaria del tipo de bacteria. Figura 13. Representacin esquemtica de una pared celular gram positiva y negativa
Tomado de: http://biolucena.wikispaces.com/Pared+celular
Identificacin de Bacterias por composicin de la pared celular que reacciona a la Tincin de Gram Un mtodo de identificacin de las bacterias es la Tincin diferencial de Gram que permite identificar la morfologa de la clula bacteriana en cocos y bacilos gram positivos y gram negativos segn la estructura de su pared celular. Se puede discriminar entre dos grandes grupos de bacterias: Gram positivas (se tien de color violeta) y Gram negativas (se tien de color rosado) debido a las diferencias en la composicin de su pared celular. Como se mencion anteriormente la pared celular est formada por peptidoglucano, la diferencia consiste en que la pared de las bacterias gram positivas es gruesa y est formada por varias capas de peptidoglucano aproximadamente 80%-90% y algo de cido teicoico, mientras que la pared de las bacterias gram negativas est formada por una sola capa delgada de peptidoglucano aproximadamente hasta un 20% la cual est rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos, y lipoprotenas.
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* Membrana plasmtica la cual presenta invaginaciones, que son los mesosomas que contienen enzimas que participan en la duplicacin del ADN, en la membrana plasmtica se localizan tambin enzimas que intervienen en la produccin de energa (ATP), funcin que en la clula eucaritica cumple la mitocondria. * Flagelos presentes en la mayora de bacterias, generalmente son rgidos, implantados en la membrana celular mediante un corpsculo basal. Permiten a la mayora de bacterias la movilidad en medios lquidos, una excepcin son las bacterias deslizantes que se mueven por flexin de la pared celular. La movilidad, o sea, el movimiento de traslacin de un punto a otro en forma rpida y de zig zag permite alas bacterias responder a estmulos, por ejemplo, qumicos (quimiotactismo positivo), cuando las bacterias son atradas a determinados compuestos como la glucosa, la galactosa o por el contrario son repelidas de algunos compuestos como los antibiticos, (quimiotactismo negativo), luminosos (fototactismo positivo) en las bacterias fotosintticas La movilidad debe distinguirse del movimiento pasivo de las bacterias en una sola direccin como consecuencia de las corrientes en la preparacin, o del movimiento Browniano que es la constante vibracin de las bacterias en un punto fijo comportamiento que se presenta por estar suspendidas en medio lquido y por su pequeo tamao. *Fimbrias muy numerosas y cortas, no tienen funcin de motilidad, se encuentran relacionadas con diversas funciones como la de adherencia a las superficies de tejidos, sitios de adsorcin para virus bacterianos y adems pueden servir como pelos sexuales para el paso de ADN de una clula a otra. *Cpsula es una estructura de material viscoso que rodea la pared celular de muchas bacterias que se encuentran en su ambiente natural. No cumple ninguna funcin metablica pero sirve a las bacterias para adherirse a sus sustratos, o para la formacin de colonias mediante la adhesin de bacterias hermanas. Cuando una bacteria encapsulada invade a un husped, la cpsula evita que los mecanismos de defensa del husped destruyan la bacteria.
Estructuras internas * El Citoplasma Se encuentra delimitado por la membrana celular, presenta un aspecto viscoso constituido por agua y sustancias como iones, protenas, enzimas, lpidos, carbohidratos disueltas en agua , en l se encuentran: materiales de reserva , ARN , ribosomas, un nucleoide ubicado en su zona central donde se encuentra la mayor parte del ADN bacteriano en algunas bacterias se encuentran dispersos por el citoplasma fragmentos circulares de ADN con informacin gentica llamados plsmidos y pigmentos
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fotosintticos en el caso de bacterias fotosintticas. En el citoplasma se realizan los procesos metablicos de la clula bacteriana. *Los ribosomas son organelos con apariencia de grnulos, algunos se hallan dispersos en el citoplasma bacteriano y otros se agrupan en cadena y se les denomina polirribosomas; estn compuestos por cido ribonucleico - ARN (60%) y protena (40%). Su funcin es la sntesis de protena. *La regin nuclear est localizada centralmente en la clula, se compone principalmente de ADN aunque tambin puede encontrarse ARN y protenas asociadas a ste. El ADN est dispuesto en un cromosoma largo y circular, algunas veces llamado nucleoide, genforo o cuerpo cromatnico. *Los mesosomas son repliegues y extensiones de la membrana citoplasmtica, intervienen en procesos metablicos y de reproduccin de la clula bacteriana. *Los cuerpos de inclusin o grnulos son materiales de reserva como lpidos, hierro, azufre que se almacenan en el citoplasma, en los perodos de suficiente aporte nutricional para ser utilizados en pocas de inanicin. * Los plsmidos son pequeas molculas circulares de ADN extracromosmico, se encuentran en la regin nuclear de algunas bacterias. Las molculas de ADN plsmico a pesar de encontrarse fuera del cromosoma, toman una conformacin de doble hlice al igual que el ADN de los cromosomas. Los plsmidos se replican de manera independiente al cromosoma y contienen informacin gentica para la bacteria complementaria a la contenida en el nucleoide y que le es til para su supervivencia en condiciones desfavorables. Por ejemplo, el cdigo que hace resistentes a las bacterias a los antibiticos, la capacidad de apareamiento, la resistencia y la tolerancia a los materiales txicos. Los plsmidos son muy utilizados en ingeniera gentica ya que por su tamao resulta fcil manipularlos; se pueden aislar, introducir en ellos informacin e introducirlos en otras clulas bacterianas viables en las cuales se expresa la informacin que ellos portan. *Las vesculas se encuentran en ciertas bacterias que habitan en lagos les sirven para flotar, contrarrestando la atraccin gravitatoria, y as lograr el ptimo de luz * Endosporas Son estructuras generalmente de forma esfrica que se forman en ciertas bacterias Gram positivas como respuesta a condiciones ambientales adversas (poca humedad, temperaturas extremas, agentes qumicos y fsicos etc.). Cuando las condiciones ambientales vuelven a ser favorables la endospora se transforma de nuevo a la forma vegetativa. Ciertas formas filamentosas pueden producir la endospora en el
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extremo del filamento y aparecen de manera libre, en otras bacterias como Clostridium se pueden observar en el interior de las bacterias a las que deforman de una manera caracterstica, lo que sirve para su identificacin Reproduccin de bacterias Generalmente las bacterias se reproducen asexualmente por fisin binaria o biparticin, unas pocas por gemacin, algunas especies de bacterias filamentosas se reproducen por esporas que se forman en los extremos de los filamentos. Durante la biparticin la clula bacteriana origina dos clulas iguales o clones. El resultado de la fisin binaria son dos clulas hijas por cada clula madre, as, una clula se divide en dos, dos en cuatro y cuatro en ocho y as sucesivamente. La sntesis de la pared, el crecimiento bacteriano y la duplicacin del ADN regulan la divisin celular. Este mecanismo de divisin celular es ms rpido y menos organizado que la mitosis y la meiosis. El proceso de biparticin se inicia con el alargamiento de la clula bacteriana y la duplicacin del ADN, luego en el centro de la bacteria, la pared celular y la membrana plasmtica se invaginan con la consecuente formacin de un tabique transversal o mesosoma que divide la clula bacteriana en dos y separa las dos regiones de ADN cromosmico. La separacin de las dos clulas va acompaada de la segregacin en cada una de ellas de uno de los dos genomas que proviene de la duplicacin del ADN materno.
El proceso de divisin ocurre en tres fases principales: 1. 2. 3. Elongacin o alargamiento de la clula y duplicacin del material gentico o ADN, Separacin de ADN dentro de las clulas hijas formadas Citocinesis o separacin celular.
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Figura 14. Representacin reproduccin de una bacteria
Fuente: Carmen Eugenia Pia Lpez
Para saber ms: Profundizacin sobre la membrana plasmtica Profundizacin sobre flagelos - Profundizacin sobre cpsula Profundizacin sobre composicin de la pared celular.
Clasificacin de las Bacterias * Por su forma y agrupacin Los modelos de agrupamiento celular de las bacterias son caractersticos de especies definidas y se utiliza como uno de los criterios de clasificacin. Cuando las clulas microbianas como los cocos se dividen, pueden permanecer unidas unas con otras, formando arreglos caractersticos. Los bacilos se dividen nicamente en un plano pero en algunas ocasiones pueden encontrarse clulas unidas por los extremos o por los lados debido a la etapa del
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desarrollo en que se encuentren o a las condiciones del cultivo. Las bacterias en espiral generalmente no se agrupan, crecen individuales y aisladas.
Figura 15. Clasificacin Morfolgica de las bacterias .............
Tomado de: http://1.bp.blogspot.com/_npnf5tssUy8/TAAxOcBBbII/AAAAAAAAAAM/8b497qtgNhE/s160 0/Faecimg_monera5.gif
* Por su requerimiento de oxgeno Otro aspecto a tener en cuenta en la clasificacin de bacterias es la necesidad de oxgeno para poder vivir. Dependen en buena medida de la disponibilidad de las enzimas eliminadoras de perxidos y superxidos. Aerobias estrictas: Dependen de O2 para su crecimiento. Anaerobias estrictas: se desarrollan en ausencia total de O2, utilizan aceptores finales distintos del oxgeno: CO2, H2 y N2, o poseen metabolismo estrictamente fermentativo. Anaerobias Facultativas: pueden desarrollarse en presencia o ausencia de O 2, aunque predominan en medios anaerbicos. Microaerfilas: slo se pueden desarrollar en presencia de bajas tensiones de O2 (menor del 12% en lugar del 20% que es la atmosfrica) y altas tensiones de CO 2.
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* Por su ptimo de temperatura Segn la temperatura ptima de crecimiento las bacterias se clasifican en: Termfilas: se desarrollan entre 25 y 80C, ptima 50 y60C Mesfilas: se desarrollan entre 10 y 45C, ptima 20 y 40C Psicrfilas: se desarrollan entre -5y 30C, ptima 10 y 20C. * Segn el pH en que se desarrollan Las bacterias se clasifican en: Acidfilas: Se desarrollan a pH entre 1.0 y 5.0 Neutrfilas: Se desarrollan a pH entre 5.5 y 8.5 Alcalfilas: Se desarrollan pH entre 9.0 y 10.0 * Por su forma de nutricin Segn su metabolismo interno, las bacterias presentan requerimientos nutricionales diversos y se clasifican en: Auttrofas quimiosintticas o fotosintticas, Las auttrofas fotosintticas utilizan la luz del sol y el bixido de carbono para fabricar su alimento. Las auttrofas quimiosintticas utilizan compuestos inorgnicos, por ejemplo, el azufre para fabricar su alimento y su fuente de energa es el CO2 Hetertrofas (por absorcin) pueden utilizar fuente de carbono orgnico para su alimentacin Las bacterias pueden vivir como parsitos afectando los organismos donde habitan, como simbiontes formando parte de la flora bacteriana normal de la piel, cavidades y tracto digestivo del hombre y de los animales y saprofitas la gran mayora, ayudando a la descomposicin de la materia orgnica muerta. Utilidad de las bacterias Las bacterias son tiles: Para fijar el nitrgeno atmosfrico que es tomado por las plantas y luego trasferido a los animales. En la descomposicin la materia orgnica muerta ayudando de esta manera a la fertilizacin del suelo. En la produccin de algunos antibiticos. En la produccin de determinadas enzimas.
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En la elaboracin de productos lcteos como: queso, yogur , mantequilla En la produccin de vinagre. En la produccin de encurtidos. En la depuracin de aguas residuales. En el curtido de cueros se utilizan enzimas producidas por bacterias. La Escherichia coli ha sido manipulada genticamente para producir insulina Las bacterias que consumen gas metano se utilizan para limpiar rellenos sanitarios, estas bacterias producen una enzima que descompone los contaminantes Para consumir vertidos de petrleo y otras sustancias txicas, tanto en el sitio del vertido como despus de que los materiales txicos hayan sido difundido por los suelos o alcanzado las aguas subterrneas. En la biorremediacin de hidrocarburos en el. agua y en el suelo. Las enzimas producidas por determinadas bacterias se emplean en la produccin de salsa de soya, vino, papel. detergentes. Mediante manipulacin gentica de bacterias, a las que se les insertan los genes productores de determinado frmaco se producen frmacos como la insulina. Estas bacterias tiles se cultivan en grandes cantidades en contenedores llamados fermentadores.
Enfermedades de origen bacteriano Las bacterias pueden ocasionar enfermedades, entre las bacterias ms perjudiciales tenemos: La causante del ttano en caso de heridas contaminadas con Clostridium tetani, bacteria que afecta el sistema nervioso causando rigidez muscular y la muerte La gangrena gaseosa o putrefaccin de tejidos y rganos, especialmente de las extremidades del hombre y de los animales siendo necesaria su amputacin. La bacteria contaminante es un Clostridium que penetra en heridas o puede ser trasmitida por la ingestin de aguas contaminadas. El bacilo de Koch o Mycobacterium tuberculosis que causa la tuberculosis cuando la persona enferma tose y en su esputo se libera el bacilo. El bacilo Salmonella typhi causante del tifo a travs de alimentos contaminados con excretas. El bacilo Corynebacterium diphtheriae que produce una infeccin del sistema respiratorio, la difteria, que adems lesiona el corazn y el sistema nervioso ocasionando la muerte. La espiroqueta Treponema pallidum. que produce una enfermedad de trasmisin sexual denominada sfilis.
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La Brucella, bacteria que causa la brucelosis por contacto con ganado infectado, leche o carne contaminada y en la mujer provoca el aborto espontneo.
Para saber ms:

Profundizacin sobre tamao y formas bacterianas Profundizacin sobre tincin de Gram y otros tipos de tincin utilizados en microbiologa Profundizacin acerca de bacterias
Transferencia
PREGUNTAS DE SELECCIN MLTIPLE CON MLTIPLE RESPUESTA Marque A si 1 y 2 son correctas. Marque B si 1 y 3 son correctas. Marque C si 2 y 4 son correctas. Marque D si 3 y 4 son correctas. Algunas especies bacterianas de inters industrial, son: 1. Penicillium Candidum, para la fabricacin de queso 2. Clostridium acetobutylicum, para procesos de fermentacin 3. Asperguillus niger, para procesos de produccin de pan 4. Escherichia coli, para la produccin de insulina
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1.2.4. Leccin 7. Microorganismos celulares eucariotas: Protistos
Son organismos microscpicos mviles, incoloros, unicelulares, eucariticos, poseen ncleo, membrana nuclear, membrana celular, mitocondrias, aparato de Golgi, microtbulos y otros organelos, carecen de pared celular, algunos tienen vacuolas digestivas y excretoras, flagelos y cilios, pertenecen al reino Protisto. Se encuentran en su mayora en medios acuticos, en el suelo hmedo aunque algunos son endoparsitos y otros ectoparsitos. Figura 16. Protozoos
Los protozoarios parsitos se pueden encontrar en sangre de humanos y animales y en lquidos tisulares de plantas. Algunos necesitan varios hospedadores para completar su ciclo de vida, presentando en cada uno de ellos una morfologa, metabolismo y tipo de reproduccin diferente. Durante su ciclo de vida pueden existir de dos formas trofozoto y quiste. En la fase de trofozoito los protozoarios realizan sus funciones de nutricin y crecimiento y es la forma que produce la enfermedad, mientras que la fase de quiste es la forma infectante que fuera del organismo puede resistir condiciones extremas como la desecacin, bajas temperaturas, y en medio hmedo logra sobrevivir hasta aos.
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Figura 17. Esquema de un paramecio
Diseo: Carmen Eugenia Pia Lpez Nutricin La mayora son hetertrofos, sin embargo algunos son auttrofos. Obtienen alimento por ingestin de otros organismos o partculas orgnicas. La alimentacin suele realizarse mediante la captura del alimento (algas, bacterias y otros protozoarios) que penetran en el citoplasma por mecanismos de difusin o de transporte activo, en algunos a travs de aberturas de la membrana celular llamadas poros bucales, otros como las amebas rodean el alimento mediante pseudpodos (fagocitosis). Hay adems protozoarios que lo absorben a travs de su membrana celular, por ejemplo, el paramecio succiona el alimento produciendo un torbellino con los cilios. El alimento es digerido en las vacuolas nutritivas localizadas en el citoplasma, luego los residuos son expulsados por las vacuolas fecales. Respiracin La respiracin la realizan por difusin a travs de la membrana celular y por las partculas de agua absorbidas con el alimento. La expulsin del gas carbnico la hacen por las vesculas o vacuolas pulstiles. Cuando la vacuola pulstil est llena de agua, se abre y lo libera al exterior Reproduccin
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Se reproducen asexualmente por divisin binaria, por gemacin y por esporulacin (fragmentacin de la clula madre en esporas) del trofozoito o forma vegetativa del protozoo. Cuando sucede este ltimo caso, pueden permanecer mucho tiempo enquistados en una cpsula. Otro tipo de reproduccin asexual es la divisin mltiple caracterstica de las amebas. En algunos grupos la reproduccin asexual alterna con fases de reproduccin sexual la cual esta condicionada a cambios desfavorables del medio. La reproduccin sexual se inicia con la formacin de gametos, macrogametos y microgametos, por diferenciacin de las clulas del trofozoito. Su unin da lugar a la formacin del cigoto seguido de meiosis. La fusin celular puede ser total, dando lugar a un cigoto (singamia), como sucede en los esporozoos o parcial, por conjugacin, como sucede en algunos ciliados. Durante el apareamiento en la conjugacin, el macroncleo de un protozoario se degenera y el microncleo por meiosis da origen a cuatro microncleos con reduccin de su material gentico, uno de estos microncleos es transferido de un protozoo al otro para formar el cigoto, los otros tres microncleos degeneran. En este proceso se produce intercambio de informacin gentica entre dos individuos. El cigoto por divisin mltiple da lugar a numerosas clulas denominadas esporozoitos. Clasificacin Segn la forma como se desplazan los protozoos se clasifican en: sacordinos, ciliados, flagelados, esporozoos.
Sacordinos Se desplazan por medio de seudpodos, que son prolongaciones de la clula que les sirven adems para capturar el alimento, englobarlo (proceso de fagocitosis) y formar una vacuola digestiva, donde el alimento es digerido por accin de enzimas. La mayora son parsitos del hombre y habitan en el tracto gastro-intestinal y cavidad oral.
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Figura 18. Entamoeba histoltica.
Tomado de http://hpd.botanic.hr/ bio/ odgovori/odgovor315.htm Son representantes de este filo: la Entamoeba histolytica o ameba que produce la disentera, por la ingestin de aguas o alimentos contaminados con heces. Esta enfermedad es propia de los pases tropicales y produce unas diarreas muy intensas. La E. histolytica puede causar enfermedad invasora intestinal y extraintestinal. Los foraminferos componentes del plancton (con un caparazn por cuyos orificios salen los pseudpodos) Ciliados: Su forma es ovalada, se desplazan y capturan el alimento por medio de cilios, filamentos cortos, vibrtiles y numerosos que rodean su cuerpo. Figura 19. Imagen del parsito Balantidium Colli
Tomado de: http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2003/Balantidium/The_Parasite.htm
Poseen una hendidura bucal o boca en el citoplasma para la ingestin de alimentos al final se presenta el citostoma y la citofaringe que se continan, en el interior del citoplasma, con las vesculas alimenticias. El citoplasma realiza movimiento de ciclosis. Poseen vacuolas contrctiles que ayudan a expulsar el agua y residuos de la digestin a travs del poro anal o citopigio.
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Se caracterizan por ser los nicos organismos con dos ncleos un microncleo para la reproduccin y un macroncleo para la alimentacin. Se reproducen de dos formas: asexual por biparticin y sexual por conjugacin. Ejemplos de este filo son: el Paramecio, la Vorticela, el Balantidium coli este ltimo es un parsito del intestino del hombre cuyo reservorio natural es el cerdo. La infeccin humana, es causada por la ingestin de quistes eliminados con las heces del cerdo, ocasionando inflamacin del intestino o enteritis. Flagelados: Se desplazan por medio de flagelos, filamentos largos y poco numerosos Figura 20. Tripanosomas en sangre.
Tomada de http://www.sciencecases.org/chagas/figure2.jpg Muchos son de vida libre y otros son parsitos, como el Tripanososma cruzi que causa la enfermedad de chagas. La forma principal de transmisin es a travs de vectores (insectos hematfagos- chinches-) que al picar a un animal o persona infectada se contagian, estos hematfagos infectados despus de que pican e ingieren la sangre defecan sobre la persona; las heces del insecto entran en la persona a travs de la picadura, de las mucosas o de las cortadas en la piel. El Tripanosoma brucei produce la enfermedad del sueo o tripanomiasis africana. El T. brucei es transportado por la saliva de la mosca ts-ts, que contagia al picar a otros seres vivos. Trichomonas vaginalis un parsito de forma ovoide, mide de 10 a 20 micrmetros, posee cuatro flagelos en la parte anterior que junto con su membrana ondulante le permiten su movimiento. Causa la enfermedad de transmisin sexual conocida como tricomoniasis. Leishmania parsito intracelular que causa la enfermedad llamada Kala-azar o fiebre negra. Requiere para completar su ciclo de vida dos huspedes, un vertebrado y un artrpodo que acta como vector
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Figura 21. Imagen de una Giardia lamblia
Tomado de: http://www.inselhunde.de/ giardien.htm La Giardialambliaes un parsito intestinal que ocasiona la giardasis una enfermedad diarreica infecciosa. La infeccin se produce al consumir alimentos o agua con quistes los cuales son activados por el cido gstrico, se liberan los trofozoitos que se se fijan a la mucosa del duodeno o del yeyuno proximal donde se reproducen. La formacin de los quistes ocurre a nivel del colon de donde pasan a las heces. Esporozoos Figura 22. Imagen de los Plasmodium
http://www.cdc.gov/malaria/spotlights/ index_100504.htm Carecen de rganos de locomocin todos son parsitos obligados de clulas del hombre y de los animales. Presentan una estructura apical adaptada a la penetracin intracelular. Se reproducen en dos fases una asexual y otra sexual, dependiendo de la fase pueden estar como: trofozoito, gameto o cigoto. Un representante de este grupo es el Plasmodium que produce la malaria, tambin llamada paludismo. Hay cuatro especies de Plasmodium que provocan la malaria: P.vivax, P. ovale, P. malariae y P. falciparum, de las cuales slo la ltima es realmente una amenaza para la vida.
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El vector que transmite la malaria es la hembra del mosquito Anopheles. En los glbulos rojos de la sangre de la persona los Plasmodium se diferencian en gametos que son ingeridos por el mosquito. En el tubo digestivo del mosquito los gametos se reproducen sexualmente dando como resultado los esporozoitos que luego son inoculados por picadura a las personas sanas. Los esporozoitos pasan al torrente sanguneo hasta que llegan a las clulas hepticas. All se reproducen asexualmente, luego las clulas hepticas se rompen, el plasmodio alcanza de nuevo al torrente sanguneo para parasitar los hemates. El Toxoplasma gondii, causante de la toxoplasmosis es otro parsito perteneciente a los esporozoos. Importancia Biolgica Los protozoos tienen importancia en las cadenas alimentarias como componentes del plancton. Son considerados como bioindicadores en el proceso de tratamiento de aguas residuales. Se utilizan para detectar vetas petrolferas. Debido a su fcil y rpida reproduccin en el laboratorio son utilizados en investigaciones sobre nutricin y crecimiento, por ejemplo, El protozoo ciliado Tetrahymena thermophila fue el primer microorganismo eucariota en el que se desarroll la induccin de cultivos sincrnicos, facilitando el anlisis de las diferentes fases del ciclo celular eucariota. Este protozoo tambin particip en el descubrimiento de los lisosomas y peroxisomas. Para saber ms: Generalidades de los protozoos
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Algas: principales caractersticas Eucariotas, auttrofas, pertenecientes al reino Protista. Presentan pared celular, clorofila, algunas poseen otros pigmentos como carotenos, ficoxantina o ficobilinas que pueden enmascarar la clorofila. La mayora son unicelulares como las algas doradas o diatomeas, otras como las algas verdes y las rojas son multicelulares. Su tamao vara desde algas microscpicas de 1 micrmetro hasta las que se observan a simple vista como las verdes que crecen en las charcas o las que se encuentran en los acuarios o en el mar. Su reproduccin puede asexual por fisin binaria longitudinal y sexual por produccin de esporas cuando las condiciones del medio son extremas.
Figura 23. Imgenes de algas
Pueden vivir solitarias o en colonias. Ejemplo de algas verdes tenemos: la Chlorella, la Dunaliella, el Volvox, y la Spirogyra. Algunas algas unicelulares se desplazan por medio de flagelos, tambin aparecen flagelos en los individuos que forman colonias. Las algas son frecuentes en hbitats acuticos constituyndose en un eslabn importante (fitoplancton), de las cadenas alimentarias de los organismos acuticos se pueden encontrar tambin en suelos, muchos gneros de algas tienen representantes que viven en simbiosis con hongos y forman los lquenes. Clasificacin Euglenofitas: unicelulares se encuentran en aguas dulces ricas en nutrientes. Carecen de pared celular. Tienen cloroplastos encerrados por una membrana triple. Poseen dos flagelos que les dan movilidad. Se reproducen sexualmente. Su presencia es un indicador de contenido mercurio en el agua.
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Diatomeas: la pared celular esta cubierta por un exoesqueleto de slice y pectina lo que las hace muy resistentes. Cuando se acumulan forman la tierra de diatomeas que, adems de su inters paleontolgico, se usa como abrasivo, en la fabricacin de pasta de dientes, como insecticida y como agente filtrante. Dinoflagelados. La mayora marinas, de color rojo, pueden producir toxinas que en grandes cantidades forman las mareas rojas, que causan intoxicacin en humanos y mortandad de peces. Clorofceas: Son llamadas tambin algas verdes con abundante clorofila no asociada a otros pigmentos, las unicelulares generalmente son de agua dulce y se reproducen asexualmente por biparticin, mientras que las pluricelulares tienen fase de reproduccin asexual y sexual. La mayora de agua dulce, aunque las hay marinas y de humedad, y a veces asociadas con los hongos en los lquenes (simbiontes). Pueden presentar vida libre o formar colonias. Tambin aparecen los sincitios, que son estructuras polinucleadas, formadas por fusin de varios individuos que comparten el citoplasma celular sin que exista membrana de separacin entre ellos. Importancia biolgica Representan un importante eslabn en la cadena alimentaria, formando parte del plancton (productores primarios). Son productoras de oxgeno. tiles en la elaboracin de frmacos. Las algas rojas son importantes en la formacin de arrecifes de coral pues viven en simbiosis con los corales brindndoles carbonato de calcio y suministrndoles el color rojo brillante. Algunos grupos de algas rojas se utilizan en la produccin de Agar que es un medio de cultivo microbiolgico. Las algas marinas son una importante fuente alimenticia.Se utilizan como indicadores biolgicos, en el control de acidificacin de las aguas. En medicina y farmacia en la produccin de antioxidantes, antibiticos, cidos grasos polinsaturados.
Para saber ms: Generalidades sobre las algas y sus usos en la biotecnologa, para los programas de Ciencias Agrarias, Regencia de farmacia e Ingeniera de Alimentos
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PREGUNTAS DE ANLISIS DE RELACIN Este tipo de preguntas consta de dos proposiciones as: Una Afirmacin y una Razn, unidas por la palabra PORQUE. Usted debe examinar la veracidad de cada proposicin y la relacin terica que las une. Para responder este tipo de preguntas, debe leerla completamente y sealar en la hoja de respuesta, la elegida de acuerdo con las siguientes instrucciones: Marque A si la afirmacin y la razn son VERDADERAS y la razn es una explicacin CORRECTA de la afirmacin. Marque B si la afirmacin y la razn y la razn son VERDADERAS, pero la razn NO es una explicacin CORRECTA de la afirmacin. Marque C si la afirmacin es VERDADERA, pero la razn es una proposicin FALSA. Marque D si la afirmacin es FALSA, pero la razn es una proposicin VERDADERA. Dentro de los protozoarios se encuentra el gnero plasmodium, estos son microorganismos unicelulares, todos parsitos, sobresalen por los daos que causa a la salud humana. PORQUE Dentro del gnero Plasmodium, existen 4 especies que causan la enfermedad conocida como Malaria.
1.2.5. Leccin 8. Microorganismos celulares eucariotas: Hongos
Introduccin Los hongos pertenecen al dominio Eukarya o Eucariota, Reino Fungi. Su importancia se deduce fcilmente de la amplitud y diversidad de este tipo de seres vivos que cuentan con aproximadamente 100.000 especies, entre las cuales hay tanto benficas como perjudiciales para el entorno humano en el rea de la salud y la produccin. Una cucharadita de tierra contiene alrededor de 120.000 hongos. Presentan diferentes formas desde microorganismos unicelulares de forma redonda u ovalada como las levaduras hasta pluricelulares como los hongos filamentosos o mohos que pueden formar largas cadenas de clulas. Su tamao y complejidad son superiores al de las bacterias. Habitan en ambientes hmedos y oscuros, sobre el suelo, las frutas el pan, el queso, las plantas, el cuerpo del hombre y de los animales, en el agua dulce y salada. Se desarrollan mejor en ambientes ligeramente cidos (pH 5, siendo 7 neutral). La mayora son aerbicos aunque hay algunas especies facultativas. Su nutricin es
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hetertrofa, carecen de clorofila y adquieren su energa de compuestos orgnicos del suelo y del agua. Se considera que los hongos saprfitos juegan un papel importante en la degradacin de la materia orgnica muerta, y en el aumento de la fertilidad del suelo. Levaduras: caractersticas morfolgicas y fisiolgicas Las levaduras son hongos unicelulares de forma esfrica, alargada u ovalada, presentan diferentes colores: blanco, rosado, beige o rojo. Su tamao oscila entre 2,5 10 micras de ancho y 4,5 - 21 micras de largo. Son microorganismos anaerobios facultativos La levadura aerbica produce dixido de carbono, agua y una produccin relativamente alta de nueva levadura, mientras que la levadura anaerobia fermenta el azcar en alcohol y dixido de carbono y tiene un crecimiento ms lento. Figura 24. Imagen de una especie de levaduras
Tomado de: http://edbolivar.files.wordpress.com/2009/05/levadura02_col1.jpg La mayora se reproducen asexualmente por gemacin consistente en que a la clula madre le sale un botn o gema. Al mismo tiempo que el botn aumenta de tamao, el ncleo de la clula madre mediante el proceso de mitosis se divide en dos, transfirindole uno a la clula hija o botn. Poco a poco la gema se va desprendiendo dando origen a una levadura hija idntica a la madre. Una levadura puede producir hasta 24 clulas hijas. Las levaduras tambin pueden reproducirse por fisin binaria. Algunas no separan la clula hija o gema y forman pseudomicelio, caracterstica que se usa para identificar y clasificar la levadura. Por ejemplo Candida albicans forma pseudomicelio. Las levaduras pueden habitar en el suelo, sobre las mucosas, en la superficie de vegetales. La mayora son mesfilas, con una temperatura mxima de crecimiento entre. 24 y 48C. Se encuentran en un rango amplio de pH el cual est comprendido entre 2,5 y 8.horas. Son incapaces de moverse por lo que nicamente pueden ser arrastrados a travs de corrientes de aire o en fluidos o por insectos.
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Condicin del hospedero para accin patgena de levaduras En el sentido ms estricto de la palabra, no existen levaduras patgenas por naturaleza; las que estn relacionadas con enfermedad en el hombre o animales, son incapaces de producir infeccin en un individuo sano. Se deben presentar algunas alteraciones en las defensas celulares del husped, en la fisiologa, o en la composicin de la flora normal para que pueda producirse la colonizacin, infeccin y la enfermedad por levaduras. Es el caso de las especies del gnero Candida que abarca ms de 160 especies, de las cuales se considera que slo 18 son patgenas. Un crecimiento excesivo del hongo Candida albicans puede causar lesiones en la piel, debajo de las uas o en las membranas mucosas de la boca, la vagina, los bronquios y los pulmones. Segn Lpez, C., Giro, L., Ramos, L. et al. Comparacin de diferentes mtodos para la identificacin de especies del gnero Candida. Rev. Argent. Microbiol., ene./mar. 2005, vol.37, no.1, p.1621. ISSN 0325-7541. Otra levadura capsulada que afecta a pacientes inmunosuprimidos es Cryptococcus neoformans, causante de la criptococosis o micosis sistmica, la principal fuente de infeccin de la variedad neoformans es el excremento de aves. La causa principal de patogenicidad de las levaduras est relacionada con alteraciones del sistema inmunolgico del husped, as como con otros factores predisponentes, que puedan interferir en el equilibrio del nicho biolgico que mantienen a estas levaduras en estado de comensal. Entre los factores desencadenantes podemos mencionar: embarazo, edades extremas (infancia y vejez), uso prolongado de antibiticos, antineoplsicos, glucocorticoides, drogas, uso de prtesis dentales, etc. (Senet JM. Risk factors and physiopathology of candidiasis. Rev Iberoam Micol 1997; 14: 6-13). Importancia econmica y algunos efectos perjudiciales de las levaduras
Las levaduras tienen importancia en la obtencin de productos y bebidas fermentables debido a su capacidad de realizar fermentacin alcohlica es el caso de Saccharomyces cervisiae. Tienen un papel importante en la fabricacin de pan y productos de pastelera. Tambin se utilizan en la produccin de antibiticos, son fuente de protena y de vitaminas del complejo B. Mediante tcnicas de ADN recombinante se utilizan como hospederos en la industria mdico farmacutica, para la produccin de vacunas, por ejemplo, Antihepatitis A, Anti-hepatitis B, inmunopotenciadores, la Hirudina indicada en la Trombocitopenia y para la prevencin de trombosis, protenas de la sangre, hormonas como la insulina y el glucagn e interferones. Sin embargo un pequeo porcentaje de levaduras aproxidamente un 25 % pueden alterar los alimentos causando su deterioro. La actividad contaminante de las levaduras sobre
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alimentos puede inhibirse por dos vas; mediante la aplicacin de mtodos fsicos con actividad bactericida, entre los que se destacan la esterilizacin por calor a presin y por filtracin y por la aplicacin de condiciones ambientales desfavorables con efecto bacteriosttico, tales como disminucin de la aw, bajos valores de pH y temperatura. Hongos Pluricelulares o Mohos Los hongos pluricelulares o mohos forman una serie de filamentos o tubos rgidos denominados hifas; dentro de las hifas se encuentra el citoplasma que contiene varios ncleos, y dems organelos: mitocondrias, ribosomas, vacuolas, aparato de Golgi, retculo endoplasmtico y lisosomas. Existen dos tipos de micelio: vegetativo que crece por toda la superficie del sustrato (suelo, alimento, tejido vegetal) y tiene como funcin absorber nutrientes del sustrato al penetrar en l y fijar el hongo al sustrato y micelio areo reproductor que produce esporas sexuales y asexuales. Figura 25. Imgenes de hifas de diferentes tipos de hongos
Tomado de: Atlas de micologa Las hifas dan al moho un aspecto algodonoso o de pelusa y pueden ser septadas, es decir, presentar tabiques transversales que separan las clulas; o aseptadas o cenocticas con clulas multinucleadas.El conjunto de hifas forman un micelio. Los hongos presentan pared celular compuesta de varias capas constituidas de estructuras amorfas como los mananos (polmeros ramificados de la manosa, los glucanos (polmeros de la glucosa) y por quitina que es un polisacrido estructural que tambin se encuentra en el exoesqueleto de los artrpodos. La pared celular da la rigidez al hongo y le permite la nutricin absortiva. Los hongos se pueden reproducir por procesos asexuales, sexuales o parasexuales. La forma de reproduccin se constituye en un criterio para su clasificacin. Los patgenos
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generalmente se reproducen de forma asexual, aunque algunas especies pueden tener reproduccin sexual y asexual, dependiendo de las condiciones ambientales. Reproduccin asexual Los hongos imperfectos se reproducen asexualmente de tres formas: por fragmentacin o fisin, por gemacin y por la formacin de esporas. En la reproduccin asexual no hay conjugacin nuclear ni reduccin cromtica. La reproduccin asexual por fragmentacin del micelio es una de las formas ms sencillas y consiste en la fragmentacin, crecimiento y ramificacin de las hifas para dar origen una nueva colonia. Este mecanismo se usa en los subcultivos de laboratorio La Gemacin consiste en la formacin de una yema en un punto de la clula madre; a medida que la nueva clula hija aumenta de tamao, se separa de la madre y da lugar posteriormente a nuevas hijas por el mismo mecanismo. Por formacin de esporas se presenta con dos opciones: por doble fisin de las hifas que forman clulas unicelulares de forma cilndrica denominadas artrosporas las cuales seliberan cuando las hifas se separan para germinar en el medio adecuado; la segunda opcin consiste en la fragmentacin de las hifas que desarrollan esporas redondas cubiertas por paredes gruesas llamadas clamidosporas resistentes a condiciones adversas como el calor y la desecacin. Las esporas presentan diferente forma, tamao, color y nmero de clulas. Son las responsables de dispersar los nuevos individuos. Algunas esporas estn diseadas para resistir condiciones adversas de crecimiento o para proporcionar un periodo de latencia. Algunos hongos producen slo un tipo de esporas asexuales, mientras otros pueden producir diferentes tipos de esporas. Tipos de esporas asexuales Figura 26. Reproduccin asexual del hongo del pan: Rhizopus nigricans modificado e imagen de Conidios en Penicillium
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Para saber ms: Atlas de imgenes de hongos y curso de biologa vegetal Animacin: salida de esporangiosporas
Esporangiosporas: Son esporas que se producen dentro de de una envoltura denominada esporangio, al romperse el esporangio las esporas salen yal caer en el sustrato adecuado dan origen a nuevas hifas. En este tipo de reproduccin el ncleo de la clula madre se divide en varios ncleos, cada uno toma una parte del citoplasma de la clula madre que luego se rodea de una membrana celular, la clula madre se rompe y se liberan varias clulas hijas. Ejemplo: en Mucor o en Rhizopus nigricans Conidias: Son esporas desnudas que se forman en los extremos de las hifas mediante gemacin. Ejemplo: en el hongo Aspergillus flavus Reproduccin Sexual La reproduccin sexual es otra forma de reproduccin de los hongos, e implica la unin de 2 ncleos uno donante y otro receptor para formar un ncleo cigtico diploide, que por meiosis origina 4 ncleos haploides. A los hongos con reproduccin sexual se los denomina perfectos. La reproduccin sexual comprende 3 fases: Figura 27. Reproduccin sexual de los hongos
Plasmogamia: en ella se unen los dos protoplastos de las hifas y los dos ncleos se renen en una sola clula. Cariogamia: fusin de los dos ncleos que se haban reunido en la plasmogamia Meiosis: Se reduce el nmero de cromosomas, se forman gametos haploides.
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Despus de la fusin de los ncleos de las dos clulas: hifas o levaduras que comparten el ADN y de ocurrida la meiosis se forman las esporas con caractersticas heredadas de cada uno de sus progenitores. Cada espora tiene capacidad para desarrollar una nueva colonia. Tipos de esporas Sexuales Ascosporas: Son unicelulares, generalmente se desarrollan 4 a 8 dentro una clula denominada asca. Basidiosporas: Unicelulares, se forman en clulas llamadas basidios en nmero de 4 Zigosporas: Son de mayor tamao con pared celular gruesa se desarrollan al fusionarse dos hifas sexualmente compatibles. Oosporas se forman por la unin de dos clulas gamticas, oogonio y anteridio En condiciones ptimas para la germinacin, las oosporas dan origen a micelio y esporangios los cuales infectan las plantas. Reproduccin parasexual La reproduccin parasexual es un mecanismo raro, en el que las hifas se unen sin fusin nuclear posterior y da lugar a una clula con ms de un ncleo funcional y de diferente procedencia gentica. En algunas ocasiones pueden conjugarse los ncleos y aparece un ncleo diploide heterocigtico. El hecho comprobado por primera vez en Aspergillus nidulans demuestra que la recombinacin gentica puede existir sin utilizar las clulas sexuales. Enfermedades causadas por hongos En los animales los hongos pueden producir enfermedades graves en la piel uas y cuero cabelludo, por ejemplo, la dermatomicosis o tia. Otros afectan los rganos del hombre y de los animales, es el caso del hongo Aspergillus causante de la aspergilosis que compromete los pulmones y el sistema nervioso. La especie ms comnmente patgena es Aspergillus fumigatus que se asocia tanto con las formas alrgicas como con las invasivas. La coccidiomicosis causada por un patgeno mictico llamado Coccidioides immitis ocasiona enfermedad en animales y en las personas inmunosuprimidas. El patgeno es normalmente inhalado, lo cual lleva a la infeccin pulmonar. Los sntomas incluyen fiebre, fatiga, prdida de peso, y tos. La coccidiomicosis tambin puede afectar a las membranas que rodean el cerebro (meningitis) y puede diseminarse por el cuerpo.
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La criptococosis es causada por un hongo parecido a la levadura, llamado Cryptococcus neoformans, el cual se encuentra en la tierra y en el excremento de las aves y afecta a las personas y algunas especies de animales. Se transmite a travs de la inhalacin de polvo contaminado. Los sntomas incluyen fiebre, fatiga, nusea, malestar, dolor de cabeza y de cuello, confusin mental, prdida de memoria, trastornos de visin y de movimiento muscular, y cambios de personalidad; si no es tratada, la enfermedad puede derivar en coma y muerte. La criptococosis afecta reas del cuerpo incluyendo la piel, los pulmones (neumona criptococcal) y el cerebro (encefalitis). La enfermedad puede diseminarse. En el perro y el gato afecta los pulmones, el sistema nervioso central y las mucosas nasal y oral. En el bovino la lesin se localiza en el tejido mamario ganglios linfticos adyacentes, en el equino se presentan trastornos respiratorios asociados a granuloma nasal. La criptococosis se diagnostica a travs de anlisis del fluido cerebral y cerebroespinal Histoplasmosis - La histoplasmosis es ocasionada por la infeccin con el hongo Histoplasma capsulatum, el cual reside en la tierra y las heces de murcilago. La enfermedad afecta con mayor frecuencia a los pulmones. Tambin puede afectar a la piel, al sistema gastrointestinal y al sistema nervioso central. Los sntomas incluyen fiebre, prdida de peso, fatiga, tos seca, problemas respiratorios, salpullido, e inflamacin de los ndulos linfticos. Se diagnostica con anlisis del fluido pulmonar, de sangre u orina, o mediante biopsia. Es tratada con medicamentos antimicticos. Candida albicans afecta a las aves causndoles la muerte, en el hombre afecta las mucosas de la boca, garganta y tracto genitourinario. Los hongos txicos como (Aspergillus, Penicillium, Fusarium) contaminan los alimentos o productos agrcolas como cereales y concentrados al producir sustancias txicas las mico toxinas (aflatoxinas, ocratoxinas, fumonisinas o zearalenona, entre otras) que al ser consumidas por el hombre o los animales les causan enfermedades letales como la micotoxicosis. Muchas enfermedades de las plantas son debidas a la presencia de hongos, por ejemplo, la enfermedad de la Roya. El hongo Phytophtora infestans, caus en Irlanda un milln de muertes a contaminar la papa. Muchos hongos arruinan anualmente de un cuarto a la mitad de las cosechas de frutas y vegetales Importancia biolgica Los hongos no solamente causan enfermedades, sino que tambin son utilizados en procesos industriales por ejemplo: del hongo Penicillium notatum se obtiene el antibitico penicilina. Algunos hongos como Penicillium roquefort son utilizados en la elaboracin de queso Roquefort.
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Las enzimas de algunos hongos producen fermentacin alcohlica en los jugos de frutas proceso que se utiliza por ejemplo, para la elaboracin de vino a partir de jugo de uva. El Saccharomyces cerevisae o levadura del pan se utiliza en la preparacin del pan y la cerveza. Los hongos son los principales descomponedores del ecosistema, digieren plantas y animales muertos, contribuyendo a la descontaminacin ambiental. Otros hongos se usan como control biolgico contra insectos perjudiciales. Hay hongos que crecen en simbiosis con las races de algunas plantas formando las micorrizas.
Clasificacin Figura 28. Imgenes de levaduras: Saccharomyces cerevisiae de la familia Ascomycota y Cryptococcus albidus, utilizadas para la fabricacin de pan
Tomado de: http://www.biology.ed.ac.uk/research/groups/jdeacon/microbes/albic2.jpg Las levaduras se identifican por el estudio de sus caractersticas metablicas; mientras que la clasificacin de los hongos filamentosos se basa en sus caractersticas morfolgicas. Los hongos se han clasificado con criterios muy diferentes segn el inters de los estudiosos (taxonmico, patognico, epidemiolgico). Desde el punto de vista taxonmico estricto, se clasifican segn el tipo de reproduccin sexual, en cuatro grupos: Zigomicetos, Ascomicetos, Basidiomicetos y los Deuteromicetos u hongos imperfectos que son los hongos superiores para los que se desconoce el tipo de reproduccin sexuada, porque sus estructuras sexuales no estn bien identificadas no se han descubierto o no existen.
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Los Zigomicetos son los hongos ms simples con hifas aseptadas, micelio cenocitico, es decir multinucleado y zigosporas. Ejemplos de este tipo de hongos son: el moho negro del pan, o muchos formadores de endomicorrizas. Ejemplo Rhizopus, Mucor, Penicillium Los Ascomicetos presentan ascas o estructuras semejantes a un saco el cual contiene las ascosporas o esporas sexuales. Su micelio es aseptado. Es el grupo con mayor nmero de especies. Entre ellas destacan muchos hongos fitopatgenos (odios, cornezuelo, grafiosis del olmo, etc.), parsitos en humanos Candida, Cryptococcus. Los Basidiomicetos presentan basidios en donde se encuentran las basidiosporas o esporas sexuales. Pertenecen a este grupo los hongos comestibles. Aqu pueden hallarse los hongos ms conocidos, como las tpicas setas, y algunos fitopatgenos de enorme importancia como royas y carbones. Los Deuteromicetos presentan hifas tabicadas.
Para saber ms: Profundizacin sobre hongos Tambin puedes obtener muchos detalles acerca de los hongos y ver algunas imgenes interesantes en Microbial World (en ingls) Una pgina actualizada permanentemente, con informacin sobre hongos: Dr. Fungi, (en ingls)
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PREGUNTAS DE ANLISIS DE POSTULADOS
Las preguntas que encontrar a continuacin constan de una afirmacin VERDADERA (tesis) y dos postulados tambin VERDADEROS, identificados con POSTULADO I y POSTULADO II. Usted debe analizar si los postulados se deducen lgicamente de la afirmacin y selecciona la respuesta en su hoja de cotejo, conforme a la siguiente instruccin: Marque A si de la tesis se deducen los postulados I y II. Marque B si de la tesis se deduce el postulado I. Marque C si de la tesis slo se deduce el postulado II. Marque D si ninguno de los postulados se deduce de la tesis. TESIS: Los hongos son los principales agentes de descomposicin de la materia orgnica en todos los ambientes cidos. Los hongos poseen una red de filamentos o hifas en el suelo y su micelio puede subdividirse en clulas individuales por medio de paredes transversales o septos. Los micelios fungosos se pueden observar fcilmente en los humus tipo mor y moder. POSTULADO I:Los hongos participan en la formacin del humus y contribuyen al reciclaje de nutrientes y a la estabilidad de agregados mediante la degradacin de residuos vegetales y animales. POSTULADO II: Una de las principales actividades de los hongos es la descomposicin de la celulosa, hemicelulosa, pectinas, almidn, grasas y compuestos de lignina.
1.2.6. Actividades de Autoevaluacin del captulo 2 CRUCIGRAMA

HORIZONTALES 2. Su forma es ovalada, se desplazan y capturan el alimento por medio de cilios, filamentos cortos, vibrtiles y numerosos que rodean su cuerpo. 4. Se les considera como la etapa primitiva de los virus. 5. Eucariotas, auttrofas, pertenecientes al reino Protista. 6. Son protenas que se multiplican en la clula hospedadora donde generan graves alteraciones 7. Se caracterizan por que son procariotas (sin ncleo verdadero), auttrofos (fundamentalmente) 9. Son ms resistentes que las bacterias a esta radiacin. 10. Son bacterias anaerobias facultativas 11. se les conoce como bacterias, microorganismos procariotas, unicelulares de organizacin muy sencilla 12. Se desplazan por medio de pseudpodos, que son prolongaciones de la clula que les sirven adems para capturar el alimento, englobarlo y formar una vacuola digestiva, donde el alimento es digerido por accin de enzimas. 14. Carecen de rganos de locomocin todos son parsitos obligados de clulas del hombre y de los animales. Presentan una estructura apical adaptada a la penetracin intracelular. 15. Pertenecen al dominio Eucarya o Eucariota, Reino Fungi.
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VERTICALES 1. Son organismos microscpicos mviles, incoloros, unicelulares, eucariticos, poseen ncleo, membrana nuclear, membrana celular, mitocondrias, aparato de Golgi, microtbulos y otros organelos, carecen de pared celular 3. Tienen importancia en la obtencin de productos y bebidas fermentables debido a su capacidad de realizar fermentacin alcohlica 8. Producen el metano de los eructos de los rumiantes y del gas liberado en las zonas pantanosas 13. hongos pluricelulares que forman una serie de filamentos o tubos rgidos denominados hifas
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1.3. CAPTULO 3. GENETICA DE LOS MICROORGANISMOS

Introduccin5 Las bacterias son microorganismos con una capacidad extraordinaria de adaptacin a diferentes condiciones ambientales. Para comprender la esencia de esta capacidad es importante conocer sus bases genticas, es decir cmo est organizada la informacin gentica, como realizan y regulan su expresin y que mecanismos de variacin gnica poseen. La capacidad infecciosa de las bacterias patgenas radica en que poseen la informacin gnica necesaria para colonizar los tejidos del husped, invadirlos y/o producir sustancias txicas que causarn la enfermedad. Por otro lado, el conocimiento del funcionamiento gentico de las bacterias, sumado al hecho de que son de fcil manejo en el laboratorio y que tienen crecimiento rpido, ha permitido usarlas para sintetizar productos tiles a la medicina, tanto para el diagnstico como para la prevencin y tratamiento de algunas enfermedades. Estas posibilidades se han visto incrementadas con el desarrollo de la ingeniera gentica y la disponibilidad de tcnicas de biologa molecular.
Objetivos Describir las tcnicas mutacionales ms usuales en Gentica Bacteriana. Distinguir entre los procesos de recombinacin gentica (transformacin, transduccin y conjugacin). Conocer las bases y la metodologa para los procesos de obtencinde productos tiles al hombre por clonacin de DNA (manipulacin dematerial gentico). Conocer los principios de la inmunologa
Conclusin La gentica estudia la variabilidad y herencia de las caractersticas de un organismo, sea eucaritico o procaritico. Las investigaciones sobre la gentica bacteriana han sido contribuciones a la biologa, debido a que las leyes de la herencia se cumplen en todos los organismos vivos. En pocas anteriores la nica posibilidad de hacer anlisis
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Montoya Villafae, Hugo Humberto. Microbiologa bsica para el rea de la salud y afines. 2@ edicin. Medelln. Universidad de Antioquia. 2008.
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genticos era el de hacer apareamientos en plantas o animales; actualmente la investigacin se hace con bacterias debido a sus ventajas, como son su rpida reproduccin y el gran nmero de individuos que resultan de cada experimento (se estima que, en su etapa logartmica, se duplica en intervalos de 20 minutos, obtenindose una nueva generacin con millones de individuos). Para el desarrollo de stos experimentos, se utiliza con mucha frecuencia, la bacteria Eschericichia coli, debido a que posee sistemas exclusivos de recombinacin gentica, la cual es un mecanismo donde las clulas descendientes pueden tener combinaciones de genes diferentes de los de sus padres.
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1.3.1. Leccin 9: Gentica bacteriana
Estructura de los cidos nucleicos El cido desoxirribonuclico o ADN, es una sustancia qumica responsable de la transmisin de informacin hereditaria. El ADN es el constituyente del cromosoma de las clulas bacterianas. En su estructura se codifica la informacin para la sntesis de las protenas celulares y los genes, que son los segmentos que codifican las protenas. Esta informacin se transmite de generacin en generacin por la replicacin del ADN. Figura 29. Estructura del ADN
Desde el punto de vista qumico, el ADN6 es un polmero de nucletidos, es decir, un polinucletido. Un polmero es un compuesto formado por muchas unidades simples conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado por vagones. En el ADN, cada vagn es un nucletido, y cada nucletido, a su vez, est formado por un azcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adeninaA, timinaT, citosinaC o guaninaG) y un grupo fosfato que acta como enganche de cada vagn con el siguiente. Lo que distingue a un vagn (nucletido) de otro es, entonces, la base
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http://es.wikipedia.org/wiki/cido_desoxirribonucleico
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nitrogenada, y por ello la secuencia del ADN se especifica nombrando slo la secuencia de sus bases. La disposicin secuencial de estas cuatro bases a lo largo de la cadena (el ordenamiento de los cuatro tipos de vagones a lo largo de todo el tren) es la que codifica la informacin gentica: por ejemplo, una secuencia de ADN puede ser ATGCTAGATCGC... En los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de nucletidos, en la que las dos hebras estn unidas entre s por unas conexiones denominadas puentes de hidrgeno. Para que la informacin que contiene el ADN pueda ser utilizada por la maquinaria celular, debe copiarse en primer lugar en unos trenes de nucletidos, ms cortos y con unas unidades diferentes, llamados ARN. Las molculas de ARN se copian exactamente del ADN mediante un proceso denominado transcripcin. Una vez procesadas en el ncleo celular, las molculas de ARN pueden salir al citoplasma para su utilizacin posterior. La informacin contenida en el ARN se interpreta usando el cdigo gentico, que especifica la secuencia de los aminocidos de las protenas, segn una correspondencia de un triplete de nucletidos (codn) para cada aminocido. Herencia de las caractersticas y variabilidad: Una caracterstica de todas las formas de vida, est dada por la estabilidad general o semejanza que produce caractersticas de los padres en su descendencia. Sin embargo, adems de la herencia de las caractersticas, existe una variabilidad o cambio, que se expresa en la descendencia. Estos cambios estn asociados a dos propiedades de la clula, el genotipo, que se refiere a la constitucin gentica precisa de una clula bacteriana o de un organismo superior y el fenotipo, que es la expresin del genotipo, o sea de las caractersticas observables de una clula bacteriana o de un organismo superior. Variaciones fenotpicas o temporales (adaptaciones) Son modificaciones del fenotipo bacteriano debidas a cambios ambientales en los cuales no se ve afectado el genoma y que no se transmiten por la herencia. Son tpicas de las bacterias que se encuentran en cultivos. Las variaciones fenotpicas pueden ser de varios tipos:
Morfolgicas: Producen cambios de forma, tamao, prdida de la cpsula, de flagelos o esporos o de tincin, como en las bacterias Gram variables. Estos cambios se producen cuando se cambia el pH, temperatura, presin osmtica o contenido nutricional del medio entre otros. Cromgenas: Algunas bacterias tienen la capacidad de producir pigmentos, que le imparten un color caracterstico a sus colonias. Estos pigmentos pueden desaparecer temporalmente al modificar sus condiciones ambientales, como en el caso de la bacteria
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Serratia marcescensque produce colonias color ladrillo cuando se cultiva en agar nutritivo, a temperatura ambiente y en la oscuridad, pero que pierde con aumentos de temperatura. Figura 30. Serratia marcescens
Tomada de: http://www.health.qld.gov.au/EndoscopeReprocessing/images/1317_serratia.jpg Enzimticas: Este es el caso de las bacterias que producen enzimas si el medio en que se desarrollan induce su produccin, como en el caso de la E. Coli que solo produce la enzima beta galactosidasa, si en el medio de cultivo hay ausencia de lactosa o en el caso de la enzima penicilinasa, que solamente se produce cuando en el medio est presente la penicilina. De tincin: Esta variacin se observa en las bacterias Gram variables: las bacterias Gram positivas de un cultivo viejo pierden la capacidad de retener colorante primario durante la decoloracin con alcohol y solamente recuperan esta propiedad cuando se vuelve a sembrar y se obtiene poblacin joven. Variaciones genotpicas permanentes: El genotipo de una clula bacteriana est determinado por la informacin gentica contenida en su cromosoma. Los cromosomas se dividen en genes, que son la unidad funcional de la herencia y estn formados por cientos de pares de nucletidos. Cualquier gen tiene la posibilidad de mutar o de cambiar a una forma diferente y de sta manera propiciar la formacin de una protena alterada o nueva, que a su vez puede daar las caractersticas de la clula, producindole a veces la muerte. Este fenmeno se conoce como mutacin, que es el cambio de la secuencia de nucletidos de un gen que se transmite en forma hereditaria. Las mutaciones son acontecimientos raros (una mutacin por cada 1.000.000 de clulas) que se producen al azar y surgen espontneamente, sin tener en cuenta los requerimientos del ambiente. Este tipo de mutaciones se conoce como mutaciones
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espontneas y pueden surgir como consecuencia de la radiacin natural, que altera la estructura de las bases de ADN. Generalmente, los mutantes se encuentran entre gran cantidad de clulas bacterianas normales, que se conoce como cepa silvestre o prottrofa, o sea que que es la cepa progenitora que crece en un medio nutritivo completo. Para aislar a estos mutantes cepa auxtrofa - se han desarrollado tcnicas de aislamiento como la utilizacin de antibiticos al medio de cultivo, para seleccionar los mutantes resistentes a este antibitico, que crecen en el medio de cultivo. Las mutaciones pueden ser catalogadas como inducidas, cuando se aplica a una poblacin bacteriana algn tipo de agente inductor, conocido como agente mutagno o sustancia mutagnica. Variabilidad gentica de las bacterias El material gentico bacteriano es muy simple: un solo cromosoma circular, plsmidos y transposones. - Cromosoma: Est formado por ADN, es de doble cadena, forma una estructura circular la cual permanece super enrollada, las bacterias solo poseen un cromosoma en su genoma. - Plsmidos: son molculas de ADN extracromosmico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADN cromosmico. A diferencia del ADN cromosomal, los plsmidos no tienen protenas asociadas. -Transposones: son porciones de ADN que pueden moverse de un lugar a otro del cromosoma. No son independientes al cromosoma bacteriano y se replican con l. La reproduccin en las bacterias es asexual por biparticin: Tras la duplicacin del ADN, la pared bacteriana crece hasta formar un tabique transversal separador de las dos nuevas bacterias. Pero adems de este tipo de reproduccin asexual, las bacterias poseen unos mecanismos de recombinacin gentica, mediante los cuales se intercambian fragmentos de ADN.Los cambios genotpicos pueden darse por tres mecanismos: a.Transformacin b.Conjugacin c. Tranduccin Transformacin: Consiste en el intercambio gentico producido cuando una bacteria es capaz de captar fragmentos de ADN, de otra bacteria que se encuentran dispersos en el medio donde vive.
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Conjugacin: En este proceso, una bacteria donadora F+ transmite a travs de un puente o pili, un plsmido, a otra bacteria receptora F-. Transduccin: En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a otra, se realiza a travs de un virus bacterifago, que se comporta como un vector intermediario entre las dos bacterias. El virus tiene un ciclo de vida lisognico. Animacin sobre proceso de conjugacin Figura 31. Recombinacin gentica de bacterias
Tomado de: http://3.bp.blogspot.com/_HQUynmAHGQ/Sca6UbRdWMI/AAAAAAAAADw/YxKlY-7t61Q/s400/eeeessstaaaaaa.bmp Para saber ms: Recombinacin gentica bacteriana Recombinacin gentica de hongos, bacterias y virus
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PREGUNTAS DE SELECCIN MLTIPLE CON MLTIPLE RESPUESTA Marque A si 1 y 2 son correctas. Marque B si 1 y 3 son correctas. Marque C si 2 y 4 son correctas. Marque D si 3 y 4 son correctas.
La meiosis no existe entre los organismos bacterianos, sin embargo, puede darse recombinacin tras la transferencia horizontal de genes, en donde los genes de un organismo maduro e independiente se transfieren a otro. En bacterias es una transferencia unidireccional, en eucariotas tiende a ser recproca. El desplazamiento del ADN de una bacteria donadora al receptor puede producirse de 3 mecanismos, dos de los cuales pueden ser: 1. Transformacin 2. Conjugacin 3. Gametognesis 4. Sntesis de protenas de tipo histona
1.3.2. Leccin 10. Gentica de protistos y hongos 7
Algunas mutaciones pueden ser "beneficas" al proveer de una ventaja evolutiva a los organismos que las poseen. La infeccin por Plasmodiun falciparum (tambin por otras especies del mismo gnero) produce la enfermedad denominada malaria, esta se haya ampliamente distribuida en las zonas con clima tropical y los vectores son las hembras de los mosquitos del gnero Anopheles. Se sabe que una mutacin en el gen que codifica para la cadena beta de la hemoglobina hace que los portadores del gen mutante sean resistentes a la infeccin, al hacer que la hemoglobina mutante disminuya su capacidad para transportar oxgeno, limitando de oxgeno al parsito Plasmodium sp. y evitando que este infecte a los eritrocitos (globulos rojos de la sangre).
Adaptado de: http://encyclopedia2.thefreedictionary.com/Fungal+genetics
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Figura 32. Plasmodium falciparum
Tomado de: http://cecyt3biology.blogspot.com/ El estuio de la estructura y funcin de los genes en los hongos, ha aportado importantes conocimientos sobre los genes, la herencia, mecanismos genticos, metabolismo, fisiologa, de los mismos hongos con aplicacin en organismos superiores en general. El ncleo de los hongos es predominantemente haploide, es decir, contienen un solo juego de cromosomas, haciendo til esta caracterstica en el estudio de las mutaciones, que se dan en genes recesivos, los cuales se enmascaran en los organimso diploides. La reproduccin de los hongos puede ser asexual o sexual. La reproduccipon asexual consiste en la divisin mittica mediante el crecimiento de las hifas, la divisin celular o la produccin de esporas asexuales. La reproduccin sexual se basa en las divisiones meiticas nucleares. En Ascomicetos y Basidiomicetos, las esporas, que contiene los ncleos que son los cuatro productos de una meiosis, permanecen juntas en un grupo llamado ttrada, condicin que no ocurre en ningn otro grupo de organimos eucariotas, donde cada producto de una meiosis se encuentra de forma individual. Las Ttradas de los hongos se estudian para entender mejor los procesos de recombinacin que se dan en la meiosis de los organimos eucarioticos.
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Muchos conocimientos de la gentica, metabolismo, fisiologa de los organismos eucariotas, se derivan del estuio de: a. Eubacterias b. Cianobacterias c. Hongos d. Protistos
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1.3.3. Leccin 11. Biotecnologa microbiana8
Metabolitos microbianos importantes para la industria Los productos de la biotecnologa se aplican hoy a un gran nmero de industrias entre las que cabe mencionar no slo la alimenticia, sino tambin la farmacutica, textil, del papel, de detergentes, etc. Antes del advenimiento de la ingeniera gentica ya se obtenan diversos productos (metabolitos) derivados de bacterias, levaduras y hongos filamentosos. Cuando un microorganismo crece en un medio con nutrientes en exceso, consigue completar sus vas metablicas generando los productos finales del metabolismo energtico y todos los compuestos necesarios para su ciclo de vida (aminocidos, protenas, nucletidos, cidos orgnicos, vitaminas, azcares, grasas, alcoholes). Estas molculas se denominanmetabolitos primarios, y los ms importantes, desde el punto de vista comercial, son los alcoholes (especialmente el etanol), los aminocidos, los cidos orgnicos, las vitaminas y las enzimas. Entre las enzimas, se pueden mencionar a las proteasas y lipasas para la fabricacin de detergentes en polvo, la celulasa y otras enzimas para la industria textil, y la pectinasa, empleada en la industria alimenticia para la elaboracin de jugos de fruta. Adems de ser altamente especficas en sus reacciones, la enorme variedad de enzimas disponible permite optar por versiones resistentes al calor, pH bajos, solventes o altas concentraciones salinas. Adems, son biodegradables, y reemplazan a procesos fsicos o qumicos generalmente contaminantes, corrosivos, y que requieren ms energa. Cabe mencionar que la mayor parte de las enzimas hoy se producen a partir de bacterias u hongos genticamente modificados, y se cree que en 2009 el mercado mundial de enzimas ascender a unos 2,4 millones de dlares. Los metabolitos secundarios, en cambio, se producen cuando algn nutriente del medio se encuentra en concentraciones limitantes. Los ms importantes comercialmente son los antibiticos, los pigmentos, las toxinas, los inhibidores enzimticos y los alcaloides.
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Adaptado de: http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/ec_49.asp
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Durante la segunda mitad del siglo XX se lograron importantes avances en la biologa, que fueron esenciales para el desarrollo de la biotecnologa. Uno de los ms importantes fue la determinacin de la estructura de doble hlice del ADN. Este hecho, que les vali a los investigadores James Watson y Francis Crick el premio Nobel de medicina en 1962, permiti comprender cmo el ADN determina los caracteres de un individuo y cmo se transmiten de una generacin a la siguiente. A partir de este hecho se pudo conocer que todos los organismos, desde los ms simples hasta los ms complejos, tienen un cdigo gentico comn. Esto significa que el ADN de un organismo est escrito en un cdigo que puede ser interpretado y traducido por las clulas de otros organismos. Se conoci que la informacin gentica en todas las clulas se traduce a protenas, componentes fundamentales que desempean una gran diversidad de funciones. Entre ellas las enzimas, que son protenas que catalizan (aceleran) reacciones qumicas en los seres vivos. A comienzos de los aos 70 se descubrieron diversas enzimas en bacterias y virus, que fueron de gran ayuda para la biotecnologa. Entre ellas: Endonucleasas de restriccin: enzimas bacterianas que reconocen secuencias especficas del ADN, y cortan la cadena cada vez que esta secuencia aparece. Existen endonucleasas de restriccin que cortan el ADN en diferentes puntos (ver El Cuaderno N 34). ADN ligasas: enzimas que pegan fragmentos de ADN. Transcriptasas inversas: enzimas virales que puede invertir la direccin normal de la transferencia de informacin. Normalmente, la informacin gentica contenida en el ADN se transcribe a una molcula de ARN (cido ribonucleico) y luego se traduce a una protena. La transcriptasa inversa sintetiza ADN a partir del ARN. En ingeniera gentica o tecnologa del ADN recombinante, se utilizan estas enzimas para cortar y aislar un gen determinado -que tiene informacin para fabricar una protena particular- e introducirlo en las clulas de un organismo distinto del inicial. En consecuencia, este organismo tendr ADN recombinante a partir del cual fabricar una nueva protena. A la protena producida a partir de ADN recombinante se la denomina protena recombinante.
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En algunas bacterias ocurren intercambios genticos (intercambio de genes) como resultado de tres mecanismos: transformacin, conjugacin, transduccin e intercambio de plsmidos. De la transformacin se podra decir: A. En este proceso, una bacteria donadora F+ transmite a travs de un puente o pili, un fragmento de ADN, a otra bacteria receptora F-. La bacteria que se llama F+ posee un plsmido, adems del cromosoma bacteriano En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a otra, se realiza a travs de un virus bacterifago, que se comporta como un vector intermediario entre las dos bacterias. Consiste en el intercambio gentico producido cuando una bacteria es capaz de captar fragmentos de ADN, de otra bacteria que se encuentran dispersos en el medio donde vive. Ninguna de las anteriores
B.
C.
D.
1.3.4. Actividades de autoevaluacin del captulo 3 En esta sopa de letras encontrars conceptos importantes del Captulo 3, IMPORTANCIA DE LOS MICROORGANISMOS. Responde la pregunta y busca la respuesta en la sopa de letras.
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Bibliografa de la Unidad 1
ARGENBIO. (s.f.). Protenas recombinantes, Cuaderno No. 49. Recuperado el 6 de mayo de 2010, de Por qu Biotecnologa: http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/ec_49.asp BEDOYA RIVAS, L. G. (2008). Anlisis del proceso de esterilizacin con calor hmedo de productos de la salud. Recuperado el 3 de Mayo de 2010, de Biblioteca digital - Universidad Autnoma de Occidente. BROCK, T., SMITH, D., & MADIGAN, M. (2000). Microbiologa (Cuarta Edicin ed.). Mexico: Prentice Hall Hispanoamericana S.A. COLABORADORES DE WIKIPEDIA. (11 de Julio de 2010). cido desoxirribonucleico. Recuperado el 13 de julio de 2010, de Wikipedia: http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=%C3%81cido_desoxirribonucleico&oldid=38716309 COLABORADORES DE WIKIPEDIA. (5 de mayo de 2010). Ciclo reproductivo de los virus. (l. e. Wikipedia, Ed.) Recuperado el 15 de mayo de 2010, de Wikipedia: http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Ciclo_reproductivo_de_los_virus&oldid=36757916 DREYFUS CORTS, G. (1995). El mundo de los microbios. (F. d. V., Productor) Recuperado el 6 de Mayo de 2010, de Biblioteca digital Ilce: http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx/sites/ciencia/volumen1/ciencia2/43/html/sec_1.html HERRERO, A. (2008). Las cinanobacterias. Recuperado el 4 de Junio de 2010, de Insituto de biologa celuar: http://www.eez.csic.es/~olivares/ciencia/fijacion/cianobacterias.htm IEZ PAREJA, E. (1999). Curso de Inmuniologa General. Recuperado el 6 de Junio de 2010, de Universidad de Granada: http://www.ugr.es/~eianez/inmuno/cap_01.htm IAEZ PAREJA, E. (5 de octubre de 2003). Curso de microbiologa. Recuperado el 6 de mayo de 2010, de Universidad de Granada: http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/01historia.htm MARTNEZ, M. M. (1999). Microbiologa (Segunda Edicin ed.). Bogot, Colombia: Unad. MAU INCHAUSTEGUI, S. (Marzo de 2007). Gentica Bacteriana. Recuperado el 3 de junio de 2010, de Gentica Bacteriana: http://geneticabacteriana.blogspot.com/ MONTOYA VILLAFAE, H. H. (2008). Microbiologa bsica para el rea de la salud y afines (Segunda Edicin ed.). Medelln, Colombia: Universidad de Antioquia. PELCZAR, M. J., REID, R. D., & CHAN, E. (1977). Microbiologa (Segunda Edicin ed.). Mexico: McGrawHill Book Co. QUILIS BENAIGES, A. (19 de Agosto de 2005). El microscopio. Recuperado el 3 de junio de 2010, de Mailxmail: http://www.mailxmail.com/curso-microscopio/conceptos VALENCIA ZAPATA, H. A. (2004). Manual de Prcticas de microbiologa bsica. Bogot: Universidad Nacional de Colombia.
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Resumen de la Unidad 1
La Microbiologa es la ciencia que estudia los microorganismos y ha sido desarrollada desde los principios de la humanidad, porque se utilizaba para preparar y conservar los alimenos y para entender el origen de las enfermedades. La Taxonoma se encarga de la clasificacin, identificacin y nomenclatura de los microorganismos. Segn Woose son tres: Archeobacteria o archera, Eubacteria o bacteria y Eucariota o Eucaria. Los virus no son seres vivos. Estn formados por una cubierta proteica y un cido nucleico y sus ciclos de infeccin en los virus son el ciclo ltico y el ciclo lisognico. Las formas acelulares de los microorganismos son: los viroides, una forma primitiva de los virus, de menor tamao y causantes de enfermedades y los priones que son protenas que se multiplican en la clula hospedera, generando enfermedades como las vacas locas. Las bacterias son seres procariotas, unicelulares y colonizan todos los ecosistemas. Se reproducen de forma asexual por biparticin o Su reproduccin es asexual por gemacin, conjugacin o biparticin, no presentan mitosis ni meiosis. Los protozoos son seres eucariotas, unicelulares, hetertrofos, con capacidad de movimiento y se clarifican de acuerdo a sus desplazamientos o modo de vida Las algas eucariotas unicelulares son seres fotosintticos. Realizan la fotosntesis utilizando distintos tipos de pigmentos. Los hongos son un grupo muy diverso de seres vivos. Son eucariotas, unicelulares o pluricelulares, hetertrofos y sin capacidad de movimiento. Los microorganismos pueden intervenir en procesos industriales, tanto para la produccin como para la contaminacin de los productos finales.
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2. UNIDAD 2: CRECIMIENTO MICROBIANO

Unidad 2: Crecimiento microbiano Palabras claves: Crecimiento microbiano, cintica, parmetros qumicos y fsicos, parmetros intrnsecos y extrnsecos, bioseguridad, esterilizacin, desinfeccin, medios de cultivo, siembra, tincin, recuento. Horas de trabajo acadmico: El contenido de esta unidad corresponde a un crdito acadmico, que equivale a 12 horas de acompaamiento tutorial y 36 horas de trabajo independiente Introduccin La dispersin tan amplia de los microorganismos en el suelo, aire, agua, sustratos biolgicos naturales y medios artificiales de cultivo, con velocidades de reproduccin y de crecimiento verdaderamente notables, han obligado a investigar y a aplicar tcnicas de manejo y bioseguridad microbiana. El conocimiento de las opciones de control de crecimiento bacteriano implica la identificacin de parmetros fsicos y qumicos que afectan el metabolismo y el crecimiento microbiano, para entender las estrategias y las tcnicas aplicadas como se describe en el presente capitulo. Objetivos.
Reconocer los parmetros fsicos y qumicos que afectan el crecimiento y desarrollo de los microorganismos. Conocer los agentes antimicrobianos que afectan el crecimiento de microorganismos. Entender la importancia de aplicar las prcticas de bioseguridad cuando se trabaja en ambientes expuestos a contaminacin microbiana y conocer sus principios. Conocer las bases y comprender las tcnicas de cultivo de los microorganismos (bacterias, levaduras, microalgas y dinoflagelados). Diferenciar entre la esterilizacin y la desinfeccin y saber cmo y en qu casos aplicar las tcnicas.
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Mapa conceptual
Propsitos Ilustrar al estudiante para que conozca y aplique en sus actividades profesionales los parmetros para fomentar o evitar el crecimiento microbiano. Dar a conocer al estudiante los principios de bioseguridad para el trabajo en el laboratorio y los equipos relacionados con el cultivo y control de los microorganismos. Dar al estudiante los elementos bsicos necesarios para poder desarrollar actividades de siembra, tincin y recuento bacteriano Contribuir al fomento del espritu investigativo del estudiante a travs del desarrollo de competencias bsicas, complejas y transversales a partir del estudio sistemtico de nociones, conceptos, y problemticas bsicas de la microbiologa, cuyo conocimiento es fundamental para el desarrollo de sus actividades profesionales.
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Metas Al finalizar el curso el estudiante tendr nociones de control de crecimiento de los microorganismos, de los principios de manejo de equipos y normas de bioseguridad de trabajo en laboratorio y acerca de los cultivos y su manejo.
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2.1. CAPTULO 4: CINTICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Introduccin La clula bacteriana es esencialmente una maquinaria de sntesis capaz de duplicarse a s misma. El proceso de sntesis para el crecimiento bacteriano involucra unas 2000 reacciones qumicas de una amplia variedad. Una vez sintetizados los polmeros, el crecimiento contina con el ensamblaje y formacin de nuevas estructuras celulares que finalizan con la divisin en dos clulas hijas. En un medioapropiado fsica y nutricionalmente, un cultivo se reproduce continuamente como clulas vegetativas, los nutrientes absorbidos y metabolizados permiten crecer al microorganismo. Objetivos Reconocer los parmetros fsicos y qumicos que afectan el crecimiento y desarrollo de los microorganismos. Relacionar los efectos causados por el metabolismo propio de cada microorganismo con su capacidad para sobrevivir en un hbitat determinado. Establecer la importancia del conocimiento de los parmetros fsicos y qumicos para establecer prcticas de control orientadas a preservar la calidad de los productos industriales y a asegurar ambientes sanos o no contaminantes para organismos vegetales y animales. Conclusin No se podra manipular con seguridad las diferentes cepas de microorganismos sin conocer los parmetros que afectan la dinmica de su crecimiento.
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2.1.1. Leccin 12: Cintica del crecimiento microbiano
El crecimiento microbiano hace referencia al aumento del nmero de microorganismos a lo largo del tiempo y no al aumento de tamao de un microorganismo. El aumento del nmero de microorganismos permite la formacin de colonias o de poblaciones. Es por eso que en microbiologa el crecimiento se estudia por poblaciones y no en microorganismos individuales. Las bacterias se reproducen generalmente por fisin binaria. El resultado de la fisin binaria son dos clulas hijas por cada clula madre, as, una clula se divide en dos, dos en cuatro y cuatro en ocho y as sucesivamente. El intervalo de tiempo que transcurre para la formacin de dos clulas a partir de la clula madre se llama tiempo de generacin o tiempo generacional y al igual que la tasa de crecimiento o cambio en el nmero de clulas por unidad de tiempo, vara en dependencia de las condiciones genticas de las bacterias y de los factores nutricionales. Si partimos de una clula al cabo de una generacin habr duplicado su nmero y as sucesivamente en cada generacin. Como se puede observar el crecimiento se produce en progresin geomtrica y no aritmtica. Tabla 3. Tabla de progresin de crecimiento microbiano
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En algunas bacterias como en el caso la E. coli, en condiciones ptimas la duplicacin celular se realiza cada 20 minutos, es as como en 10 horas se habrn producido 30 generaciones, es decir mil millones de clulas bacterianas. A partir de una clula de E .coli, se obtiene al cabo de 10 horas o sea 600 minutos, 600/20=30 generaciones. El nmero de clulas entonces sera 230. Figura 33. Aspectos para el clculo del crecimiento microbiano
Fases del crecimiento bacteriano El incremento en el nmero de las clulas en una poblacin se denomina como crecimiento exponencial o logartmico. Si se inoculan unas bacterias en un medio de cultivo fresco y se cuantifica la poblacin en intervalos de tiempo se puede obtener una curva que represente el crecimiento bacteriano. Figura 34. Curva de crecimiento bacteriano
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La curva puede estar determinada por la comparacin del nmero total de los microorganismos vivos presentes en la poblacin en un perodo de tiempo. La curva de crecimiento de la poblacin tiene cuatro fases: 1) fase lag o fase de latencia es el periodo de adaptacin de los microorganismos a un nuevo ambiente, en este periodo el nmero de clulas no se incrementa, sino que se mantiene constante por un largo perodo que puede durar desde 1 hora hasta varios das. En esta fase las clulas presentan gran actividad metablica. Al final de la fase la mayora de las clulas aumentan su tamao. 2) fase log. o logartmica o de crecimiento exponencial durante este periodo las clulas se empiezan a dividir en forma constante, la actividad metablica: respiracin celular, la sntesis de protenas es mxima. El nmero de clulas vivas en reproduccin es mucho mayor que las clulas vivas de la poblacin que comienzan a morir. El tiempo generacional es mnimo y constante. Las clulas muestran su morfologa: color agrupacin forma entre otras. En el momento final de esta fase y como resultado de la alta tasa de reproduccin, comienzan a escasear los nutrientes y el ambiente se torna txico por el exceso de productos de desecho. Es el momento en el cual las clulas son ms sensibles a los antimicrobianos o a las radiaciones que pueden intervenir negativamente en su crecimiento. Esta fase se representa por una lnea recta ascendente. 3) fase estacionaria, en este periodo se genera un factor limitante del crecimiento, razn por la cual se detiene el crecimiento de los microorganismos, generando una tasa reproductiva igual a la tasa de mortalidad. Si la poblacin no se reproduce ni muere, el nmero de clulas permanece constante y la longitud de la fase vara y depende del balance que logren las clulas con el medio ambiente. Es un periodo de equilibrio. 4) fase de muerte, o de declive logartmico, en esta fase las clulas no se reproducen, solo mueren y son destruidas por lisis en forma exponencial a causa del incremento en las cantidades de cido y otros desechos dainos en el ambiente.
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PREGUNTAS DE SELECCIN MLTIPLE CON MLTIPLE RESPUESTA Este tipo de preguntas consta de un enunciado, problema o contexto a partir del cual se plantean cuatro opciones numeradas de 1 a 4, usted deber seleccionar la combinacin de dos opciones que responda adecuadamente a la pregunta y marcarla en la hoja de respuesta, de acuerdo con la siguiente informacin: Marque A si 1 y 2 son correctas. Marque B si 1 y 3 son correctas. Marque C si 2 y 4 son correctas. Marque D si 3 y 4 son correctas.
La figura muestra el efecto bactericida de varias concentraciones de fenol sobre Escherichia Coli. Revisando el diagrama puedo concluir que: 1. A mayor concentracin de bactericida, ms rpidamente se eliminan las bacterias de E. Coli. 2. Para conseguir esterilidad debo considerar las diferentes concentraciones y tiempos de contacto entre microorganismos y antispticos 3. Utilizando una concentracin de 4.25 g/l puedo garantizar esterilidad a las 2 horas. 4. Cuando utilizo concentraciones bajas de bactericida debo esperar bastante tiempo para lograr la eliminacin de los microorganismos.
2.1.2. Leccin 17: Parmetros fsicos que afectan el crecimiento y desarrollo de los microorganismos
Los aspectos fsicos que influyen de manera determinante en el crecimiento microbiano son: la temperatura, el pH y la presin osmtica. Temperatura: la supervivencia de los microorganismos se presenta normalmente en las temperaturas usuales para el desarrollo de los animales superiores, aunque se da el caso de algunas bacterias resistentes a extremos de fro o de calor. Se puede hablar por consiguiente de una taxonoma microorgnica referida a rangos ptimos de adaptacin a la temperatura. Esta clasificacin contempla los tres casos siguientes:
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Microorganismos psicrfilos adaptados a bajas temperaturas, en trminos generales se maneja un rango de 0C a 20C como lmites normales para su crecimiento. Mesfilos, viven en temperaturas moderadas, en un rango de 20C a 40C., los microorganismos mesfilos, son los ms comunes. Por ejemplo, la temperatura ptima para la mayora de las bacterias patgenas se aproxima a los 37C. Termfilos, soportan altas temperaturas, contemplan como rangos usuales de tolerancia de 40C. a 80C. y por consiguiente sus endosporas son normalmente resistentes al calor y sobreviven a los tratamientos trmicos aplicados a conservas enlatadas aunque no crecen a las temperaturas normales de almacenamiento. De todas maneras, el crecimiento se da dentro de ciertos rangos de temperatura, que generalmente comprenden unos lmites de tolerancia de unos 30 C. pH Normalmente el pH (acidez o alcalinidad de una solucin o medio de crecimiento) de rango neutro (6,5 a 7,5) son los ms adecuados para el crecimiento bacteriano y muy pocas bacterias soportan pH inferiores a 4.0. Por esta razn el manejo de la acidez es un recurso para el control microorgnico. Como en el caso de las temperaturas existen algunas bacterias que soportan niveles extremos de acidez, razn por la cual se Las denomina acidfilas. Se conocen bacterias que sobreviven a pH de 1. Los rangos alcalinos generalmente inhiben el crecimiento microbiano. En los ensayos de laboratorio para el cultivo de bacterias se requiere neutralizar los cidos que producen las bacterias mediante sustancias qumicas denominadas tampones. Las sales de fosfato amortiguan la acidez y la mantienen en el rango usual de crecimiento para la mayora de las bacterias (de 6,5 a 7,5) y de paso aportan el fsforo que es un nutriente necesario. El intervalo ptimo de pH para mohos y levaduras est entre 5,0 y 6,0. Una tabla de rangos de tolerancia a la acidez es la siguiente: Tabla 4. Tabla de clasificacin de microorganismos de acuerdo a su tolerancia al pH
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Presin osmtica Los microorganismos estn formados por un 80-90% de agua y por consiguiente son fcilmente afectados por soluciones hipertnicas o sea con una concentracin de solutos mayor a la de la clula microbiana, razn por la cual esta pierde agua por el efecto conocido como plasmlisis. Por consiguiente la adicin de sales o de azcar produce una contraccin celular que evita el crecimiento bacteriano. Sin embargo existen las bacterias llamadas halfilas extremas que requieren alta concentracin salina para supervivir (alrededor del 30% de sal). Otro caso es el de las halfilas facultativas que no necesitan altas concentraciones salinas pero pueden soportar concentraciones entre el 2 y el 15% de sal. Se comprende entonces la tcnica usada para solidificar los medios de cultivo microbiano con agar, con una concentracin del orden del 1,5%. Transferencia
PREGUNTAS DE SELECCIN MLTIPLE CON MLTIPLE RESPUESTA Este tipo de preguntas consta de un enunciado, problema o contexto a partir del cual se plantean cuatro opciones numeradas de 1 a 4, usted deber seleccionar la combinacin de dos opciones que responda adecuadamente a la pregunta y marcarla en la hoja de respuesta, de acuerdo con la siguiente informacin: Marque A si 1 y 2 son correctas. Marque B si 1 y 3 son correctas. Marque C si 2 y 4 son correctas. Marque D si 3 y 4 son correctas.
Si tengo un microorganismo que crece a temperatura de 4C y a un pH de 9.0 puedo clasificarlo como: 1. Hipertermfilo 2. Acidfilo 3. Psicrfilo 4. Alcalfilo
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2.1.3. Leccin 14. Parmetros qumicos que afectan el crecimiento y desarrollo de los microorganismos
Los parmetros qumicos, que influyen en el crecimiento de los microorganismos son: el agua, las fuentes de carbono y de nitrgeno, los minerales, el oxgeno y los factores orgnicos del propio microorganismo. Las fuentes de carbono son necesarias para el crecimiento bacteriano ya que este elemento es una estructura bsica en todos los compuestos orgnicos que constituyen la clula viva. Por consiguiente los microorganismos obtienen su carbono a partir de compuestos orgnicos (microorganismos quimihetertrofos), o del bixido de Carbono (caso de los quimioauttrofos y fotoauttrofos). Nitrgeno, Azufre y Fsforo: en la sntesis de su material celular los microorganismos utilizan el nitrgeno principalmente para formar el grupo amino de los aminocidos constituyentes de las protenas. En algunos casos de simbiosis el nitrgeno fijado por bacterias se comparte con ciertas plantas (generalmente leguminosas), lo cual permite aumentar la fertilidad del suelo. El azufre se utiliza generalmente para sintetizar aminocidos y vitaminas como la timina y la biotina. El fsforo se utiliza en sntesis de cidos nucleicos y de los fosfolpidos de las membranas celulares. De manera similar los microorganismos necesitan otros elementos como potasio, magnesio, y calcio necesarios para su utilizacin como cofactores de las enzimas. Por otra parte los microorganismos requieren algunos elementos minerales en cantidades muy pequeas, como es el caso de los oligoelementos: hierro, cobre, molibdeno y zinc, los cuales son esenciales como cofactores en la actividad enzimtica. Oxgeno: los microorganismos aerobios utilizan el oxgeno molecular con el cual producen ms energa a partir de los nutrientes. Sin embargo existen microorganismos anaerobios facultativos que utilizan el oxgeno disponible, pero si no lo hay pueden crecer mediante procesos de fermentacin o respiracin anaerbica. La bacteria Escherichia coli y muchas levaduras son anaerobios facultativos. Existen adems los anaerobios
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obligados para los cuales el oxgeno es perjudicial y por consiguiente no lo utilizan. En este caso los tomos de oxgeno de sus componentes celulares los obtiene normalmente del agua. Es comprensible entonces el uso del in perxido para el control bacteriano ya que en este caso es una forma txica de oxgeno. Agentes antimicrobianos que afectan el crecimiento A partir del descubrimiento de la penicilina se han observado reacciones de inhibicin del crecimiento microbiano en medios slidos por causa de sustancias producidas por otros microorganismos, sustancias que por tal motivo se llaman antibiticos. Algo ms de la mitad de los antibiticos de amplio uso son producidos por la bacteria Streptomyces. Otros antibiticos son producidos por bacterias del gnero Bacillus y algunos son generados por mohos de los gneros Penicillium y Cephalosporium. Espectro de actividad antimicrobiana Los antibiticos presentan cierta selectividad sobre los tipos de clulas microbianas que pueden afectar, por ejemplo, la penicilina es efectiva contra bacterias Gram Positivas, pero ataca a pocas bacterias Gram Negativas. Los antibiticos que atacan a un alto nmero de Gram Positivas y Gram Negativas se denominan de amplio espectro y se recurre a ellos cuando no es segura la identidad del patgeno. Desafortunadamente estos antibiticos destruyen gran parte de la flora normal del husped y aquellos microorganismos patgenos que no son destruidos por el antibitico pueden atacar ms fuertemente al organismo husped por el desequilibrio de la flora. Seleccin de frmacos antimicrobianos Los principales criterios para determinar el valor de un agente antimicrobiano o frmaco antibitico son los siguientes: Toxicidad selectiva: que ataque al microorganismo pero no al husped o si son ligeramente txicos, que no alcancen a interferir significativamente con las funciones normales del organismo Que no produzca alergias o hipersensibilidad ante el sistema inmunitario. Que sea soluble en los fluidos corporales, con lenta degradacin y buen tiempo de permanencia en el organismo para lograr el efecto antibitico. Debe mantenerse en buenas condiciones mediante refrigeracin. Que no produzcan fcil resistencia en los microorganismos.
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Mecanismo de accin de los antibiticos o agentes antimicrobianos Los agentes bactericidas eliminan las bacterias y los agentes bacteriostticos solo impiden su crecimiento, contribuyendo a que las propias defensas del husped destruyan a los microorganismos patgenos. Los principales mecanismos antibiticos son los siguientes: Inhibicin de la sntesis de la pared celular. Algunos antibiticos interfieren con las sntesis del peptidoglucano necesario para la construccin de la pared celular de bacterias Gram positivas y Gram Negativas. De esta manera la pared celular de bacteria patgena se debilita y no puede crecer normalmente. Inhibicin de la sntesis de protenas. Algunos antibiticos como el cloranfenicol, la Eritromicina y las Tetraciclinas inhiben la sntesis de protenas en ciertos tipos de ribosomas de las bacterias patgenas y de esta manera se anula su actividad fisiolgica. Alteracin de la membrana citoplasmtica. Antibiticos como la polimixina B daan la permeabilidad de la membrana citoplasmtica y otros frmacos antifngicos como la Nistatina, Anfotericina B y Ketoconasol desorganizan la membrana citoplasmtica causando la destruccin celular al liberar el contenido citoplasmtico. Inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos. Este tipo de accin evita el desarrollo normal del microorganismo, pero tiene un efecto txico en el ADN y ARN de los mamferos, como es el caso del antivrico idoxuridina. Son ms selectivamente txicos para las bacterias, afectando menos al husped la Rifampicina y el cido nalidixico. Inhibicin de la actividad enzimtica. Algunos antibiticos son antimeta bolitos que por su parecido al sustrato normal de una enzima necesaria en la produccin de cido flico interfieren con esta sntesis y detienen el crecimiento del microorganismo. Es el caso de la sulfanilamida. Otros agentes de accin similar son las sulfotas el Timetropin.
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Los agentes bactericidas eliminan las bacterias y los agentes bacteriostticos solo impiden su crecimiento. Antibiticos como la tetraciclina y la estreptomicina son potentes bactericidas su mecanismo de accin se basa en: A Alteracin de la membrana citoplasmtica B Inhibicin de la sntesis de protenas C Inhibicin de la sntesis de la pared celular D Inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos
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2.1.4. Leccin 15: Parmetros microorganismos en los alimentos.
que
afectan
la
supervivencia
de
los
De todos los microorganismos presentes en un alimento slo algunos son capaces de multiplicarse activamente sobre ste. Los tejidos vegetales y animales, que constituyen la base de los alimentos, tienen bien desarrollados ciertos mecanismos de defensa frente a la invasin y proliferacin de los microorganismos. Si se tiene en cuenta este fenmeno natural, se puede prevenir o retardar la alteracin microbiolgica de todos sus productos derivados. Existen una serie de parmetros entre los cuales los ms importantes son los intrnsecos y extrnsecos que determinan lo que se denomina resistencia a la colonizacin de un alimento. Parmetros intrnsecosEstos parmetros estn relacionados directamente con los constituyentes de los tejidos vegetales y animales. Actividad de agua (aw) Los microorganismos requieren la presencia de agua, en una forma disponible, para que puedan crecer y llevar a cabo sus funciones metablicas. Actualmente, las necesidades de los microorganismos en agua se expresan en trminos de actividad de agua del medio ambiente, que se define como la relacin entre la presin del vapor de agua del sustrato y la presin de vapor del agua pura a la misma temperatura. La aw de la mayora de alimentos frescos es superior a 0.99. Esta puede reducirse aumentando la concentracin de solutos en la fase acuosa de los alimentos mediante la extraccin del agua o mediante la adicin de solutos. Uno de los mtodos ms antiguos utilizados por el hombre para conservar los alimentos ha sido la desecacin basada en la reduccin de la aw, durante el curado y el salazonado. La conservacin es una consecuencia de la eliminacin del agua, sin la cual los microorganismos no pueden crecer. Igualmente ocurre en el almbar y otros alimentos azucarados, donde los solutos aadidos disminuyen la aw.
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Un pequeo descenso de la aw es, a menudo, suficiente para evitar la alteracin del alimento, siempre que esta reduccin vaya acompaada por otros factores antimicrobianos. La mayora de las bacterias y hongos crece bien a aw entre 0,98 y 0,995; a valores ms bajos la velocidad de crecimiento y la masa celular disminuyen, a la vez que la duracin de la fase de latencia aumenta hasta cesar el crecimiento. Algunos tipos de microorganismos son capaces de crecer en condiciones de alto contenido de sal (baja aw); cuando tienen la capacidad de supervivencia a baja aw, o sea, en medios hipertnicos se les denominan osmfilos, xerfilos si tienen capacidad de crecer en ambientes con baja humedad y halfilos si crecen en ambientes con alta concentracin de sales. La baja aw reduce tambin la tasa de mortalidad de las bacterias, ya que una baja aw puede protegerlas durante tratamientos trmicos. pH La mayora de los microorganismos crecen a pH entre 5 y 8 unidades, aunque en general los hongos y las levaduras son capaces de crecer a pH ms bajos que las bacterias. Puesto que la acidificacin del interior celular conduce a la prdida del transporte de nutrientes, los microorganismos no pueden generar ms energa de mantenimiento y, a una velocidad variable segn las especies, se produce la muerte celular. En general, la presencia de cidos en el alimento produce una drstica reduccin de la supervivencia de los microorganismos. Los cidos fuertes (inorgnicos) producen una rpida disminucin del pH externo, aunque su presencia en la mayora de los alimentos es inaceptable. Los cidos orgnicos dbiles son ms efectivos que los inorgnicos en la acidificacin del medio intracelular debido a que es ms fcil su difusin a travs de la membrana celular en su forma no disociada (lipoflica); posteriormente se disocian en el interior de la clula inhibiendo el transporte celular y la actividad enzimtica. La actividad antimicrobiana de un cido orgnico o de su ster se debe a las molculas no disociadas de este compuesto por ser las formas moleculares ms solubles en las membranas celulares; es por esto que slo los cidos orgnicos lipoflicos tienen actividad antimicrobiana. Estos compuestos inhiben el crecimiento de los microorganismos o los matan por interferir con la permeabilidad de la membrana celular, al producir un desacoplamiento del transporte de substratos y del transporte de electrones de la fosforilacin oxidativa; como consecuencia de esto las bacterias no pueden obtener energa y mueren. La mayora de los cidos orgnicos resultan poco eficaces como inhibidores del crecimiento bacteriano a los valores de pH de 5.5 a 5.8 unidades y son ms eficaces a
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altas concentraciones y a pH ms bajos. De todos los cidos orgnicos el ms efectivo como agente antimicrobiano es el actico. Potencial redox Desde hace mucho tiempo se sabe que los microorganismos presentan diferentes grados de sensibilidad al potencial de oxido reduccin, hecho que se ha observado especialmente en los medios de cultivo. Se piensa que el potencial redox es un factor selectivo importante en todos los ambientes, incluidos los alimentos, que probablemente influye en los tipos de microorganismos presentes y en su metabolismo. El potencial redox indica las relaciones de oxgeno de los microorganismos vivos y puede ser utilizado para especificar el ambiente en que un microorganismo es capaz de generar energa y sintetizar nuevas clulas sin recurrir al oxgeno molecular: los microorganismos aerobios requieren valores redox positivos y los anaerobios negativos. Cada tipo de microorganismo slo puede vivir en un estrecho rango de valores redox. Entre las sustancia que ayudan a mantener en los alimentos condiciones de reduccin se encuentran los grupos SH presentes en las carnes y el cido ascrbico y los azcares reductores en las frutas y verduras. El potencial redox de un alimento se determina por: 1) el potencial caracterstico de xido reduccin del alimento original, 2) la capacidad de equilibrio, que es la resistencia del alimento a variar su potencial, 3) la tensin de oxgeno de la atmsfera que envuelve al alimento y 4) la posibilidad de acceso de la atmsfera al alimento. Nutrientes Los microorganismos requieren para su desarrollo los siguientes elementos: agua, fuentes de energa, fuente de nitrgeno, vitaminas y otros factores de crecimiento y minerales. Los hongos tienen las necesidades de agua ms reducidas, seguidos de las levaduras, bacterias gram negativas y bacterias gram positivas. Los microorganismos pueden utilizar azcares, alcoholes y aminocidos como fuente de energa. Algunos de ellos son capaces de emplear la energa de carbohidratos complejos, como almidones y celulosa, ya que tienen la capacidad de degradar estos compuestos hasta azcares sencillos. Tambin las grasas son utilizadas como fuentes de energa, aunque slo un nmero relativamente pequeo de los microorganismos de los alimentos son capaces de degradarlos.
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Los aminocidos constituyen la fuente primaria de nitrgeno para los organismos heterotrficos. Un gran nmero de otros compuestos nitrogenados tambin pueden cumplir esta funcin con relacin a las diversas clases de organismos. Por ejemplo, ciertos microorganismos son capaces de utilizar nucletidos y aminocidos libres, mientras que otros emplean pptidos y protenas. En general, la mayora de los microorganismos utilizan compuestos simples como los aminocidos, antes de tener que desdoblar compuestos ms complejos, como las protenas de alto peso molecular. Ocurre lo mismo con los polisacridos y grasas. Los microorganismos pueden requerir vitaminas del grupo B en pequeas cantidades. La mayor parte de los alimentos naturales las poseen en abundancia y se las facilitan a aquellos organismos incapaces de sintetizarlas. En general, las bacterias gram positivas tienen menor capacidad sintetizadora y por ello necesita de uno o varios de estos compuestos de los alimentos. Las bacterias gram negativas y los hongos pueden sintetizar la mayor parte de sus requerimientos, por lo cual estos dos grupos de organismos pueden proliferar en alimentos pobres en vitaminas del grupo B. Las frutas tienen un contenido en vitaminas del grupo B ms escaso que las carnes y este hecho, junto con su habitual pH bajo y su potencial redox positivo, explica que es ms frecuente la alteracin de las frutas por hongos que por bacterias. Figura 35. Esquema de los parmetros de crecimiento microbiano
Esquema elaborado por la Dra. Carmen Eugenia Pia
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PREGUNTAS DE ANLISIS DE RELACIN
De todos los microorganismos presentes en un alimento slo algunos son capaces de multiplicarse activamente sobre ste; lo anterior dependiendo de diferentes condiciones que se pueden agrupar en una serie de parmetros entre los cuales los ms importantes son los intrnsecos y extrnsecos, los cuales determinan lo que se denomina resistencia a la colonizacin de un alimento. Se consideran parmetros intrnsecos: 1. 2. 3. 4. Sales de curado pH Actividad de agua Temperatura
2.1.5. Leccin 16. Mecanismos de Control para el crecimiento microbiano
Componentes antimicrobianos La estabilidad de ciertos alimentos frente al ataque microbiano se debe a la presencia en los mismos de determinadas sustancias que poseen actividades antimicrobianas. Por ejemplo, el complejo de lactoperoxidasa de la leche cruda es activo frente a algunos estreptococos; la lisozima que est presente en la clara de huevo contiene cido benzoico, cido orgnico que poseen actividad antimicrobiana. Los lpidos y aceites esenciales, especialmente el eugenol del clavo y el aldehdo cinmico de la canela, poseen propiedades antimicrobianas. La cubierta natural de algunas materias primas y alimentos proporcionan una excelente proteccin contra la entrada y subsiguiente ataque de los organismos productores de alteraciones. Entre estas estructuras encontramos la membrana de las semillas, la cubierta externa de los frutos, la cscara de las nueces, la piel de los animales y la cscara de los huevos. En el caso de las nueces, la cscara o cubierta es suficiente para impedir la entrada de cualquier organismo. Por supuesto, una vez agrietada la cubierta, los hongos pueden atacar su contenido.
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Si la cscara externa y las membranas del huevo estn intactas, son capaces de impedir la entrada de casi todos los microorganismos, siempre y cuando se conserven en condiciones de humedad y temperaturas adecuadas. Las frutas y verduras con las cubiertas lesionadas se alteran mucho ms rpidamente que las sanas. El epitelio externo de los peces y el de otros animales como el cerdo y el buey, resiste la contaminacin y deterioro porque se desecan con ms rapidez que las superficies recientemente cortadas. Parmetros extrnsecos Estos parmetros constituyen todas aquellas propiedades del medio ambiente en el que se conservan los alimentos que pueden llegar a afectar, tanto a ste como a los microorganismos. Entre los ms relevantes para aquellos microorganismos que se transfieren a travs de los alimentos se encuentran: La temperatura de almacenamiento; Las Sales de curado y sustancias anlogas, La radiacin: ultravioleta, ionizante La presencia y concentracin de gases en el medio ambiente. Temperatura Es uno de los factores ambientales que ms influye en el crecimiento de los microorganismos. Al aumentar la temperatura aumenta la velocidad de las reacciones enzimticas hasta una cierta temperatura a la cual las protenas, DNA y otras macromolculas son sensibles y se desnaturalizan. Los microorganismos se desarrollan y crecen dentro de un amplio lmite de temperatura. Cada microorganismo tiene una temperatura mnima, ptima y mxima de crecimiento. La temperatura ptima siempre est ms cerca de la temperatura mxima que de la mnima. Segn su comportamiento frente a la temperatura, los organismos pueden ser: termfilos, la temperatura ptima para su crecimiento es de 55-75 C; mnimas 40 45 C , mximas 60 - 90 C , mesfilos, la temperatura ptima para su crecimiento es de 30 - 45C , Mnimas 5 15 C , mximas 35 - 47 C psicrfilos, la temperatura ptima para su crecimiento es de 15-20 C Mnimas -5 +5 C , mximas 15 - 20 C. Entre las cepas de bacterias psicrfilas se encuentran: Alcaligenes, Corynebacterium, Flavobacterium, Lactobacillus, Micrococcus, Pseudomonas y Streptococcus. Estos microorganismos se reproducen a temperaturas de refrigeracin y causan alteraciones en carnes, aves, pescados, huevos y alimentos que se conservan a bajas temperaturas. Los
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recuentos en placa de microorganismos vivos en estos alimentos son por lo general superiores si se incuban a 7C por 7 das por lo menos, que cuando la incubacin se hace a 30C o ms. Los gneros de mesfilos se encuentran igualmente en alimentos que se conservan a temperaturas de refrigeracin. Aparentemente no crecen a bajas temperaturas, pero se pueden reproducir si se dan las condiciones adecuadas. La mayor parte de los termfilos, se encuentran en los gneros Bacillus y Clostridium. Son pocas las especies, pero tienen gran importancia por su gran incidencia en la industria de alimentos. Los hongos tambin son capaces de crecer dentro de los lmites ms extensos. Muchos proliferan a temperatura de refrigeracin, especialmente algunas cepas de Aspergillus, Cladosporium y Thanadium y pueden desarrollarse en los huevos, en la superficie de la carne y en las frutas. Las levaduras, por su parte, crecen a temperaturas similares a las de los psicrfilos y mesfilos, pero generalmente no lo hacen a la temperatura de los termfilos. Se debe tener en cuenta que la temperatura de refrigeracin no siempre es la ptima para la conservacin de alimentos. Para algunos alimentos, por ejemplo el pltano, la temperatura ptima de almacenamiento se encuentra entre los 13 y 17C. El xito al elegir la temperatura de almacenamiento para cada tipo de alimento depende tambin en gran parte de otros factores como la humedad relativa del medio y la presencia o ausencia de gases como el dixido de carbono y el ozono. Sales de curado y sustancias anlogas Las sales de curado son bsicamente el cloruro sdico y los nitratos o nitritos de sodio y potasio. Estos productos se utilizan para modificar el color, aroma, textura y sensibilidad al crecimiento microbiano de los alimentos. A las concentraciones y bajo las condiciones corrientemente utilizadas, los agentes de curado no causan una destruccin microbiana rpida, ms bien retrasan o previenen el desarrollo de los microorganismos perjudiciales de los productos sin tratar y el de los termotolerantes no esporulados, evitando el desarrollo de las esporas que sobreviven a los tratamientos trmicos drsticos que se aplican a ciertos productos curados. Se desconoce el mecanismo exacto de la inhibicin de las bacterias por el nitrito que, aunque no previene la germinacin de las esporas, evita su desarrollo.
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Radiacin La radiacin ultravioleta produce una disminucin exponencial en el nmero de clulas vegetativas o de esporas vivas, segn el tiempo de irradiacin. Actualmente no existe mucha informacin referente a la susceptibilidad de las diferentes especies microbianas a la radiacin U.V.; por ejemplo, diferentes cepas de una misma especie pueden tener una resistencia distinta a este tipo de radiacin. El mayor valor del tratamiento con radiaciones U.V. se encuentra en la purificacin del aire y del agua, aunque tambin pueden aplicarse para esterilizar superficies de alimentos o para el equipo de los manipuladores de alimentos. Radiacin Ionizante La radiacin ionizante o rayos beta es generada por una fuente de energa elctrica sin fuentes ni residuos radioactivos. La radiacin ionizante es altamente letal; su dosis puede ajustarse para producir efectos pasteurizantes o esterilizantes y su poder de penetracin es uniforme. Es letal por destruccin de molculas vitales de los microorganismos sin produccin de calor, por lo que los alimentos tratados con radiacin ionizante se conservan frescos; acta principalmente a nivel de ADN. La sensibilidad a la radiacin de los microorganismos difiere segn las especies e incluso segn las cepas, aunque las diferencias de resistencia entre cepas no son considerables. Las bacterias Gram-negativas son generalmente ms sensibles a la irradiacin que las Gram-positivas y las esporas son an ms resistentes. En general, la resistencia de los hongos a la radiacin ionizante es del mismo orden que la de las formas vegetativas bacterianas. Los virus son an ms resistentes que las bacterias a esta radiacin. Gases como conservadores Diversos gases y vapores naturales o artificiales destruyen o inhiben los microorganismos. El nitrgeno se usa con frecuencia en el envasado y almacenamiento de los alimentos pero su fin primario no es la inhibicin de los microorganismos. La adicin de nitrgeno como gas inerte permite conservar las propiedades organolpticas de los alimentos al evitar su deterioro qumico. Al envasar el alimento con atmsferas protectoras de nitrgeno se evitan las alteraciones bacterianas en los alimentos, al evitar la proliferacin de las mismas. La inyeccin de nitrgeno el lquidos como jugos, jarabes, zumos, leche vinos y aceites elimina el oxgeno, de esta manera se consigue una atmsfera libre de oxgeno retardando la accin de hongos y bacterias. El hidrgeno se utiliza en alimentos como aceites y cidos grasos para modificar propiedades fsico-qumicas como punto de fusin, olor y color.
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El CO2 inhibe el crecimiento de microorganismos sobre los alimentos con mayor eficiencia cuanto menor es la temperatura. Este efecto se manifiesta tanto en bacterias como en hongos por un incremento de la fase de latencia y del tiempo de generacin durante la fase logartmica. Los hongos y las levaduras son ms resistentes al CO 2 que las bacterias (las Gram-negativas ms sensibles que las Gram-positivas). El dixido de azufre (SO2) se emplea como antifngico.
Para saber ms: Factores qumicos para el control de microorganismos: Microbiologa clnica, Control de microorganismos: Produccin de penicilina
Esterilizacin y desinfeccin Se define esterilidad a la condicin de ausencia de cualquier microorganismo. Significa destruccin de toda forma de vida microbiana incluyendo esporas. Los mtodos de esterilizacin ms usados en el laboratorio son calor seco, calor hmedo, flameado, utilizacin de soluciones qumicas. La desinfeccin se refiere a la reduccin de los organismos patgenos (organismos que ocasionan enfermedades). Los desinfectantes de acuerdo a su composicin qumica se clasifican en: Fenoles, Hipocloritos (cloro), Yodoformos (yodo Povidona), Amonio Cuaternario, Formaldehdos, Perxidos. Los desinfectantes pueden ser de bajo nivel, de nivel intermedio o de alto nivel. Los desinfectantes de bajo nivel (Fenoles, amonio cuaternario) pueden destruir la mayor parte de las formas vegetativas bacterianas, tanto grampositivas como gramnegativas, algunos virus (virus con envoltura lpidica) y hongos (levaduras), pero no Mycobacterium spp, ni las esporas bacterianas. Los desinfectantes de nivel intermedio consiguen inactivar todas las formas bacterianas vegetativas, incluyendo Mycobacterium tuberculosis, la mayora de los virus (virus con y sin envoltura) y hongos filamentosos, pero no destruyen necesariamente las esporas bacterianas. En cambio, los desinfectantes de alto nivel (formaldehdos, perxidos, hipocloritos) consiguen destruir todos los microorganismos, excepto algunas esporas bacterianas. Calor seco que se efecta en estufas de aire seco u hornos Pasteur y se manejan temperaturas entre 160 180C, por un espacio de dos horas aproximadamente. Este
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mtodo se utiliza para esterilizar el material de vidrio generalmente: tubos, cajas de Petri, pipetas y erlenmeyers. No se debe emplear para esterilizar medios de cultivo o agua pues se evaporan hasta secarse. Previo al horneado el material de vidrio se recubre con papel Kraft y se sella con cinta indicadora de esterilidad, una vez realizado el proceso de esterilizacin se revisa la cinta la cual debe tornarse de color caf oscuro lo que indica una correcta esterilizacin. El calor seco tambin se utiliza para secar material de vidrio como tubos y pipetas, este material se deja en el horno por dos horas a 60C. Las lminas y laminillas se secan con un trapo suave. Los dems materiales se secan a temperatura ambiente. Calor hmedoen autoclave se utiliza para esterilizar medios de cultivo preparados, escobillones, gasas entre otros. Adicionalmente se tiene otra autoclave para descontaminar cultivos antes de ser desechados. El autoclave es un recipiente en el que se consigue exponer el material a esterilizar a temperaturas superiores a la de ebullicin del agua, gracias al aumento de la presin. El autoclave se opera a presin de 15 lb. y a 121C. El tiempo de exposicin depende del material y volumen que se esterilice, pero en general esta comprendido entre 15 y 30 minutos. Manejo de la autoclave Verificar que la autoclave este apagada (off). Retirar la olla de aluminio y la rejilla del recipiente de esterilizacin. Llenar el tanque de agua hasta el nivel indicado (aproximadamente hasta una altura de 2 pulgadas) cubriendo la resistencia. Usar agua destilada para evitar que los sistemas de abastecimiento de agua se obstruyan. Llenar la olla de aluminio con el material a esterilizar de tal manera que el aire pueda circular durante el proceso de esterilizacin. Cubrir los elementos con toalla de papel para absorban la humedad que pueda caer de la cubierta. Colocar la rejilla, luego la olla de aluminio con el material a esterilizar en el interior de la autoclave. Colocar la tapa sobre el contenedor de la autoclave de manera que la flecha de la cubierta y el contenedor coincidan, luego insertar el tubo flexible de salida de aire en el canal que est situado en el interior de olla de aluminio. Ajustar y cerrar los pernos para evitar desajustes. Nota: siempre que se cierre un perno debe cerrarse luego el opuesto al cerrada. Colocar el botn de control del termostato en alto y el interruptor en encendido (on).
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Abrir la vlvula de control por 5 minutos para que el vapor que se genere en el fondo del recipiente sea expulsado y la presin aumente. Verificar en el manmetro Cuando la presin este en 18 a 20 lb/pulg2 (p.s.i) controle la temperatura con el botn del termostato mantenindolo en la posicin bajo (low) Encender la autoclave (on). Mantener el tiempo de esterilizacin requerido) mnimo 15 minutos). Cuando el reloj llegue a cero el ciclo de esterilizacin habr finalizado. Apagar la autoclave y finalmente abrir la vlvula para igualar presiones.
El desecho de material de cultivo se realiza diariamente previo al lavado del material, autoclavando todos los desechos biolgicos y los recipientes que los contengan a 121C por una hora. Posteriormente el contenido lquido de estos recipientes se descarta en la tubera, dejando caer abundante agua. El contenido slido se coloca en bolsa roja la cual debe ser sitio de almacenamiento temporal por un mximo de 5 das. Flameado usado principalmente para asas, es otro mtodo de esterilizacin comn usado en el laboratorio. Consiste en poner el asa con la cual se va a hacer el cultivo, durante unos minutos en la llama del mechero. Empleo de soluciones qumicas: para superficies, equipos, mesas y lavamanos se debe preparar hipoclorito de sodio al 5% a 500 ppm. Para obtener esta solucin se mezclan 10 ml de hipoclorito con 990 ml de agua y se obtiene un total de 1 litro de dilucin. El lavado del material de laboratorio se debe realizar a diario, utilizando hipoclorito de sodio a 5.000 ppm. y extran alcalino o neutro dependiendo de la clase de material. El material se debe dejar en esta solucin durante 2 o 3 horas. Posteriormente se procede al lavado por separado y en diferentes condiciones de acuerdo al material, todo realizado con los elementos de aseo y proteccin personal requeridos. Lminas y laminillas se limpian con un cepillo. Tubos y pipetas se deben limpiar con churrusco. Cada elemento se enjuaga con agua fra. El material lavado se sumerge en un recipiente con agua destilada y posteriormente se pone a escurrir. Despus de lavado el material se realiza la prueba de Azul de Bromotimol. Esta prueba consiste en seleccionar al azar diferentes elementos lavados y agregar 3 gotas de azul de Bromotimol 0.1% y observar si se desarrolla un cambio de color. El viraje a color azul indica la presencia de detergente residual, en cuyo caso se vuelve a lavar el material y se realiza nuevamente la prueba. El no desarrollo de color indica que el material ha sido lavado correctamente.
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Tranferencia
1. En la tabla vemos la resistencia de las esporas bacterianas, mohos y virus, en relacin con la resistencia de la Escherichia coli como unidad. De los datos podemos concluir que:
A. B. C. D.
Las clulas jvenes por su intenso metabolismo, son ms susceptibles que las viejas a la accin de agentes bactericidas. La luz ultravioleta es el mejor mtodo de controlar microorganismos Las esporas bacterianas se pueden eliminar con calor seco y luz ultravioleta El formaldehido a determinada concentracin controla mejor a esporas bacterianas que a los virus.
2.1.6. Actividades de autoevaluacin del captulo 4 Observa el siguiente video http://www.youtube.com/watch?v=FMAGUV3tDKY
Responde: Cules son las diferente reas en un cuartod e esterilizacin?
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2.2. CAPTULO 5: BIOSEGURIDAD Y EQUIPOS PARA LA PRCTICA DE LA MICROBIOLOGA

Introduccin Las normas de bioseguridad son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud y seguridad de las personas que realizan actividades en el laboratorio frente a riesgos procedentes del manejo de agentes biolgicos, fsicos o qumicos. Objetivos Identificar mtodos y tcnicas para la observacin cuantitativa de poblaciones microbianas Aplicar criterios disciplinares para la intervencin segura en ambientes de laboratorio Conocer los equipos utilizados en el laboratorio Recordar las bases de funcionamiento del microscopio
Conclusin La bioseguridad en el manejo microbiolgico, adems de ser un requerimiento cientficamente fundamentado, constituye un compromiso tico para todo microbilogo.
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2.2.1. Leccin 17. Normas de bioseguridad
Normas de Bioseguridad En el laboratorio de Microbiologa todas las reas deben estar debidamente marcadas con la seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin. Se deben utilizar siempre elementos de barrera apropiados segn las necesidades: blusa blanca limpia y en buen estado, guantes, tapabocas, gorro y gafas protectoras. No se debe pipetear con la boca. El pipetear lquidos con la boca es una prctica inadecuada y altamente riesgosa. Deben utilizarse pipetas mecnicas para evitar cualquier riesgo de contaminacin oral. Todas las pipetas deben tener tapones de algodn para reducir la contaminacin de los dispositivos de pipeteo. Las pipetas contaminadas deben sumergirse en un recipiente irrompible con hipoclorito de sodio al 5% a 5000 ppm durante 18 24 horas. En la zona de trabajo del laboratorio no se debe comer, beber, fumar, guardar alimentos ni aplicar cosmticos. No se deben llevar a la boca lpices, etiquetas o cualquier otro material utilizado en el laboratorio. Para evitar esto acostumbre el uso de tapabocas. Se debe mantener el laboratorio limpio y aseado. Una vez concluida la prctica, se debe organizar el laboratorio, desinfectando la superficie de trabajo con hipoclorito de sodio a 500 ppm o alcohol y dejando tanto el material como el equipo utilizado limpio y en el lugar adecuado. Se deben lavar las manos despus de haber manipulado material infeccioso, as como al abandonar el laboratorio. Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados se deben descontaminar antes de eliminarlos o de limpiarlos para su reutilizacin. Se deben introducir en bolsas de plstico de cierre hermtico con cdigo de color, para esterilizar en autoclave o incinerar fuera del laboratorio. Slo se debe permitir el paso a la zona de trabajo del laboratorio a las personas autorizadas. Durante el trabajo se mantendrn cerradas las puertas del laboratorio. Todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel con materiales
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potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes cuando se manipulen muestras o cultivos que contengan posibles patgenos. Los guantes deben ser desechados antes de salir del rea de trabajo. Jams se debe salir de la misma con los guantes puestos, ni con ellos se debe coger el telfono. Si un cultivo lquido se voltea o salpica, se debe cubrir el rea con hipoclorito de sodio a 10.000 ppm y avisar al instructor. Posteriormente se debe enjuagar las manos con jabn y agua. Marque y rotule adecuadamente las lminas, cajas y tubos con las siembras realizadas. Estos deben llevar claramente escrito en un lugar visible, el nombre o identificacin del grupo de trabajo, el ensayo o experiencia realizada, el medio de cultivo, la temperatura de incubacin y la fecha. A la terminacin de cada prctica es indispensable que organice adecuadamente las cajas o tubos por incubar y los entregue segn instrucciones. Es importante conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio. de igual manera el manejo de cada uno de los equipos existentes en el laboratorio. El transporte de las muestras dentro o entre laboratorios se debe realizar de tal manera que, en caso de cada, no se produzcan salpicaduras. Lo recomendable es hacerlo en cajas hermticas o neveras transportables. Estas cajas o neveras deben ser rgidas y resistentes a los golpes, contar con materiales absorbentes en su interior y de fcil desinfeccin. Se deben etiquetar o identificar de forma oportuna y no deben ser utilizadas para otros fines. Bajo ningn concepto se pueden transportar las muestras a mano. En la nevera no deben almacenarse cultivos de microorganismos patgenos por inhalacin en recipientes que no estn convenientemente cerrados. No deben almacenarse reactivos que contengan compuestos voltiles inflamables (ter etlico, por ejemplo) en neveras que no posean un sistema de proteccin antideflagracin. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama.
Para saber ms: Procedimientos en salud ocupacional:http://www.docstoc.com/docs/21504963/NORMASY-PROCEDIMIENTOS-EN-SALUD-OCUPACIONAL-BIOSEGURIDAD Normas de seguridad en laboratorio:http://www.lourdesluengo.es/practicas/normas.html
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2.2.2. Leccin 18. Niveles de contencin en laboratorios
Al hablar de contencin, se hace referencia a las medidas de seguridad (protocolos y mtodos) que se deben tener en cuenta en el laboratorio al manejar materiales o agentes biolgicos (determinadas bacterias, hongos, virus, Rickettsias, Chlamidias, parsitos, productos recombinantes, alrgenos, cultivos de clulas humanas y animales y los agentes infecciosos potenciales que contengan estas clulas, viroides, priones) potencialmente infecciosos, con el fin de eliminar o reducir el riesgo que estos podran ocasionar tanto a las personas que estn expuestas a ellos como al medio ambiente. Para el manejo de agentes biolgicos existen cuatro niveles de contencin o protocolos a seguir segn el nivel de riesgo de infeccin, y la funcin del laboratorio. Nivel 1. Es el nivel bsico en el cual los agentes biolgicos no causan enfermedades en los seres humanos, pero se deben tener precauciones en el manejo de estos agentes para evitar la contaminacin del medio ambiente. Este nivel hace referencia a los laboratorios para prcticas estudiantiles y deben seguir protocolos para el diseo, construccin de laboratorios y equipos. En este nivel es importante tener cuidado con las personas inmunodeprimidas debido a que microorganismos no causantes de enfermedades en personas sanas, pueden convertirse en patgenos al ser manipulados por personas inmunodeprimidas. Nivel 2. Este nivel hace referencia a agentes biolgicos de riesgo moderado que pueden causar enfermedades en las personas que los manipulan si no siguen los protocolos de seguridad. Generalmente aplica en laboratorios clnicos y diagnsticos, y algunos laboratorios de enseanza donde se manipulan sangre, fluidos corporales (lquido cefalorraqudeo, secrecin vaginal), tejidos o clulas humanas. La contaminacin puede ser ocasionada por cortes accidentales, por salpicaduras o ingestin del material contaminante, motivo por el cual ha de tenerse extremo cuidado con agujas o instrumentos contaminados. El uso de tapabocas, guantes, el cuidado en el manejo de objetos corto punzantes, entre otros, son medidas de prevencin tiles. Entre las posibles
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enfermedades ocasionadas en este nivel estn las causadas por virus como son. el sida, la hepatitis y la toxoplasmosis. Nivel 3. Es el nivel relacionado con estudios clnicos, diagnstico, de enseanza e investigacin donde se manipulan agentes biolgicos que no son autctonos y pueden transmitirse por va respiratoria originando enfermedades graves como es el caso de la tuberculosis causada, por la bacteria Mycobacterium tuberculosis. Este nivel exige un mayor y estricto grado de cumplimiento en las medidas de seguridad como colocacin de la seal de riesgo biolgico, acceso restringido al personal, instalaciones con ventilacin que eviten la liberacin de aerosoles infecciosos a otras zonas, tratamiento del aire mediante filtros. En este nivel se pone especial nfasis en evitar la autoinoculacin. Nivel 4. Es el nivel de mayor riesgo de contaminacin, para el que no existe ningn tratamiento clnico. Razn por la cual el diseo de la construccin y el equipo de seguridad debern estar en un lugar totalmente aislado, con sistemas de ventilacin y manejo de desechos que impidan la salida de los agentes contaminantes. Ejemplos de agentes contaminantes en este nivel seran Ebola y otros virus que producen fiebre hemorrgica. Transferencia
Cuando en un laboratorio de microbiologa, los estudiantes trabajan con microorganismos que generan patologas de gravedad moderada y que pertenecen a la propia flora habitual del hombre, como. En este caso tendramos que decir que el laboratorio debe tener un nivel de contencin: 1. Mycobacterium tuberculosis y Brucella 2. Nivel de contencin 3 3. Nivel de contencin 2 4. Estafilococos y Salmonella
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2.2.3. Leccin 19. Equipos y materiales utilizados en el laboratorio de microbiologa
El autoclave es un recipiente utilizado para esterilizar: medios de cultivo, agua destilada, tierra etc. mediante calor hmedo. El material a esterilizar se expone a temperaturas superiores a la de ebullicin del agua, gracias al aumento de la presin. El vapor de agua difunde por smosis a travs de las esporas coagulando su protoplasma Generalmente se esteriliza a temperaturas que van entre 107-126C por un tiempo de 520 minutos con presiones que varan entre 5 y 20 libras por pulgada cuadrada (p.s.i). Figura 36. Imagen y partes de una autoclave
Adaptado de:http://cgi.ebay.com/ws/eBayISAPI.dll?VISuperSize&item=200423583056
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Horno Pasteur o estufa Se utiliza para esterilizar material de vidrio, por ejemplo, cajas de Petri, matraces, tubos de ensayo, pipetas a travs de circulacin de aire caliente (calor seco) a temperaturas que varan entre 120 y 180C por un lapso de tiempo de 20 minutos a 8 horas Figura 37. Horno Pasteur
Tomado de: http://www.pasteur.fr/ip/portal/action/WebdriveActionEvent/oid/01s-00001u-01p Destilador de agua Permite la obtencin de agua destilada, es decir, agua a la que se le han eliminado iones e impurezas. Mediante el proceso de destilacin el agua es sometida al calor hasta su ebullicin para separar sus componentes lquidos, luego sus vapores son recogidos y condensados. Figura 38. Destilador de agua
Tomado de: http://www.biogen.es/biogenshop/catalog/images/Raypa/DES4.jpg
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Cmara de flujo laminar Es un receptculo con una nica cara libre (la frontal) que permite el acceso a su interior, donde se localiza la superficie de trabajo. Permite realizar, aislar, manipular cultivos en condiciones de esterilidad. La esterilidad de la zona de trabajo se consigue porque se hace circular a travs del interior de la cmara una corriente de aire que previamente ha sido microfiltrada o tratada con luz ultravioleta para eliminar todo agente contaminante. Figura 39. Siembra en Cmara de Flujo Laminar
Tomado de: http://ceal.ulagos.cl/areas/microbiologia/images/camara_flujo_laminar.jpg
Incubadora Permite obtener temperaturas de incubacin constante, en procesos como el cultivo de microorganismos y de tejidos, para determinaciones microbiolgicas. La limpieza y la desinfeccin, peridicas y sistemticas, son recomendables para reducir los riesgos derivados de la contaminacin accidental del personal del laboratorio.
Figura 40. Imgenes de equipos de incubacin
Tomado de: http://ceal.ulagos.cl/areas/microbiologia/images/mini_estufa_incubacion.jpg
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Neveras Es necesario un adecuado mantenimiento, limpieza y desinfeccin para reducir los riesgos asociados a su utilizacin. Sin embargo, an en estas condiciones, hay que tener en cuenta lo siguiente: No deben almacenarse cultivos de microorganismos patgenos por inhalacin, en recipientes que no estn convenientemente cerrados. No deben almacenarse reactivos que contengan comp uestos voltiles inflamables (ter etlico, por ejemplo) en neveras que no posean un sistema de proteccin antideflagracin. En los aparatos de tipo domstico que se utilizan en el laboratorio debe anularse la lmpara de la luz. Congeladores La congelacin es un proceso que mantiene la viabilidad de muchos agentes infecciosos, generando un riesgo potencial. Al respecto conviene seguir las siguientes recomendaciones: Identificar en ficheros, listas, etc. el contenido de lo almacenado y sus riesgos potenciales. El material potencialmente infeccioso debe colocarse en tubos, recipientes hermticamente cerrados. No deben llenarse completamente, para evitar que rebosen por efecto del aumento de volumen tras la congelacin. Es necesario descongelar peridicamente, limpiar y desinfectar si fuese procedente. Utilizar guantes para manipular el contenido. Centrfugas Cuando se centrifugue material biolgico potencialmente infeccioso deben utilizarse tubos con tapa rosca o de goma hermtica. Se debe esperar a que la centrfuga deje de girar nunca se debe detener manualmente. La tapa se debe abrir solamente cuando la centrfuga haya dejado de girar. Si accidentalmente se rompe un tubo y se genera aerosol se debe contener la respiracin y desalojar el laboratorio luego la persona responsable deber efectuar la desinfeccin inmediata de la centrfuga. Si el material es potencialmente infeccioso la centrifugacin deber hacerse bajo campana. Al terminar el trabajo limpiar con solucin descontaminante por dentro y por fuera del aparato
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Contador de colonias El contador de la colonias es un equipo que se utiliza en los laboratorios para investigar el contenido de microorganismos viables en una muestra ayuda ala cuantificacin del numero de microorganismos presentes en un alimento, bebida o agua para conocer la calidad microbiolgica de estos productos as mismo se utiliza en los laboratorios de anlisis clnicos para cuantificar las infecciones de vas urinarias.
Figura 41. Phmetro y contador de colonias
Tomado de: http://ceal.ulagos.cl/areas/microbiologia/images/mini_contador_colonias.jpg El microscopio9 Un microscopio es un instrumento que amplifica una imagen y permite la observacin de mayores detalles de los posibles a simple vista. El microscopio ms simple es una lente de aumento o un par de anteojos. El poder de resolucin del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos separados estos deben estar como mnimo a esa distancia. El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la informacin.La resolucin depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor de la muestra a observar, la calidad de la fijacin y la intensidad de la coloracin. Tericamente la mxima resolucin que se puede alcanzar es de 0,2 m, dada por una luz con longitud de onda de 540 nm, la cual pasa por un filtro verde (muy sensible por el ojo humano) y con objetos condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen producida por el objetivo, pero no puede aumentar la resolucin. Podemos clasificar los microscopios segn su descubrimiento:
Tomado de: http://www.mailxmail.com/curso-microscopio/conceptos
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- Microscopio simple o lupa: lente convergente situada entre el ojo y el objeto. - Microscopio compuesto: formado por 2 sistemas de lentes: oculares y objetivos. - Microscopio moderno: produce una imagen aumentada e invertida. Formado por tres sistemas de lentes. - Condensador: situado entre la fuente de luz y la muestra. Concentra el haz luminoso sobre la preparacin. - Objetivo: produce una imagen real y aumentada, situado entre el objeto y el revlver. - Ocular: formado por dos lentes convergentes, produce una imagen virtual y aumentada, situados entre el ojo y el revlver. Cuando se acerca un observador a un objeto, crece el ngulo visual y ese objeto parece ser mayor. Sin embargo, por debajo de una determinada distancia (unos 25 cm) entre el ojo y el objeto, ste no se ve con claridad. Este lmite se debe a la capacidad mxima de deformacin del cristalino. Si se sita entre le ojo y el objeto un sistema ptico capaz de aumentar el ngulo visual, se podr ver el objeto con mayor amplitud y claridad. Ese sistema ptico es el MICROSCOPIO. Produce una imagen aumentada de un objeto no visible de forma que sea perceptible por el ojo humano. Se consigue mediante el uso de lentes u otros sistemas. Esta ampliacin de la imagen se puede conseguir de dos formas: ondas luminosas: m. ptico haz de electrones (): m. Electrnico
Figura 42. El microscopio y sus partes
Tomado de: http://www.abcpedia.com/cienciaytecnologia/partes-microscopio.jpg
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Transferencia
El destilador de agua es un equipo donde el agua es sometida a dos de los siguientes procesos: 1. Se remueven contaminantes, slidos disueltos, cal, metales pesados y otras sustancias. 2. Es calentada hasta ebullicin 3. Es tratada con luz ultravioleta 4. Su utilizacin en procesos de limpieza garantiza esterilidad
2.2.4. Actividades de autoevaluacin del captulo 5
Actividades online, disponibles en: Partes del microscopio ptico Simulador de microscopa: Desarrollado por la Dra. Carmen Eugenia Pia para los estudiantes de biologa, donde puedes tener la experiencia interactiva de manejo del microscopio.
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2.3. CAPTULO 6: CULTIVO DE MICROORGANISMOS

Introduccin La diversidad microbiana implica la utilizacin de medios de cultivo apropiados para identificar y observar el ciclo de crecimiento y reproduccin de cada tipo de microorganismo. Adems se requiere una estandarizacin de los mtodos de siembra en cada medio de cultivo y de las tcnicas de recuento microbiolgico para lograr sistemas efectivos de manejo y control del crecimiento bacteriano.
Objetivos Describir los medios de cultivo slidos, lquidos y semislidos. Describir los mtodos de siembra apropiados para cada tipo de microorganismo en el respectivo medio de cultivo. Adquirir destreza en el recuento de microorganismos segn la tcnica seleccionada para el conteo.
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2.3.1. Leccin 20. Medios de cultivo
Tcnicas de cultivo microbiolgico10

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que los microorganismos crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial ste debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuada, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.
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Adaptado de http://www.qb.fcen.uba.ar/microinmuno/SeminarioMedios.htm Lic. Eric Caballero
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Figura 43. Cultivo de bacterias y aislamiento de colonias
Tomado de: http://www.telmeds.org/wpcontent/themes/medpress/scripts/timthumb.php?zc=1&w=300&h=150&src=http://www.telmeds.org/wpcontent/uploads/2009/03/metodoestrias2.jpg
Tipos bsicos de medios de cultivo por consistencia El tipo de medio de cultivo a utilizar depende del microorganismo de inters y de la necesidad de realizar ese cultivo. Los medios se pueden utilizar para el crecimiento de una especie o para diferenciar entre cepas o especies. Segn su consistencia o estado fsico pueden ser: Lquidos o caldos: se emplean fundamentalmente para cultivar los microorganismos y obtener grandes cantidades de los mismos o bien la produccin de metabolitos especficos, estimular y promover la seleccin de algn o algunos microorganismos e impedir que otros se multipliquen, identificar al microorganismo estudiado mediante pruebas bioqumicas. Semislidos Se utilizan para identificaciones bioqumicas y averiguar si el germen estudiado es mvil. Los medios semislidos tienen una consistencia blanda. Slidos o Agares Se utilizan para obtener colonias aisladas de microorganismos. A diferencia de los lquidos se les agrega Agar. El agar es un polisacrido acdico producido por ciertas algas rojas, es un elemento solidificante que se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. El agar Se usa a una concentracin del 1,5%. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l. La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuacin. Tipos de medios de cultivo por utilidad prctica: No selectivos o generales: permiten el cultivo y crecimiento de una amplia gama de microorganismos. Por ejemplo, Caldo nutritivo, Agar nutritivo, Agar Soya Tripticasa (TSA),
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Agar marino 2216 o Zobell. A menudo estn enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, Factor X, Factor V, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc.). Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) permiten el aislamiento y crecimiento del microorganismo o grupo de microorganismos de inters, para lo cual se manipulan factores ya sean de tipo nutricional o de tipo ambiental. Algunos medios son selectivos porque contienen un producto qumico, como la azida sdca, el telurito potsico o el cristal violeta, que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos pero no de otros. En el caso de factores nutricionales se aaden al medio sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de microorganismos, permitiendo a la vez el crecimiento de otros. Los antibiticos, el cloruro sdico en altas concentraciones, colorantes y algunas sustancias qumicas son ejemplos de agentes selectivos que se aaden a los medios para inhibir el crecimiento de otros microorganismos diferentes al de inters.El agar SPS (denominado de esta forma porque contiene sulfadiacina y sulfato de polimixina) se utiliza para identificar Clostridium botulinum, agente causal de una grave intoxicacin alimentaria. El medio SPS permite el crecimiento de esta bacteria, pero inhibe el de otras especies de Clostridium. Por ejemplo, los colorantes, que se aaden al Agar, inhiben selectivamente determinados microorganismos, es el caso del verde brillante (Agar verde brillante) utilizado para determinar la presencia de Salmonella en heces fecales ya que inhibe las bacterias Gram positivas, y la mayora de las bacterias intestinales. Para el caso de factores ambientales se manipula la temperatura, el grado de humedad, el pH, la concentracin de oxgeno o la intensidad de la luz. As el Agar glucosado de Sabouraud ajustado a pH 5,6, se usa para el aislamiento de hongos, que a ese pH crecen mejor que las bacterias. Son ejemplo de este tipo de medios: Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis, Sacarosa (TCBS) para cultivo de Vibrio y Agar Cetrimida para cultivo de Pseudomonas. Enriquecidos: suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K). Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen requerimientos de grupos especficos de microorganismos, ayudando a su identificacin (Lowenstein). En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos
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que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. Diferenciales: permiten distinguir unos microorganismos de otros por las caractersticas que presentan las colonias. Se elaboran con base en las caractersticas fisiolgicas especficas de los microorganismos, por ejemplo, nutricin, respiracin entre otras. Algunos medios diferenciales llevan incluido un indicador de pH, que pone de manifiesto la degradacin de un nutriente especfico (generalmente un azcar) por el cambio de color que se origina cuando ste es metabolizado, como en el caso del medio CLED. Los colorantes que se aaden a estos medios actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido. Un ejemplo es el Rojo Fenol es de color rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. A travs del cultivo en medio diferencial se puede distinguir las bacterias que fermentan la lactosa (con produccin de cido) de las no fermentadoras. Otros colorantes actan como inhibidores del crecimiento de unos microorganismos y no de otros, por ejemplo la Violeta de Genciana inhibe el crecimiento de la mayora de las bacterias Gram-positivas). Algunos medios pueden ser a la vez selectivos y diferenciales. El agar Mac Conkey es un ejemplo de medio selectivo y diferencial. La presencia de sales biliares y cristal violeta inhiben el crecimiento de bacterias no entricas (accin selectiva); la fermentacin de lactosa con liberacin de productos cidos hace virar un indicador de pH incorporado en el medio (accin diferencial). El agar sangre es un agar que contiene hemates y permite reconocer los microorganismos que producen hemlisis por ejemplo para aislar la bacteria que causa la escarlatina, se utiliza el medio de agar sangre. Las colonias de esta bacteria producen hemlisis, es decir, muerte y lisis de los hemates generando una zona transparente a su alrededor. El Agar eosina-azul de metileno (EAM) permite identificar el crecimiento de coliformes y E. coli. Este medio contiene peptona, lactosa y los colorantes eosina y azul de metileno. En dicho medio se inhibe el crecimiento de otras bacterias, pero no el de las coliformes (stas desarrollan colonias tpicas). E. coli muestra colonias grandes, oscuras, negro-azuladas, centro casi negro, con brillo metlico verdoso causado por la luz reflejada. La presencia de coliformes como Enterobacter se manifiesta en colonias grandes, de color rosado plido, mucosas, con centro oscuro y sin brillo metlico. Escherichia coli y las bacterias relacionadas con ella se identifican en medios con un indicador de pH porque originan productos metablicos cidos, que cambian el color del indicador y por tanto de sus colonias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (Oxidacin-Fermentacin).
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PREGUNTAS DE ANLISIS DE POSTULADOS Las preguntas que encontrar a continuacin constan de una afirmacin VERDADERA (tesis) y dos postulados tambin VERDADEROS, identificados con POSTULADO I y POSTULADO II. Usted debe analizar si los postulados se deducen lgicamente de la afirmacin y selecciona la respuesta en su hoja de cotejo, conforme a la siguiente instruccin: Marque A si de la tesis se deducen los postulados I y II. Marque B si de la tesis se deduce el postulado I. Marque C si de la tesis slo se deduce el postulado II. Marque D si ninguno de los postulados se deduce de la tesis.
TESIS: Sembrar es colocar una muestra de inoculo, en un medio de cultivo para obtener el crecimiento de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre cajas de petri, que contiene un gel (agar) al que se han aadido las sustancias que necesita los microorganismos para crecer. Esto se conoce como medio de cultivo. POSTULADO I: Pueden aadirse otro tipo de sustancias como por ejemplo, impedir el crecimiento de otras bacterias. POSTULADO II: La siembra puede hacerse en otros tipos de medio de cultivo como tubos, frascos etc.
2.3.2. Leccin 21. Condiciones generales para el cultivo de microorganismos
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio. Disponibilidad de nutrientes adecuados: Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbono ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona. Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos
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medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica. Consistencia adecuada del medio Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio. Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones. Condiciones adecuadas de humedad Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio. Luz ambiental La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos. pH La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales. Temperatura Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los termfilos a 80C o incluso
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a temperaturas superiores (hipertermfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saprfitos tienen rangos ms amplios. Esterilidad del medio Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante).
Para saber ms: Esterilizacin y preparacin de medios de cultivo
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Los medios de cultivo diferenciales permiten distinguir unos microorganismos de otros por las caractersticas que presentan las colonias. Se elaboran con base en las caractersticas fisiolgicas especficas de los microorganismos, por ejemplo, nutricin, respiracin entre otras. Algunos medios diferenciales llevan incluido un indicador de pH, que pone de manifiesto la degradacin de un nutriente especfico (generalmente un azcar) por el cambio de color que se origina cuando ste es metabolizado, como en el caso del medio CLED. Los colorantes que se aaden a estos medios actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido. En el medio de cultivo selectivo y diferencial MacKonkey se observa el crecimiento de bacterias con una coloracin violeta o rosada, lo que indica que hubo: A. Fermentacin de glucosa, lactosa y sacarosa B. Fermentacin de lactosa C. No fermentacin de glucosa, lactosa y sacarosa D. No fermentacin de lactosa
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2.3.3. Leccin 22. Siembra de microorganismos
Cmo se realiza el cultivo?
Sembrar es colocar una muestra de inculo, en un medio de cultivo para obtener el crecimiento de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de Petri, que contiene un gel (Agar) al que se han aadido las substancias que necesitan los microorganismos para crecer. A esto lo llamamos medio de cultivo. A veces se aaden otras clases de sustancias; por ejemplo, para impedir el crecimiento de otras bacterias que podran contaminar el cultivo. La siembra se puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos de vidrio con gel, frascos con lquidos nutritivos para los microorganismos. A continuacin se procede a la "incubacin" del medio ya sembrado. En cada caso se hace en condiciones particulares de presin de oxgeno, temperatura, agitacin, duracin, etc. Muchas de las bacterias patgenas crecen bien a temperaturas cercanas a los 37C habituales de nuestro organismo. Si el cultivo bacteriano tiene xito, crecern "colonias" de bacterias en el medio de cultivo. Estas colonias tienen caractersticas de color, forma, tamao etc. propias de cada bacteria y esto nos ayuda a identificarlas. Tambin se puede someter a las bacterias de las colonias a pruebas bioqumicas o de otro tipo para lograr su identificacin. Algunas bacterias son muy difciles de cultivar, otras tardan mucho tiempo en crecer y algunas, finalmente, no se han conseguido cultivar. Sistemas de Siembra: Antes de iniciar la siembra se deben cumplir determinadas condiciones: Esterilizacin de los instrumentos de trabajo y de los medios de cultivo. Los medios de cultivo se esterilizan con calor hmedo en la autoclave y los materiales de vidrio se esterilizan con calor seco en el horno Pasteur. En el caso de objetos metlicos, como el asa de siembra, que se esterilizan en el momento de su utilizacin, se mantienen en la llama hasta que se pongan al rojo, teniendo la precaucin de enfriarlos antes de su uso.
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Que el inculo no se contamine, modifique o destruya para lo cual se utiliza calor directo, flameando las bocas de los tubos de ensayo, matraces, la pipeta y dems elementos antes y despus de su utilizacin. Esterilizacin del rea de trabajo para evitar contaminaciones durante el manejo del instrumental y de los medios de cultivo. Se utilizan la cmara de flujo laminar. Si no se dispone de ella, se utiliza un mechero Bunsen que, debido a que fuerza la circulacin del aire en sentido vertical y hacia arriba, es capaz de crear un ambiente semisteril en la zona inmediata alrededor y debajo de la llama, de forma que los riesgos de contaminacin disminuyen considerablemente. Siembra de medio slido a medio lquido Marque correctamente los tubos con el nmero del grupo, sistema de siembra utilizado y la fecha. Para crear un ambiente de esterilidad encienda el mechero y trabaje siempre al lado de el. Esterilice un asa recta a la llama de un mechero y djela enfriar Tome el tubo que contiene la muestra a sembrar, retire la tapa del tubo, flamee la boca del tubo. Introduzca el asa en tubo sin tocar las paredes y tome un poco de colonia del cultivo, flamee nuevamente la boca del tubo, tapelo y dejelo en una gradilla. Tome el tubo de caldo nutritivo estril en el cual va a colocar la muestra, destapelo, flameando la boca el tubo con el mechero e introduzca el asa con la muestra obtenida. Realice movimientos de rotacin con el asa para emulsionar con el caldo las paredes del tubo. Retire el asa, flamee la boca del tubo y tape. Esterilice el asa en el mechero despus de usarla. Incube los tubos a 37C por 24 horas. Observar el crecimiento obtenido. Si no hay crecimiento el caldo queda transparente.
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Figura 44. Mtodo de aislamiento por siembra por estra en placa.
Tomado de: http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/fig/fig319.jpg
Mtodo de aislamiento por siembra por estra en placa. Para obtener un cultivo axnico: (a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero, (b) introducirla en la suspensin bacteriana para recoger una muestra, (c) sembrar haciendo estras sobre la superficie de un medio slido en una placa Petri, y (d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un segundo grupo de estras en una regin nueva de la placa. Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez, hasta conseguir que los grupos de clulas se diluyan y se separen clulas aisladas. (e) Despus de la incubacin, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia aislada y sembrar por estras una segunda placa. Siembra de medio lquido a slido. Se procede en la misma forma que en la siembra anterior pero con el asa de argolla. Si la siembra es en tubo recuerde hacer puncin y estra. Si es en caja de Petri puede utilizar diferentes sistemas como estra, agotamiento, rejilla con el fin de lograr un cultivo puro. Siembra de medio slido a slido. Se realiza de la misma forma que en la siembra anterior pero utilizando el asa recta. Los medios slidos contienen agar en proporcin de
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1.5 a 2.0% y se emplean para obtener colonias aisladas. Las placas de agar se pueden inocular mediante varios mtodos: como estras, agotamiento y rejilla con el fin de lograr un cultivo puro. Siembra en rejilla. Realice una estra que atraviese el centro del agar. Luego realice estras en ngulo recto con respecto a la estra inicial. Voltee el agar en ngulo de 90 grados y realice estra hasta cubrir todo el agar. Siembra por agotamiento. Tome una placa de agar, marque la base de la caja de petri con los nmeros 1, 2 y 3. Coloque la muestra a sembrar en el numero 1, realice estras hasta la mitad de la caja. Esterilice el asa y gire la caja hasta el numero 2, tome las dos ultimas estras y siga estriando hasta el numero 3. Gire la caja y termine de estriar, tenga cuidado de no tocar las estras ya hechas. Siembra por estras Figura 45. Imagen de siembra por estras
Tomado de: http://www.umce.cl/delgenalaproteina/modulos/modulo04/modulo04_clip_image006.jpg
Tcnica de siembra en medio de cultivo en placa de Petri (a= inicio de la siembra y d= trmino de la siembra) Siembra masiva. Tome un hisopo estril e introdzcalo en el tubo que contiene la muestra a sembrar, luego frote toda la superficie del agar. Le evaluacin del crecimiento en las placas de agar se hace a travs de la observacin de colonias en la superficie. Siembra en agar inclinado. Esta se realiza por puncin y por estra. Por puncin: Introduzca el inoculo con el asa recta hasta el fondo del medio con un solo movimiento y
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teniendo cuidado de hacer el mismo trayecto de entrada que de salida. Por estra: Extienda el inoculo sobre el agar inclinado deslizando suavemente el asa por la superficie en forma de zigzag. No olvide flamear la boca del tubo antes y despus de la siembra. Evalu la presencia de crecimiento en el agar por la formacin de una pelcula o por el crecimiento de colonias en la superficie. Siembra en profundidad. Marque la caja de petri estril con el nmero de grupo, la fecha y siembra en profundidad. Abra ligeramente la caja de Petri cerca del mechero. Abra un tubo con cultivo de bacterias y con ayuda de una pipeta de Pasteur plstica, transfiera 1 ml de ste cultivo a la base de la caja de petri estril. Descarte la pipeta en el frasco de boca ancha con clorox. Vierta un poco de agar nutritivo en la caja de Petri, tape la caja y luego realice movimientos suaves sobre el mesn, en el sentido de las agujas del reloj, luego al contrario, en forma de L y L invertida, y por ltimo en forma de 8. Esto garantiza una distribucin homognea de las bacterias en todo el agar para facilitar su posterior recuento. Envuelva las cajas de Petri y los tubos con cinta de enmascarar, mrquelos con el nmero de grupo, la fecha. Luego incube 37 c por 48 horas. Entregue al coordinador del laboratorio los cultivos bacterianos usados Tcnica del microcultivo Figura 46. Imagen de la tcnica del microcultivo de microorganismos
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Esta tcnica se utiliza en micologa para el estudio de estructuras de los hongos (conidias, ascas, hifas, conidioforos, entre otras) que son muy frgiles y se deterioran fcilmente, al ser obtenidas para su observacin a partir de un macrocultivo comn y corriente. La tcnica consiste en colocar en el interior de una caja de Petri estril unas varillas de vidrio estril y sobre ellas una lmina portaobjetos. Las varillas evitan que la lmina portaobjetos haga contacto con el fondo de la caja de Petri. Luego sobre el portaobjetos se coloca el medio de cultivo slido. Con un asa previamente flameada se siembra el hongo a analizar en el medio de cultivo, despus se cubre con la laminilla cubreobjetos, y se adiciona en el fondo de la caja de Petri agua destilada estril para mantener una atmsfera hmeda. Despus se procede a la incubacin a la temperatura requerida y por el tiempo necesario. Luego de incubado se retira con cuidado la laminilla cubreobjetos teniendo en cuenta que en ella se encuentra adherido el hongo. Se monta la laminilla con el hongo a estudiar sobre un portaobjeto y se procede a su observacin en fresco, o se prepara un frotis con una preparacin permanente. Transferencia
Sembrar es colocar una muestra de inoculo, en un medio de cultivo para obtener el crecimiento de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de Petri, que contiene un gel (Agar) al que se han aadido las substancias que necesitan los microorganismos para crecer. A veces se aaden otras clases de sustancias; por ejemplo, para impedir el crecimiento de otras bacterias que podran contaminar el cultivo. La siembra se puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos de vidrio con gel, frascos con lquidos nutritivos para los microorganismos. De lo anterior cul considera usted qu es el mejor instrumento para realizar una siembra de medio slido a lquido. A Asa de argolla B Pipeta C Asa recta D Esptula
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2.3.4. Leccin 23. Tcnicas de tincin11
La tincin es una tcnica que utiliza colorantes para aumentar el contraste entre los microorganismos y el medio que los rodea. Se utiliza para diferenciar los tipos de clulas, los constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, ncleo, mitocondria, etc. Generalmente se realiza la fijacin del microorganismo antes de su coloracin para evitar cambios estructurales en el protoplasma. La fijacin produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo que realmente son de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin. La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos son molculas cargadas positivamente y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativamente y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otros colorantes son sustancias liposolubles; este grupo se combina con los materiales lipdicos de la clula, usndose para revelar la localizacin de depsitos de grasa. Ejemplo el negro Sudn. Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el cido tnco. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que el colorante pueda actuar. Los mtodos de tincin deben usarse siempre con precaucin, ya que pueden conducir a errores. Las
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Adaptado de: http://www.danival.org/600%20microbio/6000notasmicro/tincion/_madre_tincion.html
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molculas de colorante forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras celulares autnticas, pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el mismo colorante. Tincin Simple Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tien con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactfenol).
Figura 47. Cryptococcus neoformans en tincin con tinta china.
Tomado de: http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones_archivos/image003.jpg
El Hidrxido de potasio al 10% (solucin de KOH) permite ver elementos de hongos ya que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la clula husped, pero no acta sobre los polisacridos de las paredes celulares de los hongos. La tinta china o Nigrosina permite observar clulas levaduriformes encapsuladas Cryptococcus, sobre todo en lquido cefalorraqudeo (LCR). Los polisacridos capsulares rechazan la tinta china y la cpsula aparece como un halo claro alrededor de los microorganismos. El azul de metileno es un buen colorante que acta rpidamente sobre todas las clulas bacterianas y no produce un color tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente til para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tie. El azul de metileno de Loeffler puede agregarse a las preparaciones en fresco de heces para observar la presencia de leucocitos. Mediante la tincin negativa las clulas se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los
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constituyentes celulares y que simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin de partculas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). Su mxima utilidad est en revelar la presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas Examen microscpico de las muestras muy modificadas: Tincin Diferencial Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en funcin de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitucin qumica. Los ejemplos clsicos seran la tincin de GRAM o la de Ziehl-Neelsen Tincin de GRAM Figura 48. Imgenes de diferentes tinciones de Gram
La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes. Se utiliza para diferenciar la morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos.). Esta tincin se denominada as por el bacterilogo dans Christian Gram, quien la desarroll en 1844. Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram-positivas y Gram-negativas (en este caso, los trminos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga elctrica, sino simplemente designan dos grupos morfolgicos distintos de bacterias). Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tien de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la clula Gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectandas de peptidoglicano as como algo de cido teicoico. Generalmente, 80%90% de la pared de la clula Gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la clula Gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho ms delgada, nicamente de peptidoglicano y est rodeada por una membrana exterior
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compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo 10% - 20% de la pared de la clula gram-negativa es peptidoglicano. Procedimiento para realizar la tincin de Gram Figura 49. Esquema del procedimiento de la tincin de Gram
Tomado de: http://pathmicro.med.sc.edu/fox/gram-st.jpg El frotis fijado con calor se tie durante 1 minuto con Cristal Violeta, se lava suavemente con agua para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las clulas, tanto las Gram-positivas como las Gram-negativas, estn teidas de azul o violeta oscuro. Luego se aplica durante 1 minuto una solucin de lugol (yodo-yoduro potsico). El ingrediente activo es aqu el I2; el yoduro potsico (KI) simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas Gram-positivas como las Gram-negativas se encuentran en la misma situacin. Se lava de nuevo con agua, se aplica una mezcla de alcohol etlico/acetona por partes iguales, el complejo I2-cristal violeta es soluble en esta mezcla motivo por el cual los microorganismos (Gram-positivos) no se decoloran, mientras que los (Gram-negativos) lo hacen. Se deja escurrir la mezcla y se cubre con Safranina (color de contraste) durante 20 seg. Los microorganismos Gram negativos toman la coloracin roja de la Safranina. Lavar y secar. La diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias Gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula (y tambin puede daar la
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membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas Gram-positivas, a causa de sus paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente ya que ste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo as el espacio entre las molculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Despus de la decoloracin las clulas Gram-positivas son todava azules, pero las Gram-negativas son incoloras. Diferencias en la composicin de la pared celular de Gram positivos y Gram negativos Figura 50. Pared celular de las bacterias Gram positivas y Gram negativas
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Otras tinciones de uso habitual Rodamina Auramina Figura 51. Mycobacterium tuberculosis
Tomado de: http://www.geocities.com/hmiguelito/diagn.htm
Los cidos miclicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen afinidad para los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo verdoso. El permanganato de potasio, empleado como contraste, evita la fluorescencia inespecfica. Todos los microorganismos cido-alcohol resistentes, incluyendo los esporozoarios parsitos, se tien con estos colorantes. Un aspecto importante de la coloracin rodamina-auramina es que luego los frotis pueden ser reteidos con la coloracin de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente sobre la tincin con el fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersin. De esta forma, los resultados positivos pueden ser confirmados con las coloraciones tradicionales, que adems.
ZIEHL-NEELSEN (BAAR) Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium marinum y los parsitos coccdeos como Cryptosporidiumse caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Se ha desarrollado una coloracin de cido-alcohol resistencia modificada que diferencia las especies de Nocardia (bacterias ramificadas filamentosas cuyas paredes celulares
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contienen cidos-grasos de unos 50 tomos de carbono), de los actinomices (muy semejantes pero no cido-alcohol resistentes). Nocardia spp son decoloradas por la mezcla cido-alcohol estndar pero no por un tratamiento ms suave con cido sulfrico 0,5 a 1%. Estos microorganismos se denominan cido-alcohol resistentes parciales o dbiles. El frotis se tie durante unos 5 minutos con Carbolfucsina aplicando calor suave. Lavar con agua. Decolorar con alcohol etlico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y teir durante 30-60 seg. con Azul de Metileno. Tincin de esporas (WIRTZ-CONKLIN) Figura 52. Clostridium perfringens
Tomado de: http://marvistavet.com/assets/images/Clostridium_perfringens.gif
Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.) formndose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporognesis, la clula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante aos. Algunas de las bacterias productoras de endosporas son patgenas para el hombre, por lo que su estudio y observacin son de enorme inters. Procedimiento: 1. Preparar los frotis bacterianos indicados. 2. Teir con verde malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la llama del mechero para que el colorante humee, pero sin que hierva, durante 5 min. Aadir ms colorante si la muestra se seca.
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Lavar con agua el resto de colorante. Teir con safranina 1 min. Lavar con agua el resto de colorante. Secar la preparacin. Observar la preparacin al microscopio.
Para saber ms: Tcnicas de tincin Procedimientos de tincin
Transferencia
TESIS: La tincin es una tcnica que utiliza colorantes para aumentar el contraste entre los microorganismos y el medio que los rodea. Se utiliza para diferenciar los tipos de clulas, los constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, ncleo, mitocondria, etc. POSTULADO I: Generalmente se realiza la fijacin del microorganismo antes de su coloracin para evitar cambios estructurales en el protoplasma. POSTULADO II: La fijacin produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo que realmente son de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin.
2.3.5. Leccin 24. Tcnicas de recuento bacteriano
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Tcnicas de Recuento Bacteriano Para el recuento de microorganismos presentes en una muestra de agua, suelo, aire, alimento, cultivos, entre otros, existen diferentes mtodos o tcnicas: Algunas tcnicas son directas y permiten un recuento de todas las clulas, tanto las vivas como las muertas. Las medidas directas incluyen los recuentos directos al microscopio o recuento electrnico, el recuento en placa, o el clculo del nmero ms probable (NMP). Otras son medidas indirectas y miden una propiedad de la masa de las clulas como son la turbidez, el peso seco, o una actividad metablica. Recuento de colonias o recuento estndar en placa se basa en contar las colonias de microorganismos que se desarrollan despus de inocular en un medio de cultivo adecuado e incubar a una temperatura y tiempo determinados un volumen determinado de muestra. Se utiliza para determinar el nmero de clulas aisladas o microorganismos unicelulares viables como bacterias, levaduras, tambin se utiliza para el conteo de esporas fngicas presentes en la muestra. La muestra a inocular debe ser homognea y no contener conglomerados de clulas. Despus de la incubacin cada microorganismo o clula viable formar una masa visible de organismos, o sea una colonia. De esta manera el nmero de colonias permitir a su vez determinar el nmero de organismos viables en la muestra sembrada. Se pueden utilizar sistemas de siembra en superficie, o en profundidad. Generalmente la muestra original se diluye para que el nmero de colonias desarrolladas en la placa se encuentren entre 30 y 300 colonias y as permitir un ptimo crecimiento y facilitar la lectura. Cuando la muestra se diluye el clculo del resultado se realiza contando las colonias en aquellas placas que tengan entre 30 y 300, se promedia y se multiplica por el factor de dilucin. Los resultados se expresan en colonias por ml. Los resultados tambin pueden expresarse en unidades formadoras de colonias (UFC), el valor de UFC es un valor que expresa el nmero relativo de microorganismos de un taxn determinado en un volumen de un metro cbico de muestra. En el caso de alimentos el resultado se considera como un indicador de las caractersticas higinicas generales del alimento. Un recuento en placa es una medida directa y proporciona un recuento de viables. En primer lugar, la muestra se diluye seriadamente, transfiriendo 1 ml de la muestra a 9 ml de medio estril y se mezclan adecuadamente. Este proceso se repite basta obtener una dilucin apropiada en este ejemplo, 1:100000 (10-5). Posteriormente se aade 0,1 ml a una placa de agar nutritivo, bien extendindolo en la superficie de la misma (mtodo de extensin en placa) o mezclndolo con el medio (mtodo de vertido en placa). Las placas
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se incuban y se recuentan las colonias que se desarrollan. Debido a razones estadsticas, las placas deben contener entre 30 y 300 colonias. En este ejemplo, la placa tiene 225 colonias. Figura 53. Recuento en placa dilucin de la muestra
Tomado de: http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/ documen/uni_02/58/texthtml/cap804.htm
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Equipo para conteo de colonias Figura 54. Contador de colonias
Imagen del Contador de Colonias del laboratorio de la Unad Para el recuento de colonias se emplean equipos que consiste en una pantalla iluminada la cual posee una gran lente de aumento; pueden ser: contadores de colonias en los cuales la caja de Petri se ajusta en una plataforma y se ilumina por debajo y al mismo tiempo la lente aumenta 1.5 veces el tamao del objeto. Tambin existe un contador electrnico de colonias en el cual la caja de Petri se ubica en una platina iluminada, luego se presiona la varilla de cuenta y el nmero exacto de colonias se proyecta instantneamente en una pantalla digital Conteo celular directo Recuento celular microscpico directo: Se basa en colocar un volumen determinado de clulas sin fijar y realizar el conteo utilizando microscopa de fase. Para ello se utiliza la cmara de recuento de Petroff-Hauser o de Neubauer consistente en un portaobjetos con una excavacin de 0.02 mm de profundidad en un rea de 1 milmetro cuadrado, con una rejilla dividida en 25 cuadrados grandes los cuales a su vez se subdividen en 16 cuadrados de 4X4 o sea que la muestra se distribuye en 400 celdillas.
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Figura 55. Esquema de los elementos necesarios para el recuento de colonias
Tomado de: www.bact.wisc.edu/Microtextbook/index. php?module=Book&func=displayarticle&art_id=108
La muestra, se coloca en la excavacin del portaobjeto y se cubre con el cubreobjetos se deja reposar sobre la platina del microscopio durante unos minutos, y se procede a contar el nmero de clulas en varias celdillas (generalmente en 16, equivalentes a uno de los cuadros grandes). Se anota el nmero n de clulas observadas en esas 16 celdillas. El recuento celular se calcula: n x 25 x 50 x 1000 = concentracin en clulas/ml. Es un mtodo muy rpido y sencillo pero no permite distinguir clulas vivas inmviles de clulas muertas. Se utiliza en suspensiones concentradas Recuento de clulas bacterianas utilizando sistemas electrnicos del tipo Coulter Counter. El mtodo consiste en colocar en una cmara del contador un volumen determinado del cultivo (suspensin bacteriana) luego se hace pasar a travs un tubo capilar entre dos polos de una corriente elctrica a otra cmara. El poro un pequeo orificio de unos 15 m de dimetro forma parte de un circuito elctrico, de manera que cada vez que pasa una clula a travs del mismo, la conductividad del circuito disminuye y la presencia de la clula es detectada electrnicamente en el contador. Turbidez Se basa en la medida de la turbidez de los medios de cultivo en los que crecen microorganismos unicelulares. La turbidez es proporcional a la masa de las clulas en suspensin y su medida nos permite estimarla. Para ello se utiliza un espectrofotmetro que mide la cantidad de luz que transmite una solucin o un cultivo lquido de clulas microbianas. A mayor masa de clulas en un cultivo, mayor ser su turbidez, y menor la cantidad de luz que se transmitir de manera que la lectura en el espectrofotmetro ser mayor. Se utiliza en cultivos densos. Permite medir el crecimiento de poblaciones. Para medir la masa o el nmero de clulas con un espectrofotmetro, se debe preparar una curva patrn, o grfica en la que se relacionan las medidas del espectrofotmetro con la
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masa celular o el nmero de clulas en un cultivo de un determinado y se expresa en unidades de absorbancia. Transferencia
El conocimiento de la cintica de crecimiento de los microorganismos es de sumo inters en el campo industrial, ya que permite conocer la manera de reproduccin de las bacterias, permitiendo desarrollar mtodos de catalizacin e inhibicin de stos y de prevencin en caso de que el crecimiento sea en una forma desproporcionada y peligrosa PORQUE este conocimiento ayuda en diferentes campos, como por ejemplo, el alimenticio, en el cual el conocimiento de la cintica de crecimiento microbiano es un parmetro que indica la forma en que se deben colocar los preservantes en un producto determinado.
2.3.6. Actividades de autoevaluacin del captulo 6 Clculo del nmero ms probable (NMP), aplicado a microbiologa del agua.
Batera de pruebas microorganismos
API20E:
Pruebas
bioqumicas
para
deteccin
de
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Bibliografa de la Unidad 2
BURROWS, W. (1987). Microbiologa Mdica (5a. Edicin ed.). Editorial Panamericana. MARTNEZ, M. M. (1999). Microbiologa (Segunda Edicin ed.). Bogot, Colombia: Unad. OROZCO, A. Microbiologa Sanitaria (2a. Edicin ed.). Mxico: Editorial Interamericana. PELCZAR, M. J., REID, R. D., & CHAN, E. (1977). Microbiologa (Segunda Edicin ed.). Mexico: McGraw-Hill Book Co. ROSS, F. (1986). Introductory Microbiology (1986 ed.). Estados Unidos de Amrica: Scott Foresman and Company. STAINER, R., ADELBERG, E., & INGRAHAM, J. (1984). Microbiologa, versin espaola actualizada (Cuarta ed.). Espaa: Revert S.A. UNIVERSIDAD DE SALAMANCA. (s.f.). Captulo 8: El crecimiento de los microorganismos. Recuperado el 3 de mayo de 2010, de Unisal: http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/58/text html/cap801.htm VELAZCO FERNANDEZ, D. (Diciembre de 2002). Introduccin a la microbiologa clnica Tcnicas de tincin. Recuperado el 3 de Junio de 2010, de Danival: http://www.danival.org/600%20microbio/6000notasmicro/tincion/_madre_tincion.htm
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Resumen de la unidad 2
El intervalo de tiempo que transcurre para la formacin de dos clulas a partir de la clula madre se llama tiempo de generacin o tiempo generacional y vara en dependencia de las condiciones genticas de las bacterias y de los factores nutricionales. El incremento en el nmero de las clulas en una poblacin se denomina como crecimiento exponencial o logartmico. Consta de 3 fases: log o de crecimiento exponencial, estacionaria y de muerte o de declive logartmico. Los aspectos fsicos que influyen de manera determinante en el crecimiento microbiano son: la temperatura, el pH y la presin osmtica. Los qumicos son: el agua, las fuentes de carbono y de nitrgeno, los minerales, el oxgeno y los factores orgnicos del propio microorganismo. Los microorganismos obtienen su carbono a partir de compuestos orgnicos (microorganismos quimihetertrofos), o del bixido de Carbono (caso de los quimioauttrofos y fotoauttrofos). En el laboratorio de Microbiologa todas las reas deben estar debidamente marcadas con la seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin. Se define esterilidad a la condicin de ausencia de cualquier microorganismo. Los mtodos de esterilizacin ms usados en el laboratorio son calor seco, calor hmedo, flameado, utilizacin de soluciones qumicas. La desinfeccin se refiere a la reduccin de los organismos patgenos (organismos que ocasionan enfermedades). Los desinfectantes de acuerdo a su composicin qumica se clasifican en: Fenoles, Hipocloritos (cloro), Yodoformos (yodo Povidona), Amonio Cuaternario, Formaldehdos, Perxidos. Los desinfectantes pueden ser de bajo nivel, de nivel intermedio o de alto nivel. Para que los microorganismos crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial ste debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
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3. UNIDAD 3: ECOLOGA MICROBIANA Y MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

Unidad 3: Ecologa microbina y Microbiologa industrial Palabras claves: Ecosistemas, ciclos biogeoqumicos, alteraciones, contaminacin, etas, sistema inmune, vacunas, epidemiologa. Horas de trabajo acadmico: El contenido de esta unidad corresponde a un crdito acadmico, que equivale a 12 horas de acompaamiento tutorial y 36 horas de trabajo independiente Introduccin La Microbiologa Industrial estudia todos aquellos aspectos de los microorganismos que tienen una aplicacin industrial, tanto en la transformacin de productos empleados en la alimentacin como en la produccin de sustancias tales como antibiticos, vitaminas, enzimas, as como en la obtencin de masa microbiana (protena unicelular, vacunas, fertilizantes microbianos, biopesticidas). Fruto del conocimiento de las capacidades que poseen los microorganismos ha sido, y sigue siendo, su inmediato aprovechamiento para estos fines y, as, a los mtodos tradicionales de produccin de sustancias por fermentacin se han unido recientemente las tcnicas de manipulacin gentica de los mismos que han permitido obtener, de forma masiva, nuevos productos de inters prctico que los microorganismos normalmente no sintetizan tales como insulina, hormona de crecimiento humana e interfern.
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Mapa conceptual
Objetivos Definir la importancia de los microorganismos en los ecosistemas aire, agua y suelo. Conocer acerca de los microorganismos de inters industrial Familiarizarse con microorganismos las aplicaciones en las diferentes industrias de los
Competencias Analiza las aplicaciones de importancia industrial, la produccin, el deterioro de alimentos, los sistemas de control microbiano y los principios de inmunologa. Explica el uso de bacterias, hongos y levaduras, en la produccin de alimentos. Analiza el rol de microorganismos patgenos segn los usos del agua y se contemplan las normas de calidad microbiolgica del agua.
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En las aplicaciones a la agricultura y la zootecnia, se explican los microorganismos del suelo, los simbiontes en la relacin suelo-planta bioinsecticidas y bioferilizantes. En el rea biotecnolgica se analiza el uso de microorganismos para transmisin de informacin gentica, la fabricacin de vacunas e interferones. En el aspecto relacionado con el deterioro de alimentos, se analizan fuentes y causas del deterioro, enfermedades de transmisin alimentaria y otras temticas.
Metas El estudiante estar en capacidad de presentar y sustentar las principales informaciones relacionadas con la microbiologa industrial, en especial en las industrias ambientales, de alimentos y farmacetica. El estudiante presentar y sustentar un informe de anlisis de las indagaciones realizadas como resultado del estudio orientado a la gestin sostenible de la industria relacionada con aplicaciones microbiolgicas, con orientacin comprensiva sobre protocolos de anlisis experimental o manejos aplicados a problemas del entorno gestionables con el conocimiento de las caractersticas de microorganismos especficos.
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3.1. CAPTULO 7: MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA
Introduccin Los microorganismos se encuentran por doquier en la naturaleza: en el aire, agua y suelos y juegan un sinnmeros de papeles vitales en la vida del hombre y los animales. Afectan los procesos industriales. La naturaleza del microorganismo particular y el proceso industrial determinan si la relacin es beneficiosa o perjudicial. Los microorganismos son fundamentales para la conservacin de la vida en la tierra, son los principales productores de oxgeno por la fotosntesis de los microorganismos marinos, esencialmente algas, la microbiota que hace parte de ms de la mitad del componente del suelo o los microorganismos que hacen parte de la atmsfera y que son indispensables para la vida. La ecologa microbiana es un campo cientfico que se ha desarrollado durante la segunda mitad del siglo XX. Como disciplina cientfica con entidad propia, surgi de la integracin de subdisciplinas como la microbiologa del suelo, la microbiologa acutica, la microbiologa molecular, la microbiologa de los alimentos, etc. La ecologa microbiana trata fenmenos y procesos naturales, interacciones entre microorganismos, con otras especies y con el medio. El conocimiento que proporciona contribuye al avance de la ciencia, a la vez que ofrece vas para responder y hallar soluciones a muchos de los problemas ms acuciantes a los que se enfrentan las sociedades humanas modernas.
Objetivos Definir la importancia de los microorganismos en la naturaleza, en sus ecosistemas, como el caso del agua y el suelo. Conocer las acciones benficas y perjudiciales que cumplen los microorganismos en estos ecosistemas.
Definiciones (Universidad de Navarra, 208) Ecologa microbiana: examen de las interacciones dinmicas de los microorganismos con su ambiente, tanto con el vivo (bitico) como con el abitico.Las interacciones son dinmicas porque cambian con el tiempo mientras las diferentes poblaciones se van adaptando al ambiente (en sentido amplio) para lograr un equilibrio en el conjunto.
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Ecosistema: unidad ecolgica bsica, funcionalmente autosuficiente, autorregulable y estructurada, en la que cada poblacin ocupa un nicho ecolgico. Nicho: papel que desempea una comunidad de organismos (poblacin) en un ecosistema. Hbitat: lugar ocupado por un ecosistema Biosfera: porcin de la tierra ocupada por los seres vivos. En ella se integran todos los ecosistemas en los que los microorganismos desempean funciones diversas. Ciclo biogeoqumico: movimientos de materiales a travs de reacciones qumicas en toda la biosfera. Supone un cambio de materiales entre las partes biticas y abiticas de la biosfera. Los microorganismos, a travs de sus actividades metablicas, desempean un papel importante en el intercambio de materiales entre los diversos apartados de la biosfera. Los principales elementos integrantes de la materia viva son los ms intensamente ciclados por los microorganismos: el carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno, fsforo y azufre. La actividad humana que origina una liberacin de elementos alterando los equilibrios de las etapas de los ciclos biogeoqumicos pueden tener gran importancia en el desarrollo de las poblaciones microbianas, de plantas y de animales y en la productividad de los ecosistemas particulares.
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3.1.1. Leccin 25: Poblaciones en los ecosistemas
En el suelo o edosfera, existen un nmero inespecfico de comunidades de microorganismos (Snchez-Yez), que viven en estrecho contacto que se relacionan de manera diversa, en evidente contraste con lo que se observa en medio de cultivo artificial del laboratorio de microbiologa. Los miembros de la microbiota dependen unos de otros para utilizar compuestos inorgnicos y/o orgnicos en su supervivencia, y si el ambiente lo permite, el posterior crecimiento, al mismo tiempo durante la bsqueda de alimento base de su supervivencia, existen los que ejercen influencia negativa sobre otros, en especial cuando la biota autctona, en contacto con la algena o invasora ingresa al suelo cambia continuamente con las prcticas agrcolas culturales: como el enriquecimiento con estircol animal, aplicacin intensiva y extensiva de fertilizantes, pesticidas para controlar malezas, insectos, hongos y bacterias fitopatgenas. Ecologa de las interacciones microbianas en el suelo12 En el suelo existen relaciones entre comunidades o especies: en el neutralismo los microorganismos son independientes; en simbiosis los asociados dependen uno del otro para un beneficio comn; en la protocooperacin los microorganismos establecen un beneficio mutuo pero sin dependencia vital, ello sucede durante la mineralizacin de la materia orgnica vegetal; en el degradacin selectiva uno de los microorganismos se beneficia, pero el otro no es afectado, ni favorecido de ninguna forma; en la competencia uno de los dos es inhibido eliminado o suprimido, durante la lucha por los nutrientes y espacio, el nivel de concentracin de stos en el suelo son factores limitantes de la actividad microbiana; en el amensalismo uno de los asociados se inhibe por la sntesis de un antibitico o toxina, el responsable no sufre efecto negativo; en el parasitismo uno asociado depende de manera parcial o total para su reproduccin del
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Adaptado de: microbianas.shtml
http://www.monografias.com/trabajos35/interacciones-microbianas/interacciones-
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otro; en la predacin cual asociacin sea orgnica en el suelo, biota que estimule el produccin vegetal.
uno asociado es el alimento y el otro lo consume. Independiente de dominante influye en los procesos de degradacin de materia en la proliferacin de fitopatogenos, en el establecimiento de una desarrollo radical y en consecuencia influya favorablemente en la
Los factores qumicos y fsicos afectan las interacciones microbianas, para que haya un equilibrio entre los asociados, an en las negativas, en trminos de la produccin de un cultivo agrcola especfico, el resultado puede ser: plantas enfermas con prdidas econmicas o sanas con ganancia para el agricultor. Relaciones benficas o positivas En el suelo, la rizsfera, el rizoplano, el tallo y las hojas es posible observar interacciones positivas cuando se colonizan por los microorganismos del tipo: simbiosis y protocooperacin. La protocoperacin es una asociacin benfica que involucra a dos especies, una que degrada un compuesto orgnico no aprovechable por la segundo, la actividad de degradacin de la primera que genera productos asimilables para la segunda; sta es comn en el suelo despus de la adicin de abonos verdes o animales. La protocooperacin nutricional es comn en medio de cultivo artificial, sin cido nicotnico y biotina, donde ni Proteus vulgaris, Paenibacillus se multiplican, se reportan interacciones nutritivas entre bacterias y hongos para vitaminas, aminocidos y purinas, la protocooperacin influye positivamente en el rendimiento de un cultivo agrcola pues existen microorganismos que producen fitohormonas para estimular el sano crecimiento de las plantas. La existencia en el suelo de races vegetales que contiene especies bacterianas con necesidades nutricionales, limitados por la concentracin de los carbonados e inorgnicos. Estos microorganismos son fundamentales en el desarrollo radical sano, liberados por una microbiota que crece al mineralizar residuos vegetales, cuando se incorporan abonos verdes y animales. Las interacciones microbianas positivas dependientes de factores de crecimiento son clave en races vegetales para la nutricin mineral de plantas sanas. En las asociaciones simbiticas del tipo Rhizobium-leguminosa o races-hongos en las micorrizas son fundamentales en la produccin sustentable basada en una racionalizacin de fertilizante nitrogenado y fosforado que mantenga un rendimiento rentable sin contaminar acuferos ni aumentar elcosto de produccin.
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Las bacterias que se asocian positivamente con protozoarios, se benefician al recibir nutrientes y proteccin, para los ciliados las bacterias son esenciales en su multiplicacin, a su vez stos favorecen la degradacin de abonos orgnicos y animales en pro de un suelo frtil, necesario para una adecuada produccin agrcola. El beneficio mutuo de leguminosas y rizobios es por el nitrgeno proporcionado a las plantas va bacteria al fijar N2, mientras el carbono transferido a Rhizobium por su hospedero mediante la fotosntesis del CO2, las micorrizas, asociacin hongo-raz, el hongo recibe nutrientes esenciales para multiplicarse con las races del hospedero, cuando en el suelo existe una deficiencia de fosfatos solubles suficientes para que la planta aumente su tasa de absorcin de fsforo, nitrgeno y otros minerales, esta relacin es crtica para la produccin vegetal en suelo alcalino. Otro ejemplo son los insectos que maceran hojas, flores y otros residuos vegetales e inoculan un hongo para degradar losdeshechos de plantas, hecho que favorece el composteo de abonos para la recuperacin de suelos nutricionalmente pobres y de mnima productividad agrcola. Asociaciones ecolgicas neutras El suelo, la rizsfera de plantas y sus hojas constituyen un ambiente para la microbiota: bacterias, actinomicetos, hongos, levaduras, protozoarios y nematodos. La interaccin neutra o soprofismo se observa en la degradacin de los residuos vegetales que consiste en que los microorganismos que viven en alguna parte de la planta mineralicen las sustancias de desecho para que a su vez la planta absorba los nutrientes inorgnicos. En general las bacterias heterotrficas al igual que los hongos y protozoarios son fundamentales para que los componentes vegetales: celulosa, hemicelulosas, pectina, almidn y otras sustancias de fcil mineralizacin, en consecuencia liberen el CO2 y cidos orgnicos que solubilizan minerales como los fosfatos, contribuyen a la salud de la planta. Este proceso de mineralizacin es clave para que en el suelo existan los minerales disponibles, que los vegetales requieren para un desarrollo sano y un rendimiento rentable. Generalmente la actividad de la microbiota heterotrfica se considera un factor limitante de la fertilidad de un suelo, la liberacin de los nutrientes inorgnicos que se reciclan para que el suelo mantenga su productividad, en especial cuando se restringe o regula la aplicacin de fertilizantes qumicos con base en los tipos de nitrgeno inorgnico e orgnico, en los fosfatos y otros microelementos. Bajo estas circunstancias los saprobios ayudan a la mineralizacin de la materia orgnica en el suelo a favor de las plantas. El comensalismo es equivalente al inquilinismo cuando los asociados viven fsicamente en el mismo sitio, sin dao o de beneficio, como los gneros bacterianos: Pseudomanas spp, Bacillus, Arthrobacter, los actinomicetos del
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tipo Streptomyces, Micronomospora, al igual que hongos: Penicillium, Aspergillus, Cheatomium y otros que reciclan la materia orgnica a minerales que las plantas necesitan para crecer y que a la vez conservan la fertilidad del suelo. As, la interaccin ser positiva, en este caso la simbiosis Rhizobium-leguminosa, como las micorrizas apoya una produccin agrcola, al regular la dosis de los fertilizantes qumicos en beneficio de la fertilidad del suelo. Interacciones negativas Los microorganismos inoculados en suelos estriles se multiplican rpido, sin embargo, como en el caso de Rhizobium ello provoca su eliminacin en semanas, o menos tiempo, en consecuencia la leguminosa no responde a la inoculacin sin lograr el rendimiento esperado, as es necesario seleccionar un Rhizobium nativo y especfico para la leguminosa, en el suelo elegido, para un pronstico favorable en trminos de rendimiento, ahorro de fertilizante y productividad rentable. Las interacciones negativas como la que enfrenta Rhizobium se resumen en trminos de: competencia, amensalismo, parasitismo y predacin, con base a: a) la competencia por nutrientes limitantes de crecimiento como el nitrgeno; b) liberacin de txicos en contra del asociado como los antibiticos que matan Rhizobium, c) el canibalismo de un microorganismo sobre otro,como Bdellovibrio ataca y consume las clulas de Rhizobium d) por la actividad microbiana quimiolitotrofica de liberacin de cidos ntrico y sulfrico que matan bacterias sensibles al pH cido como Rhizobium; f) por bacterias que causan la lisis de Rhizobium como sucede con los bacterifagos o rhizobiofagos, aunque existe para lizar cualquier otro gnero de bacterias benficas de plantas. Amensalismo Cuando una suspensin de suelo se siembra en agar nutritivo, bacterias, actinomicetos y hongos generan una o ms colonias, que producen una zona clara sin crecimiento, o halo de inhibicin, evidencia de que esa colonia produce un antibitico, que evita el desarrollo de otros en baja concentracin.
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Figura 56. Rhizobium, streptomyces griseus
Los habitantes del suelo que liberan antibiticos son: actinomicetos, bacterias y hongos; el primer grupo es el ms activo, como ejemplo la sntesis de: estreptomicina, cloramfenicol, cicloheximida y clorotetraciclina, esta capacidad de liberar estos antimicrobianos escomn en los gneros:Streptomyces, Nocardia y Micromonospora, y en las especies de Bacillus yde Pseudomonas que liberan piocianina; en los hongos, Penicillium,Trichoderma, Aspergillus, Fusarium.Tambin producen antibiticos efectivos para inhibir otros hongos, bacterias y actinomicetos. Una alta proporcin de microorganismos heterotroficos del suelo generan antibiticos en medio de cultivo artificial, la mayora de esas antimicrobianos. Los sintetizan saprobios del suelo, este fenmeno natural supone que estos productos tienen beneficio para las clulas que lo hacen como ventaja de competencia natural como sucede con Rhizobium en leguminosas. Aunque no existe evidencia de que esa capacidad favorece su supervivencia. La capacidad de una especie microbiana para colonizar un sitio microscpico depende de la supresin de sus vecinos mediante la sntesis de antibiticos como se reporta sucede con Rhizobium, Azotobacter, Azospirillum y Burkholderia ; adems existen en el suelo la fungistasis, que inhibe, pero no mata hongos, pero si sus conidias, hifas, esclerotes y ascosporas, el grado de inhibicin de los hongos vara segn el tipo de suelo, el nmero, la identidad de los compuestos es desconocido. Los principios fungistticos son microbianas, fitopatgneos, molculas termolbiles. El suelo contiene factores perjudiciales para algunos grupos microbianos sean o no patgenos para plantas y/o animales, as extractos del suelo poseen sustancias que evitan la multiplicacin bacteriana, evidencia sugiere que se generan en las races de plantas, en suelo con alto contenido en materia orgnica, etc., como la paja enterrada que colonizada conCephalosporium gramineum que le causa una enfermedad del trigo de invierno contiene un antibitico que sintetiza en medio de cultivo.
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Hongos en simbiosis micorrcica con plantas sintetizan un inhibidor en medio de cultivo; lo que explica la conocida proteccin de la micorriza contra la infeccin radicular de hongos fitopatgenos. Se reporta que sustancias que se sintetizan en el suelo controlan la actividad de mineralizacin de poblaciones microbianas heterotrficas nativas, ese es el caso del CO2, el NH3, el nitrito, el etileno, y compuestos de azufre; en el campo el amoniaco es un inhibidor de Nitrobacter, el NH3 proviene de la descomposicin de residuos vegetales ricos en nitrgeno, lo que suprime hongos, en la fase gaseosa eleva el pH, el nitrito que se acumula fungicida, as como el NH3 anhidro, los fertilizantes a base de amonio. Parasitismo y predacin La predacin es una de la interrelacin microbiana comn en el suelo, la rizsfera, el rizoplano y las hojas de las plantas y que se usa en el controlbiolgico de plagas y enfermedades agrcolas, de los habitantes del suelo, las bacterias son susceptibles al ataque de predadores; como los protozoario que afectan negativamente sus poblaciones al consumir millones, lo cual se observa cuando se inoculan bacterias promotoras de crecimiento vegetal como: Azospirillum, Derxia, Burkholderia, Azotobacter. Los protozoarios limitan la densidad de ese tipo de poblaciones bacterianas, reduce su abundancia lo que causa que se inhiba su efecto positivo sobre el cultivo vegetal. Al evitar el establecimiento de ciertas bacterias en el suelo, falla la inoculacin de Rhizobium en leguminosas, y la optimizacin de la fertilizacin nitrogenada, que asegure un rendimiento rentable, sin la sobreexplotacin del suelo, por eso es necesaria una seleccin de Rhizobium para superar el problema de la predacin de los protozoarios al inocular las leguminosas. Los hongos mucilaginosos consumen ese tipo de bacterias, las mixobacterias son el mayor depredador de cmo Azospirillum, aunque algunas comoBurkholderia son resistentes a la predacin. Las mixobacterias no slo se alimentan de bacterias, tambin de algas, hongos y levaduras; existen grupos microbianos que tienen parsitos que viven sobre o dentro de sus clulas, como los bacterifagos, distribuidos en el suelo y la rizsfera de plantas. Mientras Bdellovibrio ataca otros gneros bacterianos, su necesidad de grandes densidades de bacterias para su multiplicacin, que Bdellovibrio afecta la actividadde las bacterias benficas de racescomo: Rhizobium, Azotobacter, Burkholderia. Mientras los hongos microbianos son susceptibles al parasitismo; sus hifas, conidias, clamidosporas, osporas, zoosporas, esclerotes y otras estructurasde latencia son atacados; hongos de parsitos: Gliocladium, Penicillium, Rhizoctonia y Trichoderma.
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El impacto de la contaminacin ambiental sobre las interacciones microbianas Actualmente esta ampliamente documentado el impacto negativo del hombre sobre los procesos naturales de descomposicin de materia orgnica y de su inmovilizacin para que los ciclos biogeoqumicos faciliten la productividad agrcola. Desde el inicio de la agricultura esta actividad fue considerada contaminante por sus efectos sobre la estructura del suelo, con la introduccin del monocultivo vegetal, al igual que el uso intensivo y extensivo de fertilizantes qumicos y pesticidas para el control de plagas y enfermedades, y por elempleo de maquinaria agrcola con sus insumos, que tuvieron y tienen un drstico impacto sobre las diversas interacciones microbianas, que influyen directa y drsticamente sobre los procesos de descomposicin de materia orgnica que aumenta o reduce la productividad de un suelo al cambiar las concentraciones de los macroelementos limitantes de su crecimiento, adems de la aplicacin de pesticidas de amplio espectro, que reducen la densidad y diversidad de las poblaciones microbianas, que favorecen la dominancia de los que causan problemas de sanidad vegetal, al eliminar las poblaciones nativas antagonistas de los fitopatgenos, as como de aquellas benficas. En consecuencia suelos originalmente productivos se transforman en pobres y contaminados por su perdida de diversidad biolgica y de minerales que faciliten la produccin agrcola. La agricultura sustentable es un intento por retornar a practicas culturales que causen el mnimo impacto negativo sobre las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas de los suelos, para una produccin agrcola basada en la conservacin del suelo, que evite su sobreexplotacin: mediante la labranza cero, optimizacin en el uso y manejo del agua, por la restriccin estricta en la aplicacin de fertilizantes qumicos, con una tendencia a su disminucin o sustitucin con abonos verdes, animales o composta. Estas estrategias favorecen la conservacin del suelo y el mantenimiento de la diversidad biolgica en la que las interacciones microbianas en equilibrio, aseguren la dinmica de los ciclos y que la contaminacin ambiental de cualquier tipo sea mnima. Si el manejo de la produccin agrcola no da un drstico giro el problema futuro de alimentar a la humanidad ser crtico, pues el suelo y agua manejados como hasta hoy, estn en riesgo de desaparecer, es por ello que la poltica para el campo y ley intentan que la produccin vegetal se modifique hacia un esquema de conservacinrecursos naturales.
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Transferencia
TESIS: Los hongos son los principales agentes de descomposicin de la materia orgnica en todos los ambientes cidos. Los hongos poseen una red de filamentos o hifas en el suelo y su micelio puede subdividirse en clulas individuales por medio de paredes transversales o septos. Los micelios fungosos se pueden observar fcilmente en los humus tipo mor y moder. POSTULADO I: Los hongos participan en la formacin del humus y contribuyen al reciclaje de nutrientes y a la estabilidad de agregados mediante la degradacin de residuos vegetales y animales. POSTULADO II: Una de las principales actividades de los hongos es la descomposicin de la celulosa, hemicelulosa, pectinas, almidn, grasas y compuestos de lignina .
3.1.2. Leccin 26: Actividades biogeoqumicas de los microorganismos
Intervencin de los biogeoqumicos13
microorganismos
en
las
transformaciones
ciclos
Las bacterias y los hongos son los microorganismos que, junto a los productores, permiten la existencia del ciclo de la materia en la biosfera. Su funcin es descomponer la
13
Adaptado de: http://web.educastur.princast.es/proyectos/biogeo_ov/2bch/B5_MICRO_INM/T51_MICROBIOLOGIA/informa cion.htm
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materia orgnica procedente de restos vegetales, cadveres y excrementos, convirtindola en materia inorgnica que vuelve a ser utilizada por los productores. La actividad de los descomponedores en la biosfera permite que la materia se recicle y no se disperse en las sucesivas transferencias, como ocurre con la energa. Muchos de los elementos qumicos que componen los materiales terrestres estn sometidos a unos circuitos cclicos que consisten, bsicamente, en que pasan de formar parte de materia inorgnica inerte a formar parte de materia constitutiva de seres vivos y de stos, posteriormente, de nuevo a materia inorgnica inerte, cerrndose el ciclo. Estos ciclos de la materia son los ciclos biogeoqumicos. Como ejemplos de ciclos biogeoqumicos, y el papel que desempean microorganismos en ellos, estudiaremos el ciclo del carbono y el ciclo del nitrgeno:
Figura 57. Ciclos biogeoqumicos
los
http://web.educastur.princast.es/proyectos/biogeo_ov/2bch/B5_MICRO_INM/T51_MICROBIOLOGIA/diaposi tivas/Diapositiva76.JPG
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EL CICLO DEL CARBONO Mediante el proceso de fotosntesis, las plantas toman el carbono en forma de CO 2 de la atmsfera o del agua, asimilndolo durante la fase oscura de dicho proceso para formar molculas orgnicas. Parte del carbono vuelve al medio inerte en la misma forma de CO2 como resultado de la respiracin tanto de las propias plantas como de los organismos consumidores y descomponedores. Los desechos, restos o cadveres que contienen carbono vuelven tambin al medio inorgnico por accin de los descomponedores (bacterias y hongos). Una parte muy importante del carbono, puede tardar millones de aos en incorporarse al medio inerte. Es el caso del carbono que llega a formar parte del petrleo y del carbn mineral. Este carbono puede volver al ciclo por combustin de estos combustibles fsiles. Figura 58. Ciclo del carbono
Tomado de: http://www.lenntech.com/espanol/ciclo-nitrogeno.htm
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Movilizacin e inmovilizacin microbiana del carbono La actividad microbiana puede hacer el carbono inaccesible a los consumidores mediante transformaciones que lleven a la formacin de humus (restos de material vegetal difcilmente metabolizable) o a la produccin de metano. As mismo, la conversin de formas de carbono no digestibles (celulosa, materia fecal) en biomasa utilizable es resultado de la actividad microbiana.
EL CICLO DEL NITRGENO
La fuente principal de nitrgeno es la atmsfera, de la que este gas constituye un 78%; sin embargo, este nitrgeno atmosfrico slo puede ser fijado por un grupo de bacterias fijadoras del nitrgeno que transforman este gas en compuestos nitrogenados utilizados directamente por las plantas. Entre el grupo de bacterias fijadoras del nitrgeno est el gnero Rhizobium que se encuentra en simbiosis con las races de las plantas leguminosas (guisantes, judas, trboles, alfalfa, etc.), estas bacterias se introducen en los tejidos del vegetal, donde proliferan y desarrollan una especie de ndulos fijadores del nitrgeno.
Figura 59. Ciclo del nitrgeno
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http://www.lenntech.com/espanol/ciclo-nitrogeno.htm El resto de las plantas depende del nitrgeno que se encuentra en el suelo, de donde lo toman en forma de nitratos. Cuando cualquier organismo muere, el nitrgeno de los restos orgnicos, como son las protenas y los cidos nucleicos, por accin de bacterias y hongos presentes en el suelo, se convierte en amoniaco o in amonio (amonificacin). Otros grupos de bacterias del suelo oxidan los iones amonio a nitritos y finalmente las bacterias nitrificantes oxidan los nitritos a nitratos. Los nitratos son ya fcilmente absorbidos por las races de las plantas y utilizados para formar molculas propias, que contienen nitrgeno (protenas y cidos nucleicos). Mediante las cadenas trficas posteriores, el nitrgeno asimilado en estas molculas del vegetal pasa a los animales. Existe un grupo de bacterias desnitrificantes que en condiciones anaerobias y de inundacin convierten los nitratos del suelo en nitrgeno molecular que escapa a la atmsfera. Por eso los agricultores drenan las tierras para reducir la desnitrificacin y aaden fertilizantes para incrementar los niveles de nitrato del suelo.
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Ciclo del azufre14 El ciclo comprende varios tipos de reacciones redox desarrolladas por microorganismos: Figura 60. Esquema del ciclo del azufre
Tomado de: http://platea.pntic.mec.es/~cmarti3/CTMA/BIOSFERA/ciclos.htm 1.- Ciertos tipos de bacterias son capaces de extraer el azufre de compuestos orgnicos (proceso de desulfuracin) que rinde SO4= en condiciones aerobias y H2S en condiciones anaerobias. 2.- Bacterias anaerobias respiradoras de SO4= que producen la acumulacin de H2S hasta alcanzar concentraciones txicas. 3.- Bacterias fotosintticas anaerobias pueden usar el H2S como donador de electrones en sus procesos metablicos dando lugar a depsitos de azufre elemental (S).
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http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/50-ciclos%20biogeoquimicos.htm
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4.- Bacterias quimiolitotrofas que utilizan el H2S como fuente de energa para la produccin de ATP. En muchos casos se producen asociaciones entre bacterias formadoras y consumidores de H2S en un sistema balanceado. En todos los caos, el S es la forma no asimilable y slo puede entrar en el ciclo por la accin de algunas bacterias que son capaces de oxidarlo a SO4=. Drenaje cido de las minas En minas de carbn en muchas ocasiones hay una contaminacin con pirita (Fe 2S) que se oxida rpidamente en contacto con el aire y por accin microbiana. La oxidacin de estos sulfuros puede dar lugar a la produccin de grandes cantidades de SO 4H2 que acidifica el suelo impidiendo todo crecimiento posterior de plantas o de bacterias no acidfilas extremas. Este cido puede alcanzar el agua de los ros al escurrir de las pilas de carbn que estn sufriendo el proceso. Otros ciclos Fsforo Este ciclo no est sometido a procesos redox porque la forma esencial del fsforo (tanto orgnico como inorgnico) es el fosfato. La actividad microbiana reside en la capacidad de produccin de otros cidos orgnicos que aumenten o disminuyan la solubilidad de los fosfatos en el ecosistema hacindolos ms o menos accesibles a otros organismos. El fosfato suele ser limitante del crecimiento. Una entrada masiva de fosfatos en el sistema (como ocurre debido al empleo masivo de detergentes fosfatados) aumenta la productividad del ecosistema con lo que la materia orgnica aumenta considerablemente. Cuando esta materia orgnica comienza a descomponerse, se incrementan los procesos de respiracin y, por consiguiente, el consumo de oxgeno, lo que genera un incremento de anaerobiosis conocido como proceso de eutrofizacin. Hierro El ciclo de este elemento est asociado a la conversin entre sus formas Fe 2+ ms solubles que las Fe3+. Los microorganismos que oxidan hierro (quimiolitotrofos) producen cambios en la accesibilizacin del elemento a otros miembros del ecosistema. Calcio El ciclo biogeoqumico del calcio consiste en variaciones de su solubilidad debido a la formacin de compuestos carbonatados ms (Ca(CO3H)2) o menos (CaCO3) como
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consecuencia de la liberacin por microorganismos de cidos orgnicos que desplacen el equilibrio entre ambas formas. Metales pesados Los microorganismos pueden cambiar el estado de oxidacin o de modificacin (metilacin, por ejemplo) de metales pesados de manera que aumenten o disminuyan su toxicidad o su adsorcin a las membranas y estructuras biolgicas, lo que influye en su acumulacin a lo largo de la cadena trfica. Transferencia
Escoje la secuencia que corresponde al ciclo del nitrgeno: 1. Por accin de las bacterias Nitrosomonas el amoniaco (NH3) se oxida a nitritos (NO2) 2. Las bacterias Nitrobacter a su vez transforman los nitritos en nitratos donde el nitrgeno vuelve a quedar disponible para las plantas 3. Los residuos vegetales, componen la materia orgnica, que por accin microbiolgica se transforman en amonaco 4. El nitrgeno atmosfrico es fijado mediante las bacterias simbiticas en los ndulos radiculares de las leguminosas, para que lo puedan absorber las plantas A. 1432 B. 3214 C. 2431 D. 4312
3.1.3. Leccin 27: Microbiologa del suelo
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Figura 61. Organismos del suelo
http://www.sagan-gea.org/hojaredsuelo/paginas/microor'.gif
La actividad de los microorganismos es muy importante para la transformacin y la vida de los suelos. Las bacterias y los hongos participan en los ciclos del carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y en la incorporacin del potasio y el magnesio, entre otros, para su asimilacin por los vegetales. Los procesos biolgicos ms importantes que se desarrollan en el suelo son: humificacin (descomposicin de la materia orgnica por hongos, bacterias, actinomicetos, lombrices y termitas), transformaciones del nitrgeno (amonificacin, nitrificacin, fijacin) y mezcladesplazamiento (lombrices y termitas principalmente). La fuente principal del nitrgeno utilizado por las plantas es el nitrgeno del aire (78 % de la atmsfera terrestre), sin embargo, en esa estructura no es utilizable por las plantas superiores. Los caminos principales por los que el nitrgeno es transformado a formas (estructuras) utilizables por las plantas superiores son los siguientes: 1. Fijacin por Rhizobium y otros microorganismos que viven simbiticamente en las races de las leguminosas (alfalfa, trbol, guisantes, soya, cacahuates y habas) y otras determinadas plantas no leguminosas.
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2. Fijacin por microorganismos que viven libremente en el suelo (numerosas especies de algas azul-verdosas y ciertas bacterias como: las Rhodospirillum que son fotosintticas, Clostridium, que es una saprofita anaerobia y las saprofitas aerobias: Acetobacter y Beijerinckia) y quiz por organismos que viven en las hojas de las plantas tropicales. Las algas azul-verdes soportan un amplio rango de condiciones ambientales, incluyendo superficies rocosas y extensos terrenos ridos. Son completamente auttrofas y requieren slo luz, agua, nitrgeno libre (N2), dixido de carbono (CO2) y sales que contengan los elementos minerales esenciales. Su importancia reside principalmente en que suministran nitrgeno asimilable a otros organismos durante los primeros estadios de la formacin del suelo. Figura 62. Algas verdeazules
http://www.sagan-gea.org/hojaredsuelo/paginas/spirulina2.jpg
Las bacterias que viven libremente requieren de residuos orgnicos como fuente de energa, parte de la energa de la oxidacin de la materia orgnica la utilizan para fijar el nitrgeno elemental. La rizosfera de las races de las plantas (rea del terreno adyacente a las races) es una zona de alto contenido en residuos orgnicos de la planta, donde tiene lugar la fijacin del nitrgeno por las Azotobacter y las Clostridium. 3. Fijacin como amonaco, NO31+ , CN2 2- , por alguno de los varios procesos industriales para la fabricacin de fertilizantes nitrogenados sintticos. 4. Fijacin, como alguno de los xidos de nitrgeno, por las descargas elctricas atmosfricas. El nitrgeno en la atmsfera est en forma de amonaco, NH3, nitratos, NO31-, nitritos, NO21-, xido nitroso y compuestos orgnicos, las cuales son arrastradas por la lluvia.
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Las bacterias y los hongos habitan principalmente en los suelos bien aireados, pero solamente las bacterias realizan la mayor parte de los cambios biolgicos y qumicos en los ambientes anaerobios. Las bacterias son muy pequeas, son raras las que llegan a medir varias micras de longitud. Se les clasifica en aerobias a las que viven slo en presencia de oxgeno; anaerobias las que viven slo en ausencia del oxgeno y anaerobias facultativas aquellos organismos que pueden desarrollarse en presencia o en ausencia de oxgeno. Figura 63. Micelio (esporangios) de hongo
http://www.sagan-gea.org/hojaredsuelo/paginas/asper.jpg La mayor parte de los organismos del suelo utilizan a los compuestos orgnicos complejos como fuente de energa y carbono a los que se clasifica como hetertrofos. Hay un pequeo grupo de microorganismos que usan al bixido de carbono como nica fuente de carbono y se les clasifica como auttrofas. Existen bacterias fotoauttrofas que aprovechan la energa del sol y las bacterias quimioauttrofas aprovechan la energa de la oxidacin de materia orgnica y son de gran importancia para los suelos.
Cianobacterias Las bacterias que utilizan a los compuestos nitrogenados como fuente de energa incluyen a las bacterias que oxidan el amonio y lo transforman en nitritos (Nitrosomonas y Nitrosococcus) y las bacterias que oxidan a los nitritos transformndolos en nitratos (Nitrobacter). Las reacciones qumicas producidas por estos microorganismos se representan con las ecuaciones siguientes:
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2 NH41+ + 3 O2 --------> 2 NO21- + 4 H+ + 2 H2O (Nitrosomonas) 2 NO21+ + O2 --------> 2 NO31- (Nitrobacter) El azufre existe en forma de sulfuro en varios minerales primarios y se agrega a los suelos forestales en forma de residuos vegetales, animales o como lluvia cida. Con frecuencia se agrega azufre elemental a los suelos de almcigos para aumentar la acidez, a fin de controlar determinados agentes patgenos de las plantas. La mayor parte del azufre del suelo forma compuestos orgnicos y slo es absorbido por las races de las plantas en forma de sulfato por lo que es necesario el proceso de mineralizacin. La descomposicin de la materia orgnica y su transformacin a compuestos inorgnicos de azufre la realizan microorganismos hetertrofos y la oxidacin de los sulfuros y del azufre elemental para transformarse en sulfatos la pueden realizar tanto las bacterias hetertrofas como las quimioauttrofas. Las bacterias del gnero Thiobacillus son los principales habitantes de los suelos bien aireados. El gnero aerobio acidfilo T. thiooxidans es el que predomina en los suelos forestales y realiza la reaccin de oxidacin del azufre segn la ecuacin: 2 S + 3 O2 + 2 H2O -----> 2 H2SO4 (T. oxidans ) La acidificacin del suelo producida por el cido sulfrico resultante de la oxidacin del azufre elemental produce un aumento de la solubilidad del fsforo, del potasio, del calcio y de varios micronutrientes, as como, la movilizacin de algunos minerales del suelo que son disueltos por el cido sulfrico. La oxidacin de compuestos inorgnicos de azufre pueden realizarla bacterias hetertrofas, actinomicetos y hongos en ciertas condiciones. El quimioauttrofo Thiobacillus nitrificans puede realizar la oxidacin en forma anaerobia y utilizar el nitrato como aceptor del electrn y transformar los nitratos en nitrgeno gaseoso al mismo tiempo que oxida los compuestos de azufre. Sin embargo, bajo ciertas condiciones anaerbicas como en suelos saturados por agua, los compuestos inorgnicos del azufre son reducidos a sulfuros en lugar de oxidarlos a sulfatos. La oxidacin del fierro la realiza la bacteria quimioauttrofa Thiobacillus ferrooxidans. La reduccin del fierro frrico la realizan las bacterias aerobias y anaerobias facultativas como Bacillus, Clostridium y Pseudomonas. Bacilos Los hongos son los principales agentes de descomposicin de la materia orgnica en todos los ambientes cidos. Los hongos poseen una red de filamentos o hifas en el suelo y su micelio puede subdividirse en clulas individuales por medio de paredes
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transversales o septos. Los micelios fungosos se pueden observar fcilmente en los humus tipo mor y moder. Una de las principales actividades de los hongos es la descomposicin de la celulosa, hemicelulosa, pectinas, almidn, grasas y compuestos de lignina. Los hongos participan en la formacin del humus y contribuyen al reciclaje de nutrientes y a la estabilidad de agregados mediante la degradacin de residuos vegetales y animales. Las algas, generalmente, tienen clorofila que les permite utilizar la luz solar como fuente de energa para fijar el bixido de carbono (fotosntesis), se encuentran en los suelos frtiles, ricos en bases con nitrgeno y fsforo disponibles, y tienden son escasas en suelos arenosos estriles y cidos. Contribuyen a solubilizar a los minerales del suelo , acelerando as el proceso de intemperizacin del suelo. Generan materia orgnica a partir de compuestos inorgnicos y aumentan el contenido de humus en el suelo. Las variedades de algas azulverdoso pueden asimilar el nitrgeno atmosfrico, aumentando as la cantidad de nitrgeno en los suelos. Las algas azulverdoso son principalmente activas en suelos hmedos o inundados y en suelos superficiales cuya alcalinidad ha aumentado como consecuencia de la quema de bosques. Como no dependen de la materia orgnica como fuente de energa, son los primeros colonizadores de las regiones ridas o arenosas y facilitan la invasin posterior de las plantas superiores. Transferencia
TESIS: Los hongos son los principales agentes de descomposicin de la materia orgnica en todos los ambientes cidos. Los hongos poseen una red de filamentos o hifas en el suelo y su micelio puede subdividirse en clulas individuales por medio de paredes transversales o septos. Los micelios fungosos se pueden observar fcilmente en los humus tipo mor y moder. POSTULADO I: Los hongos participan en la formacin del humus y contribuyen al reciclaje de nutrientes y a la estabilidad de agregados mediante la degradacin de residuos vegetales y animales. POSTULADO II: Una de las principales actividades de los hongos es la descomposicin de la celulosa, hemicelulosa, pectinas, almidn, grasas y compuestos de lignina.
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3.1.4. Leccin 28: Microbiologa del agua
Microorganismo y calidad del agua: Cianobacterias El agua es un sistema vivo y dinmico en cuya superficie se encuentran una serie de microorganismos no patgenos que por el contrario permiten el desarrollo de los ciclos biolgicos y qumicos y el mantenimiento del equilibrio biolgico. La presencia de los microorganismos en concentraciones y condiciones normales en las fuentes de agua es beneficiosa; pero cuando se incrementa su concentracin se altera la calidad del agua dificultando el tratamiento de esta y su uso. Los microorganismos que en forma normal se encuentran en aguas superficiales son los siguientes: Cianobacterias: pueden causar efectos txicos si su biomasa se incrementa por el efecto llamado floracin, producido por un aumento de nutrientes como N y P aportados por el vertido de aguas residuales, de aguas provenientes de reas fertilizadas o de ganaderas. Durante la floracin se producen cianotoxinas que afectan al sistema nervioso y digestivo adems de provocar efectos nocivos sobre mucosas y piel.La cianobacteria Oscillatoria causa problemas de corrosin en los tubos de acero. Sin embargo otras cianobacterias como la Spirulina son utilizadas en el biotratamiento de aguas residuales con el fin de lograr la biorremocin o biabsorcin de metales pesados como el Bario, Cadmio. Microalgas fotosintticas o productores primarios: Cuando se incrementan los nutrientes se produce un aumento anormal de algas con la consecuente eutrofizacin de la fuente de agua. El exceso de algas verdes (Chlorophytas) causa alteraciones en el color del agua tornndose verde y con olor y sabor desagradables. Por ejemplo el incremento de Scenedesmus origina un olor a pescado. Microalgas diatomeas, Son unicelulares o coloniales, de plastos marrones o amarillos. Las clulas se encuentran impregnadas en slice formando valvas que suelen situarse a
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modo de caja, y que pueden presentar una ornamentacin caracterstica de cada especie, el aumento de su concentracin pueden causar obstruccin de los filtros. Bacterias Pseudomona aeruginosa se utiliza como indicador de la calidad del agua, su presencia en aguas potables se constituye en un riesgo para la salud del hombre y los animales ya que pueden ocasionar enfermedades a personas cuyos mecanismos de defensa esten disminudos. Bacillus como Serratia marcescens una bacteria de las denominadas oportunistas porque normalmente no es patgena, pero pueden causar enfermedades en personas con ciertas deficiencias orgnicas que facilitan la infeccin Coliformes como Escherichia coli , Streptococcus faecalis, Clostridium perfringens son habitantes normales del tracto digestivo de animales y del hombre y se los considera como indicadores de la calidad del agua Clostridium spp indicadores de contaminacin de alto riesgo del agua, son anaerobios sulfito-reductores, su representante ms caracterstico es Clostridium perfringens su presencia en las aguas naturales produce malos olores y, con mucha frecuencia, ennegrecimiento del producto cuando ste tiene hierro, formando un precipitado oscuro de sulfuro de hierro (Merck, 2000). Los Clostridium adems de las aguas superficiales pueden provenir de fuentes ambientales como suelo, sedimentos marinos, vegetacin en descomposicin, heridas infectadas de hombre y animales, alimentos. La mayor parte de bacterias que se encuentran en el agua son beneficiosas permitiendo transformaciones orgnicas y la autodepuracin de los cuerpos de agua. Sin embargo existe otro grupo de bacterias que son patgenas y pueden causar enfermedades graves en el hombre y en los animales. Protozoos: La mayora son beneficiosos, pues contribuyen a preservar el equilibrio de los ecosistemas acuticos al formar parte del zooplancton; sin embargo su incremento disminuye el oxgeno disuelto, altera el pH y el olor del agua. Otros protozoarios presentes en el agua son parsitos y pueden causar enfermedades en el hombre y en los animales como es el caso de la Ameba, de la Giardia lamblia y Cryptosporidium Contaminacin del Agua por microorganismos y transmisin de enfermedades El agua se puede contaminar por fenmenos naturales y por la accin del hombre principalmente sobre las fuentes de agua superficiales. Una de las principales causas de contaminacin del agua por microorganismos es el vertimiento de aguas residuales sin ningn tratamiento o mal tratadas, por desechos industriales, por aguas provenientes de plantas de procesamiento de carnes, por aguas de desecho de ganadera, por heces de humanos y de animales. Entre los microorganismos presentes en el agua contaminada y causantes de enfermedades se pueden citar los siguientes:
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Bacterias: Escherichia coli, Salmonella typhi, Shigella, Vibrio cholerae, Yersinia enterocolitica, Campylobacter jejuni. Virus: Enterovirus, rotavirus, El rotavirus es un virus ARN, tiene como husped o reservorio al hombre, primales, caballo, cerdo, perro, gato, conejo, ratn, vaca, pjaros, etc. y ocasiona gastroenteritis viral en el hombre. El adenovirus es un virus ADN, se transmite mediante el contacto directo, por transmisin fecal-oral, y ocasionalmente mediante transmisin por agua, causa enfermedad respiratoria; sin embargo, tambin pueden causar otras enfermedades como gastroenteritis, conjuntivitis, cistitis, y sarpullidos, dependiendo del serotipo de adenovirus que cause la infeccin. Protozoos: Giardia, Cryptosporidium, Entamoeba histolytica, Balantidium coli.
A continuacin se sealan las enfermedades ms frecuentes trasmitidas por microorganismos patgenos del agua.
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Tabla 5. Principales enfermedades causadas por microorganismos del agua sus sintomas y la fuente de contaminacin
Transferencia
Las Cianobacteriaspueden causar efectos txicos si su biomasa se incrementa por un aumento de nutrientes como N y P aportados por el vertido de aguas residuales, de aguas provenientes de reas fertilizadas o de ganaderas conocido como floracin PORQUE durante este proceso se producen cianotoxinas que afectan al sistema nervioso y digestivo adems de provocar efectos nocivos sobre mucosas y piel
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3.1.5. Ejercicios de repaso del captulo 7

Ejercicios de entrenamiento de anlisis de aguas con respuesta para verificar los logros en la interpretacin de resultados
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3.2. CAPTULO. 8: MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS

Introduccin Los microorganismos desarrollan dos acciones bsicas en los alimentos: En unos casos se aprovechan sus cualidades de induccin a la fermentacin, para obtener transformaciones resultantes en alimentos de caractersticas especficas deseadas para el mercado, por ejemplo, el kumis, la cerveza, el vino, el pan, el queso, el vinagre. En otros casos la accin de los microorganismos es antagnica a la anterior ya que pueden producir descomposicin de los alimentos convirtindolos en fuentes de toxicidad o infeccin Objetivos Identificar los grupos bacterianos importantes en la produccin de alimentos. Reconocer las diferencias bsicas entre los diferentes grupos de bacterias. Comprender los procesos llevados a cabo por las bacterias tanto en la produccin como en la contaminacin de alimentos. Distinguir los mecanismos utilizados por las bacterias en los diferentes procesos Identificar las alteraciones que se producen en los alimentos por los diversos tipos de accin microbiana. Describir las enfermedades generadas por la contaminacin microbiana de los alimentos. Analizar procesos microbiolgicos aplicados a la produccin de alimentos.
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3.2.1. Leccin 29. Las bacterias y su importancia en la produccin de alimentos
Algunos gneros bacterianos importantes en alimentos Las bacterias se han utilizado desde los tiempos histricos ms remotos para producir alimentos15. Los procesos bacterianos pueden darle a los alimentos ms resistencia al deterioro o caractersticas organolpticas ms agradables (sabor, textura, etc.). Existe un amplio rango de bacterias involucradas en la produccin, conservacin y alteracin de productos alimenticios. Bacterias lcticas o productoras de cido lctico Su caracterstica ms importante es la capacidad de fermentar los azcares para dar cido lctico. Debido a la rpida produccin de cido son capaces de eliminar a muchos microorganismos competitivos. La mayora de las bacterias pertenecientes a este grupo crecen en el rango de los termfilos. En este grupo se incluyen: Lactobacillus bacilos Gram positivos, forman cadenas en la mayora de las especies, no esporulados y generalmente no mviles. Son microaerfilos, aunque existen algunos anaerbios estrictos; son catalasa negativos y fermentadores. Son benficas en la elaboracin de quesos y fermentacin de vegetales. Pero pueden producir gases que perjudican los quesos y vinos.
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Adaptado de: (PELCZAR, REID, & CHAN, 1977)
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Figura 64. Esquema de Las Bacterias y su importancia en la produccin de alimentos
Mapa elaborado por la Dra. Carmen Eugenia Pia Streptococcus cocos Gram positivos, dispuestos caractersticamente en pares o cadenas. Las especies importantes en alimentos se dividen en: pigenos y estreptococos. Los pigenos comprenden especies patgenas, entre las que se encuentran S. agalactiae, que ocasiona mastitis en las vacas, y S. pyogenes, muy patgeno en humanos, el cual causa la faringitis sptica, escarlatina y otras enfermedades. Se puede encontrar en la leche cruda. Los pigenos crecen en rangos de temperaturas caractersticos de animales de sangre caliente (37C). Los pertenecientes al grupo de
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los otrosestreptococos crecen exclusivamente a 45C. Incluyen el S. thermophilus, importante en la elaboracin de quesos y en ciertas leches fermentadas como el yoghurt. Enterococcus Cocos Gram positivos, no esporulados, hemolticos. Crecen tanto a 10C como a 45 C. Resisten las temperaturas de pasterizacin de la leche e incluso mayores.; toleran un porcentaje de sal del 6.5% o superior; crecen a un pH alcalino de 9,6 unidades. En este grupo se encuentran E. faecalis, resistente al calor, proveniente de los humanos y E. faecium. Lactococcus Cocos Gram positivos, no esporulados. Crecen a 10. Se emplean como fermentadores para la produccin del queso y la mantequilla de varios tipos. Comprenden bacterias importantes en la leche, como L. lactis y L. cremoris. Leuconostoc Son cocos Gram positivos, organizados en pares o cadenas. Son importantes en los alimentos por: producir diacetilo y otras sustancias aromticas; tolerar las concentraciones salinas de ciertas salmueras, como las de la fermentacin de encurtidos hortcolas.; algunas especies toleran altas concentraciones de azcares (5560%), lo que les permite crecer en jarabes, caramelo lquido, crema de helados, etc.; producir cantidades considerables de dixido de carbono a partir de los azcares, ocasionado la aparicin de ojos en ciertos quesos, alteraciones en alimentos con alto contenido de azcar y la fermentacin de algunas clases de pan; producir muclago en medios que contienen sacarosa, proceso ptimo en la produccin de dextrano, pero representa un riesgo en alimentos ricos en dicho disacrido, como en la produccin de azcar a partir de caa o remolacha. Pediococcus Son cocos aislados, en parejas, en cadenas cortas o en ttradas: Gram positivos, catalasa positiva y microaerfilos. Se han encontrado en las salmueras de los encurtidos en fase fermentativa, siendo los responsables de ciertas alteraciones en las bebidas alcohlicas. Bacterias acticas o productoras de cido actico La mayor parte de las bacterias acticas pertenecen a uno de los dos gneros, Acetobacter y Gluconobacter. Acetobacter Son formas bacilares, Gram negativas, aerbicas estrictas y mviles. Oxidan el alcohol etlico a cido actico y se encuentran en masa fermentada de granos de cereales, frutas, hortalizas y bebidas alcohlicas y constituyen un problema en estas ltimas, ya que causa una alteracin de las mismas. Algunas especies comoA. aceti oxidan el etanol convirtindolo en cido actico para producir vinagre, lo que constituye su ms importante aplicacin industrial.
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Gluconobacter Este gnero pertenece a la familia Pseudomonadaceae. Las bacterias pertenecientes a este grupo oxidan el etanol a cido actico. La especie G. oxydansproduce viscosidad en la cerveza y ms adelante una proliferacin viscosa que afecta la infusin de malta. Bacterias Butiricas Las bacterias de este grupo, en su mayora, son anaerobias esporuladas del gneroClostridium. Clostridium Son bacilos anaerobios o microaerfilos, Gram negativos, catalasanegativos, formadores de endosporas resistentes a altas temperaturas. Muchas especies fermentan activamente los carbohidratos, con produccin de cidos, entre los que se encuentra el butrico, y gases, usualmente dixido de carbono e hidrgeno. C. thermosaccharolyticum determina la alteracin gaseosa de las conservas vegetales. La putrefaccin de los alimentos es a menudo ocasionada por especies mesfilas proteolticas tales como C. lentoputrescens y C. putrefaciens. El rompimiento violento de la cuajada de la leche es ocasionado por C. perfringens o especies semejantes y da lugar a una fermentacin tumultuosa de la leche; C. butyricum, que fermenta los lactatos, determina la produccin tarda de gas en los quesos curados. Bacterias Propinicas Son bacterias pequeas, inmviles, Gram positivas, no esporuladas, catalasa-positivas de carcter anaerbico o aerotolerante y de forma bacilar. Fermentan el cido lctico, los carbohidratos y los polialcoholes para producir grandes cantidades de cidos propinico y actico y a menudo dixido de carbono. Ciertas especies, como Propionibacterium freudenreichii, proliferan en el queso suizo fermentando los lactatos con produccin de gas, que da lugar a la formacin de ojos y contribuyen a la obtencin de su tpico sabor. Las propionibacterias pigmentadas pueden causar modificaciones del color del queso Bacterias Proteolticas Tienen la capacidad de descomponer la estructura de las protenas. Muchas especies de Clostridium, Bacillus, Pseudomonas y Proteus son proteolticas. Las bacterias de la putrefaccin son capaces de descomponer anaerbicamente las protenas y producir compuestos malolientes, como cido sulfhdrico, mercaptanos, aminas, indol y cidos grasos. La mayor parte de las especies proteolticas de Clostridium son putrefactivas, as como ciertas especies de Proteus, Pseudomonas y otros gneros no esporulados. Bacillus cereus En la industria alimentaria ha sido de inters y objeto de estudio la destruccin de las esporas de B. cereus por su termorresistencia. Produce graves
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intoxicaciones debido a que genera una enterotoxina diarreica, un factor emtico y hemolisinas. Pseudomonas diversas especies de Pseudomonas son capaces de efectuar alteraciones en los alimentos. Pueden desarrollarse a bajas temperaturas (refrigeracin). En aerobiosis, crecen rpidamente y originan productos de oxidacin y muclago en las superficies de los alimentos, donde es ms probable una contaminacin abundante. Ciertas especies producen pigmentos como la fluorescencia verdosa producida por la pioverdina de Pseudomonas fluorescens y el color blanco, cremoso, rojizo, castao o incluso negro producido por P. nigrilaciens. Proteus las bacterias de este gnero son responsables de la alteracin de carnes, productos pesqueros y huevos. La presencia de estas bacterias en muchos alimentos no refrigerados las ha hecho sospechosas de ser causantes de toxiinfecciones alimentarias, o sea infecciones causadas por endotxinas o exotoxinas producidas por microorganismos. Se hallan en el intestino humano y de animales. Bacteria lipolticas Corresponde a un grupo heterogneo de bacterias que producen lipasas, enzimas que catalizan la hidrlisis de las grasas a cidos grasos y glicerol. Muchas bacterias aerbicas y proteolticas son tambin lipolticas. Pseudomonas fluorocescens es una de las especies fuertemente lipoltica. Los gneros Pseudomonas, Alcaligenes, Serratia y Micrococcus tienen especies lipolticas. Serratia, enterobacteria gram negativa, mvil, en forma de bacilo, fermenta butanodiol. Muchas de sus especies producen un pigmento rosceo o magenta y dan lugar a coloraciones rojizas en la superficie de los alimentos. S. marcescens es la especie ms comn. Micrococcus son Gram positivos, aerobios y catalasa-positivos. A menudo se encuentran en utensilios y equipo usados en alimentacin que no han sido adecuadamente limpiados e higienizados. Son importantes en los alimentos debido a las siguientes caractersticas: son capaces de utilizar las sales amnicas y otros compuestos nitrogenados simples como nica fuente de nitrgeno, la mayora fermentan los azcares, produciendo cantidades moderadas de cido, otros toleran gran cantidad de sal, creciendo por lo tanto a niveles de humedad bajos; estas especies se desarrollan en salmueras del curado de carnes, tanques de salmuera, muchos resisten la pasterizacin comercial de la leche (M. varians), otros son pigmentados y dan coloracin anormal a las superficies de los alimentos sobre los que crecen; M. luteus, por ejemplo, es amarillo y M. roseus, rosa.
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Bacterias Sacarolticas Hidrolizan los disacridos o polisacridos a azcares sencillos. Bacillus subtilis y Clostridium butyricum son amilolticos. Pocas especies bacterianas son capaces de hidrolizar la celulosa. Bacterias Pectolticas Las pectinas son carbohidratos complejos que forman parte de hortalizas y frutas. Las pectinasas, compuestas de varias enzimas pectolticas, pueden dar lugar al ablandamiento de los tejidos vegetales o a la prdida de la capacidad de gelificacin de los zumos de frutas. Se comportan como pectolticas especies de Erwinia, Bacillus y Clostridium, as como ciertos mohos. Las especies del gnero Erwinia son patgenas y saprofitos de vegetales, en los que causan necrosis, agallas, marchitamientos y podredumbre, lesionando frutas, hortalizas y otros productos vegetales. Puede presentarse directamente en el campo o durante el almacenamiento de los frutos. Es de inters econmico ya que las bacterias se pueden diseminar rpidamente por los exudados producidos en los tejidos y daar un lote de produccin. Bacterias termfilas Estas bacterias tienen una temperatura ptima por encima de 45 C, en muchos casos de 55C o superior y son importantes en el caso de alimentos mantenidos a elevadas temperaturas. Bacillus spp. causan la fermentacin cida de algunos alimentos enlatados y Clostridium thermosaccharolyticum da lugar a una alteracin gaseosa.Lactobacillus thermophilus es un microorganismo cido lctico y termfilo obligado. Bacterias psictropas Estas bacterias se pueden desarrollar a temperaturas no muy por encima de las de congelacin y tienen importancia en alimentos refrigerados. Las bacterias psicrotrficas se encuentran principalmente en los gneros Pseudomonas, Flavobacterium y Alcaligenes, aunque tambin hay especies psicrotrficas de los gneros Micrococcus, Lactobacillus, Enterobacter; Arthrobacter y otros. Flavobacterium especies de este gnero, amarillas o anaranjadas, determinan coloraciones anormales superficiales en las carnes y toma parte en el deterioro de mariscos, aves, huevos, mantequilla y leche. Algunos miembros son psicrtrofos, habindose observado su crecimiento, tras la descongelacin, en hortalizas congeladas.
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Bacterias halfitas Necesitan para su crecimiento determinadas concentraciones de cloruro sdico. Pertenecen a los gneros Halobacterium, Micrococcus, Pseudomonas, Vibrio, Pediococcus y Alcaligenes. Halobacterium normalmente aparecen en los pecados salados y en pieles adobadas debido a que la sal utilizada es portadora de este grupo de bacterias, produciendo manchas coloreadas. Vibrio son patgenos importantes para el hombre. V. cholerae es el agente causante del colera y V. parahaemolyticus produce gastroenteritis en humanos por el consumo de comida de mar contaminada. V. anguillarum y otras especies, son responsables de enfermedades en peces. Bacterias formadoras de viscosidad Pertenecientes a este tipo de bacterias se pueden citar: Alcaligenes viscolatis (viscosus) y Enterobacter aerogenes, que producen la alteracin viscosa de la leche, especies de Leuconostoc, que originan mucosidad en las soluciones de sacarosa y el crecimiento viscoso superficial de ciertas bacterias presentes en los alimentos. Algunas especies de Streptococcus y Lactobacillus poseen variedades que determinan la viscosidad o mucosidad de la leche; se conoce un micrococo que hace viscosas las soluciones de curado de las carnes. Hay cepas de Lactobacillus plantarum y de otros lactobacilos que pueden causar viscosidad en varios productos derivados de las frutas, hortalizas y cereales, por ejemplo, en la sidra y cerveza. Bacterias coliformes Son bacilos que han sido definidos como aerbicos o anaerbicos facultativos, Gram negativos y no esporulados, que fermentan la lactosa con formacin de gas. Las principales especies de bacterias coliformes son Escherichia coli y Enterobacter aerogenes. E. aerogenes produce menor cantidad de cido, forma acetona pero no indol, da lugar a dixido de carbono e hidrgeno en la proporcin 2:1 y utiliza el citrato como nica fuente de carbono. Produce ms gas que E. coli y por lo tanto, es ms peligroso como microorganismo, ya que puede originar gas en quesos, leche y otros alimentos. Ambas especies fermentan los azcares con formacin de cido lctico, etanol, cidos actico y succnico, dixido de carbono e hidrgeno. Los recuentos de coliformes, Coliformes fecales y de E. coli se emplean en los alimentos con carcter indicador. En general, no se admite la presencia de bacterias coliformes en los alimentos y en algunos casos, como el agua o las ostras, es ndice de contaminacin
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con materiales cloacales y, por lo tanto, con posibles patgenos entricos. Adems pueden dar lugar a la alteracin de los alimentos por multiplicacin en los mismos Otras bacterias importantes en alimentos Salmonella las bacterias de este gnero son intestinales. A este grupo pertenecen los agentes productores de fiebre tifoidea y paratifoidea, as como los causantes de Salmonelosis humanas transmitidas por alimentos. Su presencia en alimentos es totalmente inadmisible. Staphylococcus la mayora de las cepas de S. aureus producen un pigmento dorado y coagulan el plasma sanguneo mientras que S. epidermis no produce ni coagulasa ni pigmentos. Se asocian con la piel, membranas mucosas del hombre y animales. S. aureus causa abscesos, forunculosis, neumona infecciones en heridas y un importante sndrome de toxoinfeccin alimenticia en el hombre. Algunas cepas han presentado ltimamente mltiple resistencia a los medicamentos. El S. epidermis se encuentra comnmente en la piel y es el responsable de endocarditis e infecciones en pacientes con baja resistencia. Hongos fundamentales en la industria alimenticia Las levaduras forman parte de la poblacin mictica unicelular, que por su capacidad de degradar azcares puede producir efectos importantes en la industrializacin de alimentos. Las levaduras son un grupo particular de hongos unicelulares (constituidos por una sola clula) y caracterizados por su capacidad de transformar los azcares. Hay muchas especies de levaduras. La ms comnmente conocida es Saccharomyces cerevisiae la cual es utilizada en la industria panadera y en la elaboracin de la cerveza. Las levaduras tambin juegan un papel importante en la produccin de otros productos como el vino y el kefir. La mayora de las levaduras usadas en la industria alimentaria son de forma redonda y se dividen produciendo pequeos brotes. Esta produccin de brotes es una caracterstica utilizada para reconocerlas a travs del microscopio, ya que, durante el brote, las clulas poseen una forma de ocho (8). Las levaduras necesitan azcares para crecer y los fermentan produciendo alcohol y dixido de carbono (CO2). Esta reaccin y sus productos derivados hacen que la levadura posea una funcin muy importante en la industria alimentaria. As mismo, las levaduras tambin producen componentes de aroma agradable, los cuales juegan un papel muy importante en el aroma del producto final. Por ejemplo, en la cerveza, la levadura se
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necesita para producir el alcohol y el dixido de carbono que forma la espuma. Por otro lado, en la industria panadera el alcohol producido durante la fermentacin se evapora durante el horneado. Las levaduras pueden encontrarse en todas partes en la naturaleza, especialmente en plantas y frutas. Una vez que las frutas caen del rbol, la actividad de los hongos har que stas se pudran. Durante este proceso se forman alcohol y dixido de carbono a partir de los azcares presentes en las frutas. En algunas ocasiones aparecen en los informativos animales embriagados debido a que han comido estos frutos deteriorados. En la industria alimentaria, grandes tanques con agua azucarada en presencia de oxgeno son utilizados para hacer crecer las levaduras. Cuando se alcanza la cantidad de levadura deseada, el lquido es evacuado por medio de una bomba y la levadura es extrada, la que posteriormente podr ser secada. Ningn otro requerimiento es necesario para producir levadura.
Para saber ms:

Al respecto, en la pgina: http://www.food-info.net/es/qa/qa-wi8.htm se presenta una sntesis sobre las levaduras. Microbiologa de frutas, hortalizas y hierbas medicinales Microbiologa y anlisis microbiolgico de loscereales, harinas y derivados Produccin industrial de bebidas alcohlicas
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TESIS: No es lo mismo un alimento contaminado que un alimento deteriorado ya que cuando un alimento se encuentra deteriorado sus cualidades, olor, sabor, aspecto, se reducen o anulan, pudindose apreciar por medio de los sentidos (vista, olfato, gusto, tacto) POSTULADO I: La contaminacin por alimentos, debido a que no se puede percibir por el gusto o por el olfato, es extremadamente peligrosa y puede causar enfermedades graves e incluso la muerte. POSTULADO II: Un alimento contaminado puede parecer completamente normal, por eso es un error suponer que un alimento con buen aspecto est en buenas condiciones para su consumo, ya que puede estar contaminado por bacterias.
3.2.2. Leccin 30: Alteraciones microbianas en los alimentos16
Una vez que los microorganismos colonizan los alimentos, estos microorganismos se pueden multiplicar puesto que encuentran los nutrientes necesarios para su desarrollo y como resultado del metabolismo microbiano estos alimentos se alteran. No obstante, solamente una parte de esta microbiota inicial llega a proliferar suficientemente como para producir la alteracin de los alimentos. El que solamente una parte de la microbiota inicial sea capaz de desarrollarse masivamente, en un alimento concreto, viene condicionado por una serie de factores intrnsecos del propio alimento as como de factores extrnsecos del medio ambiente que le rodea: pH, humedad, temperatura de conservacin.
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Adaptado de (Importancia de los microorganismos en la elaboracin de alimentos)
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Consecuencias del desarrollo de microorganismos en los alimentos Los efectos que produce el desarrollo de microorganismos en los alimentos, tanto beneficiosos como perjudiciales, se sumarizan a continuacin: 1.- Alteracin de los alimentos (microorganismos alterantes) Los microorganismos al crecer y utilizar los alimentos como fuente de nutrientes producen cambios en la apariencia, sabor, olor y otras cualidades del alimento. Estos procesos de degradacin son: a. Putrefaccin Protenas alimentos + Microorganismos proteolticos ------> Aminocidos + Aminas + NH3 + SH2 b. Fermentacin Carbohidratos alimentos + Microorganismos sacarolticos ------> Acidos + Alcoholes + Gases c. Enranciamiento Grasas alimentos + Microorganismos lipolticos ------> Acidos grasos+ Glicerol 2. Enfermedades de origen microbiano (microorganismos patgenos) a.- Infeccin alimentaria: Salmonelosis b.- Intoxicacin alimentaria: Botulismo 3.- Alimentos producidos por microorganismos (microorganismos industriales) a.- Vegetales: vino, aceitunas b.- Lcteos: yogurt, queso c.- Protena de origen unicelular (SCP): clulas de bacterias, levaduras, algas y hongos filamentosos.
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TESIS: No es lo mismo un alimento contaminado que un alimento deteriorado ya que cuando un alimento se encuentra deteriorado sus cualidades, olor, sabor, aspecto, se reducen o anulan, pudindose apreciar por medio de los sentidos (vista, olfato, gusto, tacto) POSTULADO I: La contaminacin por alimentos, debido a que no se puede percibir por el gusto o por el olfato, es extremadamente peligrosa y puede causar enfermedades graves e incluso la muerte. POSTULADO II: Un alimento contaminado puede parecer completamente normal, por eso es un error suponer que un alimento con buen aspecto est en buenas condiciones para su consumo, ya que puede estar contaminado por bacterias.
3.2.3. Leccin 31: Contaminacin de alimentos
Un alimento contaminado17 (BONINI) es aqul que contiene grmenes capaces de provocar enfermedad a las personas que lo consumen. No es lo mismo un alimento contaminado que un alimento deteriorado ya que cuando un alimento se encuentra deteriorado sus cualidades, olor, sabor, aspecto, se reducen o anulan, pudindose apreciar por medio de los sentidos (vista, olfato, gusto, tacto) La contaminacin ni se nota ni se ve ya que los microorganismos no se aprecian a simple vista al ser microscpicos.
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http://www.monografias.com/trabajos28/contaminacion-alimentaria/contaminacionalimentaria.shtml?monosearch
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Un alimento contaminado puede parecer completamente normal, por eso es un error suponer que un alimento con buen aspecto est en buenas condiciones para su consumo, ya que puede estar contaminado por bacterias. Un alimento puede estar: - Deteriorado y contaminado (se nota) - Deteriorado y no contaminado (se nota) - Contaminado y no deteriorado (no se nota) Este ltimo es el realmente peligroso y causante generalmente de las enfermedades de origen alimentario. Los grmenes llegan a los alimentos de diversas formas ya que se encuentran en todas partes, algunos son perjudiciales para el hombre causando enfermedades, stos toman el nombre de grmenes patgenos. Las bacterias o grmenes se encuentran tambin en personas y animales, en el hombre en la boca, nariz, aparato digestivo, etc. La persona que tiene bacterias patgenas se llama portador y puede ser un portador sano o enfermo. El portador sano no presenta sntomas de enfermedad y no sabe que es portador. Todo manipulador por ese motivo, debe de poner en prctica rigurosas medidas de higiene siempre, para no contaminar los alimentos. Los alimentos generalmente se contaminan por dos vas: - La directa, del portador (sano o enfermo) al alimento. - La indirecta, del portador (sano o enfermo) a un intermediario, insectos, utensilios, y de ste ultimo al alimento, como hemos visto en clase, en las primeras unidades. En general la produccin de alimentos libres de contaminantes no slo depende del lugar de su produccin sino tambin de los procesos de elaboracin y de las personas que toman contactos con ellos. La contaminacin de los mismos puede producirse en cualquier momento desde su cosecha, pasando por la elaboracin a nivel industrial, hasta cuando se prepara la comida en el hogar.
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Enfermedades transmitidas por alimentos - etas Es casi siempre la explicacin que damos cuando tenemos vmitos, diarrea o algn otro tipo de sntoma gastrointestinal. Pocas personas saben que los alimentos que consumen todos los das pueden causarle enfermedades conocidas como ETAs -Enfermedades Transmitidas por Alimentos-. Llamadas as porque el alimento acta como vehculo en la transmisin de organismos patgenos (que nos enferman, dainos) y sustanciastxicas. Las ETAs estn causadas por la ingestin de alimentos y/o agua contaminados con agentes patgenos. Las alergias por hipersensibilidad individual a ciertos alimentos no se consideran ETAs, por ejemplo la que experimentan los celiacos con el gluten con el y las personas intolerantes a la lactosa con la leche. Infecciones alimentarias: Son las ETAs producidas por la ingestin de alimentos o agua contaminados con agentes infecciosos especficos tales como bacterias, virus, hongos, parsitos, que en el intestino pueden multiplicarse y/o producir toxinas. INTOXICACIONES ALIMENTARIAS Son las ETAs producidas por la ingestin de toxinas producidas en los tejidos de plantas o animales, o productos metablicos de microorganismos en los alimentos, o sustancias qumicas que se incorporan a ellos de modo accidental o intencional en cualquier momento desde su produccin hasta su consumo. Los sntomas se desarrollan durante 1-7 das e incluyen alguno de los siguientes:Dolor de cabeza, nauseas, vmitos, dolor abdominal, diarrea. Estos sntomas van a variar de acuerdo al tipo de agente responsable as como la cantidad de alimento contaminado que fue consumido. Para las personas sanas, las ETAs son enfermedades pasajeras, que slo duran un par de das y sin ningn tipo de complicacin. Pero para las personas susceptibles como son los nios, los ancianos, mujeres embarazadas y laspersonas enfermas pueden llegar a ser muy graves, dejar secuelas o incluso provocar la muerte. Los agentes responsables de las ETAs son: bacterias y sus toxinas, virus, parsitos, sustancias qumicas, metales, txicos de origen vegetal y sustancias qumicas txicas que
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pueden provenir de herbicidas, plaguicidas, fertilizantes. Dentro de todas las posibles causas mencionadas, las ETAs de origen bacteriano son las ms frecuentes de todas. Las bacterias ms comunes o que se presentan con mayores frecuencias son: Clostridium perfringens, Bacillus cereus, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Clostridium botulinum, Shigella, Listeria monocytogenes, Campylobacter jejuni Estos microorganismos se encuentran en una gran variedad de alimentos. Especialmente en aquellos conocidos como Alimentos de alto Riesgo. En algunos casos los alimentos puede que se hayan contaminado durante su produccin o recoleccin, en otros casos el descuido durante la elaboracin de alimentos en el hogar as como el uso de utensilios que fueron previamente utilizados para preparar alimentos contaminados. Para prevenir las intoxicaciones alimentarias es necesario tomar medidas de higiene correctas para manipular los alimentos. Estas medidas son fciles de aplicar. Almacenar los productos de limpieza separados de los productos alimenticios. Cerrar claramente todos los productos de limpieza, raticidas y otro tipo de producto qumico claramente para evitar confusiones fatales. Tener especial cuidado con envases de vidrio, especialmente aquellos que se hallan en la cocina. Evitar el uso de anillos cuando prepara la comida. Lavarse adecuadamente las manos antes de preparar la comida y cada vez que estas se contaminan (luego de tocar alimentos crudos, luego de ir al bao, luego de utilizar productos de limpieza, luego de tocar dinero, etc.). Al abrir una lata de alimentos en conserva, colocar lo que no usa en envases plsticos correctamente tapados dentro de la heladera. Nunca abrir una lata y dejar lo que sobra en la misma.
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Relacione los microorganismos de la columna 1 con las fuentes de contaminacin de la columna 2. 1. Staphylococcus aureus 2. Clostridium botullinum 3. Coli 4. Streptococcus faecalis 5. Aspergilius falvus ( ) man y granos almacenados ( ) Agua ( ) Cremas y ensaladas ( ) Alimentos semi conservados ( ) Encurtidos
3.2.4. Leccin 32: Microbiologa de la leche y productos lcteos
Las bacterias del cido lctico18 La fermentacin ha sido, durante varios miles de aos, una importante forma de conservacin de los alimentos. El crecimiento microbiano, tanto de poblaciones naturales como de poblaciones inoculadas, causa cambios qumicos, de textura o ambos, en los alimentos de tal manera que el producto final puede almacenarse durante un perodo de tiempo prolongado. El proceso de la fermentacin tambin se emplea para crear nuevos olores y sabores agradables para los alimentos. Todas las bacterias del cido lctico fermentan diversos azcares produciendo cido lctico en cantidades suficientemente elevadas como para inhibir o matar a la mayora de los otros microorganismos. Pero, con unas pocas excepciones que incluyen algunos
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http://nostoc.usal.es/sefin/MI/tema21MI.html
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estreptococos, las bacterias del cido lctico son incuas para la especie humana y adems, sus productos metablicos tienen un sabor agradable. Estas propiedades nos permiten utilizar las bacterias del cido lctico para preparar y conservar alimentos. Los alimentos deben contener suficiente cantidad de azcares para que las bacterias del cido lctico produzcan cantidades inhibitorias de dicho cido (la mayora de los materiales vegetales y productos lcteos las tienen). Adems, debe excluirse el aire para que los microorganismos aerobios, que metabolizan ms rpidamente, no puedan utilizar el azcar antes que las bacterias del cido lctico tengan la posibilidad de desarrollarse. Generalmente no es necesario aadir bacterias del cido lctico a los alimentos ya que la mayora de los productos vegetales y lcteos contienen una poblacin natural adecuada, salvo que hayan sido sometidos al proceso de pasteurizacin. Orla Jensen en 1920 clasific las bacterias lcticas, atendiendo a sus caractersticas bioqumicas, en dos grupos: A.- Homofermentativas B.- Heterofermentativas Las vas metablicas que utilizan para degradar la glucosa son diferentes. Los fermentadores homolcticos utilizan la va glucoltica y reducen directamente casi todo el piruvato a lactato gracias al enzima lactato deshidrogenasa. Los fermentadores heterolcticos utilizan la va de la fosfocetolasa convirtiendo la glucosa en D-lactato, etanol o actico y CO2. Productos lcteos Figura 65. Lactobacillus bulgaricus
Tomado de: http://microbewiki.kenyon.edu/images/b/b4/Lacto.JPG
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La leche fermentada tiene aromas y sabores diferentes dependiendo de las condiciones de incubacin y del inculo microbiano utilizado. Todos los productos lcteos fermentados derivan de tcnicas de fabricacin similares, en las que el cido producido mediante actividad microbiana provoca la desnaturalizacin de las protenas. Para llevar a cabo este proceso suele inocularse la leche con el cultivo iniciador (starter) deseado, se incuba a la temperatura ptima y a continuacin se detiene el crecimiento microbiano mediante enfriamiento. Los cultivos de especies de Lactobacillus y de Lactococcus lactis se utilizan para conferir aroma y para la produccin de cido. El organismo Lactococcus lactis subespecie diacetilactis convierte el citrato de la leche a diacetilo, lo que proporciona un especial sabor mantecoso al producto acabado. El cultivo de este microorganismo con leche desnatada produce suero de leche cultivado; y si se utiliza crema completa, el resultado es la crema agria. El yogur es producido por un cultivo iniciador especial en el que estn presentes dos bacterias principales en una proporcin 1:1, Streptococcus termophilus y Lactobacillus bulgaricus. Cuando estos organismos crecen a la vez, Streptococcus produce cido mientras que los componentes del aroma son formados por Lactobacillus. El yogur recin preparado contiene 109 bacterias por gramo. La leche con acidfilos se produce utilizando Lactobacillus acidophilus.
Transferencia
En la produccin de yogurt, se debe calentar la leche a 85 grados y luego reposarla a 40 grados y sembrar. Se debe tener disponible una cepa de: 1. 2. 3. 4. Tener una cepa de Streptococcus termophilus Tener una cepa de Lactobacillus casel Tener una cepa de Lactobacillus bulgaricus Todas las anteriores
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Sistemas de anlisis de riesgos y puntos crticos de control
Todas las personas tienen derecho a esperar que los alimentos que comen sean inocuos y aptos para el consumo. Las enfermedades de transmisin alimentaria y los daos provocados por los alimentos son, en el mejor de los casos, desagradables, y en el peor pueden ser fatales. Los brotes de enfermedades transmitidas por los alimentos pueden perjudicar al comercio y al turismo y provocar prdidas de ingresos, desempleo y pleitos. El deterioro de los alimentos ocasiona prdidas, es costoso y puede influir negativamente en el comercio y en la confianza de los consumidores. Por consiguiente, es imprescindible un control eficaz de la higiene, a fin de evitar las consecuencias perjudiciales que derivan de las enfermedades y los daos provocados por los alimentos y por el deterioro de los mismos, para la salud y la economa. Todos, agricultores y cultivadores, fabricantes y elaboradores, manipuladores y consumidores de alimentos, tienen la responsabilidad de asegurarse de que los alimentos sean inocuos y aptos para el consumo. Los Principios Generales de Higiene de los Alimentos del Codex Alimentarius19(Agriculture and consumer protection deparment, 1999) constituyen una firme base para garantizar la higiene de los alimentos, haciendo hincapi en los controles esenciales en cada fase de la cadena alimentaria y recomendando la aplicacin del sistema de anlisis de riesgos y de los puntos crticos de control (HACCP) siempre que sea posible para potenciar la inocuidad de los alimentos. El HACCP permite determinar riesgos concretos y adoptar medidas preventivas para evitarlos. Es un sistema de gestin de la inocuidad de los alimentos basado en el control de los puntos crticos en la manipulacin de los alimentos para prevenir problemas al respecto, ya que propicia un uso ms eficaz de los recursos y una respuesta ms oportuna a tales problemas. El sistema de HACCP facilita la inspeccin por parte de las autoridades encargadas de regular el control de los alimentos y favorece el comercio internacional al aumentar la confianza de los compradores en la inocuidad de los alimentos. Definiciones Anlisis de peligros: Proceso de recopilacin y evaluacin de informacin sobre los peligros y las condiciones que los originan para decidir cules son importantes con la inocuidad de los alimentos y, por tanto, planteados en el plan del sistema de HACCP. Controlar: Adoptar todas las medidas necesarias para asegurar y mantener el cumplimiento de los criterios establecidos en el plan de HACCP.
19
http://www.fao.org/docrep/v9723t/v9723t0g.htm
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Lmite crtico: Criterio que diferencia la aceptabilidad o inaceptabilidad del proceso en una determinada fase. Medida correctiva: Accin que hay que realizar cuando los resultados de la vigilancia en los PCC indican prdida en el control del proceso. Medida de control: Cualquier medida y actividad que puede realizarse para prevenir o eliminar un peligro para la inocuidad de los alimentos o para reducirlo a un nivel aceptable. Peligro: Agente biolgico, qumico o fsico presente en el alimento, o bien la condicin en que ste se halla, que puede causar un efecto adverso para la salud. Plan de HACCP: Documento preparado de conformidad con los principios del sistema de HACCP, de tal forma que su cumplimiento asegura el control de los peligros que resultan significativos para la inocuidad de los alimentos en el segmento de la cadena alimentaria considerado. Punto crtico de control (PCC): Fase en la que puede aplicarse un control y que es esencial para prevenir o eliminar un peligro relacionado con la inocuidad de los alimentos o para reducirlo a un nivel aceptable. Sistema de HACCP: Sistema que permite identificar, evaluar y controlar peligros significativos para la inocuidad de los alimentos. Validacin: Constatacin de que los elementos del plan de HACCP son efectivos. Verificacin: Aplicacin de mtodos, procedimientos, ensayos y otras evaluaciones, adems de la vigilancia, para constatar el cumplimiento del plan de HACCP. Vigilar: Llevar a cabo una secuencia planificada de observaciones o mediciones de los parmetros de control para evaluar si un PCC est bajo control. Principios del sistema de haccp
El Sistema de HACCP consiste en los siete principios siguientes:
Principio 1: Realizar un anlisis de peligros. Principio 2: Determinar los puntos crticos de control (PCC). Principio 3: Establecer un lmite o lmites crticos. Principio 4: Establecer un sistema de vigilancia del control de los PCC. Principio 5: Establecer las medidas correctivas que han de adoptarse cuando la vigilancia indica que un determinado PCC no est controlado. Principio 6: Establecer procedimientos de comprobacin para confirmar que el Sistema de HACCP funciona eficazmente.
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Principio 7: Establecer un sistema de documentacin sobre todos los procedimientos y los registros apropiados para estos principios y su aplicacin.
Directrices para la aplicacin del sistema de HACCP Antes de aplicar el sistema de HACCP a cualquier sector de la cadena alimentaria, el sector deber estar funcionando de acuerdo con los Principios Generales de Higiene de los Alimentos del Codex, los Cdigos de Prcticas del Codex pertinentes y la legislacin correspondiente en materia de inocuidad de los alimentos. El empeo por parte de la direccin es necesario para la aplicacin de un sistema de HACCP eficaz. Cuando se identifiquen y analicen los peligros y se efecten las operaciones consecuentes para elaborar y aplicar sistemas de HACCP, debern tenerse en cuenta las repercusiones de las materias primas, los ingredientes, las prcticas de fabricacin de alimentos, la funcin de los procesos de fabricacin en el control de los peligros, el probable uso final del producto, las categoras de consumidores afectadas y las pruebas epidemiolgicas relativas a la inocuidad de los alimentos. La finalidad del sistema de HACCP es lograr que el control se centre en los PCC. En el caso de que se identifique un peligro que debe controlarse pero no se encuentre ningn PCC, deber considerarse la posibilidad de formular de nuevo la operacin. El sistema de HACCP deber aplicarse por separado a cada operacin concreta. Puede darse el caso de que los PCC identificados en un determinado ejemplo en algn cdigo de prcticas de higiene del Codex no sean los nicos identificados para una aplicacin concreta, o que sean de naturaleza diferente. Cuando se introduzca alguna modificacin en el producto, el proceso o en cualquier fase, ser necesario examinar la aplicacin del sistema de HACCP y realizar los cambios oportunos. Es importante que el sistema de HACCP se aplique de modo flexible, teniendo en cuenta el carcter y la amplitud de la operacin. Aplicacin La aplicacin de los principios del sistema de HACCP consta de las siguientes operaciones, que se identifican en la secuencia lgica para la aplicacin del sistema de HACCP (Diagrama 1).
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Figura 66. Secuencia lgica para la aplicacin del sistema de haccp
Tomado de:http://www.fao.org/DOCREP/005/Y1579S/y1579s00.gif
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Figura 67. Ejemplo de hoja de trabajo del sistema de HACCP
Tomado de: http://www.fao.org/DOCREP/005/Y1579S/y1579s02.gif
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Transferencia De acuerdo a la siguiente grfica, la principal accin para controlar la contaminacin microbiolgica de frutas y hortalizas, sera: a. b. c. d. Controlar el agua de riego en los cultivos Implementar las buenas prcticas agrcolas Lavar las frutas y verduras con agua hervida antes de consumirlas Adquirir los alimentos en sitios que garanticen su orgen
Para saber ms:

SISTEMA DE ANLISIS DE PELIGROS Y DE PUNTOS CRTICOS DE CONTROL (HACCP) Y DIRECTRICES PARA SU APLICACIN
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Transferencia
Usted ha sido contratado para dirigir un sistema de calidad en una compaa. Una de sus primeras funciones es certificar la empresa en sistema HACCP. Indique cuales serian los pasos que usted desarrollara en orden especfico para implementar el sistema: A. B. C. D. Determinar PCC, Anlisis de peligros, Monitoreo, Establecer lmites crticos, documentacin y verificacin Determinar PCC, Anlisis de peligros, establecer lmites crticos, Monitoreo, correctivas y documentacin Anlisis de peligros, Determinar PCC, establecer limites crticos, Monitoreo, Verificacin y documentacin Anlisis de peligros, establecer limites crticos, Monitoreo, Determinar PCC, documentacin y verificacin Acciones correctivas, verificacin, Acciones Acciones correctivas, Acciones correctivas,
3.2.5. Actividades de repaso del captulo 8
Crucigrama de bacterias que se presentan cuando hay contaminacin alimentaria
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Horizontales
3. Son bacterias cuyo habitat es la sal, por lo cual aparecen en los alimentos salados 5. Bacterias gram positivas que encontramos en equipos sucios y dan color a los alimentos en que crecen 7. Estos cocos crecen en un amplio rango de temperaturas y son resistentes a procesos de pasteurizacin de la leche 8. Un patgeno de esta familia es el causante del clera 9. Estos cocos, al hacerles el procedimiento de tincin se colorean de violeta 11. Se asocian a mucosas animales y humanas, producen enfermedades como neumona 12. Variedades de estos cocos pueden ocasionar enfermedades en los humanos y otros ser utilizados en la produccin de alimentos 14. Estos bacilos colaboran a la fermentacin de granos para la produccin de vinagre 15. Estas bacterias se pueden desarrollar a temperaturas muy bajas y pertenecen al grupo de las coliformes 16. Su presencia en alimentos es sntoma de contaminacin que puede poner en peligro la vida Verticales 1. Estas bacterias oxidan el etanol a cido actico 2. Algunas especies de esta bacteria producen fluorescencia blanca o rojiza 4. Producen endotoxinas que alteran las carnes 6. Son cadenas o pares de cocos que alteran los alimentos con alto contenido de azcar 10. Estos bacilos crecen en ambientes con poca o nula presencia de oxgeno y se usan para fermentar carbohidratos 12. Bacilo gram negativo, que fermenta los alimentos en los que se reproduce 13. Son patgenos de productos vegetales
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3.3. CAPTULO. 9: INMUNOLGIA BASICA

Introduccin Conjunto de mecanismos que un individuo posee para enfrentarse a la invasin de cualquier cuerpo extrao y para hacer frente a la aparicin detumores. Esta cualidad se adquiere antes del nacimiento y se madura y afianza en los primeros aos de vida. En los vertebrados implica que los organismos diferencian lo propio de lo ajeno; es decir, reconocen todos sus tipos celulares. El Sistema Inmune es el responsable de conferir inmunidad. Este sistema, presente en invertebrados, alcanza su mxima complejidad en los primates y seres humanos. La ciencia encargada de estudiar estos procesos se denomina Inmunologa. Objetivos Ofrecer una visin general de algunos fenmenos inmunolgicos. Reconocer la importancia de los microorganismos en los procesos inmunitarios.
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3.3.1. Leccin 33: Epidemiologia
La epidemiologa20(Achon Cicciarella) es la ciencia que estudia las causas y las caractersticas de las enfermedades, basada en la interaccin de los diferentes sistemas relacionados con la salud, ya sea desde el medio ambiente hasta lo molecular. El objetivo que persigue es generar los conocimientos cientficos necesarios para as proponer acciones preventivas con el fin de mejorar la salud de las poblaciones. La epidemiologa es el estudio de las enfermedades que afectan a muchas poblaciones en un lugar determinado y durante un tiempo establecido. Est considerada como una ciencia bsica de la medicina preventiva, adems de una fuente de informacin para la formulacin de polticas de salud pblica. El estudio de la epidemiologa est centrado en: -La distribucin, la frecuencia y las causas de una enfermedad. -Las consecuencias biolgicas, psicolgicas y sociales de la enfermedad. -Los riesgos para la salud, como as la distribucin y la frecuencia. -Las particularidades y las repercusiones de las respuestas asumidas para atender la salud. -Los modos y los riesgos de controlar de las enfermedades. Para poner en prctica un estudio epidemiolgico se deben tener conocimientos de la poblacin a tratar, que permitan saber los riesgos que existan en contraer una enfermedad. Mediante dichas investigaciones se pueden hacer pronsticos sobre la
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Adaptado de: http://hnncbiol.blogspot.com/2008/01/epidemiologa.html
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aparicin de la enfermedad, las medidas para su cura y evolucin, su control y la implementacin de prcticas sanitarias. La llamada trada o tringulo epidemiolgico es un tradicional modelo de las causas de las enfermedades. Se compone de tres partes: un agente etiolgico, un hospedador susceptible y el medio ambiente que interacta entre ambos, en especial en la va de transmisin desde una fuente infecciosa hacia el husped. En la medida que se rompe el equilibrio entre estos tres factores, agente-husped-medio, sobreviene la enfermedad. Por otra parte, el desequilibrio de alguno de ellos puede aumentar o disminuir la frecuencia de las patologas. Componentes del agente etiolgico Si bien siempre fueron consideradas las noxas biolgicas, deben incluirse entre estos a los factores fsicos, qumicos, psquicos, sociales y culturales. La trada epidemiolgica se altera ante eventos como el ingreso de sustancias txicas al organismo, las radiaciones nocivas, los conflictos blicos, los problemas laborales y econmicos y la discriminacin de cualquier tipo, entre otros. Componentes del husped Las causas que predisponen susceptibilidad hacia las noxas son la edad del individuo, el status socioeconmico y los malos hbitos como la drogadiccin, el alcoholismo, la prostitucin, etc. Las causas que influyen en la susceptibilidad a una noxa incluye el estado de salud, el estado nutricional, la gentica y su composicin psicolgica. Figura 68. Trada epidemiolgica
Tomado de: http://2.bp.blogspot.com/_TYKXEPKoytc/SRJXVS9cteI/AAAAAAAABQ4/8dKPQrMwcxE/s400/epi.bmp
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Componentes ambientales Los factores del medio ambiente que tienen influencia en el agente etiolgico y en el hospedador pueden dividirse en biolgicos (artrpodos vectores de noxas), fsicos (temperatura, humedad, presin atmosfrica) y socioeconmicos (viviendas precarias, hacinamiento, etc.). En sntesis, puede afirmarse que para que se presente una enfermedad interactan los tres componentes antes sealados, y que una mltiple variedad de presentaciones deben darse para que se produzca el desequilibrio de la trada. Transferencia
TESIS: La llamada trada o tringulo epidemiolgico es un tradicional modelo de las causas de las enfermedades. Se compone de tres partes: un agente etiolgico, un hospedador susceptible y el medio ambiente que interacta entre ambos, en especial en la va de transmisin desde una fuente infecciosa hacia el husped. En la medida que se rompe el equilibrio entre estos tres factores, agente-husped-medio, sobreviene la enfermedad. Por otra parte, el desequilibrio de alguno de ellos puede aumentar o disminuir la frecuencia de las patologas. POSTULADO I: Los factores del medio ambiente que tienen influencia en el agente etiolgico y en el hospedador pueden dividirse en biolgicos (artrpodos vectores de noxas), fsicos (temperatura, humedad, presin atmosfrica) y socioeconmicos (viviendas precarias, hacinamiento, etc.). POSTULADO II: La trada epidemiolgica se altera ante eventos como el ingreso de sustancias txicas al organismo, las radiaciones nocivas, los conflictos blicos, los problemas laborales y econmicos y la discriminacin de cualquier tipo, entre otros.
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3.3.2. Leccin 34: Vacunas
Una vacuna21 es una suspensin de microorganismos (o alguna parte o producto de ellos) que produce inmunidad al ser inoculada en un husped. Una vacuna oral o parental induce en el husped la formacin de anticuerpos frente al organismo causante de la enfermedad; por lo que, durante exposiciones futuras de este microorganismo, el agente infeccioso es inactivado (neutralizado o matado), se previene su proliferacin y por lo tanto no se establece el estado de enfermedad. El primero en utilizar el trmino vacuna fue Pasteur en 1880 y proviene del latn vacca. Usando este trmino Pasteur reconoci el trabajo de Edward Jenner que en 1796 vacun con xito a un nio de 8 aos (James Phipps) de viruela, vacuna que obtuvo de los exudados de las pstulas de una vaca con viruela. A partir de este momento se desarrollaron numerosas vacunas lo que ha llevado a erradicar enfermedades como la viruela y en otros casos a una reduccin dramtica en la incidencia de numerosas enfermedades graves como la poliomielitis. Tipos de vacunas tradicionales Las vacunas tradicionales se pueden clasificar dentro de tres tipos: vacunas atenuadas, vacunas inactivadas y vacunas toxoides. 1.- Vacunas atenuadas Son preparaciones de bacterias o virus vivos que estn tan debilitados o alterados que ya no son virulentos, siendo todava capaces de provocar una respuesta inmune. Algunos ejemplos de vacunas vivas son la Sabin para la polio, fiebre amarilla, sarampin, rubeola, parotiditis y la BCG para la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis). La mayora de las
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Adaptado de: http://nostoc.usal.es/sefin/MI/tema16MI.html
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vacunas de virus atenuados provocan inmunidad para toda la vida sin necesidad de inmunizaciones de recuerdo. 2.- Vacunas inactivadas Son suspensiones de bacterias o virus muertos por la accin de desinfectantes como el fenol o formaldehido. En este tipo de vacunas es necesario dividir la cantidad total que se necesita para inducir la proteccin en varias dosis con intervalos de das o semanas debido a la alta concentracin de microorganismos muertos que se deben administrar ya que no se replican como ocurre con las vacunas atenuadas. Algunos ejemplos de vacunas muertas son la Salk para la polio, rabia, gripe y la tosferina (Bordetella pertussis). 3.- Vacunas toxoides Son preparaciones obtenidas a partir de toxinas bacterianas inactivadas. Generalmente se utiliza el formol (c.a. 38% de formaldehido en H2O). Los toxoides son muy efectivos en la prevencin de la difteria (Corynebacterium diphtheriae) y el ttanos (Clostridium tetani). A pesar de los logros obtenidos con este tipo de vacunas, existen una serie de limitaciones en la produccin de vacunas segn el modelo tradicional: a.- No todos los agentes infecciosos pueden crecerse en cultivo, por lo que todava no se han desarrollado vacunas para estas enfermedades. b.- La produccin de virus animales y humanos requiere cultivos celulares, los cuales son caros, obtenindose adems bajos rendimientos. c.- Son necesarias grandes medidas de seguridad para asegurar que tanto el personal de laboratorio como de produccin no van a estar expuestos al agente patgeno. d.- Se corre el riesgo de que los lotes de vacunas no estn completamente muertos o atenuados durante el proceso de produccin por lo que se pueden introducir organismos virulentos en las vacunas y dispersar la enfermedad inadvertidamente. e.- Las cepas atenuadas pueden revertir, una posibilidad que requiere continuos ensayos para asegurar que no ha ocurrido una readquisicin de la virulencia. f.- No todas las enfermedades (p.ej. SIDA) se pueden prevenir a travs del uso de vacunas tradicionales. g.- La mayor parte de las vacunas actuales tienen una vida media limitada y a menudo requieren refrigeracin para mantener su potencia. Estos requerimientos originan problemas de almacenamiento en aquellos pases con grandes reas rurales sin
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electrificar. En la ltima dcada, la tecnologa del DNA recombinante ha supuesto la creacin de una nueva generacin de vacunas que permiten obviar las limitaciones de las clsicas. La disponibilidad de clonacin de genes ha permitido a los investigadores contemplar nuevas estrategias en el desarrollo de vacunas: 1.- Se pueden eliminar (curar) los genes de virulencia de un agente infeccioso y que mantenga la habilidad de estimular una respuesta inmune. En este caso, el organismo modificado genticamente puede usarse como una vacuna viva sin las preocupaciones acerca de la reversin a la virulencia, ya que es imposible que un gen completo pueda ser readquirido espontneamente durante el crecimiento en cultivo puro. 2.- Se pueden crear sistemas vivos no patgenos que transporten determinantes antignicos de un agente patgeno con el que no estn relacionados. De esta forma el sistema transportador facilita la induccin de una fuerte respuesta inmunolgica dirigida contra el agente patgeno. 3.- Para aquellos agentes infecciosos que no se pueden mantener en cultivo, los genes que codifican para las protenas que tienen determinantes antignicos se pueden aislar, clonar y expresar en un husped alternativo tal como Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae o lneas celulares de mamferos. Estas protenas pueden ser formuladas en vacunas de subunidades. Las vacunas de subunidades utilizan solamente aquellos fragmentos antignicos ms adecuados para estimular una respuesta inmunitaria potente. Los genes de estas subunidades proteicas pueden ser introducidos en el genoma de una bacteria o levadura mediante las tcnicas de ingeniera gentica. La bacteria o levadura produce estas subunidades en cantidad y son despus recolectadas y purificadas para utilizarlas como vacunas. Produccin de vacunas Produccin de toxoides bacterianos Las toxinas bacterianas se inactivan para producir toxoides de tal manera que pierdan su toxicidad pero que retengan su antigenicidad. La vacunacin a gran escala no comenz hasta que Ramn hall en 1924 una forma segura y reproducible de inactivacin de las toxinas y los microorganismos patgenos mediante su tratamiento con formaldehido y despus de conseguir la atenuacin de los patgenos mediante pasos sucesivos en medios de cultivo in vitro. Cepas: La vacunacin con toxoides se utiliza en humanos para enfermedades causadas por Clostridium tetani y Corynebacterium diphtheriae. Cada productor ha llevado a cabo a
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lo largo del tiempo una seleccin de aquellas cepas que producen un mximo de produccin de toxina en el medio de cultivo que l mismo ha desarrollado. La mayora de las cepas son estables en lifilos. Medio de cultivo: Generalmente las toxinas bacterianas no se producen en grandes cantidades en medios sintticos, por lo que es necesario aadir una fuente de protenas como la carne, casena y como alternativa soja. La carne se digiere con papana o tripsina y la caseina se digiere con cido o tripsina. Este medio debe ser suplementado con varios aminocidos y vitaminas por lo que se aade extracto de levadura. La fuente de carbono es glucosa aunque tambin se puede utilizar sacarosa y maltosa. Condiciones de cultivo: La mayora de las vacunas toxoides se producen a partir de Clostridium (anaerobio) por lo que no hay ningn requerimiento especial para la introduccin de gases en el cultivo. Puesto que tambin son sacarolticos, son organismos que producen cidos a partir del azcar por lo que se debe controlar el pH. El tiempo de incubacin se debe determinar en funcin de la cantidad de toxina que se produce, para lo cual existen diversas tcnicas tanto enzimticas (lecitinasa, hemlisis, proteolisis) como ensayos en animales (cobayas, ratones, conejos) usando como indicadores la muerte o lesiones en la piel. Inactivacin: Las toxinas bacterianas se inactivan siempre con formaldehido. Aislamiento: El toxoide de Clostridium tetani se purifica por ultrafiltracin utilizando membranas con un tamao de poro de 0,001-0,05 m. La purificacin enCorynebacterium diphtheriae difiere en que la toxina se purifica primero y despus se convierte en toxoide. Para la purificacin primero se elimina la mayor parte de las protenas por precipitacin con 25% de sulfato amnico en presencia de carbn activo y en condiciones alcalinas. Despus de filtrar, la toxina presente en el filtrado se precipita por adicin de sulfato amnico al 20%, se recoge por filtracin, se redisuelve y se elimina el sulfato amnico por dilisis. Produccin de vacunas virales El primer paso esencial en la produccin de vacunas vricas, sean vivas o inactivadas, es la obtencin de una gran cantidad de material rico en antgenos virales. Debido a que las clulas vivas son esenciales para la replicacin de los virus, las fuentes de tales materiales estn limitadas a tejidos de animales infectados, embriones de pollos y cultivos celulares. Independientemente del sustrato utilizado, es de vital importancia para la produccin el mantener un lote de virus como inoculante. Estos lotes se suelen conservar bien liofilizados o congelados en Nitrgeno lquido. Los microbilogos cultivan los virus para aislar y producir cantidades suficientes tanto para su estudio como para la
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produccin de vacunas. En general, existen 3 mtodos para cultivar virus animales: animales vivos, huevos embrionados de pollo (o pato) y cultivos celulares. Animales vivos: En la actualidad, el uso de animales vivos para la produccin de vacunas vricas est prcticamente abandonado. Sin embargo, se ha utilizado para la obtencin de vacunas contra la viruela, rabia y fiebre amarilla. Huevos embrionados: Uno de los mtodos ms econmico y prctico para cultivar una gran variedad de virus animales es el uso de huevos de pollo embrionados. El descubrimiento de que los virus se podan cultivar por esta sencilla tcnica fue hecho en 1931. Los huevos embrionados pueden ser inoculados aspticamente con virus, usando una aguja y jeringa, a travs de un agujero que se realiza en la cscara. Este agujero se sella con parafina y los huevos se incuban a 36C durante 2 a 3 das para permitir que los virus se multipliquen. Los embriones de pollo contienen diferentes tipos de clulas y tejidos en los que varios virus pueden replicarse. Por ejemplo, la membrana corioalantoica permite el crecimiento de herpesvirus y varicela. La cavidad amnitica permite el crecimiento del virus de la gripe y de la parotiditis. Cultivo de tejidos: Es el mtodo ms usado para el cultivo de virus animales. Una vez que el cultivo celular ha crecido, es posible usarlo como un hospedador in vitro para un virus. Los virus invaden las clulas causando normalmente algn tipo de cambio visible en el crecimiento de las clulas de la monocapa cercanas al sitio de la infeccin inicial. Este cambio localizado, denominado efecto citoptico (CPE), es un deterioro de las clulas del cultivo de tejidos causado por el virus. La CPE puede tener diferentes apariencias dependiendo de un virus particular y del tipo de clulas en el cultivo.
Produccin de vacunas recombinantes (Hepatitis B) La hepatitis B es una enfermedad vrica que mata cada ao a dos millones de personas. En 1976 un equipo de investigacin de los laboratorios Merck (Dr. Hilleman) demostr experimentalmente la viabilidad de una vacuna contra el virus de esa forma de hepatitis (VHB); la inyeccin de antgeno particulado purificado, procedente del plasma de personas infectadas, protega a los animales de la infeccin por el VHB. La vacuna era eficaz, pero no poda producirse en grandes cantidades dada la limitacin de donantes. La solucin vino de la mano de la clonacin del genoma del VHB y la expresin de las partculas del VHB en Saccharomyces cerevisiae. La manipulacin gentica de la levadura permiti producir elevadas cantidades del antgeno de superficie con la misma conformacin que las partculas derivadas de los donantes de plasma. En la actualidad la
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vacuna se administra a varios millones de personas en todo el mundo, la enfermedad est desapareciendo y cabe esperar que la insuficiencia heptica y el cncer causados por esta infeccin pasen pronto a la historia. En la actualidad, la vacuna se administra a varios millones de personas en todo el mundo, la enfermedad est desapareciendo y cabe esperar que la insuficiencia heptica y el cncer causados por esta infeccin pasen pronto a la historia.
Transferencia
Las vacunas tradicionales se pueden clasificar dentro de tres tipos: vacunas atenuadas, vacunas inactivadas y vacunas toxoides. De las vacunas inactivas se puede decir: A. Son preparaciones obtenidas a partir de toxinas bacterianas inactivadas. Generalmente se utiliza el formol (c.a. 38% de formaldehido en H2O) B. En este tipo de vacunas es necesario dividir la cantidad total que se necesita para inducir la proteccin en varias dosis con intervalos de das o semanas debido a la alta concentracin de microorganismos muertos que se deben administrar Son preparaciones de bacterias o virus vivos que estn tan debilitados o alterados que ya no son virulentos, siendo todava capaces de provocar una respuesta inmune. Ninguna de las anteriores
C. D.
Para saber ms: Tipos de inmunidad Antgenos y anticuerpos La respuesta inflamatoria
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3.3.3. Leccin 35: Productos farmacuticos de origen microbiano
Produccin de protenas recombinantes humanas22 La recombinacin de genes humanos en el ADN de bacterias es una de las posibilidades que ofrece la biotecnologa, y que posibilita obtener protenas humanas con fines teraputicos. Por ejemplo, insulina humana obtenida a partir de la bacteria Escherichia coli. Esta tcnica es de gran valor porque las bacterias se reproducen rpidamente y pueden duplicar su nmero cada 20 minutos. De esta forma se pueden obtener en poco tiempo muchas copias del gen humano inserto en el ADN bacteriano, y producir grandes cantidades de protenas recombinantes. A escala industrial, la produccin de protenas recombinantes involucra las siguientes etapas: Fermentacin: las bacterias son cultivadas en tanques sellados (fermentadores) que contienen un medio de cultivo nutritivo. Extraccin: las clulas son centrifugadas para recuperar las protenas de su interior. Purificacin: se separa la protena recombinante de las otras protenas bacterianas. Formulacin: la protena recombinante es modificada para conseguir una forma estable y estril que puede administrarse teraputicamente. Cada una de las fases de la elaboracin implica un manejo muy cuidadoso de los materiales y un estricto control de calidad para optimizar la extraccin, la pureza, la actividad y la estabilidad del frmaco. Dependiendo del producto y del tipo de clula utilizada, la produccin de protenas recombinantes puede ser un proceso simple o ms complejo. Aunque la complejidad del proceso aumentara el costo final del producto, el valor nunca sobrepasar al gasto de aislar el compuesto desde su fuente original (por ejemplo, obtencin de insulina a partir de pncreas de porcinos o bovinos) para llegar a cantidades medicinales.
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http://www.argenbio.org/index.php?action=novedades&note=194
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Productos biotecnolgicos destinados a la salud humana La ingeniera gentica permite que numerosas protenas potencialmente teraputicas, que antes se producan solo en pequeas cantidades, puedan elaborarse en grandes cantidades. En la actualidad existen ms de 30 protenas aprobadas para su uso clnico, y cientos de genes de protenas teraputicas que se han expresado a nivel de laboratorio y que estn intentando demostrar su adecuacin clnica. La tabla que aparece a continuacin enumera una diversidad de protenas recombinantes que hoy se comercializan y emplean como frmacos para el tratamiento de diversas patologas en humanos. Tambin pueden producirse antgenos y anticuerpos como protenas recombinantes, que se emplean en la confeccin de kits o sistemas de diagnstico de diversas enfermedades.
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Tabla 8. Productos farmacuticos aplicados a la salud humana y que provienen de organismos genticamente modificados
Para saber ms: Protenas recombinantes Qu es la ingeniera gentica Produccin de antibioticos
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Transferencia
TESIS: Una de las aplicaciones ms importantes de la ingeniera gentica en el sector sanitario es la obtencin a escala industrial de productos propios de los seres vivos que stos fabrican en cantidades muy pequeas, pero cuya carencia implica graves desajustes del funcionamiento del organismo.De este modo, protenas como la hormona del crecimiento o la insulina, que el hombre produce en cantidad apenas detectable, puede ser sintetizada por la bacteria Escherichia coli, previa manipulacin gentica, en una cantidad superior al 10% del total de las protenas celulares. POSTULADO 1: Los conocimientos referentes a la expresin de protenas mamferos en microorganismos se han desarrollado con gran rapidez y el nmero de protenas humanas producidas mediante manipulacin gentica de Escherichia coli va aumentando da a da en la actualidad. POSTULADO 2: La tcnica utilizada para la obtencin de una protena concreta consiste en aislar el gen que est en el origen de su sntesis, recombinarlo con un vector adecuado e introducirlo en una bacteria que siguiendo la informacin del gen insertado, producir la protena en cuestin.
3.3.4. Actividades de repaso del captulo 9
Estudio de caso: La Tuberculosis La tuberculosis es una de las enfermedades ms antiguas que afectan a los seres humanos. Aunque se estima una antigedad entre 15.000 a 20.000 aos, se acepta ms que esta especie evolucion de otros microorganismos ms primitivos dentro del propio gnero Mycobacterium. Se puede pensar que en algn momento de la evolucin, alguna especie de micobacterias traspasara la barrera biolgica, por presin selectiva, y pasara a tener un reservorio en animales. Esto, posiblemente, dio lugar a un anciano progenitor del Mycobacterium bovis, que es la aceptada por muchos como la ms antigua de las especies que actualmente integran el denominado complejo Mycobacterium tuberculosis, que incluye M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum y M. microti. El "escaln" siguiente sera el paso del M. bovis a la especie humana, coincidiendo con la domesticacin de los animales por parte del hombre. As, posiblemente, pudo surgir como patgeno para el hombre. Para esta enfermedad, debes determinar la triada epidemiolgica: El agente etiolgico, El husped y El agente ambiental.
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Bibliografa Unidad 3
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Resumen de la Unidad 3
Las caractersticas que deben tener los microorganismos utilizados en la industria, es que deben ser pequeos, eficientes, con rpido transporte de nutrientes y elevada tasa metablica. Un microorganismo de uso industrial debe producir la sustancia de inters; debe ser genticamente estable y debe crecer rpidamente en cultivos a gran escala y no debe ser patgeno para el hombre, plantas o animales. El microorganismo debe tambin crecer en un relativamente barato medio de cultivo disponible en grandes cantidades. Bacterias y hongos descomponen la materia orgnica, convirtindola en materia inorgnica, para que sea vuelta a utilizar por los productores. La actividad de los microorganismos es muy importante para la transformacin y la vida de los suelos. Las bacterias y los hongos participan en los ciclos del carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y en la incorporacin del potasio y el magnesio, entre otros, para su asimilacin por los vegetales. Los procesos biolgicos que se desarrollan en el suelo, por los microorganismos son: humificacin (descomposicin de la materia orgnica por hongos, bacterias, actinomicetos, lombrices y termitas) y transformaciones del nitrgeno (amonificacin, nitrificacin, fijacin). Los microorganismos (bacterias y levaduras) se han utilizado desde tiempos antiguos para producir alimentos. Los microorganismos al crecer y utilizar los alimentos como fuente de nutrientes producen cambios en la apariencia, sabor, olor y otras cualidades del alimento. Estos procesos de degradacin son: Putrefaccin, Fermentacin y Enranciamiento. Infecciones alimentarias: Las ETAs producidas por la ingestin de alimentos o agua contaminados con agentes infecciosos especficos tales como bacterias, virus, hongos, parsitos, que en el intestino pueden multiplicarse y/o producir toxinas. Los Principios Generales de Higiene de los Alimentos constituyen una base para garantizar la higiene de los alimentos, haciendo hincapi en los controles esenciales en cada fase de la cadena alimentaria y recomendando la aplicacin del sistema de anlisis de riesgos y de los puntos crticos de control (HACCP) siempre que sea posible para potenciar la inocuidad de los alimentos.
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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y Escuela de Ciencias Bsicas, Tecnologa e Ingeniera Contenido didctico del curso Microbiologa

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA ESCUELA DE CIENCIAS BSICAS, TECNOLOGA E INGENIERA

PASTO Septiembre de 2011

ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

PAGINA 15 24 96 100 186 227

Institucin: Ciudad: Autora del Acadmico:

1. UNIDAD 1: TENDENCIAS DISCIPLINARES DE LA MICROBIOLOGA Esquema de la unidad

1.1. CAPITULO 1. INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA

1.1.1 Leccin 1. Definicin de Microbiologa

1.1.2. Leccin 2. Evolucin histrica

Figura 1. Experimento de la teora de la generacin espontnea

Figura 2. Experimento de Louis Pasteur

Tomado de: http://es.geocities.com/joakinicu/imagen0016.htm

1.1.3. Leccin 3. Clasificacin de los Microorganismos

Fuente: Dra. Carmen Eugenia Pia

Tabla 2. Ejemplo de clasificacin completa de un Microorganismo: la bacteria Neisseria meningitidis

1.1.4. Actividades de Autoevaluacin del captulo 1 CRUCIGRAMA: TRMINOS IMPORTANTES EN MICROBIOLOGA

1.2. CAPITULO 2. DIVERSIDAD MICROBIANA

1.2.1. Leccin 4. Organismos acelulares

Figura 4. Imagen y representacin grfica de un virus

Adaptado de: http://es.wikipedia.org/wiki/Ciclo_reproductivo_de_los_virus

Figura 6. Esquema del poder infectivo de los priones

1.2.2. Leccin 5: Microorganismos celulares procariotas: Las arqueobacterias

Estructura de las arqueobacterias

1.2.3. Leccin 6: Microorganismos celulares procariotas: Las Eubacterias

Figura 8. Esquemas representativos de diferentes tipos de bacterias

Adapatado de: http://encuentro.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_03_07.htm

Figura 11. Imagen de un micoplasma

Adaptado de: http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/01historia.htm

Figura 12. Representacin esquemtica de una bacteria

Tomado de: http://biolucena.wikispaces.com/Pared+celular

Figura 14. Representacin reproduccin de una bacteria

Fuente: Carmen Eugenia Pia Lpez

Figura 15. Clasificacin Morfolgica de las bacterias .............

Tomado de: http://1.bp.blogspot.com/_npnf5tssUy8/TAAxOcBBbII/AAAAAAAAAAM/8b497qtgNhE/s160 0/Faecimg_monera5.gif

Para saber ms:

1.2.4. Leccin 7. Microorganismos celulares eucariotas: Protistos

Figura 17. Esquema de un paramecio

Figura 18. Entamoeba histoltica.

Tomado de: http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2003/Balantidium/The_Parasite.htm

Figura 21. Imagen de una Giardia lamblia

Figura 23. Imgenes de algas

1.2.5. Leccin 8. Microorganismos celulares eucariotas: Hongos

1.2.6. Actividades de Autoevaluacin del captulo 2 CRUCIGRAMA

1.3. CAPTULO 3. GENETICA DE LOS MICROORGANISMOS

1.3.1. Leccin 9: Gentica bacteriana

1.3.2. Leccin 10. Gentica de protistos y hongos 7

Adaptado de: http://encyclopedia2.thefreedictionary.com/Fungal+genetics

Figura 32. Plasmodium falciparum

1.3.3. Leccin 11. Biotecnologa microbiana8

Adaptado de: http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/ec_49.asp

2. UNIDAD 2: CRECIMIENTO MICROBIANO

2.1. CAPTULO 4: CINTICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

2.1.1. Leccin 12: Cintica del crecimiento microbiano

2.1.4. Leccin 15: Parmetros microorganismos en los alimentos.

Esquema elaborado por la Dra. Carmen Eugenia Pia

2.1.5. Leccin 16. Mecanismos de Control para el crecimiento microbiano

2.1.6. Actividades de autoevaluacin del captulo 4 Observa el siguiente video http://www.youtube.com/watch?v=FMAGUV3tDKY

Responde: Cules son las diferente reas en un cuartod e esterilizacin?

2.2. CAPTULO 5: BIOSEGURIDAD Y EQUIPOS PARA LA PRCTICA DE LA MICROBIOLOGA

2.2.1. Leccin 17. Normas de bioseguridad

Para saber ms: Procedimientos en salud ocupacional:http://www.docstoc.com/docs/21504963/NORMASY-PROCEDIMIENTOS-EN-SALUD-OCUPACIONAL-BIOSEGURIDAD Normas de seguridad en laboratorio:http://www.lourdesluengo.es/practicas/normas.html

2.2.2. Leccin 18. Niveles de contencin en laboratorios

2.2.3. Leccin 19. Equipos y materiales utilizados en el laboratorio de microbiologa