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COMPOSICION QUIMICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Cuando se disea la frmula del medio de cultivo, es necesario conocer en qu categora est

incluido el microorganismo a cultivar para elegir acertadamente los componentes del medio: generalmente compuestos inorgnicos para microorganismos fototrofos y quimiolitotrofos, y orgnicos para quimioorganotrofos. Un medio de cultivo est integrado por: 1. Elementos energticos y constitutivos: a) Macroelementos (g/l): Fuente de carbono: puede ser CO2 compuestos carbonados orgnicos. Se utilizan en la construccin de innumerables molculas necesarias para la clula. Los hidratos de carbono se consideran fuente de carbono y energa por excelencia en los quimioorganotrofos. Los ms comunes son: - hexosas como glucosa, fructosa, galactosa; - pentosas como arabinosa, xilosa, ramnosa; - disacridos como lactosa, sacarosa, maltosa; - trisacridos como rafinosa; - polisacridos como almidn, glucgeno; - alcoholes como glicerol, sorbitol, manitol; y - glucsidos como salicina, y esculina. Fuente de nitrgeno: muchos organismos son autotrofos respecto de la fuente de nitrgeno y pueden crecer utilizando

molculas sencillas como NO3-, NH3 N2. El nitrgeno es metabolizado para proveer protenas, cidos nucleicos y polmeros de pared. Otros microorganismos pueden incorporar nitrgeno pirimdicas. ** En ciertos medios de cultivo para quimioorganotrofos, el aporte de nitrgeno es realizado por las peptonas, que son los productos de la hidrlisis cida o enzimtica de protenas de origen animal o vegetal (carne, soja, casena, gelatina, harina de maz y girasol). Esos productos de hidrlisis pueden tener longitud variable, desde aminocidos, hasta dipptidos, tripptidos, polipptidos, albumosas, proteosas. La hidrlisis cida puede ser realizada con HCl H2SO4 y presenta las siguientes desventajas: - el triptofano se destruye - se pierde el 10% de vitaminas presentes - desaparecen casi completamente los polipptidos Se prefiere la hidrlisis enzimtica que emplea diferentes proteasas actuando a pH especficos, ej. papana a pH 6.5, tripsina a pH 8.5, pepsina a pH 2. Las peptonas son fuente de nitrgeno y, en ausencia de hidratos de carbono en el medio de cultivo complejo, cumplen la funcin de fuente de carbono y energa. Aportan vitaminas del grupo B, trazas de metales y fosfatos que dan carcter buffer al medio. en forma de aminocidos, bases pricas o

Las peptonas de origen vegetal pueden aportar carbohidratos fermentables. Fuente de fsforo: se suelen agregar fosfatos de sodio o potasio que tambin confieren poder buffer al medio de cultivo (pH cercano a 7). Si se agrega yema de huevo al medio de cultivo, el aporte de P es realizado por los glicerofosfolpidos de la yema. El fsforo se incorpora a cidos nucleicos, fosfolpidos, polmeros de membrana, ATP, y sustancias de reserva (grnulos de volutina) Fuente de azufre: se adiciona como SO4=, cisterna o metionina. En la clula se incorpora a aminocidos y diferentes coenzimas. Fuente de calcio, magnesio y potasio: potasio, calcio y magnesio se adicionan como sales inorgnicas. Son cationes que estabilizan macromolculas aninicas. K+ acta como coenzima y estabilizador de RNA. Mg2+ se integra a colorofila en organismos fotosintticos. Ca2+ abunda en esporas como dipicolinato de calcio. Fuente de sodio: sodio contribuira a equilibrar la presin osmtica del medio extracelular. Es un catin requerido por bacterias haloflicas. Se suele suministrar como NaCl. b) Microelementos o trazas (mg ug/ml): suelen estar naturalmente macroelementos. * Frecuentemente esenciales: presentes como contaminantes de los

Mn: estimula el crecimiento, favorece la esporulacin. Fe: cofactor de enzimas para la funcin respiratoria en citocromos, catalasa y flavoprotenas. En adecuada concentracin favorece la sntesis de toxina diftrica. Co: interviene en la sntesis de vitamina B12. Cu: presente en oxidasa terminal de la cadena respiratoria. Esenciales en casos especiales: B, Al, Si, V, As, Se, Mo, Sn, Be, F, etc. Inhibidores del crecimiento: Au, Ag, Cd, Cr, Pb, y cualquier microelemento a concentracin mayor que 10-4 M puede resultar txico para el desarrollo de los microorganismos.