BIOTECNOLOGA VEGETAL: OBTENCIN DE PLANTAS IN VITRO.

Mederos-Molina Sebastiana, smedemol@ull.es Dpto. Biologa Vegetal, Fac. Farmacia Plasencia Cruz Ins del Carmen, incruz@ull.es Dpto. Anlisis Matemtico, Fac. Matemticas Varela Calvo Corina, cvarela@ull.es Didctica Ciencias Experimentales, C.S.E Universidad de Laguna, Tenerife, Islas Canarias, Espaa.

El objetivo de este trabajo es mostrar, de un modo divulgativo y didctico, la tcnica de cultivo de tejidos vegetales in vitro, lnea de investigacin de la Biotecnologa Vegetal. Pretendemos, por una parte, aclarar ciertas confusiones publicadas en algunos textos de bachillerato con relacin al tema [1], [3], y por otra, hacer referencia a otros libros de edicin muy reciente que ni siquiera lo aluden [4]. Llevar a cabo esta tcnica en enseanza no universitaria es complicado por lo costoso que resulta instrumentacin y productos qumicos- sin embargo, aclarar cmo transcurre es fundamental para entenderla. La Biotecnologa puede definirse como el conjunto de manipulaciones

biolgicas de clulas u organismos vivos, con fines agronmicos y/o medicinales, entre otros. Tiene dos lneas prioritarias: cultivos de tejidos vegetales in vitro e ingenera gentica. Nuestro trabajo se centra en la primera lnea. Las aplicaciones ms importantes del cultivo de tejidos vegetales in vitro en agricultura se orientan a la propagacin, al saneamiento y a la mejora gentica. El cultivo indefinido de tejidos vegetales tumorales o callo1 de Daucus carota* L. (zanahoria) y de Nicotiana glauca x Nicotiana langsdorffii+ L. (tabaco) se logr, por primera vez, simultneamente (1939) en Francia por Gautheret y Nobecourt* y en EEUU por White+; Por otra parte, Ball fue el pionero de la multiplicacin vegetativa in vitro o micropropagacin (propagacin vegetativa de plantas mediante el cultivo in vitro de meristemos, yemas, cualquier tejido u rgano de una planta, tambin denominado "explanto"), ya que en 1946, obtuvo el desarrollo in vitro de plantas enteras a partir de meristemos apicales de vstagos de Tropaeolum majus y de Lupinus albus L. [2].

Esta lnea requiere que el material a cultivar est asptico3 (esterilizado) y adems que se cultive en un medio nutritivo estril, constituido principalmente por sales minerales de macronutrientes y micronutrientes, vitaminas, hormonas (citoquininas y/o auxinas principalmente), azcar (sacarosa y/o glucosa entre otras), etc. Los medios nutritivos pueden permanecer en estado lquido o bien solidificarse con agar4 en base al tipo de cultivos in vitro a realizar (callos, cultivos de clulas, meristemos, explantos, etc.). Finalmente, el medio ya sembrado se deposita en cmara de incubacin o germinadora, equipada de factores ambientales controlados (luz, temperatura, humedad relativa) u optimizados para cada tipo de cultivo a realizar. La propagacin vegetativa in vitro o clonacin5 puede ser una alternativa econmicamente rentable, frente a los mtodos de multiplicacin clsicos (el sexual: germinacin de semillas y el vegetativo o asexual: esqueje, injerto, acodo). La micropropagacin masiva de clones5 puede obtenerse va organognesis directa, es decir, a partir de meristemo o yema (apical y/o axilar) aislada de un vstago6 . Esta va aporta estabilidad gentica o ausencia de mutaciones, y tambin plantas libres de virus (saneamiento), mediante el cultivo de pices meristemticos de vstago. La va indirecta o callo1 , consiste en regenerar plantas a partir de clulas desorganizadas y diferenciadas, pero siempre que stas reviertan al estado de meristemoide7 y/o embrioide8 . Sin embargo, la va "callo" se utiliza para obtener variantes somaclonales y mutantes, entre otros. En este poster, tras un anlisis previo de determinados libros de texto, recogemos la informacin confusa (tanto en el texto como en la imagen) que se ofrece en algunos de ellos, y proponemos la que debera aportarse, con el objeto de aclarar aspectos y evitar la creacin de errores conceptuales.

Glosario de trminos:
1

Callo. Tejido desorganizado formado por una masa de clulas vegetales tumorales

debido a que stas crecen de manera descontrolada. La mayora de estas clulas estn en estado diferenciado salvo algunas que revierten al estado indiferenciado7,8.
2

Micropropagacin. Propagacin vegetativa de plantas mediante el cultivo in vitro de

meristemos, yemas, cualquier tejido u rgano de una planta, tambin denominado "explanto".

Cultivos aspticos. Cultivos estriles libres de agentes contaminantes o ausencia de

microorganismos: hongos, bacterias, levaduras, virus, etc.

4

Agar. Producto qumico que obtenido de ciertas especies de algas, se utiliza para

solidificar los medios nutritivos.

5

Clonacin. Este trmino puede definirse como el uso de mtodos asexuales para

producir copias exactas de un individuo vegetal o animal. Para ello se precisa que las clulas a cultivar -aisladas o integrantes de tejidos u rganos- sean totipotentes

(pluripotentes) y que las mismas procedan de un organismo concreto para que posteriormente se desarrollen y formen un nuevo individuo idntico al primero.
6

Vstago. Para este caso concreto, brote o rama que se desarrolla en el tallo de una

planta, a partir de un tejido meristemtico o yema, ubicados en el pice y/o en las zonas axilares del tallo.
7

Meristemoide. Ndulo de tejido indiferenciado, a partir del cual se pueden obtener

nuevas clulas y/o estructuras adventicias.

8

Embrioide . Estructura embrionaria que se desarrolla mediante el cultivo in vitro de

clulas somticas. Trmino tambin vlido para los embriones adventicios que se desarrollan mediante las tcnicas in vitro pero de forma vegetativa. BIBLIOGRFA (1) GARCA, M.; FURI, J.; GARCA, L.; G ARCA, M.A. Y SENDRA, R. (1997). Biologa y Geologa. Documento: Cultivo In Vitro de Plantas, Bachillerato I, Editorial ECIR, Valencia, pp. 202. (2) GAUTHERET, R. (1983). Plant Tissue Culture: A History. Bot. Mag. Tokyo, no 96, pp. 393 - 410. (3) INCIARTE, M.R.; VILLA, S. Y MIGUEL G. (2001). Biologa: Biotecnologa, Bachillerato 2, Editorial Mc Graw Hill, Madrid, pp. 190 - 202, (4) JIMENO FERNNDEZ, A.; BALLESTEROS VZQUEZ, M. Y UGEDO UCAR L. (2000). Biologa: Los genes y la ingeniera gentica, Bachillerato 2, Editorial

Santillana, Madrid, pp. 178 - 193.