TRANSGNESIS, METODOS Y APLICACIONES Daniela Flrez Agudelo1, Edwin Santiago Restrepo Bastidas1 1.

Estudiantes de pregrado biologa, Facultad de ciencia exactas y naturales. Universidad de Caldas, Manizales 14 Febrero de 2014 Resumen: La transgnesis como herramienta de la ingeniera gentica, has sido ampliamente utilizada con el
potencial de transformar todo organismo que posea material gentico, desde el reconocimiento de los cidos nucleicos hasta la primera terapia gnica aplicada en humanos, involucra un sin fin de procesos, descubrimientos y nuevas metodologas que actualmente envuelven las transformaciones de diversos organismos (bacterias, plantas, hongos, animales y humanos). En esta revisin se fundamenta en los mtodos y aplicaciones que se obtienen a partir de estos organismos genticamente modificados (OGM), muchos de ellos involucrados en mejoramiento nutritivo, resistencias a plagas, vacunas comestible, la creacin de protenas recombinantes, entre otras.

Palabras clave: Transgnesis, metodologa, Organismo genticamente modificados, aplicaciones. Abstract: Transgenesis as a tool for genetic engineering has been widely used with the potential to transform the entire
organism that possesses genetic material from the recognition of nucleic acids applied to the first human gene therapy, involving a myriad of processes, discoveries and new methodologies that currently involve transformations of various organisms (bacteria, plants, fungi, animals and humans). This review is based on the methods and applications derived from these genetically modified organisms (GMOs), many of them involved in nutritional improvement, resistance to pests, edible vaccines, creating recombinant proteins, among others.

Keywords: Transgenesis, metodology, genetically modified organisms, application. 1. Introduccin La existencia de la creciente demanda de productos bsicos para la supervivencia humana (por ejemplo: la floreciente necesidad de vacunas econmicas, eficientes y seguras (Coku, 2007), aumento notorio de la necesidad de pptidos y protenas teraputicas (Almonacid et al., 2005), baja calidad de las tierras cultivadas llevando a malos productos (Ubalua, 2009), entre otras), ha conducido al hombre a buscar respuestas encaminadas en la manipulacin gentica, una de ella es la ingeniera gentica. La transgnesis es una herramienta de la biotecnologa moderna, es el proceso de transferencia de genes individuales entre organismos o modificacin de los genes de un organismo para suprimir o aadir un rasgo deseado (Ubalua, 2009), segn Parmat et al (2011) La ingeniera metablica permite el control directo sobre la maquinaria celular del organismo mediante mutagnesis o la introduccin de los transgenes, el Cassette es una porcin de ADN que contiene la informacin de un gen o de varios genes de inters en los cuales se busca agregarlos a un organismo con capacidades elevadas de produccin y estabilidad genomica presente en la progenie como sucede en casos de plantas transformadas por Agrobacterium tumefaciens (Shrawat et al.; 2006). Todos los seres vivos pueden sufrir procesos de transgnesis obteniendo as un organismo genticamente modificado (OGM). Desde los primeros proceso de transgnesis (1981) en ratones (Pearanda y Asencio, 2007), ha llevado a investigadores a usarlos para estudio del comportamiento de genes con respectos a enfermedades como la hipertensin (Stec, Davisson yCrut, 1998), algunos organismo modelos como Escherichia coli fueron los primeros en generarles ADN recombinante (1977) para que el mismo

produzca insulina y la hormona de crecimiento reemplazando a los bovinos como antiguos productores (Castaeda et al., 2009; Garrido, 2012). Solo estos pequeos inicios generaron una gran revolucin con la capacidad de transformar un sin nmero de organismo, encaminadas a la produccin de vacunas (Coku, 2007), biocombustibles (Hannon et al, 2010), biomonitores, frmacos, alimentos ms nutritivos, entre otros. Estos son algunos de los alcances que en la actualidad se han logrado por medio de la transgnesis, se har mencin de alguno de ellos a lo largo de la revisin, incluyendo la historia de la transgnesis, algunos mtodos transgnicos actuales en diferentes organismos (animales, plantas y microorganismos) y las aplicaciones que se tiene a partir estos OGM. 2. Historia de la transgnesis En el siglo XIX un qumico llamado Friedrich Miescher encontr un nuevo compuesto, caracterizado por la presencia de fosforo y un pH cido, a esta sustancia se denomin nucleina, posteriormente (1889) se le acuo el nombre de cidos nucleicos (Patino, 2006; Castaeda et al., 2009; Gonzalo, 2003), aos despus se descubrieron las bases nitrogenadas que los forman (1844 Guanina, 1885 Adenina, 1893 Timina, 1894 Citosina y 1900 Uracilo). Ya entrando en el siglo XX exactamente en 1903 Walter Sutton mostro al cromosoma como el transportador del material gentico, posteriores estudios determinaron que haba herencia ligada al sexo (Thomas Morgan), que los cidos nucleicos contenan fosfatos, pentosas y bases nitrogenadas (Aaron Theodore), que existen mutaciones producidas artificialmente, tal es el caso de los Rayos X (Herman Mller) (Patino, 2006). El principio del traspaso del Material gentico se determin parcialmente gracias al experimento de Federic Griffith (1923) que descubri la existencia de un principio transformante, observando el fenmeno de como cepas avirulentas de la bacteria Streptococcus pneumoniae (Rugosas) por algn motivo se volvan cepas virulentas (lisas) (Patino, 2006), no fue hasta 1944 que Oswald T. Avery y colaboradores encuentran que el principio transformante era la trasferencia de un fragmento de ADN (Castaeda et al., 2009), ya el culmen definitivo de que el ADN era el principio transformante lo lograron los esposos Martha Chase y Alfred Hershey en 1952, el cual experimentaron con el bacterifago T2 y la bacteria Escherichia coli demostrando al utilizar isotopos radiactivo (ADN 32P y Protena 35S) que el ADN es la molcula hereditaria (Patino, 2006; Castaeda et al., 2009), en los aos 50s Watson y Crick desvelan la estructura molecular del ADN en 1953 basndose en lo encontrado por Erwin Chargaff (complementariedad de las bases nitrogenadas), la controversial foto 51 realizada por R. Franklin y M. Wilkins (muestra que la estructura del ADN es repetida), entre otras (Gonzalo, 2003). Otros componentes del dogma central de la biologa fueron descubiertas, tal es el caso de los tipos de ARN: el ARN ribosomal en 1952, el ARN de transferencia en 1958 y 1960-1961 el ARN mensajero, culminando con el descifrado del cdigo gentico. Ya en la dcada de los 70s se descubre las enzimas de restriccin, se da el primer clonaje de genes en vectores (plsmidos), se produce en 1973 el primer organismo con ADN recombinante (Castaeda et al., 2009), se empieza a desentraar los mecanismos por el cual una bacteria Agrobacterium tumefaciens infecta a las clulas huspedes (Garca, 2012) y en 1975 se funda la primera empresa de ingeniera gentica (Genentech Incorporated) y en 1977 implanta en Escherichia coli el gen humano de la somatotropina para que este organismo produzca las hormona de crecimiento humana (Castaeda et al., 2009; Garrido, 2012), otro gran descubrimiento en la ingeniera gentica fue realizado por Sanger, Maxam y Gilbert

quienes en sus trabajos publicaron metodologas para la secuenciacin de la molcula de ADN (Garrido, 2012). A partir de todos estos descubrimientos, en 1981 mediante el uso de genes inyectados de proncleos de cigoto se logr una transformacin estable en ratones (Pearanda y Asencio, 2007), se presentaron los primeros reportes cientficos de plantas transformadas en 1983 tales como plantas de tabaco, de petunias y girasoles (Valderrama, Isaza y Kafuri, 2005), en ese mismo ao se encontraron los puntos clave para el uso de Agrobacterium tumefaciens en el traspaso de genes (Garcia, 2012), en 1985 Kary Mullis inventa la tcnica de PCR (Reaccin en cadena de la polimerasa) (Garrido, 2012), Sanford y colaboradores introducen en 1987 el mecanismo de bombardeo de partculas dndole el nombre de biolistica (Gonzales, 2013). En 1990 se dio la primera terapia gnica por el Dr. French Anderson y colaboradores aplicada a una nia de 4 aos (Gonzalo, 2003; Garrido, 2012). En los aos 90s se empieza los procesos de secuenciacin de genomas completos empezando por Haemophilus influenzae (1995), de Saccharomy cescerevisiae (1996), del gusano Caenorhabditis elegans (Lpez, 2008) y logrando en 2003 donde tanto entidad pblica (Francis Collins) como privada (Craig Venter) secuencian el genoma humano, posteriormente en 2010 se sintetizo qumicamente un organismo Mycoplasma capricolum(Garrido, 2012). 3. Tipos de transgnesis, mtodos y aplicaciones 3.1. Transgnesis en microorganismos Los microorganismos para convertir los carbohidratos, compuestos lignocelulosicos y otros desechos en alimentos ricos en protenas son eficientes debido a su capacidad de crecimiento rpido, ser fcilmente modificados genticamente, crecer en diferentes ambientes (suspensiones o en slidos) adems de presentar altos contenidos de protenas entre el 35 al 60% (Ubalua, 2007). Estas grandes caractersticas llevo a que estos organismos fueran el primer foco de atencin para procesos de transformacin gentica. Generalmente los procesos de transformacin en microorganismo se dan por electroporacin y agentes qumicos con choque trmico (Figura 1).Actualmente para organismo recalcitrante como Streptococcus mutans los aminoclays han sido exitosos para transformarlos (Choi et al, 2013). El proceso de electroporacin consiste en la formacin de poros en la membrana del organismo de inters, generado por un choque elctrico de corta duracin, que en consecuencia aumenta la permeabilidad de la membrana permitiendo que el ADN de inters (plsmido) entre a la clula, es un proceso reversible. Las clulas electrocompetentes (cepa) y los plsmidos con los genes de inters son colocados en celdas de electroporacin, en condiciones especficas (Reyes et al., 2010). El principal problema con este mtodo es la presencia de alta mortalidad celular (Li et al., 2007). En la transformacin por choque trmico, el objetivo radica en aumentar la temperatura abruptamente aproximadamente a 42 C (Sha et al., 2011). Segn Li et al (2007) dos elementos claves se utilizan en la transformacin del ADN por choque trmico: primero es que las clulas bacterianas hayan sido tratadas previamente con CaCl2, para hacer la membrana celular ms permeable y segundo un ADN circular recombinante (plsmido), un ADN circular con el gen diana a

ser transferido dentro de la clula, en este proceso el plsmido debe contener un gen de resistencia a antibiticos para la seleccin de cepas transformadas. Los aminoclays o 3-aminopropil filosilicatos fue un mtodo creado en 1997, son compuestos que constan de cationes metlicos (generalmente Mg2+ o Ca2+) que son la columna vertebral de la estructura la cual esta intercala por grupos amino unido por enlaces covalente. Estos animoclays forman un complejo con el plsmido (complejo ADN-aminoclay) lo cual facilita la penetracin del plsmido por la membrana del organismo. Esta tcnica es ms efectiva cuando el catin tiene menor tamao, adems que es til para transformar cepas nativas, como es el caso de Streptococcus mutans (Choi et al, 2013).

Cassette

Bacteria Poro

Plsmido

Electroporacin

Choque trmico
42 C

Ambas tcnicas generan poros reversibles en la membrana, va de entrada para los plsmidos.

Se obtiene las bacterias con el plsmido de inters Figura 1 Mtodos de transformacin en microorganismos.

3.1.1 Aplicaciones El primer organismo con ADN quimrico fue realizado por la primera compaa de ingeniera gentica (Genentech Incorporated), el cual en 1977 transformaron a Escherichia coli para que produjera la hormona de crecimiento humana (Castaeda et al., 2009; Garrido, 2012). Segn Ubalua(2009) algunos microorganismos son utilizados para producir ingredientes alimentarios tales como cido actico, cido ctrico, etanol, niacina, vitamina B 12, goma de xantano, y el glutamato monosdico. Los procesos de electroporacin se ha realizado para transformar cepas de Agrobacterium tumefaciens, punto importante para los procesos de transformacin a partir de este organismo en plantas. Muchos microorganismo han sido el foco para la generacin de vacunas gnicas, tal es el caso de Salmonella spp para combatir contra la Vaccinia, Bacillus para el picornavirus y Escherichia coli contra la varicela-zoster (Lpez et al, 2004). Algunas cepas como la S. typhi Ty21a es efectiva contra la fiebre tifoidea y la cepa de V. cholerae produce vacuna contra la clera (Guilln, Mendieta y Sanoja, 2009). 3.2. Transgnesis vegetal Segn Gonzales (2013) La transformacin gentica en plantas presenta varios mtodos que permiten la introduccin e integracin de ADN forneo en el genoma y as poder seleccionar eficientemente las clulas transformadas permitiendo la regeneracin completa de las mismas, los mtodos bsicos para la transgnesis vegetal son mediante Agrobacterium tumefaciens y biolstica (Figura 2). 3.2.1Transformacin mediada por Agrobacterium tumefaciens Agrobacterium tumefaciens perteneciente a la familia Rhizobiaceae, genero Agrobacterium, es una alfa-proteobacteria (Garcia, 2012),que se presenta naturalmente en el suelo y produce la enfermedad nombrada como agalla, que se caracteriza por la neoformacin del tejido vegetal de la planta afectada (Gonzales, 2013). Agrobacterium tiene la capacidad de transferir parte de su ADN al genoma de su husped especialmente en clulas vegetales (Ziemienowicz, 2013). Principalmente causa el tumor en la mayora de la dicotilednea y en algunas monocotiledneas (Garca, 2012). La transformacin por este organismo ha demostrado ser un mtodo eficaz para la eliminacin de genes marcadores a partir de cereales transgnicos, en la regeneracin de plantas con nmero bajo de copias del transgen, adems que son ms estable en las generaciones y reduce el silenciamiento de genes (Shrawat et al.; 2006). El traspaso de genes por Agrobacterium tumefaciens a las clulas vegetales consiste en seis pasos: (1) Seleccin del vector (plasmido) y cepa bacteriana. Desde el descubrimiento de vectores binarios en los cuales un plsmido contena los genes vir y el otro el ADN-T, han permitido mejorar los sistemas de transformacin en plantas, algunos aplicados como pBIN, pCB, pGA y pGreen que se caracterizan en el tamao, en el nmero de restricciones del DNA-T, presencia de genes reporteros, orgenes de replicacin y el sistema de seleccin en

bacterias y plantas con respecto al nativo. Algunos plsmidos usados ampliamente son pCAMBIA, pSITE, pBIN, pEND4K, pGPTV, entre otros (Garca, 2012). Algunas cepas como LBA 4404 (Shrawatet al., 2006) y EHA 101C58 de Agrobacterium tumefaciens viene conplsmidos (pTiBo542 y pFAJ3000) que contienen resistencia a antibiticos especficos como es el caso de la Kanamicina, Estreptomicina y Espectinomicina como marcador de transformacin y otros genes como Intron -glucuronidasa (uidA) de carcter informador (Hamama et al., 2010).Otras cepas pertenecientes a Agrobacterium de origen Cromosomal C58 son la GV2260, EHA105, EHA101, AGL-1 y de origen Ach5 la cepa LBA 4404 (Garca, 2012). (2) Construccin del Cassette El Cassette contiene los genes de inters adems del promotor, terminador (Secuencias poli A) y secuencias pegajosas (Sticky ends) que la enzima de restriccin especifica reconocer, son los que forma el material gentico que Agrobacteriumintroducir en el genoma vegetal. Hay dos formar en que se puede construir un Cassette: (a) Consisten en tomar antecedentes del gen de inters (buscar secuencia ya estandarizadas en el Genbank u otra base de datos) por medio bioinformticos. (b) Consiste en determinar experimentalmente un gen de inters el cual se le realizaran estudios moleculares para posterior secuenciacin. Despus se reconoce la secuencia y se manda a crear el Cassette para su posterior integracin al vehculo (plsmido). (3) Clonaje del Cassette en plsmido En la integracin del plsmido con el Cassette se busca que este produzca grandes cantidades de copias, la cepa generalmente utilizadas es la Escherichia coli, la cual se encarga con su maquinaria celular producir la clonacin del plsmido, a lo largo del proceso estas cepas son colocadas en un medio de seleccin, adems de realizarse un proceso molecular (PCR) para determinar si el plsmido de inters est en la cepa (Reyes et al., 2010). (4) Transformacin de Agrobacterium Para transformar la cepa de Agrobacterium, primero se extrae de Escherichia coli los plsmidos clonados, para que despus por procesos de electroporacinse le introduzcan a Agrobacterium.En un acaso particular utilizaron alcuotas (1mg) que contena el plsmido de inters y se aadieron 100ml de clulas de Agrobacterium en un medio LB (Luria Bertani) y posterior a la transformacin se confirma la presencia del Cassette por asilamiento de ADN y anlisis de restriccin(Shrawat et al.; 2006). Se realiza proceso de seleccin (Resistencia a antibitico). (5) Transformacin Vegetal (a) Preparacin de Agrobacterium Generalmente la preparacin de las cepas transformadas de Agrobacterium se da en medio LB, que consiste en tres componentes principalmente, un mineral NaCl, la triptona (fuente de pptidos

pequeos y aminocidos) y extracto de levadura (subproducto de la digestin de Saccharomy cescerevisiae (Garboza et al., 2011), adems de contener el antibitico respectivo. En el caso de las cepas LBA4404 (pUAGB7) y LBA4404 (pYF133) estas se incuban durante 3 dias a 28C, para posteriormente ser recogidas y aplicadas al co-cultivo con el material vegetal a transformar(Shrawat et al., 2006). (b) Preparacin de tejido vegetal El tejido a utilizar puede provenir de muchas partes de la plantas desde disco de hojas (Hamama et al., 2010), semillas (Chaudhury et al., 2006), embriones (Shrawat et al., 2006), entre otras. Al tejido seleccionado se le hace un proceso de esterilizacin y se le corta en porciones especficas para que Agrobacteriumpueda infectarlo. (c) Inoculacin / Infeccin Tanto la preparacin de Agrobacteriumy el material vegetal se renen en un recipiente donde ocurrir la infeccin (paso del transgen al genoma de la planta), se realiza un medio de seleccin con el antibitico especifico. Shrawat y colaboradores (2006) utilizaron entre 40 y 50 embriones inmaduros que sumergieron en 10-15 ml de medio de co-cultivo lquido (PL-CL) que contiene clulas de Agrobacterium en la densidad de 109 clulas / ml, todo lo anterior se coloc en una placa de Petri de un dimetro de 100 mm. El tiempo de exposicin a la infeccin es un factor primordial para lograr una tasa de transformacin alta, la mayora de las especies el ptimo tiempo de infeccin es de 48-72h (Ziemienowicz, 2013). (d) Induccin de genes vir La maquinaria molecular que posee Agrobacterium tumefaciens ha sido ampliamente estudiada, este organismo posee grupos de genes que le permite reconocer la clula vegetal y de all transportar su ADN-T e integrarlo al genoma del husped, el objetivo de este sistema resulta en suprimir el sistema inmune de la planta (Pitzschke y Hirt, 2010). Generalmente los portales de entrada para Agrobacterium tumefaciens son heridas en el individuo, estas heridas provocan la formacin de fenoles y azucares, seales que la protena VirA reconoce, luego un mecanismo de activacin (fosforilacion) hacia VirG genera la posterior expresin de los genes vir (virA, virB, virC, virD, virE, virF y virG), la protena VirD2 captura el ADN-T y lo saca del plsmido para transportarlo, las protenas VirB1-11 genera pequeos puentes entre la bacteria y la clula vegetal, estos puentes son la entrada de los factores vir ( virE2.virE3 y virF) y el paso del ADN.T, cuando los factores vir se encuentra en la clula vegetal se unes a VirB1-11 que lleva el ADN-T, para posteriormente conducirlo a la integracin en el genoma vegetal (Pitzschke y Hirt, 2010). (e) Seleccin / Regeneracin vegetal El proceso de seleccin usualmente se utiliza Kanamicina, timentina, estreptomicina, entre otras. Al presentarse el traspaso del Cassette al genoma vegetal este adquiere la resistencia al antibitico de seleccin, de all determinar que clulas fueron transformadas. Para los procesos de regeneracin diferenciadas por los requerimientos individuales de la planta ya transformadas, se concibe tres posibilidades ya sea por organognesis (Shrawat et al., 2006), callognesis y embriognesis.

Permiten empezar la formacin de callos, o estructuras diferenciadas que en su genoma tiene ADN forneo, se inducen mecanismo de crecimiento y enraizamiento hasta la presentacin de una plntula para ser llevada despus a un invernadero. (6) Confirmacin molecular del transgen Los procesos moleculares determinan la presencia de un gen de inters, generalmente se llevan a cabo procesos de amplificacin de secuencias especificas (PCR) (Chaudhury et al., 2006; Hamama et al., 2010), otros autores optan por otras herramientas como anlisis por restriccin (Southern blot) (Shrawat et al., 2006), aplicadas a ARN (Northern blot) y a protenas (Western blot). 3.2.2. Transformacin mediada por biolstica. La tcnica de biolstica (balstica biolgica) es un mtodo que consiste en el bombardeo de microproyectiles de oro o tungsteno de tamao de 1.3 m cubiertos con el ADN de inters, el cual es lanzado a la clula para transformarla, estas micropartculas son aceleradas por plvora, helio o aire comprimido (Gonzales, 2013), La transformacin mediada por biolstica consiste en cinco pasos: (1) Seleccin de partculas Para la seleccin de la partcula se busca una compuesto inerte que no interaccione con el ADN, oro o tungsteno aproximadamente 1.3 m de tamao son los ms usados (Thomson, 2004; Gonzales, 2013). Algunas plantas son susceptibles al tungsteno (toxico), por ende se tiende a utilizar el oro (Clark y Pazdernik, 2012). (2) Construccin del Cassette La construccin del Cassette es igual que el presentado en Agrobacterium tumefaciens. (3) Preparacin de la partculas/Bombardeo Todo el equipo consiste en varias partes,la insercin del Cassette a las partculas es una de ellas, generalmente consiste en desinfectar las partculas, precipitar el plsmido sobre ella (contiene ADN, Partculas de tungsteno, CaCl2), centrifugar las muestras, todo el proceso se realiza en una cmara de flujo laminar.Las muestras vegetales previamente tratadas se colocan en una caja de Petri en el sistema de flujo de partculas, este contiene la pistola donde se cargara y dispara las partculas, una manguera del paso del aire o helio y una malla para direccionar la rfaga de partculas hacia las clulas a transformar (Chavarri et al., 2004). (4) Seleccin/Regeneracin de clulas vegetales (in vitro) Despus del bombardeo, las clulas son transferidas a un medio de seleccin que contiene el antibiticoespecfico. Las clulas embrionarias bombardeadas son transferidas a un medio B5 durante 3 meses, subcultivadas una vez al mes (Chavarri et al., 2004), posterior a ellos las clulas transformadas ya sean por organognesis, callognesis o embriognesis, se empiezan a diferenciar, formar plntulas para luego pasarlas al invernadero. (5) Confirmacin molecular del transgen

Los procesos de reconocimientos de secuencias especificas (transgen) es igual a la presentada por Agrobacterium tumefaciens.

Planta de inters

Agrobacterium tumefaciens Cepa bacteriana Vehculo (plsmido)

Biolstica

Seleccin de partcula

(1)

(a) Bioinformtica

Construccin del Cassette

(b) Experimentacin

(2)

Promotor Stickyend

TRANSGEN

Terminador (PoliA)

Stickyend

(3) Clonacin del plsmido (4) Transformacin de Agrobacterium (Plsmido) (5) Transformacin de Planta
- Preparacin del M. Vegetal - Preparacin de Agrobacterium - Infeccin - Induccin de genes vir - Regeneracin

(3) Preparacin de partculas

(4) Seleccin/Regeneracin

(6)
Convenciones Gen de seleccin (antibitico) Genes vir

Reconocimiento del transgen por Tcnicas moleculares (PCR, Southernblot, Northernblot, entre otras.)

(5)

Planta transgnica

Figura 2. Pasos para la transformacin mediante Agrobacterium tumefaciens y biolstica

3.2.3 Aplicaciones La transformacin en plantas ha sido ampliamente utilizada en la formacin de cultivos transgnicos para mejorar caractersticas como valor nutricional (Ubalua, 2009), resistencia a plagas (Dale et al., 2002), pigmentacin floral (Hamama et al., 2010), produccin de frmacos (Coku, 2007; Almonacid et al., 2005) y como biomonitores (Ziemienowicz, 2013). Algunos organismo como algas han sido genticamente modificadas tal es el caso de Chlamidomonas reinhardtii (Radakovits et al., 2010), Nannochloropsis sp (Anandarajah et al, 2012),Dunalliela tertiolecta (Georgianna et al, 2012) y Phaedodactylum Tricornutum (Radakovits, Eduafo and Posewitz, 2010), encaminadas en mejorar la produccin de biocombustibles. La resistencia a plagas fue uno de los primeros focos para procesos de transgnesis, el ejemplo ms nombrado es el caso del Bacillus thuringiensis (Bt) que es una bacteria del suelo inofensiva que produce una toxica letal para ciertos insectos (Dale et al., 2002) y que ha sido ampliamente utilizado como agente biolgico para el control de plagas debido a la produccin de protenas (insecticidas), una de estas protenas es codificada por el gen (Cry) que produce endotoxinas deltas el cual fue transferido a Zea mays (Belzile, 2002). Los procesos de transformacin genticas se han aplicado a mejorar el valor nutricional de algunos alimento, estas transformaciones mediante Agrobacterium tumefaciens han permitido aumentar los niveles de Beta-carotenos en canola, soya y maz, aumentar la composicin de aceites y aumentar los niveles de vitamina A en el arroz (Ziemienowicz, 2013). En la horticultura la transgnesis mediada por Agrobacterium tumefacienstiene un gran potencial y ahora hay algunos ejemplos de variedades transgnicas ornamentales que estn disponible tales como Hydrangeamacrophylla (Hamama et al., 2010), Clavel (Dianthuscaryophylus), Crisantemos (Dendranthemax glandiflora),Orquideas (Cymbidium spp., Oncidium, Phalaenopsis), Petunia (Petunia hybrida), Rosa (Rosa hybrida) (Ziemienowicz, 2013). Los logros obtenidos por la trasformacin de plantas mediada por Agrobacterium tumefaciens segn Ziemienowicz (2013) han permitido la produccin de varias protenas, tales como anticuerpos recombinates (planticuerpos) y vacunas comestibles, por ejemplo: enterotoxina de Escherichia coli, protenas de la capside del virus de Norwalk, el antgeno de superficie de la hepatitis B, protenas del virus de la fiebre aftosa por la alfalfa transgnica, al utilizar papa transgnica como transportador de anticuerpos facilita su uso (Ziemienowicz, 2013), evitan la contaminacin por patgenos humanos como puede ocurrir en los cultivos de clulas de mamferos adems de que estos organismos (plantas) producen mayores cantidades de protenas, actualmente, las vacunas contra el ntrax y virus de la rabia se estn produciendo en plantas (Coku, 2007). Otras aplicaciones de plantas transformadas se muestran en la figura 3. En la transformacin de algas, un caso particular se present en el alga roja Phaedodactylum Tricornutum, el cual por biolstica se le transfiri los transgenes a cepas P. Tricornutum (CCMP632), estos genes codifican thioesterasa implicadas en la formacin de TAGs (triacilgliceroles), como resultado se dio una mayor acumulacin de lpidos de cadenas cortas (cidos lurico y mirstica), til para la formacin de TAGs, pero con un crecimiento celular ms lento con respecto a la cepa nativa (Radakovits, Eduafo and Posewitz, 2010).

Alimentos con mayor nivel nutritivo

Biomonitores

Mayor productividad

Protenas recombinantes

Evita el uso de agroqumicos

Figura 3. Aplicaciones de plantas transgnica 3.3 Transgnesis animal En los animales superiores, la informacin genticase transmite por reproduccin sexual. Es lo que seconoce como transmisin gentica vertical. Sin embargo, en 1981, Gordon y Ruddle demostraron la integracin y transmisin estables (a travs de la lnea germinal) de genes inyectados en proncleos de cigotosde ratn obtenidos por fecundacin in vitro. Eran los primeros ratones transgnicos. Es decir, se tratabade una transmisin gentica horizontal, que se denomin transgnesis. El paso siguiente consisti en probar que tambinse podan obtener ratones transgnicos que incorporaran en su genoma un gen (transgn) de otra especie. As, en 1982, Palmiter y col. obtuvieron ratones transgnicos gigantes al inyectar en el proncleo de un cigoto de ratn el gen de la rata que codifica la hormona del crecimiento. Incluso, estos mismos investigadores, obtuvieron tambin ratones transgnicos gigantes cuando el transgn introducido, que codificaba la hormona del crecimiento, era de origen humano (Pearanda y Asensio, 2007). 3.3.1 Microinyeccin pronuclear En la dcada del 80 ocurri un importante avance en la tecnologa de animales transgnicos que marc el curso de la investigacin en este campo por al menos dos dcadas. Gordon y

colaboradores describieron una tcnica donde el ADN desnudo fue inyectado en el proncleo de un ovocito de ratn recientemente fertilizado, el que posteriormente se transfiri a hembras receptoras sincronizadas. Este experimento demostr que era posible usar un plsmido recombinante como vector para transferir genes forneos directamente hacia el embrin (Narbon, 2008). Esta tcnica consiste en extraer vulos de hembras en las que se ha inducidouna superovulacin y han sido fertilizadas invivo, o bien se fertilizan posteriormente in vitro. Utilizando un microscopio, con una micropipeta, se inmoviliza el vulo fecundado y se inyecta en unode sus proncleos una solucin que contiene muchas copias del transgn. Posteriormente, estos vulos fecundados y microinyectados se introducen en madres receptoras, previamente sincronizadas hormonalmente, para gestarlos, aplicando la tcnica de la transferencia de embriones. Finalmente, los recin nacidos son examinados paraver si en ellos se ha producido la incorporacin del transgn.

Figura 4. Microinyeccin de DNA en ovocito fertilizado. - pipeta de sujecin; -ovocito fertilizado en el que evidencian los dos proncleos (rojo y verde); - pipeta de inyeccin, a travs de la cual se inyecta la solucin que contiene el DNA del transgn de inters en uno de los proncleos. 3.3.2 Vectores virales Son todos aquellos que han sido obtenidos a partir de un virus, tratando de eliminar sus caractersticas patolgicas y adaptarlos a una nueva funcin como transportadores de material gentico heterlogo. Pretenden aprovechar las ventajas que aportan los virus como vectores naturales que han sufrido procesos de evolucin complejos a lo largo de millones de aos para optimizar su funcin de introductores de material gentico en las clulas que invaden. Para modificar un virus y transformarlo en un vector de transferencia gnica en animales, el primer paso es bloquear su capacidad de propagacin eliminando los genes responsables de su replicacin. El segundo paso es la eliminacin de parte del genoma viral para crear espacio para introducir el material gentico de inters (gen o genes, ms los elementos de control) (Narbon, 2008). Las partculas virales silvestres no se pueden emplear directamente como vectores de expresin, es necesario convertirlos en virus deficientes en su replicacin dentro de la clula diana. De esta forma, el vector viral slo se podr multiplicar en las clulas de empaquetamiento, que son lneas celulares modificadas que tienen la propiedad de ensamblar a los virus y producir partculas virales que poseen los genes quecodifican para las protenas virales y para el gen de inters (Legorreta-Herrera, 2012).

Los vectores lentivirales que contienen el gen de la protena fluorescente verde se han utilizado con xito para seleccionar embriones transgnicos antes de la transferencia a una madre sustituta. Los vectores lentivirales han dado como resultado la eficiencia de la transgnesis de 80 % en ratones, 46 % en ratas, 70 % en los cerdos, y 100 % en el ganado vacuno. La alta eficiencia de la transgnesis lentiviral en ambos modelos animales y ganado, hacen que el procedimiento de esta tecnologa tenga un inters de probar una modificacin gentica en ratones, y ms tarde ampliarlo en el ganado (Ramos, 2010). 3.3.3 Transferencia de genes mediada por esperma (SMGT) En 1989, se describi por primera vez un nuevo mtodo parala generacin de animales transgnicos, la transferencia de genes mediada por esperma (SMGT), la cual consiste en la introduccin de ADN forneo en gametos masculinos antes del proceso de fertilizacin (Pearanda y Asensio, 2007), se basa en la capacidad intrnseca de los espermatozoides de unirse e internalizar DNA exgeno que, posteriormente, podr ser transferido alhuevo durante la fertilizacin. Esta habilidad de los espermatozoidespor capturar DNA exgenofue descubierta en 1971, pero el hallazgo,con sus importantes implicaciones,fue ignorado durante cerca de 20 aos.La transferencia gnica mediada por esperma en vertebrados se ha desarrollado y sufrido muchos cambios en los ltimos aos. La incubacin de las clulas espermticas con ADN forneo seguida de fertilizacin in vitro o in vivo ha generado conejos, cerdos, ratones, ovejas, vacas, peces, pollos transgnicos. La definicin y el establecimiento de los protocolos segn la especie a transformar son y ser un tema valioso en biotecnologa (Narbon, 2008).

Extraccin del eyaculado Obtencin de semen transgnico

ADN

Gestacin de embriones por hembras sincronizadas

Inyeccin intracitoplasmatica de esperma transgnico en ovocitos de ratn, seguida de cultivo de cigotos hasta en embriones en estadio de blastocisto.

Estudio de la progenie y seleccin de fundadores

Descendencia Figura 5. Produccin de ratones modificados genticamente mediante SMGT

3.3.4 Gene targeting La microinyeccin es un mtodo para generar animales transgnicos muy ineficiente, debido a que conlleva la integracin aleatoria del gen forneo en el genoma receptor con consecuencias, el transgn se introduce en el genoma receptor deforma aleatoria, por lo que slo en un pequeo porcentaje se sita en el lugar adecuado para conseguiruna buena expresin en el animal transgnico. No todos los animales que nacen han incorporadoa su genoma el transgn (no son transgnicos, por tanto), el gen exgeno puede insertarse en un lugar errneo, por ejemplo en medio de un gen del genoma receptor, interrumpindolo y causando su mutacin y, con ello, la muerte del embrin o alteraciones en el animal transgnico nacido. Se produce un patrn variable de expresin del genexgeno en la progenie transgnica, a menudo enmosaico (Pearanda, 2007). La tcnica de gene targeting evita esos problemas, al generar una modificacin gentica dirigida, especfica y controlada, basada en la introduccin o en la eliminacin de DNA en lugares precisos del genoma, utilizando la recombinacin homloga de esas secuencias de DNA forneas con los genes autctonos. Esta tcnica requiere la utilizacin de clulas madre embrionarias (ES cells, embrionic stem cells), que son pluripotentes y que, una vez modificadas genticamente, son inyectadas en blastocistos para generar embriones quimera (Asensio, 2007). 3.3.5 Aplicaciones Desde el principio de los tiempos, el hombre ha pretendido cambiar las caractersticas de los animales domsticos queriendo aadir aquellas que mejoraban sus condiciones como animales de compaa, de produccin, de trabajo o de abasto, mediante la eleccin de los ms aptos y el cruzamiento de los ejemplares que mostraban mejores caractersticas: mayor produccin de leche o carne o ms fuerza y resistencia. Se escogan aquellos ejemplares con caractersticas deseables, aparendolos entre s y con su descendencia, para conservar los rasgos de inters, recurriendo al mestizaje cuando se adverta la aparicin de caractersticas fenotpicas indeseadas debido al parentesco (Pearanda y Asensio, 2007). Luego de algunos problemas iniciales, el desarrollo y comercializacin de cultivos modificados genticamente registr un crecimiento importante, pero los productos originados de animales de granja modificados genticamente no han aparecido a los principales sistemas de produccin de alimentos. Aunque se han introducido experimentalmente ms de 50 transgenes diferentes en animales de granja, estas iniciativas requieren todava unos conocimientos tcnicos considerables y no son tan habituales como en el caso de las plantas (Narbon, 2008).

Hoy en da, gracias a la reproduccin asistida y a la biotecnologa, se planea y dirigen los procesos reproductivos, se transfierenlos rasgos deseados y se apura la mejora gentica. El intervalo intergeneracional puede disminuirse sensiblemente gracias a la combinacin de la inseminacin artificial, que es la ms antigua y utilizada de las tcnicas de reproduccin asistida, con las tcnicas ms recientes como son: el estro sincronizado, la superovulacin, la extraccin de vulos de hembras sexualmente inmaduras aun fuera de la poca de cra, o la produccin de embriones in vitro y la transferencia de embriones. Adems, es viable seleccionar el sexo de la progenie con semen sexado para la inseminacin; se puede desarrollar la seleccin gentica de individuos mediante marcadores moleculares asociados a caracteres de inters. (Asensio, 2007). En el ganado, por razones econmicas, los cigotos para la microinyeccin de ADN se producen despus de ovarios. Mientras que esta fuente de cigotos es barata y fcilmente disponible en cantidades casi ilimitadas, tiene la desventaja en que no se conoce el desarrollo de los animales donantes. En cabras, el mtodo de eleccin para la generacin de animales transgnicos ha sido la microinyeccin de cigotos producidos in vivo recuperados del oviducto 15-20 h despus de la hora estimada de la fertilizacin. En este mtodo, las cabras de los donantes se superovularon, inseminadas o apareadas luego de la deteccin de calor, y el oviducto se vaca para recoger los presuntos cigotos. Aunque los resultados de este mtodo en cigotos de alta capacidad de desarrollo, el procedimiento se caracteriza por una gran cantidad de variabilidad en el nmero de proncleos (NP) cigotos etapa recuperados por donante. (Baldassarre, 2002). El uso de vectores lentivirales ha permitido altas tasas de transgnesis en ambos modelos animales y ganado, reduciendo as los costes de produccin de animales transgnicos, y permitido la transgnesis para la produccin de protenas recombinantes. Aunque la transgnesis lentiviral tiene un gran potencial para la produccin de grandes cantidades de protenas recombinantes en la leche de ganado transgnico, an hay varios obstculos que deben ser superados. Para el ganado, la posibilidad de elegir embriones transgnicos antes de su transferencia a la madre de alquiler es un tema muy importante, ya que ahorrara tiempo, trabajo y dinero al eliminar la transferencia de embriones no transgnicas. La probabilidad de la seleccin temprana de embriones de ratones transgnicos que llevan un gen valioso se explora, utilizando GFP como marcador de seleccin. Por consiguiente, se disea y construye un vector lentiviral que contiene dos casetes de expresin: la primera contiene la secuencia codificante para el dominio extracelular de la glicoprotena E2 del virus de la PPC, bajo el control de un promotor especfico mamaria. El segundo casete de expresin contiene la secuencia de codificacin para GFP guiado por el promotor temprano de SV40. La glicoprotena E2 se selecciona especficamente entre VPPC, ya que en estudios anteriores, esta molcula se expres de manera muy eficiente en la glndula mamaria de cabras translcidas con vectores adenovirales. Obtenida de la leche glicoprotena E2 era un antgeno excelente, con inmunidad slida y duradera en los cerdos vacunados. Por lo tanto, la glicoprotena E2 era un excelente modelo que se expresa en la leche, y su produccin a gran escala en el ganado transgnico es uno los principales objetivos. El promotor de SV40 es seleccionado para dirigir la expresin de la GFP, en lugar de un promotor ms fuerte comn (por ejemplo, CMV o PGK), con el fin de reducir la competencia por los factores de transcripcin, y por lo tanto minimizar la interferencia con el promotor especfico de tejido (Ramos, 2010).

Los ratones transgnicos se usan ampliamente en la investigacin biomdica para estudiar la expresin gnica, la biologa del desarrollo, y los modelos de terapia gnica (Van Keuren, 2009). La investigacin sobre BAC (cromosoma artificial bacteriano), transgenes de expresin directa de genes a niveles fisiolgicos con la misma temporizacin y de expresin de los patrones de desarrollo como los genes endgenos en modelos de animales transgnicos. En ratones transgnicos ha dado lugar a la identificacin de las mutaciones genticas que causan enfermedades y a la identificacin de elementos reguladores de genes; los transgenes de BAC con las instrucciones genticas necesarias para la expresin de genes cell specific directa se pueden modificar de modo que las protenas o los reporteros se expresan en las poblaciones de clulas definidas. El mtodo ms rpido y eficaz para generar BAC ratones transgnicos es la microinyeccin directa de ADN BAC en el proncleo de los huevos fertilizados de ratn, BAC transgnesis mediante microinyeccin es un mtodo eficaz y eficiente para producir modelos de ratones genticamente modificados. Preguntas comunes sobre microinyeccin BAC pronuclear incluyen 1) el mejor mtodo para purificar el ADN de BAC para la microinyeccin, 2) la mejor amortiguacin microinyeccin, 3) la concentracin de ADN microinyeccin ms eficaz, y 4) si ADN lineal o circular microinyeccin molcula es ms eficiente, la microinyeccin de ADN BAC a una concentracin de 0,5 ng / ul asegura una alta supervivencia de los huevos, las tasas de natalidad razonables, y la transgnesis eficaz (Van Keuren, 2009). 3.4. Transgnesis en humanos En el ao 2000, investigadores de la Universidad del Sur de Florida confirmaron que el tejido fetal puede sobrevivir despus de haber sido establecido en el cerebro de pacientes con Enfermedad de Huntington, y que este tejido se conserva libre de la enfermedad. Los pacientes que adoptaron un trasplante presentaron una mejora de su estado, lo que propone que el trasplante de neuronas fetales u otras clulas puede, algn da, brindar un tratamiento que modifique la vida a los enfermos de Huntington, una enfermedad degenerativa cerebral para la que no hay cura. Igualmente podra aplicarse a otras enfermedades cerebrales o de la mdula espinal. Tras dos aos de evaluacin, los pacientes recibieron un injerto de clulas nerviosas fetales humanas en la zona derecha, y tras un ao, en la zona izquierda del cuerpo estriado. Los resultados finales se valoraron un ao despus. La evaluacin de los efectos fueron conducidos mediante una serie de pruebas neurolgicas y psiquitricas. Estos resultados se relacionaron con un grupo de control de 22 pacientes no tratados que se encontraban en una fase parecida de la enfermedad, y que fueron propsito de seguimiento en paralelo. Igualmente se elaboraron repetidas pruebas con resonancia magntica (MRI) y tomografa de emisin de positrones (PET) para determinar la actividad metablica. Estas neuronas se adquieren de abortos fetales en el primer trimestre de su evolucin. Se sacan del estriado, un ncleo repetidor central en el cerebro y son trasplantados en el rea daada del cerebro de los pacientes. Los pacientes que recibieron un trasplante presentaron mejora de su estado, lo que propone que el trasplante de neuronas fetales u otrasclulas puede, algn da, brindar un tratamiento que cambie la vida a los enfermos de Huntington. Adems podra aplicarse a otras enfermedades cerebrales o de la mdula espinal.

Se pudo deducir que estos injertos sobrevivirn conectados con el cerebro, y no sern rechazados dijo el Dr. Thomas B. Freeman, director mdico del "Center for Aging and Brain Repair de la USF y quien dirigi esta investigacin. Samberg realizo un primer trasplante de estas caractersticas en animales en 1983. Siete aos despus, el equipo revelo un estudio que determinaba que el tejido fetal sobreviva una vez que se haba trasplantado en los cerebros de enfermos de Parkinson, y que estos pacientes mejoraban. Aplicaron los mismos principios al Huntington, y tres aos despus instauraron las neuronas en el cerebro del primero de siete pacientes. Uno de ellos muri de un ataque al corazn lo que permiti la autopsia. Esta mostr que las neuronas se haban conectado con xito en el cerebro y estaban proliferando. Y se pudo ver de qu forma los injertos se integraban en el cerebro (Horrobin, 2000). Lax-101: proyecto de investigacin en la enfermedad de Huntington Laxdale, una compaa de investigacin con base en Stirling (Escocia), desarrollo un nuevo enfoque en la gestin de enfermedades del sistema nervioso como la enfermedad de Huntington (EH). El Profesor Vaddadi desarrollo un estudio en ratones que llevan el gen humano de la enfermedad de Huntington (ratones transgnicos) y un ensayo controlado con placebo en diecisiete pacientes que estaban en la fase intermedia de la enfermedad. El Dr Basant Puri, del Hospital de Hammer Smith en Londres, realizo un ensayo controlado con placebo en siete pacientes que fueron hospitalizados y que requeran atencin las 24 horas. El Profesor Vaddadi, trabajando conjuntamente con John Drago, Jerry Clifford y John Waddington, descubrio que cuando se aplico a los ratones transgnicos una sustancia que tena LAX-bi desde su nacimiento, estos ratones no presentaban movimientos patolgicos, que en estos suele aparece a las 30-40 semanas de edad. En los dos estudios con pacientes que se realizaron en Australia y en Londres, se observo que en el grupo placebo, la mayora de los pacientes padecan un deterioro durante el curso del estudio, mientras que en los grupos tratados con el frmaco, una gran parte de los pacientes mostr mejora. El xito queda demostrado debido a que pocos pacientes en el grupo placebo se mantuvieron estables o mejoraron un poco, mientras que solo muy pocos pacientes en el grupo LAX-191 sufrieron un deterioro (Horrobin,2000). Cientficos norteamericanos crean el primer mono que incorpora un gen de otra especie ANDi es el nombre de un mono Rhesus que naci el 20 de octubre del ao 2000 en un centro de investigacin de primates en Oregon (EE UU). Sus cuidadores confirmanque su comportamiento con sus dos compaeros de su edad, es normal. Sin embargo, sus clulas tienen un gen ms, procedente de una medusa. ANDi fue primer primate modificado genticamente. Sus creadores consideran que los primates transgnicos se empleen como modelos animales ms cercanos al hombre que los ratones para el estudio de enfermedades. Fue el resultado 224 intentos para lograr el primer primate modificado genticamente. Se haban modificado muchos mamferos, desde ratones a ovejas, pero nunca primates (mamferosentre los que se incluye al ser humano). Los cientficos de Oregon consideran que ANDI es el primer paso para lograr modelos animales ms parecidos al ser humano en los que se pueden estudiar la funcin de los genes y las caractersticas de enfermedades y sus posibles tratamientos. Sin

embargo, otros expertos dicen que queda mucho camino por recorrer antes de que los monos puedan utilizarse rutinariamente en los laboratorios como se utilizan actualmente los ratones transgnicos. El gen extra que tiene ANDI proviene de las medusas y se emplean como marcador ya que las clulas que lo contienen brillan al observarlas. Es un gen que no hace nada pero se identifica fcilmente. ANDI, han explicado los cientficos, no brilla, y ni siquiera sus clulas lo hacen, pero el anlisis gentico de clulas de diversas partes de su organismo ha proporcionado ratificar que contienen el gen marcador. Los cientficos no saben por qu no expresa el gen de forma que sea visible, y piensan que de pronto se exprese cuando crezca, aunque tambin es posible que est ya est produciendo la protena correspondiente pero en muy poca cantidad. Ellos tampoco han demostrado todava que el mono vaya a transmitir su modificacin gentica a sus descendientes y ni siquiera que su esperma sea transgnico (Ruiz de Elvira, 2000). Una bacteria ayuda a fabricar orejas humanas La celulosa bacteriana, creada por ciertos de microbios, como la bacteria Gluconacetobacter xylinus, est compuesta por fibrillas de unos 30 nanmetros (mil millonsimas de metro), un grosor parecido al de las fibras de colgeno que constituye los cartlagos. "Es una sustancia muy parecida a la celulosa de los rboles o las fibras del algodn", asegura Martnez. La celulosa bacteriana, no puede ser degradada por el cuerpo humano, mientras las vacas carecen de mecanismos para digerir la celulosa. Es un material ideal para preparar injertos humanos. Con la celulosa bacteriana, el equipo de Gatenholm fabrica una estructura con forma de oreja, en un proceso que dura 18 das. Sobre esta estructura, los investigadores ponen clulas madre adulta, obtenida de mdula sea humana, y clulas de cartlago, conseguidas de narices de donantes que han sido sometidos, por ejemplo, a operaciones de ciruga esttica. En dos meses desde el comienzo, las clulas han proliferado para armar una oreja humana, lista para trasplantar (Ansede, 2013). 4. Discusin y conclusiones Grandes descubrimientos despertaron la curiosidad humana que llevo tanto a la gentica iniciada por Mendel y la biologa molecular por Warren Weaver a ser herramientas fundamentales para entender la naturaleza qumica de la herencia. A partir de ah se inici la poca (aos 50s en adelante) de grandes descubrimientos que marcaron y transformaron ideas de ciencia ficcin en realidad, y que solo hoy es palpable susimportancia aplicaciones. Muchos organismos han sido transformados al igual que los mtodos de transgnesis, actualmente Agrobacterium tumefaciens no es utilizado exclusivamente para transgnesis en plantas, se han transformados hongos como Aspergillus niger, Trichoderma reesei, Paracoccidiodes brasiliensis, entre otros (Valderrama, Isaza y Kafuri, 2005), siendo el nico organismo en poder transformar un organismo perteneciente a otro reino. Agrobacterium ha sido el mtodo ms desarrollado y estudiado, debido a su relativa simplicidad para desarrollar plantas transgnicas de gran valor comercial, pero an se debe abordar problemas tales como: transformar plantas de valor comercial

(organismos recalcitrantes), evitar la integracin al azar, poder agregar transgenes mutiples y la estabilidad del transgen en la herencia (Ziemienowicz, 2013). La expectativa de alimentos derivados de animales transgnicos de granja no ha sido bien recibida por los consumidores. Algunas personas prefieren las plantas transgnicas que los animales transgnicos. La experimentacin con animales y su alteracin es menos aceptable y tiene repercusiones ms amplias. Varias culturas y religiones restringen o prohben el consumo de ciertos alimentos derivados de animales. Sin embargo, la ingestin o inyeccin de ciertos productos farmacuticos derivados de animales transgnicos parece ms aceptable para el pblico. A medida que se vayan perfeccionando las tcnicas de transferencia gnica en animales, junto con otras tcnicas del proceso igualmente importantes (mejoramiento de los constructos), se podrn obtener mayores y ms seguras aplicaciones en las diferentes reas en las que se ha venido trabajando los ltimos aos. Las tcnicas que se estn empleando para transgnesis en humanos es un avance para la evolucin, como se pudo leer en el artculo presentado, clulas de fetos contra enfermedades degenerativas como lo es Huntington, sirve para que las personas que sufren esta enfermedad presenten una mejora y para aquellas con alguna anomala en su cuerpo, pueda ser reemplazada por una en buenas condiciones ya que por medio de la transgnesis estas adoptan clulas que no son degradadas por el cuerpo humano y es ms factible para injertos. Ahora tenemos la capacidad de transformar muchos organismos, antes se inici con el reconocimiento de una sustancia con caractersticas especiales (ADN), ahora las secuenciamos, las estandarizamos y las pasamos a un organismo de inters. Estos esfuerzos y logros permitirn seguir mejorando para obtener respuestas, que concluyan en una transformacin eficiente, segura tanto para humanos como para el ambiente y til para el sostenimiento u equilibro entre las especies.

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