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La espectroscopia es el estudio de la interaccin entre la radiacin electromagntica y la materia, con absorcin o emisin de energa radiante. Tiene aplicaciones en astronoma, fsica y qumica, entre otras cientficas. El anlisis espectral se basa en detectar la absorcin o emisin de radiacin electromagntica a ciertas longitudes de onda y se relacionan con los niveles de energa implicados en una transicin cuntica. Existen tres casos de interaccin con la materia: 1. Choque elstico: existe slo un cambio en el impulso de los fotones. Ejemplos son los rayos X, la difraccin de electrones y la difraccin de neutrones. 2. Choque inelstico: por ejemplo la espectroscopia Raman. 3. Absorcin o emisin resonante de fotones
1. Aspectos generales.
El mecanismo por el cual la materia emite radiacin electromagntica es el dominio de la espectroscopia. La radiacin electromagntica se atribuye a las diferencias de energa en las transiciones de los electrones de unos niveles atmicos a otros. La espectroscopia se relaciona en la mayora de los casos con la tercera interaccin. Estudia en qu frecuencia o longitud de onda una sustancia puede absorber o emitir energa en forma de un cuanto de luz. La energa de un fotn (un cuanto de luz) de una onda electromagntica o su correspondiente frecuencia, equivale a la diferencia de energa entre dos estados cunticos de la sustancia estudiada:
Donde
es la constante de Planck,
Esta ecuacin es conocida tambin como la ecuacin bsica de la espectroscopia. Las diferencias de energa entre estados cunticos dependen de la composicin elemental de la prueba o de la estructura de la molcula, y por eso este mtodo proporciona informacin importante para astrnomos, fsicos, qumicos y bilogos. 1
Por medio de un espectrofotmetro se mide el espectro de la luz (intensidad de la luz absorbida, reflejada o emitida en funcin de la frecuencia o de la longitud de onda). Los espectros se diferencian considerablemente de elemento a elemento. En general, se denota como espectro a la distribucin de la intensidad en funcin de la frecuencia o de la longitud de onda. Adems de la luz visible, la espectroscopia cubre hoy en da una gran parte del espectro electromagntico, que va de los infrarrojos hasta los rayos gamma. El objetivo de la espectroscopia es obtener informacin acerca de una prueba o de un cuerpo radiante. Por ejemplo:
La estructura interna o la temperatura (por ejemplo de estrellas) La composicin o la cintica de una reaccin qumica La espectroscopia analtica identifica tomos o molculas por medio de sus espectros
2. Etimologa.
Por analoga con otras palabras que designan ramas de la ciencia, es frecuente romper el diptongo final convirtiendo espectroscopia en espectroscopa (ntese la tilde sobre la i). Tanto la forma con diptongo (ia), como la forma con hiato (a) acorde con la pronunciacin etimolgica griega, son aceptadas por la Real Academia Espaola.
2.1.
Origen
La luz visible es fsicamente idntica a todas las radiaciones
electromagnticas. Es visible para nosotros porque nuestros ojos detectan esta estrecha banda de radiacin del espectro electromagntico completo. Esta banda es la radiacin dominante que emite el Sol. Desde la antigedad, cientficos y filsofos han especulado sobre la naturaleza de la luz. Nuestra comprensin moderna de la luz comenz con el experimento del prisma de Isaac Newton, con el que comprob que cualquier haz incidente de luz blanca, no necesariamente procedente del Sol, se descompone en el 2
espectro del arco iris (del rojo al violeta). Newton tuvo que esforzarse en demostrar que los colores no eran introducidos por el prisma, sino que realmente eran los constituyentes de la luz blanca. Posteriormente, se pudo comprobar que cada color corresponda a un nico intervalo de frecuencias o longitudes de onda. En los siglos XVIII y XIX, el prisma usado para descomponer la luz fue reforzado con rendijas y lentes telescpicas con lo que se consigui as una herramienta ms potente y precisa para examinar la luz procedente de distintas fuentes. Joseph von Fraunhofer, astrnomo y fsico, utiliz este espectroscopio inicial para descubrir que el espectro de la luz solar estaba dividido por una serie de lneas oscuras, cuyas longitudes de onda se calcularon con extremo cuidado. Por el contrario, la luz generada en laboratorio mediante el calentamiento de gases, metales y sales mostraba una serie de lneas estrechas, coloreadas y brillantes sobre un fondo oscuro. La longitud de onda de cada una de estas bandas era caracterstica del elemento que haba sido calentado. Por entonces, surgi la idea de utilizar estos espectros como huella digital de los elementos observados. A partir de ese momento, se desarroll una verdadera industria dedicada exclusivamente a la realizacin de espectros de todos los elementos y compuestos conocidos. Tambin se descubri que si se calentaba un elemento lo suficientemente (incandescente), produca luz blanca continua, un espectro completo de todos los colores, sin ningn tipo de lnea o banda oscura en su espectro. En poco tiempo lleg el progreso: se pas la luz incandescente de espectro continuo por una fina pelcula de un elemento elegido que estaba a temperatura menor. El espectro resultante tena lneas oscuras, idnticas a las que aparecan en el espectro solar, precisamente en las frecuencias donde el elemento particular produca sus lneas brillantes cuando se calentaba. Es decir, cada elemento emite y absorbe luz a ciertas frecuencias fijas caractersticas del mismo.Las lneas oscuras de Fraunhofer, que aparecan en el espectro solar, son el resultado de la absorcin de ciertas frecuencias caractersticas por los elementos presentes en las capas ms exteriores de nuestra estrella (espectro de absorcin). An haba dudas: en 1878, en el espectro solar se detectaron lneas que no casaban con las de ningn elemento conocido. De ello, los astrnomos 3
predijeron la existencia de un elemento nuevo, llamado helio. En 1895 se descubri el helio terrestre.De igual forma que la teora universal de la gravitacin de Newton prob que se pueden aplicar las mismas leyes tanto en la superficie de la Tierra como para definir las rbitas de los planetas, la espectroscopia demostr que existen los mismos elementos tanto en la Tierra como en el resto del Universo.
3. Campos de estudio
Espectroscopia atmica Tcnica Espectroscopia de absorcin atmica Espectroscopia de emisin atmica Espectroscopia de fluorescencia atmica Espectroscopia de rayos X Espectroscopia molecular Tcnica Espectroscopia de resonancia magntica nuclear Radiacin electromagntica Radiofrecuencias Excitacin UV-vis Calor UV-vis Rayos X Relajacin Calor UV-vis UV-vis Rayos X
3.1.
Espectroscopia astronmica.
La espectroscopia astronmica es la tcnica de espectroscopia usada en astronoma. Dado que la espectroscopia queda bien descrita en su propio artculo, aqu nos centraremos en su uso en astronoma. El objeto de estudio es el espectro de la radiacin electromagntica, incluida la luz visible, que radia desde estrellas y otros objetos celestes. La espectroscopia se puede usar para averiguar muchas propiedades de estrellas y galaxias distantes, tales como su composicin qumica y movimiento, mediante efecto Doppler.
3.1.1. Estrellas.
La espectroscopia astronmica comienza con las observaciones iniciales de Isaac Newton de la luz del Sol, dispersada por un prisma. Observ un arco iris de color, y quiz incluso lneas de absorcin. Estas bandas oscuras que 5
aparecen en el espectro solar las describi por primera vez en detalle Joseph von Fraunhofer. La mayora de espectros estelares comparten estas dos caractersticas dominantes del espectro solar: emisin en todas las longitudes de onda del espectro ptico (el continuum) con varias lneas de absorcin discretas superpuestas. Denominaciones originales de Fraunhofer (1817) para las lneas de absorcin del espectro solar: Letra Longitud de onda (nm) Origen qumico A B C D1 D2 E F G H K 759,37 686,72 656,28 589,59 589,00 526,96 486,13 431,42 396,85 393,37 O2 atmosfrico O2 atmosfrico hidrgeno alpha sodio neutro sodio neutro hierro neutro hidrgeno beta molcula CH calcio ionizado calcio ionizado
Fraunhofer y Angelo Secchi estuvieron entre los pioneros de la espectroscopia del Sol y otras estrellas. Se recuerda especialmente a Secchi por clasificar las estrellas en tipos espectrales, basndose en el nmero y fuerza de las lneas de absorcin de su espectro. Ms adelante se descubri que el origen de los tipos espectrales estaba relacionado con la temperatura superficial de la estrella: slo se pueden observar determinadas lneas de absorcin dentro de un cierto rango de temperaturas; porque slo en ese rango se llenan los niveles energticos atmicos relacionados. Las lneas de absorcin en los espectros estelares se pueden usar para determinar la composicin qumica de una estrella. Cada elemento es responsable de un conjunto diferente de lneas de absorcin en el espectro, a longitudes de onda que se pueden medir de forma extremadamente fiable mediante experimentos en laboratorio. Por tanto, una lnea de absorcin en 6
una longitud de onda concreta en un espectro estelar muestra que ese elemento debe estar presente. Las lneas de absorcin del hidrgeno (que se encuentra en la atmsfera de casi cualquier estrella) son particularmente importantes. Las lneas del hidrgeno que se encuentran dentro del espectro visible se denominan lneas de Balmer. En 1868, Sir Norman Lockyer observ fuertes lneas amarillas en el espectro solar que no haba visto nunca en experimentos en el laboratorio. Dedujo que deba tratarse de un elemento desconocido, al que llam helio, del griego helios (sol). El helio no se detect de forma concluyente en la Tierra hasta 25 aos despus. En la misma dcada se detectaron lneas de emisin (una verde, en particular) en el espectro coronal durante los eclipses solares que no se correspondan a ninguna lnea espectral conocida. De nuevo se propuso que esto se deba a un elemento desconocido, denominado coronio de forma provisional. No fue hasta la dcada de 1930 que se descubri que estas lneas provenan de hierro y nquel muy ionizados, debindose esta ionizacin a las temperaturas extremas de la corona solar. En conjunto con la fsica atmica y los modelos de evolucin estelar, la espectroscopia estelar se usa actualmente para determinar una multitud de propiedades estelares: su distancia, edad, luminosidad y tasa de prdida de masa se pueden estimar mediante estudios espectrales, y los estudios sobre efecto Doppler pueden descubrir la presencia de compaeros ocultos tales como agujeros negros y exoplanetas.
3.1.2. Nebulosas
En los primeros tiempos de la astronoma telescpica, la palabra nebulosa se usaba para describir cualquier mancha borrosa que no pareciese una estrella. Muchas de stas, como la Nebulosa de Andrmeda, tenan espectros que se parecan mucho a los estelares, y acabaron resultando galaxias. Otras, como la Nebulosa Ojo de gato, tena espectros muy diferentes. Cuando William Huggins observ la Ojo de Gato, no encontr un espectro continuo como el del Sol, sino slo unas pocas lneas de emisin fuertes. Estas lneas no se 7
correspondan con ningn elemento terrestre conocido, e igual que sucedi con el helio que se haba identificado en el sol, los astrnomos sugirieron que las lneas se deban a un nuevo elemento, nebulio (llamado ocasionalmente nebulo o nefelio). En realidad, en la dcada de 1920 se describi que las lneas se debean al oxgeno, un elemento muy familiar. Pero las nebulosas estn normalmente muy rarificadas; son mucho menos densas que el mejor vaco conseguido en la Tierra. En estas condiciones, los tomos se comportan de una manera muy diferente y se pueden formar lneas que se suprimen a densidades normales. Estas lneas se conocen como lneas prohibidas y son las ms potentes en la mayora de espectros nebulares.
3.1.3. Galaxias
El espectro de las galaxias se parece al estelar, ya que consiste en la luz de millones de estrellas combinadas. La espectroscopia galctica ha conducido a muchos descubrimientos fundamentales. Edwin Hubble descubri en la dcada de 1920 que, aparte de las ms cercanas (aquellas en lo que se conoce como el Grupo Local), todas las galaxias se alejan de la Tierra. Cuanto ms lejos est una galaxia, ms rpido se est alejando (ver la Ley de Hubble). sta fue la primera indicacin de que el Universo se cre en un nico punto, en un Big Bang. Los estudios de Fritz Zwicky sobre agrupaciones galcticas mediante efecto Doppler encontraron que la mayora de las galaxias se estn moviendo ms rpido de lo que pareca posible, por lo que se conoca de la masa de estas agrupaciones. La hiptesis de Zwicky es que debe existir una gran cantidad de materia no luminosa en las agrupaciones galcticas: lo que acab conocindose como materia oscura
3.1.4. Cusares
En la dcada de 1950 se encontraron algunas potentes fuentes de radio asociadas a objetos muy tenues que parecan ser muy azules. Se les llam Fuentes de radio cuasi-estelares, o cusares. Cuando se obtuvo el primer espectro de uno de estos objetos, se encontr algo misterioso, con lneas de absorcin en longitudes de onda donde no se esperaban. Pronto se entendi 8
que lo que se estaba viendo era un espectro galctico normal, pero muy corrido al rojo. De acuerdo con la Ley de Hubble, esto implicaba que el cusar deba ser muy distante, y por tanto muy luminoso. Actualmente se piensa que los cusares son galaxias en formacin, con su gran emisin energtica alimentada por agujeros negros supermasivos.
3.1.6. Cometas
El espectro de los cometas consiste en un espectro solar reflejado en las nubes de polvo que le rodean, as como en lneas de emisin formadas cuando el viento solar choca con los gases que rodean al cometa. El anlisis de la composicin de los cometas ha mostrado que estn hechos de materiales vrgenes provenientes de los tiempos de formacin del sistema solar. Se sabe que existen muchos compuestos orgnicos en los comentas, y se ha sugerido que los impactos cometarios pueden haber proporcionado a la Tierra mucha del agua de sus ocanos y los compuestos necesarios para la formacin de la vida. Se ha sugerido que la vida puede haber sido trada a la Tierra por cometas desde el espacio interestelar (la teora de la Panspermia)
3.2.
3.2.1. Descripcin
Es un mtodo de qumica analtica que est basado en la atomizacin del analito en matriz lquida y que utiliza comnmente un nebulizador prequemador (o cmara de nebulizacin) para crear una niebla de la muestra y un quemador con forma de ranura que da una llama con una longitud de trayecto ms larga, en caso de que la transmisin de energa inicial al analito sea por el mtodo "de llama". La niebla atmica es desolvatada y expuesta a una energa a una determinada longitud de onda emitida ya sea por la dicha llama, o una lmpara de ctodo hueco construida con el mismo analito a determinar o una Lmpara de Descarga de Electrones (EDL). Normalmente las curvas de calibracin no cumplen la Ley de Beer-Lambert en su estricto rigor. La temperatura de la llama es lo bastante alta para que la llama de por s no mueran los tomos de la muestra de su estado fundamental. El nebulizador y la llama se usan para desolvatar y atomizar la muestra, pero la excitacin de los tomos del analito es hecha por el uso de lmparas que brillan a travs de la llama a diversas longitudes de onda para cada tipo de analito. En AA la cantidad de luz absorbida despus de pasar a travs de la llama determina la cantidad de analito existente en la muestra. Hoy da se utiliza frecuentemente una mufla de grafito (u horno de grafito) para calentar la muestra a fin de desolvatarla y atomizarla, aumentando la sensibilidad. El mtodo del horno de grafito puede tambin analizar algunas muestras slidas o semislidas. Debido a su buena sensibilidad y selectividad, sigue siendo un mtodo de anlisis comnmente usado para ciertos elementos traza en muestras acuosas (y otros lquidos).
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Combustible Oxidante Gas LP Gas LP Hidrgeno Hidrgeno Acetileno Acetileno Acetileno 3.2.2.1.2. Aire Oxgeno Aire Oxgeno Aire Oxgeno
Temperatura Vel. de Combustin 1700-1900 2700-2800 2000-2100 2550-2700 2100-2400 3050-3150 39-43 370-390 300-440 900-1400 158-266 1100-2480 285
Estructura de llama Las regiones ms importantes de la llama son la zona de combustin primaria secundaria y zona interconal, esta ltima es la zona ms rica en tomos libres y es la ms ampliamente utilizada.
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Perfiles de temperatura La temperatura mxima se localiza aproximadamente 1 cm por encima de la zona de combustin primaria Un fotmetro de llama de laboratorio que se utiliza propano o butano como gas de combustin El aerosol formado por el flujo del gas oxidante, se mezcla con el combustible y se pasa a travs de una serie de deflectores que eliminan las gotitas que no sean muy finas. Como consecuencia de la accin de estas, la mayor parte de la muestra se recoge en el fondo de una cmara y se drena hacia un contenedor de desechos. El aerosol, el oxidante y el combustible se queman en un mechero provisto de una ranura de 1 mm o 2 de ancho por 5 10 mm de longitud. Estos mecheros proporcionan una llama relativamente estable y larga, estas propiedades aumentan la sensibilidad y la reproducibilidad. Reguladores de combustibles y oxidantes Los caudales de oxidante y combustible constituyen variables importantes que requieren un control preciso es deseable poder variar cada uno de ellos en un intervalo amplio para poder encontrar experimentalmente las condiciones ptimas para la atomizacin 3.2.2.1.3. Caractersticas del funcionamiento de los atomizadores de llama Seal de salida La seal del detector aumenta al mximo algunos segundos despus de la ignicin y cae rpidamente a cero cuando los productos de atomizacin salen fuera.
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3.2.2.2.
3.2.2.3.
Fuentes de radiacin
Los mtodos analticos basados en la absorcin atmica son
potencialmente muy especficos, ya que las lneas de absorcin atmica son considerablemente estrechas (de 0,002 a 0,0005 nm)y las energas de transicin electrnica son especficas de cada elemento.
3.2.2.4.
3.2.2.5.
Nebulizadores
La forma geomtrica de los nebulizadores usados en ICP son diversos y dependen del fabricante, en general son cmaras asociadas al sistema del inyector, y este esta solidario a la antorcha plasmtica y operan por efecto Venturi cuando el gas argn es introducido a gran velocidad por un tubo capilar. Las cmaras spray pueden ser de vidrios (ciclnicas-Gemcone)) o de PVC (cmaras tipo Scott o MEINHARD de flujo cruzado) dependiendo de la cantidad de slidos disueltos que presente la matriz del analito. 13
3.3.
Espectroscopia de fluorescencia
La espectroscopia de fluorescencia , tambin llamada espectrofotometra o fluometra; es un tipo de espectroscopia electromagntica, la cual analiza la fluorescencia de una muestra. Esto involucra el uso de un haz de luz comnmente de luz ultravioleta, que excita a los electrones en las molculas de ciertos componentes y causa entonces la emisin de luz; tpicamente, pero no necesariamente, luz visible. Su tcnica complementaria es el espectro de absorcin . El equipamiento que mide la fluorescencia es llamado fluormetro o fluormetro.
3.3.1. Descripcin.
Las molculas tienen varios estados referidos a los niveles de energa. La espectroscopia de fluorescencia se preocupa fundamentalmente de estados electrnicos y vibratorios. Generalmente las especies estudiadas poseen un estado fundamental electrnico o estado estacionario(un bajo estado electrnico) de inters, y un estado electrnico excitado de una energa superior. Dentro de cada uno de estos estados electrnicos hay varios estados vibratorios. En espectroscopia de fluorescencia, las especies son las primeras en ser excitadas mediante la absorcin de un fotn, desde su de estado electrnico fundamental, a uno de los diversos estados vibratorios en el estado electrnico excitado. Las colisiones con otras molculas causan a la molcula excitada la perdida de energa vibratoria hasta que alcanza el menor estado vibratorio del estado electrnico excitado. Este proceso es a menudo visualizado con el diagrama de Jablonski. La molcula luego vuelve a declinar a uno de los varios niveles de vibracin del estado electrnico fundamental emitiendo un fotn en el proceso. Como las molculas pueden decaer en cualquiera de los varios niveles vibratorios en el estado fundamental, los fotones emitidos tendrn entonces diferentes energas, y de este modo diferentes frecuencias. Por tanto, por el anlisis de las diferentes frecuencias de luz emitidas en la espectroscopia de fluorescencia junto con sus intensidades relativas, la estructura de los diferentes niveles vibratorios puede ser determinada . Para especies atmicas, el proceso es similar, sin embargo desde especies atmicas no se poseen niveles vibratorios de energa, los
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fotones emitidos estn con frecuencia con la misma longitud de onda que la radiacin incidente. Este proceso de re-emitir el fotn absorbido es llamado resonancia de fluorescencia y aunque es caracterstica de la fluorescencia atmica, se observa en la fluorescencia molecular.1 En un experimento tpico , las diferentes longitudes de onda de luz fluorescente emitidas por una muestra se miden usando un monocromador , sosteniendo la luz excitada en una longitud de onda constante . Esto es llamado espectro de emisin . Un espectro de excitacin es lo contrario, en este la luz emitida se mantiene constante en una longitud de onda , y la luz de excitacin es leda a travs de diferentes longitudes de onda ( mediante un monocromador ). Un mapa de emisin es medido mediante el registro del espectro de emisin resultante de una gama de excitacin de longitudes de onda en la combinacin de todas estas juntas. Esta es una superficie tridimensional de datos: la intensidad de emisin como una funcin de la excitacin y emisin de longitudes de onda, la cual es tpicamente representada como un mapa de contorno
3.3.2. Instrumentacin
Existen dos tipos generales de instrumentos: Fluormetro de filtro: El uso de estos filtros sirve para aislar la incidencia de luz y la fluorescencia de la luz. Espectrofluormetros: Utiliza una red de difraccin de
monocromador es para aislar la incidencia de la luz y la florescencia de la luz. Ambos tipos de filtros usan el siguiente esquema: La luz procedente de una fuente de excitacin pasa a travs de un filtro o un monocromador y golpea la muestra. Una porcin de la luz incidente es absorbida por la muestra y algunas de las molculas en la muestra fluorescente. La luz fluorescente es emitida en todas las direcciones. Algunas de estas luces fluorescentes pasan a travs de un segundo filtro o un monocromador y alcanzan un detector, el cual es usualmente colocado a noventa grados de la incidencia del haz de luz para minimizar el riesgo de la transmisin o reflejo de la incidencia de la luz buscada en el detector. 15
3.3.3. Aplicaciones
La espectroscopia de fluorescencia es usada en los campos de investigacin como el bioqumico, mdico y qumico, entre otros, para el anlisis de compuestos orgnicos. Su uso tambin ha sido reportado en la diferenciacin de tumores malignos y benignos en la piel. Las tcnicas de espectroscopia atmica de fluorescencia son practicadas en otros tipos de anlisis, y medicin de un compuesto presente en el aire, en el agua o en otro medio, como CVAFS que es usado para la deteccin de metales pesados, como el mercurio. Tambin puede ser usado para re direccionar fotones.
3.4.
Espectroscopia de rayos X
Cada punto (reflexin) en este patrn de difraccin se forma por la interferencia de la dispersin de rayos X pasando por un cristal. Los datos obtenidos pueden utilizarse para determinar la estructura cristalina. La espectroscopia de rayos X es un nombre genrico que abarca todas aquellas tcnicas espectroscpicas utilizadas para determinar la estructura electrnica de los materiales mediante excitacin por rayos X. La
espectroscopia de rayos X tiene una amplia gama de aplicaciones, en especial en la determinacin de estructuras cristalinas y muestras slidas. Los rayos X son un tipo de radiacin electromagntica con una energa muy superior a la radiacin ultravioleta que permite su absorcin por los electrones de core. Los rayos X son especialmente capaces de penetrar estructuras cristalinas: su longitud de onda, de un orden de magnitud igual al de las distancias interatmicas, hace que se difracten, produciendo los patrones de difraccin del cristal.
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1. La difraccin de rayos X en materiales cristalinos se utiliza para obtener su estructura cristalina. 2. La fluorescencia de rayos X nos aporta informacin sobre la superficie de la muestra. 3. Emisin electrnica Auger.
3.5.
O,
C,
31
P,
19
F y Tl,
Sn,
195
Pt,
199
Hg,
203
205
Se prefieren los ncleos de nmero cuntico de espn nuclear igual a 1/2, ya que carecen de un momento cuadrupolar elctrico que produce un ensanchamiento de las seales de RMN. Tambin es mejor que el istopo sea abundante en la naturaleza, ya que la intensidad de la seal depender de la concentracin de esos ncleos activos. Por eso, uno de los ms tiles en la elucidacin de estructuras es el 1H, dando lugar a la espectroscopia de resonancia magntica nuclear de protn. Tambin es importante en qumica orgnica el 13C, aunque se trata de un ncleo poco abundante y poco sensible. La tcnica se ha empleado en qumica orgnica, qumica inorgnica y bioqumica. La misma tecnologa tambin ha terminado por extenderse a otros 17
campos, por ejemplo en medicina, en donde se obtienen imgenes por resonancia magntica.
3.5.1. Tipos de RMN 3.5.1.1. Espectroscopia de RMN con Onda Continua (CW: Continuous Wave)
Desde sus comienzos hasta finales de los 60, la espectroscopia de RMN utiliz una tcnica conocida como espectroscopia de onda continua (CW). La manera de registrar un espectro de RMN en el modo de CW era, bien mantener constante el campo magntico e ir haciendo un barrido de frecuencias con un campo oscilante, o bien, lo que era usado ms a menudo, se mantena constante la frecuencia del campo oscilante, y se iba variando la intensidad del campo magntico para encontrar las transiciones (picos del espectro). En la RMN de CW las seales del espectro se registran como seales en resonancia. La espectroscopia CW est limitada por su baja sensibilidad, ya que cada seal se registra una sola vez por cada barrido y la tcnica de resonancia magntica nuclear ya es de por s no demasiado sensible; esto quiere decir que la tcnica sufre de una baja relacin seal-ruido. Afortunadamente, en RMN es posible mejorar la relacin seal-ruido mediante el promediado de seal. El promediado de seal consiste en repetir la adquisicin del experimento e ir sumando los espectros que se obtienen. De esta manera, las zonas del espectro en que existen seales se suman de manera constructiva, mientras que, por su parte, las zonas en que hay ruido, por su carcter aleatorio, se acumula ms lentamente que la seal. Mediante el promediado de seal se incrementa la relacin seal-ruido en un valor que es la raz cuadrada del nmero de espectros que se han acumulado. Esta relacin se cumple con espectros de RMN en los que intervienen un slo tipo de ncleos, por ejemplo, slo 1H, homonucleares.
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18
3.5.1.2.
radiofrecuencias. La forma que suele usarse para este pulso es rectangular, es decir, la intensidad de la radiofrecuencia oscila entre un mximo y un mnimo que es constante mientras dura el pulso. Un pulso de corta duracin tiene una cierta incertidumbre en la frecuencia (principio de indeterminacin de Heisenberg). La descomposicin de fourier de una onda rectangular contiene contribuciones de una de todas las frecuencias. El pulso que se genera es por tanto policromtico y cuanto ms corto sea, es capaz de excitar un mayor rango de frecuencias.
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La seal que se detecta FID (Free Induction Decay) es una seal oscilante que contiene todas las seales del espectro y decae hasta hacerse cero. La FID es una onda que contiene todas las seales del espectro en una forma que es dependiente del tiempo. Esta onda puede convertirse en un espectro de seales en funcin de su frecuencia. Para ello se utiliza una funcin matemtica conocida como Transformada de Fourier. El resultado es lo que se conoce como un espectro de RMN (espectro de frecuencias).
3.5.1.3.
RMN Multidimensional
La posibilidad de excitar la muestra con uno o ms pulsos de radiofrecuencia (RF), cada uno de ellos aplicado con una potencia, duracin, frecuencia, forma y fase particulares, e introducirlos en momentos especficos de tiempo durante el experimento de RMN, generalmente antes de que el sistema haya regresado al equilibrio por relajacin, permite disear toda una gama de secuencias de pulsos de las que se puede extraer informacin molecular muy variada. Una secuencia de pulsos es una distribucin en el tiempo de alguno o varios de los siguientes elementos: i) un cierto nmero de pulsos de RF que afectn a uno o ms tipos de ncleos, ii) tiempos de espera en los que no se hace nada sino esperar a que el sistema evolucione de una determinada forma. Estos tiempos de espera pueden ser fijos o bien incrementables si su duracin se va aumentando a medida que se repite el experimento. iii) gradientes de campo magntico y iv) una etapa final en la que se adquiere la FID. 20
Grosso modo, las interacciones que pueden detectarse por RMN se pueden clasificar en dos tipos: 1. Las interacciones a travs de enlaces se basan en el acoplamiento escalar 2. Las interacciones a travs del espacio se basan en el acoplamiento dipolar. En el caso de muestras en disolucin, el acoplamiento dipolar se manifiesta como efecto Overhauser nuclear que permite determinar la distancia entre los tomos. Richard Ernst en 1991 y Kurt Wthrich en el 2002 fueron galardonados con el premio Nobel de Qumica por su contribuciones al desarrollo de la RMN de 2-dimensiones y multidimensional con transformada de Fourier. Los avances conseguidos por ellos y por otros grupos de investigadores han expandido la RMN a la bioqumica, y en particular a la determinacin de la estructura en disolucin de biopolmeros como protenas o incluso cidos nucleicos de tamao pequeo.
en
Resonancia
Magntica
Nuclear:
el
Un espectrmetro de RMN consta de las siguientes partes fundamentales: Un imn que genere un campo magntico estable, el cual puede ser de una intensidad variable, definiendo la frecuencia de resonancia de cada ncleo. Generalmente se identifica cada espectrmetro por la frecuencia de
resonancia del protn, as en un imn de 7.046 Tesla, los ncleos de 1H resuenan a 300 MHz, y por tanto sera un espectrmetro de 300 MHz. Por el momento el imn de mayor campo magntico del mundo lo ha instalado Bruker en la Unviersiad de ciencia y tecnologa Rey Abdullah en Arabia Saudita, de 950 MHz (22.3 Tesla). Una sonda, que se sita dentro del imn, en la que se introduce la muestra y que consta de las bobinas responsables de emitir y recibir las radiofrecuencias (RF). El 21
nmero de bobinas y su disposicin determinan el tipo y las aplicaciones de cada sonda. Una consola en la que se generan los pulsos de RF y se controla el resto de la parte electrnica del espectrmetro Un ordenador que sirve de interfaz con el espectrmetro y con el que se analiza toda la informacin obtenida.
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Espectro monodimensional de 13C: Al igual que en 1H el desplazamiento qumico da informacin de los grupos funcionales. Dependiendo del tipo de experimento realizado se puede obtener informacin del nmero de hidrgenos unidos a cada carbono.
13
C.
Espectros
bidimensionales
homonucleares:
Los
experimentos
COSY y TOCSY dan informacin de las relaciones entre los protones de la molcula, por acomplamiento escalar o dipolar (NOESY) Espectros bidimensionales heteronucleares: Los experimentos HMQC y HSQC indican qu hidrgenos estn unidos a qu carbonos. El experimento HMBC permite determinar relaciones entre protones y carbonos a mayor distancia (2 o 3 enlaces) Experimentos con otros ncleos: Si la molcula posee otros ncleos activos en RMN es posible su medida a travs de experimentos monodimensionales o bidimensionales (por deteccin indirecta)
23
3.6.
Espectroscopia infrarroja
Espectroscopia infrarroja (Espectroscopia IR) es la rama de la espectroscopia que trata con la parte infrarroja del espectro electromagntico. Esta cubre un conjunto de tcnicas, siendo la ms comn una forma de espectroscopia de absorcin. As como otras tcnicas espectroscpicas, puede usarse para identificar un compuesto e investigar la composicin de una muestra. Esta se puede dividir segn el tipo de la radiacin que se analiza, en:
Espectroscopia del Infrarrojo cercano Espectroscopia del infrarrojo medio Espectroscopia del infrarrojo lejano
Debido a que las bandas son sobre tonos o combinaciones, sus absorbancias molares son pequeas y los lmites de deteccin son del orden del 0.1%.
3.6.1.1.
Instrumentacin y Tcnicas
La instrumentacin utilizada en la regin del IR (Infrarrojo) cercano es semejante a la que se emplea para la espectroscopia de absorcin ultravioleta/visible. Como fuentes se utilizan las lmparas de tungsteno, y por lo general, las celdas son de cuarzo o slice fundida como las que se utilizan en el intervalo de 200 a 770 m. La longitud de las celdas varia de 0.1 a 10 cm. Los detectores normalmente son fotoconductores de sulfuro 24
de plomo. Algunos espectrofotmetros comerciales se han diseado para trabajar desde 180 a 2500 m, y de este modo se puede utilizar para obtener espectros de IR cercano. En la Figura 12-24 se relacionan algunos de los disolventes ms utilizados en el IR cercano. Obsrvese que el tetracloruro de carbono y el disulfuro de carbono son los nicos disolventes transparentes en toda la regin de IR cercano.
3.6.1.2.
Aplicaciones
En contraste con la espectroscopia de IR medio, la de IR cercano es menos til para la identificacin, y ms til para el anlisis cuantitativo de compuestos que contengan agrupaciones funcionales con hidrgenos unidos a carbonos, nitrgenos y oxgenos. Estos compuestos se pueden determinar a menudo con exactitudes y precisiones ms semejantes a las de espectroscopia UV/visible que a las de espectroscopia de IR medio. Algunas aplicaciones incluyen la determinacin de agua en una variedad de muestras como glicerol, hidrazina, pelculas orgnicas, y cido ntrico fumante. La determinacin cuantitativa de fenoles, alcoholes, cidos orgnicos e hidroperoxidos se basa en el primer sobretono de la vibracin de la tensin O-H que absorbe alrededor de 7100 cm-1 (1.4 m); la determinacin de esteres, cetonas y cidos carboxlicos se basa en su absorcin en la regin de 3300 a 3600 cm-1 (2.8 a 3.0 m). En este caso la absorcin corresponde al primer sobretono de la vibracin de tensin del carbonilo. La espectrofotometra en el IR cercano tambin es una valiosa tcnica para la identificacin y determinacin de aminas primarias y secundarias en presencia de aminas terciarias en mezclas. Los anlisis por lo general se llevan a cabo en disoluciones de tetracloruro de carbono y en celdas de 10 cm. Las aminas primarias se determinan directamente midiendo la absorbancia de una combinacin de la banda de tensin N-H alrededor de 5000 cm-1 (2.0 m); en esta regin no absorben ni las aminas secundarias ni las terciarias, estas tienen varias bandas de absorcin superpuestas en la zona de 3300 a 10000 cm-1 (1 a 3 m), debido a las vibraciones de 25
tensin N-H y sus sobretonos, mientras que las aminas terciarias no pueden presentar estas bandas. De este modo, una de esas bandas permite hallar concentracin de la amina secundaria despus de de corregir la absorcin por la amina primaria.
26
3.6.3.1.
Aplicaciones
Cuando se estudia la conformacin de una molcula en su totalidad, las bandas del infrarrojo lejano difieren en forma predecible a los diferentes ismeros de un mismo compuesto bsico. Las frecuencias del infrarrojo lejano para compuestos organometlicos suelen ser sensibles al ion a tomo metlico y esto tambin puede utilizarse en el estudio de enlaces de coordinacin.Esta regin es muy adecuada para el estudio de los compuestos inorgnicos, cuyos tomos sean pesados y con enlaces tendientes a ser dbiles. Las molculas diatmicas simples tienen solamente un enlace, el cual se puede estirar. Molculas ms complejas pueden tener muchos enlaces, y las vibraciones pueden ser conjugadas, llevando a absorciones en el infrarrojo a frecuencias caractersticas que pueden relacionarse a grupos qumicos. Los tomos en un grupo CH2, encontrado comnmente en compuestos orgnicos pueden vibrar de seis formas distintas, estiramientos simtricos y asimtricos, flexiones simtricas y asimtricas en el plano (scissoring o tijereteo y rocking o balanceo, respectivamente), y flexiones simtricas y asimtricas fuera del plano (wagging o aleteo y twisting o torsin, respectivamente); como se muestra a continuacin:
scissoring ()
27
estiramiento (as)
twisting o torsin ()
-1
3.7.
Espectroscopia ultravioleta-visible
Visible o espectrofotometra ultravioleta-visible (UV/VIS) es una espectroscopia de emisin de fotones y una espectrofotometra. Utiliza radiacin
electromagntica (luz) de las regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro electromagntico, es decir, una longitud de onda entre 380nm y 780nm. La radiacin absorbida por las molculas desde esta regin del espectro provoca transiciones electrnicas que pueden ser cuantificadas.
La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de molculas, y adems, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia.
Se utiliza de manera general en la determinacin cuantitativa de los componentes de soluciones de iones de metales de transicin y compuestos orgnicos altamente conjugados.
determinar pequeas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de metales en aleaciones o la concentracin de cierto medicamento que puede llegar a ciertas partes del cuerpo.
Longitud de onda: se define como la distancia entre los picos adyacentes y puede ser medida en metros, centmetros, o nanometros ( meters).
Frecuencia: es el nmero de ondas por ciclos usualmente sus unidades estn dadas en Hertz que son ciclos por segundos (Hz).
La luminiscencia ocurre debido a la emisin de luz por una sustancia determinada y esto ocurre cuando un electrn regresa a su estado inicial despus de haber sido excitado y libera una energa como un fotn.
Podemos encontrar tres tipos de nombres para la espectroscopia de luminiscencia, para diferentes tcnicas:
Esta espectrofotometra utiliza radiaciones del campo UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm (UV cercano) y de luz visible de 400 a 800 29
nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar las soluciones en la regin ultravioleta-visible del espectro. Se rige por una ley muy importante: la ecuacin de Beer-Lambert. Ley de Beer-Lambert Una expresin para la ecuacin de Beer-Lambert es la siguiente:
fotocolorimetra, = es el rango de luz que sale del tubo de fotocolorimetra y que va a llegar a la celda fotoelctrica donde es captada y medida = es la capacidad de captacin del haz del campo electromagntico, = es la longitud del tubo de fotocolorimetra, en cm. = es la concentracin de la muestra ya ubicada en el tubo de fotocolorimetra. La ley de Beer permite cuantificar la concentracin de una muestra por UV, tambin puede ser expresada de la siguiente manera:
donde: es la Absorbancia es el Coeficiente de extincin (Caracterstico de cada sustancia). es el Largo del paso de la cuba (cm). es la Concentracin (moles/l).
30
Las muestras en solucin se ponen en una pequea celda de Si. Se utilizan dos lmparas: una de H o deuterio para la regin UV, y una de W / halgeno para la regin visible
Se utiliza tambin una celda de referencia que contiene slo solvente. La luz pasa simultneamente por la celda de muestra y la celda de referencia.
El espectrmetro compara la luz que pasa por la muestra con la que pasa por la celda de referencia.
La radiacin transmitida es detectada y el espectrmetro obtiene el espectro de absorcin al barrer la longitud de onda de la luz.
3.8.
Posibilidad
anlisis
mayora
materiales
no
reflectores,
Desventajas Adems de los problemas de la reflexin en la superficie nos encontramos con otros problemas:
Est limitada principalmente a muestra en polvo. Si la muestra contiene agua y debido al calentamiento producido por el rayo de luz infrarrojo, sta se puede evaporar dando lugar a vapor de agua que causa fuertes interferencias en el espectro.
El llenado de la celda es poco reproducible sobre todo cuando se quiere trabajar en anlisis cuantitativo.
32
INDICE
Espectroscopia General....................................................................................................................... 1 1. 2. Aspectos generales...................................................................................................................... 1 Etimologa.................................................................................................................................... 2 2.1. Origen .................................................................................................................................. 2 Relacin con el estudio de los astros .......................................................................... 4
2.1.1. 3.
Campos de estudio ...................................................................................................................... 5 3.1. Espectroscopia astronmica. .............................................................................................. 5 Estrellas. ...................................................................................................................... 5 Nebulosas .................................................................................................................... 7 Galaxias ....................................................................................................................... 8 Cusares ...................................................................................................................... 8 Planetas y asteroides................................................................................................... 9 Cometas....................................................................................................................... 9
Espectroscopia de absorcin atmica (AA) ........................................................................... 10 3.2.1. 3.2.2. Descripcin ................................................................................................................ 10 Mtodos. ................................................................................................................... 11
3.3.
3.4.1. 3.5.
Espectroscopia de resonancia magntica nuclear ................................................................ 17 Tipos de RMN ................................................................................................................ 18 Espectroscopia de RMN con Onda Continua (CW: Continuous Wave) ................. 18 Espectroscopia de RMN de pulsos y Transformada de Fourier ............................ 19 RMN Multidimensional ......................................................................................... 20
3.5.1.
Instrumentacin en Resonancia Magntica Nuclear: el espectrmetro ...................... 21 Informacin obtenida mediante RMN .......................................................................... 22
Espectroscopia infrarroja ...................................................................................................... 24 Espectroscopia del infrarrojo cercano .......................................................................... 24 Instrumentacin y Tcnicas................................................................................... 24 33
3.6.1.
3.6.1.1.
Aplicaciones........................................................................................................... 25
Espectroscopia del infrarrojo medio ............................................................................. 26 Espectroscopia del infrarrojo lejano ............................................................................. 26 Aplicaciones........................................................................................................... 27
3.6.3.1.
Resumen de absorciones de enlaces en molculas orgnicas ...................................................... 28 3.7. Espectroscopia ultravioleta-visible ....................................................................................... 28 El espectrofotmetro ultravioleta-visible ..................................................................... 29 Caractersticas del sistema ............................................................................................ 31 Tipos de Espectrofotmetros ........................................................................................ 31
Espectroscopia de Reflectancia Difusa (DRIFTS) ................................................................ 31 Ventajas y desventajas del DRIFTS ................................................................................ 31
3.8.1.
34