Dicas do prof.

Q para o exame de BQI Aula 1 - Preparao de Solues algumas contas do gnero daquelas que foram feitas na aula 1

Molalidade e Normalidade: Exemplos: Hcl 1M = 1N H2SO4 1M e 2N Normalidade = capacidade de um cido ou base em transferir ou aceitar H . Aplica-se apenas a cidos e bases.
+

Aula 2 Preparao de Solues-Tampo e constatao do efeito tampo o que um tampo? onde que eficiente e dar exemplos de solues tampo

Soluo-Tampo soluo aquosa contendo uma mistura de um par cido-base conjugado, cujo pH no varia significativamente aquando da adio de pequenas quantidades de cidos ou bases. Os tampes estabilizam o pH de uma soluo. Os fludos biolgicos so tamponados! O pH do sangue 7,2. O principal sistema tampo do nosso sangue o cido Carbnico. Outro sistema tampo muito importante so as protenas plasmticas no plasma, principalmente a Albumina. O que pode provocar a alterao do pH? Uma insuficiente troca gasosa. O pH no estmago 2. Os ces quando ingerem um osso, no estmago este transforma-se numa pasta de Carbonato de Clcio. Quando esta pasta chega ao clon, absorve a gua que a pasta tem e essa pasta transforma-se numa pedra e fica estanque. Obstipao

Aula 3 Determinao do ndice de Saponificao do leo Alimentar o que o ndice de acidez, saponificao e ster. Estequiometria da reaco.

A reaco de saponificao a reaco de um ster (TG) com uma base forte (KOH) para produzir um lcool (glicerol) e sais alcalinos de cidos gordos designados por sabo de K (KAG). Equao da reaco: 1 TG + 3 KOH aquecimento 1 glicerol + 3 KAG (sabo de K) O KOH serve para libertar as molculas de cidos gordos, ficando livres.

ndice de Acidez (IA) e ndice de Saponificao so 2 ndices que avaliam a qualidade do azeite. ndice de Acidez (IA) :mg KOH necessrios para saponificar 1g de leo a frio (cidos gordos livres). ndice de Saponificao (IS = IA + IE): mg KOH necessrios para saponificar 1g de leo a quente (cidos gordos livres esterificados). ndice de ster (IE): IE = IS IA (cidos Gordos esterificados) ndice de Acidez no azeite: < 0,5 azeite extra-virgem 0,5 < azeite < 1 azeite virgem > 1 no um bom azeite para a indstria alimentar Existem 2 tipos de lpidos: Estruturais e de Reserva. Dentro dos lpidos de reserva temos os Triacilgliceris (mais conhecidos por Triglicridos). Os Triglicridos (TG) so a principal forma de armazenamento de energia. Diferenas entre Azeite e leos Industriais Mtodo de extraco. No azeite processado apenas mecanicamente e no h possibilidade de aparecer solventes orgnicos. Acontece o contrio nos leos. Nos leos no temos ndice de acidez porque so estveis. Monoglicridos Diglicridos Triglicridos Triglicridos Diglicridos (a ligao rompe e resulta glicerol e cidos gordos livres que ficam com a extremidade carboxlica facilmente oxidvel, isto ficam mais propensos oxidao, logo rancificao e maior acidez). Mais cidos gordos lives Maior Oxidao, logo no um produto estvel e da os azeites terem essa regulamentao pelo ndice de acidez. Objectivo da determinao do ndice de saponificao: medir o grau de deteriorao e grau de estabilidade das gorduras verificar se as propriedades dos leos esto de acordo com as especificaes identificar possveis fraudes e adulteraes Aula 4 Determinao dos parmetros estruturais do glicognio estequiometria da reaco da aula 4 quais as condies ideais para que se d a reaco (coluna de carbite, etc..) qual a interferncia do CO2

A gua tem que ser fervida para libertar o CO2 dissolvido. Quais so as condies para que esta tcnica ocorra correctamente? Coluna de Carbite gua fervida Periodato de Sdio (NAIO4) protegido do sol

Gligognio polmero ramificado de resduos de glucose. um Homopolmero porque constitudo por um nico tipo de acar, a glucose. No sabemos a massa molar do glicognio, porque esta molcula est sempre a mudar, mas sabemos a massa molar da glucose. Glicognio + Periodato CH3COOH (apontei isto, mas no sei explicar) A Insulina e o Glucagon so as enzimas que regulam a concentrao de glicognio. Fgado repe nveis de glucose Msculo todo o glicognio que acumula fica para utilizao prpria. Aula 5 Princpios e prtica da centrifugao relacione a fora centrfuga necessria para a separao de clulas, protenas, vrus tem a ver com a fora necessria para a separao, penso que seja para ordenar lei de stokes (em exame podem pedir para escrevermos a frmula e legendar cada elemento da frmula) diferenas entre as centrifugaes (vrios tipos)

Centrifugao mtodo analtico baseado na separao de partculas dispersas num meio lquido, por aplicao de uma fora centrfuga adequada. As centrfulas podem classificar-se em 3 categorias: Centrfugas de baixa velocidade (< 5.000 rpm, ~600g) Centrfugas de alta velocidade (< 25.000 rpm, ~6000g) Ultra-centrfugas (< 100.000 rpm, ~60000g) clulas atacadas por vrus

Utilizaes: Separao Purificao Caracterizao

Vantagens: Simples Verstil Utilizao corrente

Existem 2 tipos de processos de centrifugao: Preparativa, a qual utilizada para isolar partculas especficas para posteriormente serem alvo de estudo com outras metodologias Analtica, a qual utilizada para medir as propriedades fsicas das partculas sedimentadas

Factores que influenciam a velocidade de centrifugao (Lei de Stokes): Fora Centrfuga Viscosidade da partcula ( a dificuldade do corpo a afundar. Exemplo: afundar em azeite mais difcil que afundar em gua) Tamanho da partcula Diferena de densidade entre a partcula e o meio
2

Intensidade da Fora Centrfuga: Fc = m r Fora Centrfuga Relativa: RCF(g) = x r / g ou RCF(g) = x r / g

2 2

Teoria da sedimentao lei de Stokes:

Vs velocidade de sedimentao r raio da partcula g fora centrfuga p densidade da partcula f densidade do fludo viscosidade do fludo

Atravs da Lei de Stokes, verificamos que: A velocidade de sedimentao da partcula directamente proporcional ao tamanho da partcula (quanto maior raio da partcula, maior velocidade de sedimentao) A velocidade de sedimentao proporcional diferena entre a densidade da partcula e do fludo na qual est suspensa. A Sedimentao ZERO quando a densidade da partcula e do fludo igual. Se a densidade do fludo excede a densidade da partcula, ocorre a flutuao da partcula. A velocidade de sedimentao directamente proporcional fora centrfuga A velocidade de sedimentao inversamente proporcional viscosidade do fludo (quanto maior a viscosidade do fludo, menor a velocidade de sedimentao porque maior o atrito sedimentao)
-13

O Coeficiente de Sedimentao expresso normalmente em unidades de Svedberg: 1S = 10

seg

Tipos de Centrifugao: Centrifugao Diferencial (consiste em sujeitar a amostra homognea a repetidas

centrifugaes aumentando a fora centrfuga, permitindo a separao dos diversos constituintes);

Centrifugao em gradiente de densidade: Velocidade Zonal Isopcnica

A principal diferena entre as duas centrifugaes que na zonal o gradiente "construdo" por ns, dependendo do peso molecular das substncias a separar.Na isopicnica o gradiente criado pela utilizao de uma substncia de csio. Centrifugao zonal- a amostra aplica-se na camada mais superficial, e as molculas da mistura a separar vo migrando de acordo com o seu peso, tamanho e massa. Quanto maior o tamanho e a massa mais rapidamente se deslocam. Centrifugao isopicnica- as substncias da mistura so essencialmente mobilizadas por afinidade com a densidade do meio. Neste sentido, as molculas por si s "criam os seus prprios patamares" de acordo com a sua afinidade para as densidades.

Aula 6 Tcnicas Electroforticas e Aula 7 Electroforese de protenas do soro sanguneo em papel Do pH e perguntam para onde migra a protena, sabendo o ponto isoelctrico Vantagens e desvantagens do papel de filtro e acetato de celulose Quais os parmetros que afectam a electroforese? Lei de Ohm e Lei de Joule Ninidrina (corante), Hidridantina (forma reduzida da Ninidrina) e Metilcelulose (solvente)

O objectivo da Electroforese separar molculas com caractersticas mais ou menos semelhantes. A caracterstica que tm que ter a carga elctrica. As protenas e os aminocidos so bons exemplos e so espcies anfotricas porque ou se comportam como cido ou base.

No exame do determinado pH e perguntam para onde migra a protena? Todas as protenas tm um ponto isoelctrico. No ponto isoelctrico as protenas e aminocidos tm carga neutra. Se as protenas ou aminocidos forem colocados num pH superior ao ponto isoelctrico, ela vai ter carga negativa porque est num meio com excesso de cargas negativas. O que caracteriza um pH alcalino o excesso de hidroxianies (OH , cargas negativas). Um pH cido, corresponde a excesso de protes (carga positiva).
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As protenas migram de acordo com a diferena entre o seu PI e o pH. As protenas so anfotricas, comportam-se como cidos ou bases de acordo com o pH onde esto.

Existem 2 tipos de suporte na Electroforese: Papel de Filtro: Superfcie rugosa Poro de tamanho no uniforme No permite transparentizao Exige um tempo de corrida longo Fraca resoluo Necessrio aplicar uma grande quantidade de amostra A nica vantagem ser mais econmico que o acetato de celulose

Acetato de Celulose: Textura lisa Poro de tamanho uniforme Possibilidade de transparentizar Tempo de corrida rpido Boa resoluo Necessita apenas de uma pequena quantidade de amostra

Quais os parmetros que afectam a electroforese? Caractersticas do tampo: Fora inica do tampo (quanto mais baixa fora inica, mais rpida a migrao e menos produo de calor. Quanto maior a fora inica, maior n de partculas com carga elctrica e maior o atrito das molculas a chocar umas com as outras, logo menor a migrao. A Fora inica tambm condiciona negativamente a produo de calor) Carga inica do tampo

Electricidade (Parte elctrica): Diferena de potencial elctrico (aumentar o potencial elctrico s produtivo at determinado ponto) Intensidade da corrente

Factores da prpria electroforese: Tempo de corrida

Fenmenos Fsico-Qumicos que afectam a electroforese: Electroendosmose (tem a ver com a interaco dos sais que constituem o tampo com as molculas submetidas electroforese) Evaporao e Fluxo de pavio (o factor que mais condiciona a produo de calor durante a electroforese)

Electroendosmose Esses ioes podem alterar a carga da molecula/proteina. Se os ies do sal que rodearem a proteina
anularem a carga da proteina - > a proteina no migra ; se os ioes inverterem a carga da proteina - > inverte o sentido de migrao ; se os ies aumentarem a carga da proteina -> aumenta a migrao no sentido normal.

Quais so os factores que afectam a mobilidade electrofortica? Molcula com raio maior, maior atrito Viscosidade do meio qto maior viscosidade, mais difcil da molcula progredir

Quais so as leis que regem a electroforese? Lei de Ohm (V = I x R) Lei de Joule (Calor = Intensidade x resistncia x tempo)
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O Plasma a parte lquida do sangue composta por gua (cerca de 91%), protenas (7%) e outros solutos (nutrientes, gases, ies, etc...). As protenas que existem no Plasma so as Albuminas (58%), Globulinas (38%) e Fibrinognio (4%). O Fibrinognio responsvel pela formao do cogulo sanguneo. A Fibrina uma rede de fibras proteicas filiforme (so elas que costituem o cogulo sanguneo). Na coagulao o Fibrinognio solvel transformado em Fibrina insolvel, por aco da trombina. Os Anticoagulantes como a Heparina produzida pelos Basfilos e o EDTA (cido etilenodiaminotetractico) controlam a formao do cogulo. O soro a poro lquida do sangue aps a remoo da fibrina e das clulas sanguneas. Devido presena de Fibrina, o plasma no utilizado para anlise do sangue (?).

Em termos de protenas plasmticas, temos duas como principais: Albumina principal funo regular a presso onctica (capacidade do sangue reter a gua e no a perder) Globulinas:
1, 2,

e (Imunoglobolina ou Anticorpo)

Molculas de gua Albumina

As molculas de gua ligam-se albumina. Sem a albumina a gua escapa para o peritoneu. Se o espao pleural ficar cheio de lquido, o pulmo no tem espao para distender, o que conduz a uma dificuldade respiratria que evolui para a morte do animal. Nos seres humanos a acumulao mais ao nvel abdominal.

Baixos valores de Albumina, devido a: Necrose do Fgado (grande destruio do fgado) Cirrose Alcolica Hepatites Virais

Ninidrina promove uma descarboxilao e desaminaes que so oxidativas. Ficamos com CO 2 que desaparece, carbono e grupo amina. A Ninidrina potencialmente oxidante e pode oxidar-se a ela prpria. Aula 9 Tcnicas Espectrofotomtricas Pressupostos da Lei Lambert-Beer composio do espectrofotmetro (tudo explicado) explicar o tubo fotomultiplicador

Ateno: Espectroscopia de IV no tem nada a ver com Espectrofotometria!

Espectrofotometria:

A Espectrofotometria feita apenas com radiao monocromtica (s com um comprimento de onda).

Componentes/Composio de um Espectrofotmetro:

Lmpada (Tungstnio, Hidrognio/Dentrio e Xnon)

Elemento Monocromador (faz a difraco da luz em diferentes comprimentos de onda, isto ,

faz com que um feixe de luz policromtico se transforme em vrios feixes de luz monocromticos)
Compartimento da Amostra onde colocamos a cuvete

Detector (o Tubo Fotomultiplicador simultaneamente detector e amplificador e por isso o mais utilizado)

Amplificador Registador

Tubo Fotomultiplicador conjunto de dmeros electricamente excitveis. responsvel pelo efeito fotoelctrico.

Cuvetes (compartimento para a anlise da amostra. Macro e micro-cuvetes): No utilizadas em UV: Vidro e plstico Utilizadas em UV: Quartzo e Slica

Lmpadas em Espectrofotometria: A lmpada de UV mais utilizada o Deutrio (istopo do Hidrognio). Utilizamos lmpadas de Deutrio, porque h uma gama contnua com todos os compartimentos de onda, ao contrrio do hidrognio que uma gama descontnua.

Lei de Lambert e Beer: A=xbxc Em que: A Absorvncia absortividade molar (varia de molcula para molcula) b dimetro interno da cuvete que normalmente 1 cm c- concentrao da soluo em mol/l

A absorvncia depende da concentrao e absortividade molar. Para a mesma concentrao, s depende da concentrao.

Pressupostos da Lei de Lambert-Beer: Monocromacidade do feixe luminoso Solvente com mnimo de absoro ptica Absorvncia lida no comprimento de onda ptimo Absorvncia de 0,5 a 2,0 A. Asorvncia menor que 0,5 significa que estamos a trabalhar com material muito diludo e no podemos utilizar, mas podemos concentrar a amostra! Absorvncia superior a 2,0 significa que estamos a trabalhar com valores muito elevados, mas

podemos diluir a amostra para ficar dentro da escala dos 0,5-2,0. Numa absorvncia superior a 2 tambm h fenmenos fsico-qumicos que interferem com a absorvncia. Em absorvncias menores que 0,5 ou maiores que 2 deixa de existir linearidade da relao entre concentrao e absorvncia.

Relao entre Absorvncia e Transmitncia: o logaritmo negativo da Transmitncia igual Absorvncia (A = - log T).

Aula 11- Determinao da protena total pelo mtodo do biureto

Complexo Hexacoordenado Cu-Protenas tetracoordenado mas por ter mais duas ligaes chama-se hexacoordenado Composio do Reagente de Biureto (Hidrxido de Sdio e Sulfato de Cobre pentahidratado com Tartarato duplo de Sdio e Potssio tetrahidratado). O composto activo do reagente de biureto o Sulfato de Cobre que vai interagir com as protenas.

O que tenho para aqui apontado que o biureto (composto por KOH e CuSO4) usado para determinao da concentrao de protenas atravs de tcnicas como a espectrofotometria e apresenta uma cor azul escura quando em contacto com estas.. no sei se preciso saber muito mais..

So efectuados 3 ensaios: Ensaio em branco, ensaio da amostra e ensaio controlo. Ensaio Branco - toda a absoro que poder existir sem o complexo hexacoordenado (para assim se fazer a tara, no considerando esta absoro). Ensaio da Amostra - plasma do animal (neste caso Bovino) no qual vamos determinar a concentrao da protena. Ensaio Controlo permite verificar se os procedimentos tcnicos foram efectuados de forma adequada (com plasma de bovino normal). Ovalbumina (albumina do ovo) muito semelhante albumina, mas mais econmica. Medimos absorvncia a 545nm a 0,20, 0,40, 0,60, 0,80, 1,00 e 1,20 ml de uma soluo de ovalbumina com concentrao de 1g/dl. Achamos uma equao da recta. A partir dessa equao da recta calculamos a concentrao de protena do Bovino que estamos a analisar, substituindo a absorvncia do plasma-EDTA bovino (corresponde ao y da equao) tambm medida a 545nm na equao da recta. Se valor obtido estiver entre 47-74g/l significa que o 10

animal est de boa sade ao nvel das protenas plasmticas. Faz-se o mesmo com o controlo. Se tambm estiver entre estes valores de protenas plasmticas, significa que a anlise foi bem feita. R2 = 1 excelente correlao

Aula 12 Determinao do azoto -amnico Estequiometria da reaco Explicar a reaco da Ninidrina (descarboxilao e desaminao oxidativa) Condies da reaco Produtos da reaco (esqueleto carbonado do aminocido e CO2)

Reaco da Ninidrina: -aminocido + 2 Ninidrina

descarboxilao e desaminao oxidativa

Prpura de Ruhemann + RCHO + CO2

O azoto -amnico consiste concretamente em aminocidos e ns vamos ver se o teor em aminocidos est de acordo com a espcie.

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