DETERMINACIN DEL ORIGEN GEOGRFICO Y LA ADULTERACIN DE ALIMENTOS UTILIZANDO ISOTOPOS ESTABLES

1. INTRODUCCIN

En la actualidad, es una preocupacin general la autenticidad, y por ende el origen, de los productos que estn consumiendo ya que estos pueden ser adulterados fcilmente y estas adulteraciones son muy difciles de detectar. Por ejemplo, el aceite de oliva, el cual es sumamente costoso por sus propiedades organolpticas y nutricionales, es comnmente adulterado con aceites vegetales comunes, disminuyendo sus

caractersticas y engaando fcilmente al productor, por otro lado, en Australia y Suiza se han encontrado en el mercado una gran cantidad de quesos de cabra adulterados con leche de vacunos. Como los casos expuestos anteriormente, existen un sin nmero de ejemplos ms que demuestran, no solamente de adulteraciones del producto original, sino falsedad del origen de diferentes alimentos, entre estos se encuentra el caso del t procedente de china, muy cotizado por su historia y caractersticas, el cual ha sido falsificado durante aos.

Por consiguiente, la sociedad cientfica y los productores de alimentos se han visto en la necesidad de encontrar una manera de detectar estos parmetros en los productos que se van a ofrecer a los consumidores, para no engaar a los mismos y, por otro lado, no perjudicar a los dems productores desvariando los precios de los productos.

As, uno de los primero anlisis que se pens realizar fue el anlisis de ADN de los productos, obteniendo de esta manera una informacin del origen del alimento, mas no de las posibles adulteraciones del mismo, adems se debe considerar que el costo de este anlisis es sumamente alto y los tiempos de espera excesivos (Ghidini, 2006). Despus de aos de investigaciones, se ha descubierto que el anlisis de isotopos estables presentes dentro del alimento, utilizando tcnicas como el IRMS, CG-IRMS, ICP-MS, CG-C/TC-IRMS, permite determinar el origen, la pureza y procedencia del producto, adems de, en caso de alimentos procedentes de animales, la raza del animal y el tipo de alimentacin del mismo.

El anlisis de isotopos estables es uno de los mtodos ms viables para el control de calidad de los alimentos ya que permite encontrar la trazabilidad del producto y a su vez detectar la trazabilidad del compuesto con el cual se ha realizado el fraude del mismo.

En tiempos modernos, esta tcnica se utiliza principalmente en Europa desde principios de los aos 2000 y en Estados Unidos. En Amrica Latina, principalmente Mxico, Argentina y Chile, solamente se han realizado estudios a nivel de laboratorio sobre la utilidad de estos isotopos para la calidad de los productos, pero, debido a la falta de instrumentacin, no es una tcnica aplicable.

1.1. ISOTOPOS ESTABLES

Un isotopo es un elemento que tiene la misma masa atmica que un elemento pero diferente nmero atmico, como es el caso del carbono, el cual presente 3 istopos, los cuales presentan una masa atmica de seis, pero un nmero atmico diferente (12, 13 y 14).

En la naturaleza existen tres clases de istopos: los radioactivos, que se transforman en otros elementos y presentan una vida finita, los cosmognicos, que son producto de la interaccin entre los elementos en la atmosfera superior y los rayos que inciden sobre ellos y finalmente los estables, que estn presentes en casi todos los objetos y no se transforman en otros elementos (Prez, 2010).

Algunas de las caractersticas de los istopos estables son que presentan un bajo peso molecular, poseen diferencias de masas relativamente altas, corresponden a elementos que son abundantes en la Tierra y la abundancia del istopo ms ligero es mayor que la del ms pesado. Como ejemplo tenemos el caso del 1H y su istopo ms pesado 2H o D (deuterio), el cual se encuentra en menor proporcin.

Los principales elementos que presentan isotopos estables de inters en la industria alimenticia son el hidrgeno, carbono, nitrgeno, oxgeno, azufre y estroncio,

presentando cada uno de estos un nmero especfico de isotopos que se puede analizar, siendo los de mayor inters los de bajo peso molecular (Ghidini, 2006).

1.1.1. ABUNDANCIA DE LOS ISOTOPOS ESTABLES

En la siguiente Tabla 1 se muestra la abundancia de los isotopos estables en el planeta, las variaciones en la abundancia de carbono, hidrgeno y nitrgeno (principales componentes de los compuestos orgnicos) son de inters para este estudio, ya que estos son los que estarn presentes, en mayor cantidad, en los alimentos y van a variar dependiendo del lugar donde este el mismo, las condiciones climticas, la vegetacin, las acciones del hombre, los animales, entre otros.

Elementos

Istopos
1

Abundancia (%) 99,985 0,015 98,89 1,11 99,67 0,37 99,759 0,037 0,204

H H C C

Hidrgeno
2 12

Carbono
13 14

N N O O O

Nitrgeno
15 16

Oxgeno

17

18

Elementos

Istopos
32

Abundancia (%) 95,00 0,76 4,22 0,014 0,56 9,86 7,02 82,56

S S S S

33

Azufre
34 36

84

Sr Sr Sr Sr

86

Estroncio
87 88

Tabla 1. Abundancia de los isotopos estables de los principales elementos presentes en el planeta Tierra (Ghidini, 2006).

1.1.2. COMPOSICIN ISOTPICA DE UNA MUESTRA

Comnmente se representa con notacin delta (), en donde la composicin isotpica o abundancia de un isotopo se relaciona con la abundancia estndar, como se muestra en la Ecuacin 1.

Ecuacin 1. Composicin isotpica de la muestra

Donde R representa la relacin molar entre el isotopo ms pesado con respecto al ms liviano. Si se toma como elemento de estudio el oxgeno se tendra que la R relacionara los isotopos 16 O con el 18 O, como se muestra a continuacin:

Ecuacin 2: Razn entre istopos de oxigeno

Los estndares para los isotopos ms analizados se presentan en la Tabla 2. Existen gran cantidad de estndares, dependiendo del lugar donde se realice las mediciones, pero los ms utilizados son los que se presentan en la tabla siguiente, siendo el estndar del estroncio el menos utilizado, por lo cual no se contempla como importante. Relacin Elemento isotpica H C N O S
2

Estndar Internacional H/1H C/12C

Standard Mean Ocean Water (SMOW) Pee Dee Belemnite (PDB) Atmospheric air (AIR) Standard Mean Ocean Water (SMOW) Canyon Diablo Triolite (CDT)

0,0001558 0,0112372 0,0036765 0,0020052 0,0450045

13

15

N/14N

18

O/16 O S/32S

34

Tabla 2. R estndares para principales relaciones isotpicas

1.1.3. VARIACIN ISOTPICA EN LA NATURALEZA

La abundancia de los istopos estables en la naturaleza es limitada, especialmente para aquellos isotopos que se encuentran en la atmosfera, como es el hidrgeno u oxgeno, sin embargo dependiendo de la flora de los diferentes lugares, la fauna, la accin humana, los fenmenos fsicos del planeta, estas proporciones varan, convirtindose en la huella digital de los diferentes productos.

Si se habla especficamente de la variacin ambiental de los isotopos, estos se vern afectados por la accin humana, en especial la de los isotopos de azufre y nitrgeno, mientras que el carbono variara por la accin microbiana y de las diferentes degradaciones de este por accin de los seres vivos. Por otro lado, elementos como el estroncio solamente son provistos por la degradacin de rocas en el suelo.

Por otro lado, el contenido de

13

C/12C en las plantas depende del proceso

fotosinttico que estas sigan; C3, C4 o CAM, las cuales producen diferentes porcentajes de carbono, haciendo fcil la identificacin de alteraciones en los alimentos, en los que se usan edulcorantes en especial.

Siguiendo el concepto de la fotosntesis propuesto en el prrafo anterior, se tiene tambin la variacin de los isotopos de los diferentes elementos dentro de los animales debido al alimento que consumen y tambin al ambiente al que se encuentran expuestos, siendo este un indicativo inequvoco de la procedencia de los productos animales. Pero aqu tambin se expone una gran problemtica, cuando los productos provienen de lugares muy cercanos, con caractersticas ambientales similares y contaminantes cercanos, esta huella digital puede ser difusa entre ambos objetos y fcilmente confundida, es en estos casos que el anlisis de isotopos de elementos pesados presenta su utilidad principal, pues estos elementos son propios del lugar y muchas veces propios de especies de animales y de plantas.

2. MTODOS DE ANLISIS DE ISOTOPOS ESTABLES PARA LA TRAZABILIDAD DE ALIMENTOS

Hace algunos aos, el anlisis isotpico era simplemente un sueo de los investigadores, ya que supona una gran cantidad de tiempo para obtener resultados pobres, adems del alto gasto de reactivos, contaminaciones cruzadas, bajos lmites de deteccin y un sin nmero de problemas ms que hacan de este estudio casi infructuoso. Pero desde el desarrollo de la espectrometra de masas se hizo posible y viable estos estudios, a tal punto que, en la actualidad, fcilmente se puede realizar el anlisis de sin nmero de isotopos y sus transformaciones (Ghidini, 2006).

El anlisis de istopos estables se realiza en forma de molculas gaseosas del tipo H2, SO2, CO o N2, las cuales son introducidas en el espectrmetro de masas y analizadas, obteniendo su identificacin y cuantificacin en relacin masa/carga (m/z). Estos equipos son conocidos en la actualidad como IRMS (Isotope Ratio Mass Spectrometers) por sus siglas en ingls, los cuales han sido especficamente desarrollados para el anlisis de isotopos en diferentes matrices.

Los IRMS pueden ser utilizados solos o acoplados a diferentes mtodos de separacin, siendo el cromatgrafo de gases el ms utilizado por la naturaleza de los istopos utilizados.

Por otro lado, se debe considerar la existencia de istopos estables de elementos de alto peso molecular, los cuales no pueden ser volatilizados, pero de igual forma presentan una gran importancia en la trazabilidad de los alimentos, para estos elementos se han realizado anlisis con ICP-MS, pero este mtodo es demasiado costoso por lo cual sus aplicaciones se han visto seriamente comprometidas.

2.1.IRMS Un IRMS, igual que un cromatgrafo de gases comn, est formado por cuatro partes principales, las cuales solamente se han ido automatizando o hacindose ms selectivas, pero en esencia no han cambiado desde el inicio de esta tcnica.

Sistema de introduccin de muestra Existen tres formas para introducir la muestra dentro del analizador, siendo estas las que determinaran el nombre con el que se conoce al mismo.

o Introduccin indirecta La evaporacin de la muestra se realiza en un recipiente externo al espectrmetro. Este proceso se encuentra poco automatizado y de gran destreza manual de los analistas, haciendo de este un mtodo dependiente del operador.

o Introduccin directa En este mtodo, se introduce la muestra directamente en la fuente de iones a travs de una varilla metlica, la cual en su punta tiene un capilar en donde se encuentra colocada la muestra. La gran dificultad de este mtodo es cuando se introduce una muestra cristalina, la cual no se evapora de manera constante afectando el equilibrio dentro del equipo.

o Introduccin por cromatgrafo de gases Este es el equipo ms utilizado en la actualidad ya que permite una separacin previa de los componentes y una mayor selectividad. Como su nombre lo indica se acopla un equipo de cromatgrafo de gases antes del IRMS, en donde la muestra es volatizada y separada en columnas

selectivas, pasando al detector en fracciones separadas y por ende facilitando la identificacin de los mismos.

Fuentes de iones La fuente de ionizacin produce un chorro de electrones que al chocar con las molculas originan cationes monovalentes, los cuales son extrados y aceleradas mediante potenciales crecientes (3Kv).

Analizador para la separacin Despus de que los cationes son acelerados en la fuente de iones, son dirigidos hacia el campo magntico donde el haz nico producido ser separado en otros tantos segn las diferentes masas moleculares (que estn determinadas por los diferentes istopos presentes en ellas).

Sistema detector o analizador Finalmente, los iones de cada uno de estos haces separados, impactan en Copas de Faraday dispuestas en posiciones fijas. En cada impacto, el catin toma el electrn necesario para neutralizarse y este potencial elctrico producido se neutraliza al pasar por una resistencia de precisin conectada a tierra. La caida de voltaje en la resistencia ser proporcional a la intensidad del haz de iones. Este voltaje tras un convertidor voltaje/frecuencia (V/F) se amplifica y contabiliza con el software correspondiente en unidades de masa/carga (m/z).

3. ESTUDIOS

REALIZADOS

EN

EL

ANLISIS

DE

PUREZA

TRAZABILIDAD DE ALIMENTOS

Desde que los alimentos fueron considerados bienes intercambiables con un valor sobre ellos, el origen y la complejidad de los mismos les otorg diferencias significativas y es en ese momento que la adulteracin y el fraude de estos comenz.

Durante aos, la adulteracin del aceite de oliva con aceites vegetal ha sido el principal problema en los pases europeos conjuntamente con la adulteracin del queso de cabra con leche de vacuno en las mismas regiones y Australia. Por otro lado el fraude de procedencia de t chino japons, adulterando su provincia de origen. Adems de diferentes adulteraciones de jugos de frutas y procedencias de productos Mexicanos.

Como diferentes autores alrededor del mundo exponen, la adulteracin y procedencia del producto, adems de la sanidad de los mismos es una de las ms grandes preocupaciones de la industria alimenticia.

Especficamente en la Unin Europea, la preocupacin de la procedencia del prosciutto di Parma de Italia y el aceite de oliva griego de Kalamata, entre otros

productos como el vino del Francia y dems son de tal importancia por su precio que es en este lugar donde se impuls con mayor fuerza el desarrollo del estudio del origen y pureza de los diferentes alimentos de renombre que se producen, aplicando no solamente el anlisis de CG-IRMS, si no tambin ICP-MS, haciendo de la trazabilidad de los alimentos uno de los principales parmetros a considerarse en el control de calidad de estos productos (Romann, 2007).

Uno de los ejemplos ms claros de la trazabilidad de los alimentos, es el origen del t chino, ya que su precio depender de la regin de la que provenga, tanto as que en caso de fraude, el productor podra a llegar a ganar hasta el 200%. Long Zhang, Jia-rong Pan, Cheng Zhu realizaron este estudio utilizando como equipo analizador un CG-IRMS y determinaron que fcilmente se puede determinar el origen de las diferentes hojas de t, como se muestra en el grfico a continuacin.

A)

B)

Figura 1. A) Origen de las muestras analizadas B) Porcentaje de delta de isotopo de carbono

3.1.ARROZ

Uno de los ltimos estudios isotpicos con respecto al arroz fue realizado por Sazuki Yaeko, en el ao 2008, en donde se analizaron 14 muestras de arroz lavado Koshihikari de diferentes partes del mundo (1 de Australia, 12 de diferentes provincias de Japn y 1 de Estados Unidos) utilizando un equipo de EA/IRMS y se obtuvo como resultado el del porcentaje de la abundancia de oxgeno y nitrgeno (como se indica en el punto 1.1.2).

Utilizando la abundancia de los isotopos de nitrgeno y oxgeno se observ que se puede identificar fcilmente la procedencia de cada una de las muestras, aun del arroz procedente de las diferentes provincias de Japn, demostrando de esta manera que se puede encontrar la procedencia de un arroz basando este criterio en la abundancia isotpica del mismo.

En las siguientes grficas se observan algunos de los resultados obtenidos por este estudio, en donde se puede observar claramente la diferencia en la composicin isotpica con respecto al nitrgeno, carbono y oxgeno.

Figura 2. Comparacin isotpica de cuatro diferentes muestras de arroz. a) muestra de arroz australiano, b) muestra de arroz americano, c) y d) dos de las 12 muestras de arroz japons estudiadas.

3.2.LECHE

Como se mencion anteriormente el anlisis de la pureza de la leche y la procedencia de la misma es de suma importancia, ya que dependiendo del lugar de donde proviene esta leche y de su pureza aumenta su precio comercial.

La leche de cabra y especialmente el queso que se produce con esta, son sumamente cotizados alrededor del mundo, por lo cual esta leche es adulterada con

la del ganado vacuno, ms barata, provocando que esta actividad se transforme en habitual, provocando que se obtengan ganancias ilcitas para el productor.

La leche ha sido uno de los productos ms ampliamente estudiados en los ltimos aos en lo que se refiere a composicin isotpica, ya que su matriz es sumamente fcil de tratar y por otro lado, todos los factores que afectan al animal se vern reflejados en la leche, de tal forma que las variaciones isotpicos del alimento y el ambiente afectaran directamente a la abundancia de los mismos en la leche.

En el ao 2007, R.G. Crittenden, A.S. Andrewb, M. LeFournourc, M.D. Youngd, H. Middletond y R. Stockmanna realizaron un estudio en siete diferentes muestra de leche australiana para determinar el contenido multi-isotpico y por consiguiente desarrollar un mtodo aplicable para controlar la calidad de la leche y asegurar la procedencia de la misma.

El contenido multi-isotpico se refiere al anlisis de ms de dos deltas de porcentaje de istopos en las muestras, siendo los elementos analizados en este estudio el 13C/12C, 15N/14N, 18O/16O, 34S/32S y 87Rb/86Sr. Se utilizaron tcnicas como la IRMS y CG-C/TC-IRMS (utilizada para el anlisis de los isotopos del oxgeno).

Como se muestra en la Figura 3, se puede realizar identificar, con completa claridad, el lugar de origen de cada una de las muestras. Adems las adulteraciones se pueden identificar debido a que se observara un aumento o disminucin del de los diferentes istopos, siendo el ms detectable el del estroncio.

Figura 3. Comparacin de los perfiles de proporcin de istopos estables de las muestras de leche descremada recolectados en diferentes regiones lecheras de Australasia. Para cada ubicacin, barras de izquierda a derecha son las proporciones de istopos estables de carbono, nitrgeno, oxgeno, azufre y estroncio, respectivamente.

Por consiguientes, las diferentes condiciones ambientales, la contaminacin a la cual se encuentra expuesto el animal y el alimento que este consume van a variar su composicin isotpica, como ya se ha discutido anteriormente. La importancia de este estudio radica en que, sin importar la matriz, se puede realizar la trazabilidad de la leche usando la composicin isotpica.

3.3.VINOS

Como ya se ha visto en los otros alimentos, se puede obtener fcilmente el origen de los diferentes productos, gracias a la composicin isotpica dentro de los mismos.

Brasil es uno de los pocos productores de vino de Sudamrica, y gracias a su diversidad de clima y suelos, se pueden encontrar diferentes tipos de vinos como resultado. El Merlot y el Cabernet Sauvignon son los vinos ms representativos de la produccin brasilea y por consiguiente fueron los estudiados (Dutra, 2010).

Uno de los parmetros que se debe descartar en este estudio fue que los vinos analizados fueron elegidos de locaciones relativamente cercanas y casi sin ningn cambio ambiental memorable entre estas, adems de analizar una misma fruta, de diferente raza y se observ que los niveles de los isotopos de carbono variaron entre el Merlot y el Cabernet Sauvignon, por el mismo echo de la gentica de la planta, aunque esta variacin no es significativa. Por otro lado, los valores del de los isotopos del oxgeno son propios no solamente de cada clase de uva, sino de cada lugar de procedencia, siendo este parmetro por si solo capaz de demostrar la trazabilidad de los vinos.

La Tabla 3 presenta los resultados obtenidos en el estudio, y en especial permite observar de mejor manera la variacin de los istopos estudiados y por consiguiente su relacin con su tipo de uva y su origen.

Tabla 3. Valores de la proporcin de istopos 18O/16O (%) en agua de vino y 13C/12C (%) en etanol de los vinos.

Por otro lado, la adulteracin de los vinos, adems de la adicin de agua y azcar como lo exponen N. Dordevic y sus coautores en su publicacin del 2013, es uno de los problemas ms graves que puede ser identificado a travs de la proporcin isotpica del carbono y oxgeno. El los isotopos del carbono, como se expuso en el punto 1.1.3, depender del tipo de planta y las proporciones de carbono entre el azcar (sacarosa) y el dulce de la fruta varan enormemente, permitiendo fcilmente su identificacin, por otro lado, los isotopos de oxgeno van a variar dependiendo del agua con la cual se adulter, que presentara de la misma forma diferencias isotpicas muy fcilmente identificables.

Otro de los adulterantes ms comunes en este tipo de bebidas es el glicerol, pero este adulterante ha sido tan ampliamente estudiado que en los ltimos aos se ha visto dejado de lado, pero es importante recalcar que esta adulteracin se puede detectar por variaciones en la abundancia de los isotopos del oxgeno principalmente (Romann, 1998).

3.4.CARNES Y PRODUCTOS CRNICOS

A lo largo de este ensayo se ha hablado ampliamente del origen del alimento en s, pero en el caso de las carnes, estas dependern del alimento del animal, de su salud y de la raza del mismo, no solamente de su lugar de origen. Adems, en la Unin Europea y Estados Unidos, se da la opcin al consumidor de carne orgnica o tratada de forma normal, todos los aspectos de nutricin del animal y tratamiento de la carne despus del faenamiento y son estos aspectos los que motivaron para realizar los diferentes estudios.

A.P. Moloneya, B. Baharb,c, O. Schmidtc, C.M. Scrimgeourd, I.S. Begleye, F.J. Monahan realizaron un estudio completo de como la dieta diaria afecta la composicin isotpica de las carnes de comercio, utilizando un equipo de IRMS de flujo continuo y determinaron que la dieta afecta directamente la composicin multi-isotpica del producto final, adems que el cambio imprevisto de

alimentacin antes del proceso de faenamiento afecta esta composicin de una manera muy evidente, por ejemplo el 13C/12C (%) en la grasa del vacuno antes del cambio de dieta era de -30.37, mientras que al sufrir el cambio de alimentacin este valor subi a -27,51, variaciones que se observan en los diferentes tejidos del animal.

Tabla 4. Valores de de 13C/12C y 15N/14N de los diferentes tejidos de res antes del cambio repentino de alimento

Tabla 5. Valores de de

13

C/12C y

15

N/14N de los diferentes tejidos de res despus del

cambio repentino de alimento

3.5.MIEL

El anlisis de la miel es uno de las ms impresionantes, a nivel de istopos estables, ya que no solamente da el origen geogrfico del producto, si no tambin da una idea muy cercana del origen botnico del mismo, haciendo de este estudio uno de los ms importantes en cuestin de control de calidad.

Como bien se sabe, la miel ha sido adulterada durante aos por edulcorantes provenientes de la caa de azcar, haciendo que esta disminuya su calidad y se cristalice despus de algn tiempo, haciendo que el consumidor se sienta defraudado.

Anteriormente se expuso que existen diferentes tipos de plantas que de acuerdo a su proceso fotosinttico producen diferentes porcentajes de relacin de istopos, as que se puede diferenciar fcilmente cuando una miel ha sido adulterada, como lo demuestra el estudio realizado por Urska Kropf,,Terezija Golob, Marijan NecEmer, Peter Kump, Mojca Korosec, Jasna Bertoncelj y Nives Ogrinc, en donde se analizaron 271 muestras de miel eslovena, en donde se encontr que 6 de estas se encontraban adulteradas con sacarosa, ya que presentaron valores de proporcin de istopos de carbono y oxigeno diferentes a la considerada normal, demostrando de esta manera que se puede identificar fcilmente la sacarosa introducida.

Tabla 6. Porcentaje de sacarosa presente en las mieles adulteradas

4.

CONCLUSIONES

Se puede identificar fcilmente el origen de los alimentos y su pureza utilizando isotopos estables de bajo peso molecular, analizando solamente uno o gran cantidad, siendo el caso del multi-anlisis el ms exacto.

Las tcnicas de anlisis pueden ser variadas, partiendo desde un IRMS solo hasta un equipo de RMN o un ICP-MS, y el uso de cada una solamente depender del presupuesto de los laboratorios y de la sensibilidad de los resultados que se desee obtener.

Finalmente, el anlisis de isotopos estables puede ser, o es como en el caso de los pases de primer mundo, uno de los principales anlisis para control de calidad de los alimentos, en especial de los productos que provienen de los animales porque la abundancia de los isotopos estables dar informacin del animal, su nutricin y procesamiento.

5. REFERENCIAS Suzuki, Y., Chikaraishi, Y., Ogawa, N., Ohkouchi, N., Korenaga, T., (2008), Geographical origin of polished rice based on multiple element and stable isotope analyses, Japn.

Pilgrim, T., Watling, R., Grice, K., (2010), Application of trace element and stable isotope signatures to determine the provenance of tea (Camellia sinensis) samples, Australia.

Crittendena, R., Andrewb, A., LeFournourc, M., Youngd, M., Middletond, H., Stockmann, H., (2007), Determining the geographic origin of milk in Australasia using multi-element stable isotope ratio analysis, Australia.

Romann, A., Schmidt, H., Hermann, A., Ristow, R., (1998), Multielement stable isotope ratio analysis of glycerol to determine its origin in wine, Alemania.

Su Kim, K., Sung Kim, J., Hwang, I., Jeong, I., Khan, N., Sun Im Lee, Dong Bok Jeon, Yang Hoon Song, Kwan Suk Kim (2013), Application of Stable Isotope Ratio Analysis for Origin Authentication of Pork, Corea del Sur.

Spiros A., Drivelos, Constantinos A., Georgiou (2012), Recent developments in application of stable isotope analysis on agro-product authenticity and traceability, China.

Romann, A., (2007), Stable Isotope Database for European food products, Alemania

Dordevica, N., Wehrensa, R., Postmab, G.J., Buydensb, L.M.C., Camin, F., (2012), Statistical methods for improving verification of claims of origin for Italian wines based on stable isotope ratios, Italia.

Dordevic, N., Camin, F., Marianella, R.M., Postma, G.J., Buydens, L.M.C., Wehrens, R., (2013), Detecting the addition of sugar and water to wine, Italia.

Ghidini S., Ianieri A., Zanardi E., Conter M., Boschetti T., Iacumin P., Bracchi. P. G (2006), Stable isotopes determination in food authentication: a review, Roma.

Long Zhang, Jia-Rong Pan, Cheng Zhu (2012), Determination of the geographical origin of Chinese teas based on stable carbon and nitrogen isotope ratios, China.

Moloneya, A.P., Baharb, B., Schmidtc, O., Scrimgeourd, C.M., Begleye, I.S., Monahan, F.J., (2009), Confirmation of the dietary Background of beef from its stable Isotope signature, Irlanda.

Urska Kropf, Terezija Golob, Marijan NecEmer, Peter Kump, Mojca Korosec, Jasna Bertoncelj y Nives Ogrinc (2010), Carbon and Nitrogen Natural Stable Isotopes in Slovene Honey: Adulteration and Botanical and Geographical Aspects, Slovenia.

Prez, V., Valdivia, L., (2010), Istopos estables: una alternativa en los estudios de los mamferos fsiles, Mxico.

Dutra, S.V., Adami, L., Marcon, A.R., Carnieli, G., Roani, C., Spineli, F., Leonardelli, D.Munaro, S., Vanderlinde, R., (2010), Determination of

Geographical Origin of Brazilian Wines Using Joint Isotopic and Mineral Elements, Brasil.

Museo Nacional de Ciencias Naturales (s/a), Espectrometra de Masas, http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografia/espec trometria_de_masas.pdf, 27 de noviembre del 2013.