Informe de laboratorio Bioprocesos N1 presentado el 04 de septiembre de 2013

DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES MTODO DNS

Paola T. Guzmn G. 1, Gabriel F. Garca A. 2 Emmanuel Larios3
Fundacin Universidad de Amrica Campus de los Cerros: Avda Circunvalar No. 20-53. Tel: 57 1 3376680. Fax. 57 1 3362941. Dirigido a: Carolina Rojas Prez4 lcrojasp@gmail.com

Resumen: Se desarroll un procedimiento para determinar la concentracin los azucares que poseen extremos carbonilos fcilmente oxidables (azcares reductores) por el mtodo del cido 3,5 dinitro saliclico (DNS); la determinacin de estos azcares se realiz con el objeto de obtener una curva de calibracin, con este reactivo (DNS) que tiene capacidad de oxidar a los azcares reductores dando resultados colorimtricos que se pueden medir con una longitud de onda de 540nm en el espectrofotmetro. Palabras clave: Reactivo 3,5 dinitro saliclico (DNS), curva, calibracin, azucares reductores, espectrofotmetro. 1. INTRODUCCIN Hoy en da la industria licorera y alimenticia utiliza varios tipos de mtodos analticos para la determinacin azcar y alcohol en los licores y/o bebidas a utilizar como medio de venta. Uno de los mtodos ms acordes y con mejor resultados en la determinacin de los azucares con carcter reductor, es el mtodo (DNS), mtodo que ha sufrido varias modificaciones a travs de los aos para adecuarse al anlisis de diferentes materiales y su principal ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un mtodo espectrofotomtrico; el procedimiento se basa en una reaccin redox que ocurre entre el DNS y los azcares reductores presentes en la muestra, sin embargo a nivel industrial no es recomendable utilizarlo cuando dicha trata sustancias tales como mieles y caldos de fermentacin que lo contengan, esto debido a segn estudios realizados en la materia, a los altos niveles de dispersin. El presente informe desarrollara el procedimiento respectivo para la determinacin de azucares reductores a partir de una solucin patrn de glucosa de concentracin 1g/L, que permitir realizar y ajustar una curva de calibracin, y una solucin desconocida; por el mtodo del cido 3,5 dinitro saliclico (DNS).

2. DATOS Se utiliz una solucin patrn de glucosa ( l ) (1g/L) En la Tabla 1.0 se muestra las cantidades de volumen de solucin de glucosa, agua destilada y solucin DNS necesarias para la realizacin de las 5 soluciones y el blanco (que

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es la referencia de 0 para la toma de absorbancia en el espectrofotmetro), para proceder a la toma de datos en el espectrofotmetro. Dilucin Blanco 1 2 3 4 0 0.1 0.2 0.3 0.4 Volumen de solucin I (mL) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 Volumen de agua (mL) 2 2 2 2 2 Volumen DNS (mL) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 Volumen Total (mL) Tabla No.1 Datos para la preparacin de soluciones 5 0.5 0 2 2.5

Para la construccin de la curva de calibracin es necesario conocer las concentraciones de azcar en cada solucin despus de haber realizado la dilucin con el agua destilada. Esta concentracin se puede determinar con la ecuacin: (Ec. 1) Esta es la ecuacin No. 1 (Ec. 1), despejando de esta ecuacin la C2, que es la de inters se obtiene

De esta ecuacin se sabe que la C1 es la concentracin de la solucin patrn de glucosa (1g/L), y el volumen final (V2) que es 6,5mL que es el volumen obtenido despus de agregar los 4mL de agua en todas las soluciones. A partir de esta ecuacin se determinan las concentraciones de la siguiente manera: Para la solucin No. 1 se obtiene

Este proceso se repite hasta obtener las concentraciones de azcar de las 5 soluciones a estudiar, los cuales estn registrados en la Tabla No. 2 Dilucin Blanco 1 2 3 4 0 1/65 2/65 3/65 4/65 Concentracin (g/L) Tabla No. 2 Concentracin de azcar de las 5 soluciones. 5 5/65

Despus de preparadas las soluciones, se mide la absorbancia con el espectrofotmetro y se obtiene la tabla No. 3, que muestra las absorbancias medidas con el espectrofotmetro, tomando como 0 la solucin sin concentracin de glucosa (blanco). Dilucin Blanco 1 2 3 4 5 0 0.029 0.178 0.396 0.571 0.778 Absorbancia (Abs) Tabla No. 3 Datos de absorbancia tomados con el espectrofotmetro.

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Con estos datos tomados durante la prctica se construye la curva de calibracin, que relaciona las concentraciones de las diferentes soluciones y la absorbancia medida en cada una de ellas. La tabla No. 4 nos relaciona estos datos. No. Solucin Concentracin Absorbancia Blanco 0 0 1 0,015384615 0,029 2 0,030769231 0,178 3 0,046153846 0,396 4 0,061538462 0,571 5 0,076923077 0,778 Tabla No. 4 Datos para la construccin de la curva de calibracin Para el estudio de la muestra es necesario hacer una dilucin ya que los azucares estn muy concentrados y se obtendran resultados que no se ajustan a la curva de calibracin. Las dos diluciones realizadas para la muestra fueron 1:20 y 1:30 1:20 Por 1mL de muestra, se agregan 19mL de agua. 1:30 Por 1mL de muestra, se agregan 29mL de agua. Para estas dos diluciones se realiza el mismo procedimiento que con las soluciones anteriores y se mide la absorbancia en el espectrofotmetro, utilizando el mismo blanco utilizado en las anteriores soluciones. De estos datos tomados se obtiene la Tabla No. 6, que muestra las absorbancias tomadas para las muestras. No. De Muestra Dilucin Absorbancia (Abs) 1 1:20 0.944 2 1:30 0.410 Tabla No. 5 Datos de absorbancia tomados para la muestra 3. RESULTADOS Con la (Tabla No.4) se obtiene la (Grfica No. 1) que es la curva de calibracin obtenida de acuerdo con los datos tomados durante la prctica.

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Curva de Calibracin
0.9 0.8 0.7 0.6

Absorbancia

0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 -0.1 0 -0.2 0.02 0.04 0.06

y = 10.649x - 0.0842 R = 0.9672

0.08

0.1

Concentracin de azucar

Grfica No. 1 Curva de calibracin Con la curva obtenida se realiza una grfica de tendencia lineal que se ajusta a los datos, el R2 obtenido para la ecuacin de la recta es de 0.9672. Teniendo en cuenta que el R2 es mayor a 0.95 los datos no tienen mucha dispersin y por lo tanto son aceptables.

Muestra problema

Para la muestra a estudiar se tienen los datos mostrados en la Tabla No. 5, que es la informacin obtenida de la informacin nutricional que viene del fabricante de la muestra, con la cual se podr comparar con los resultados obtenidos durante la realizacin de la prctica. Muestra: jugo de naranja sinttico marca Cifrut de la compaa AJE; cuyo concentracin de azucares es de 27g/240ml es decir 112,5g/L
Muestra Problema Jugo Cifrut 0,500 2,000 2,500 0,944

Dilucin Volumen de solucin 1:20 (mL) Volumen de DNS (mL) Volumen total (mL) Absorbancia a (540nm)

Tabla No. 5 Muestra problema (1:20) para encontrar su concentracin de azucares

Informe de laboratorio Bioprocesos N1 presentado el 04 de septiembre de 2013 Dilucin Volumen de solucin 1:30 (mL) Volumen de DNS (mL) Volumen total (mL) Absorbancia a (540nm) Muestra Problema Jugo Cifrut 0,500 2,000 2,500 0,410

Tabla No. 6 Muestra problema (1:30) para encontrar su concentracin de azucares

Utilizando la ecuacin de la recta obtenida por la tendencia lineal de la curva de calibracin observada en la (Grafica No.1) y el valor de las absorbancias que se encuentran en la (Tabla No. 5 y Tabla No.6) Se llega a:

(Ec.2) Despejando X de la Ec. (2)

Donde Y es la Absorbancia de la muestra problema igual a 0,944 con la (Tabla No.5)

Donde Y es la Absorbancia de la muestra problema igual a 0,410 con la (Tabla No.6)

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