Control de Calidad de Forrajes

CONTROL DE CALIDAD DE FORRAJES
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CONTROL DE CALIDAD DE FORRAJES Alfred Ferret Dep. Cincia Animal i dels Aliments. Universitat Autnoma Barcelona
1.- INTRODUCCIN
Aceptando como buena la definicin del Forage and Grazing Terminology Committee (1991), un forraje es toda parte comestible de una planta, distinta al grano separado, que puede proveer alimento a los animales en pastoreo o que puede ser cosechada para su alimentacin. Segn la clasificacin de Barnes y Baylor (1995), el trmino forraje incluira las siguientes clases: hierba, heno, ensilaje, las fracciones comestibles de las especies arbustivas y arbreas, as como la paja. En la actualidad sera incorrecto, debido a su uso generalizado, excluir del concepto a las mezclas comnmente empleadas en nuestras explotaciones ganaderas intensivas, en las que el forraje interviene en una proporcin importante (40-60%), teniendo en cuenta que nuestro objetivo es el de hablar de control de calidad.
2.- EL MUESTREO: IMPORTANCIA Y SUS CARACTERSTICAS ESPECFICAS El muestreo es posiblemente el factor principal que afecta la exactitud en el anlisis de forrajes y alimentos. Faithfull (2002) en su reciente libro sobre Methods in Agricultural Chemical Analysis : a Practical Handbook, recoge una cita de Allen y Whitfield (1964) en la que estos autores afirman que la variacin asociada con el muestreo es de 5 a 10 veces mayor que la asociada con la del laboratorio. La validez del anlisis que realicemos en el laboratorio depende del grado de representacin que tenga la muestra del forraje o
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Forraje es un trmino de uso comn, tanto a nivel ganadero como a nivel tcnico y cientfico, que encierra una amplia variabilidad conceptual segn quien lo use. De hecho no existe una definicin ampliamente aceptada y existe una gran variacin en la amplitud de alimentos que pueden ser considerados dentro de este trmino (Wilkins, 2000).
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alimento que despus ser suministrado al animal. Sin embargo, nunca tendremos un conocimiento real de lo que ingerir el animal, ya que el anlisis de una muestra es slo una estima, con un margen de error, del verdadero valor del alimento. La muestra escogida debe ser representativa del conjunto que nos interesa caracterizar. Para ello, debemos procurar hacer siempre el muestreo dentro de ciclo en una planta, de una misma partida, lote de compra o ensilado y an as, siempre existe una cierta variabilidad en los anlisis que nos afectar la exactitud de las estimas realizadas. Para intentar contrarrestar esta variacin, la muestra debe cogerse de sitios distintos en un campo, en una mezcla o silo, o de diversas pacas de una partida de heno. El muestreo presenta caractersticas especficas segn se trate de un forraje verde, de un heno, de un ensilado o de una mezcla o racin mixta. En cualquier caso es siempre necesario describir al mximo el origen, estado vegetativo, la fecha y las condiciones de recoleccin de la muestra que debe analizarse. 2.1.- Forraje verde
2.2.- Henos
El muestreo de henos debe realizarse, a ser posible, dentro del mismo corte o estado de madurez de la planta. Evidentemente eso es posible si el heno es producido en la propia explotacin, de lo contrario ser prcticamente imposible asegurar estas premisas, hecho que ocurre siempre que compramos una partida de heno a una empresa o cooperativa. An en el mejor de los casos, las pacas de henos son un acmulo de hojas y tallos, cuya proporcin posiblemente vare respecto a planta original y en su disposicin espacial. Para realizar el muestreo podemos valernos de una sonda, de un dimetro interior mnimo de 1 cm, que penetre 30-45 cm dentro de la paca de heno, rectangular o redonda,
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El muestreo del forraje verde es uno de los ms complejos ya que el tipo de situaciones posibles es diverso. De una forma simplificada consideraremos dos posibles situaciones de muestreo: en la misma superficie de cultivo y tras la recoleccin de la planta. En el primer caso, podemos realizar el muestreo de una planta en pie o bien de una planta cortada y en el suelo. Sea como sea, debemos despreciar los mrgenes del campo ya que sus plantas no son representativas del cultivo. Una manera efectiva de muestrear es avanzando en zig-zag por el campo, muestreando de manera aleatoria en diferentes puntos del mismo. Las plantas se cortarn a la altura normal de corte, segn vaya a efectuarse la cosecha del cultivo. Se recogern entre 500 a 1000 g de muestra, guardndola en bolsa de plstico que se enviar rpidamente al laboratorio. Cuando las plantas ya han sido cortadas, se proceder de forma equivalente al anterior, slo que el muestreo se realizar inmediatamente despus del corte, cuando la planta ya est en el suelo. La segunda situacin se da cuando el forraje ha sido recolectado y est listo para ser repartido a los animales. En este caso, lo mejor ser recoger la muestra en el momento de la descarga del remolque, tomndola de forma aleatoria a diferentes tiempos de descarga.
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para sacar muestras centrales y as evitar el sesgo de sacar muestras de los extremos o de tener que abrir las pacas para realizar un buen muestreo. Se recomienda recoger unas 20 sub-muestras, una por paca, para posteriormente reunirlas y formar una nica muestra de 500 a 1000 g. La eleccin de las pacas debe ser totalmente al azar. En el caso de no disponer de sonda y de trabajar con paca pequea, se recomienda sacar las submuestras de 20 pacas que debern abrirse para extraer dos panes de dos sitios distintos de la paca. Estos panes debern ser cuarteados con la ayuda de unas tijeras potentes (tijeras de podar), guardndose dos trozos opuestos. Esta operacin debe realizarse sobre una superficie limpia, evitando perder hoja. En el supuesto de disponer pacas grandes o redondas, el muestreo se dificulta y no ser hasta que las abramos cuando podremos muestrear. 2.3.- Ensilados
Una alternativa interesante para el muestreo de silos es el de preverlo en el momento de ensilar. Para ello, a medida que va llenndose el silo, a diferentes niveles en altura y frentes a lo largo del silo, iremos disponiendo masa de forraje dentro de bolsas de malla ancha. De esta forma a medida que vayamos encontrado las muestras durante el desensilado iremos disponiendo de las muestras para analizar. 2.4.- Mezclas Las muestras mixtas son, en general, difciles de muestrear ya que no siempre se puede tener la seguridad que la mezcla est bien hecha. En el caso de duda es preferible analizar por separado los ingredientes y considerar en que proporcin participan dentro de la mezcla, aunque debe prevalecer siempre el criterio de que la muestra debe representar lo que ingiere el animal. Cuando en las mezclas se empleen ingredientes con componentes voltiles (alimentos fermentados), es preferible realizar determinaciones basadas en la
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La fermentacin de la masa de forraje se realiza en aproximadamente una semana, sin embargo puede ser recomendable esperar como mnimo dos semanas para recoger una muestra del silo. El muestreo podemos realizarlo con dos objetivos generales diferentes: a) hacer una previsin del valor medio del silo, antes de iniciar su utilizacin y b) conocer el valor del ensilado que consumen los animales. En el primer caso, debemos valernos de una sonda que permita muestrear a cierta profundidad, procurando tapar bien los agujeros creados. Para hacer bien el trabajo se recomienda tomar las muestras de los puntos medios de los 4 segmentos generados por la interseccin de las 2 diagonales trazadas en la parte superior de un bloque del silo (Faithful, 2002). En el segundo caso, el muestreo consistir en extraer diferentes submuestras (12-15) del frente del silo, del mismo tipo de material que estn consumiendo los animales, repitiendo la accin en diferentes frentes del silo, a medida que avance el uso de ensilado. Deben evitarse las submuestras enmohecidas o malogradas que rechazaremos en el momento de realizar la oferta a los animales, por lo que no se recomienda tomar submuestras de las zonas de contacto con el plstico de cobertura. Se recogern en cada muestreo entre 500 y 1000 g de ensilado.
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qumica hmeda. El anlisis a travs del NIR no es recomendable en este tipo de muestras ya que las calibraciones con ellas no dan buenos resultados. Cualquiera de las muestras mencionadas debern ser guardadas en bolsas de plstico, procurando que quede la menor cantidad posible de aire, y analizadas, en todos los casos, con la mxima rapidez posible. Cuando se trate de muestras que puedan sufrir algn tipo de alteracin (ensilados o mezclas) y en el supuesto que las muestras no puedan ser analizadas inmediatamente, es necesario proceder a su congelacin. Las muestras sern enviadas al laboratorio bien empaquetadas, especialmente en el caso de ensilados y mezclas. En este ltimo caso y sobretodo al tener que tramitar muestras congeladas, los contenedores de poliestireno expandido pueden ser los ms aconsejables. Con ello se puede conseguir que las muestras lleguen an congeladas al laboratorio.
3.- ANLISIS DE FORRAJES O MEZCLAS SECAS
Las determinaciones analticas bsicas, realizadas siempre en duplicado, en el caso de forrajes secos, henos y deshidratados, o mezclas secas, sern: materia seca, cenizas, protena bruta, fibra neutro detergente, fibra cido detergente y extracto etreo. La determinacin de lignina puede considerarse como opcional. En el caso de los deshidratados o de muestras que han podido sufrir un cierto calentamiento, sera recomendable tambin realizar la determinacin del nitrgeno ligado a la fibra. 3.1.- Materia seca (MS) La determinacin del contenido en MS de una muestra consiste en provocar la evaporacin del agua presente en la misma, con lo que podemos conocer el contenido en MS por simple gravimetra. Tenemos bsicamente dos vas distintas para realizar esta determinacin. La primera es la que podemos realizar slo a nivel de laboratorio y consiste en someter la muestra a un secado en estufa de ventilacin forzada a 100 oC durante 24 horas, a 105 oC durante 16 horas o a 135 oC durante 2 horas (AOAC, 1990; Undersander et al., 1993). La segunda va es la que podemos utilizar a nivel de explotacin. En este caso el secado lo podemos realizar provocando la evaporacin del agua mediante un microondas. ste debe ser un aparato con una potencia mnima de 600 vatios. La determinacin consiste en usar una balanza electrnica con una precisin de 0.01 g, algn recipiente que pueda introducirse en el microondas para colocar entre 100 y 200 g de muestra, y mantener el proceso durante 3 minutos a la mxima potencia. A continuacin se recomienda sacar el contenedor, remover la muestra y reintroducirla de nuevo para reiniciar el proceso, esta vez a la mitad de la potencia y durante un minuto. Seguidamente debemos pesar el
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Una vez obtenida la muestra, esta debe ser subdividida en dos. Una se utilizar para realizar la determinacin de materia seca, con sometimiento del material a temperatura elevada (100-105 oC) y la segunda ser desecada a una temperatura mxima de 60 oC durante 48 horas, para evitar daarla por calor y poder as realizar las restantes determinaciones. Esta segunda submuestra, una vez seca, ser molida con un molino en el que dispondremos de una malla con un dimetro de poro de 1 mm.
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contenedor con la muestra. Esta ltima fase debe repetirse tanta veces como sea necesario, hasta que podamos asegurar que la muestra no pierde ms peso, con lo que podremos considerar que el proceso de evaporacin ha concluido (Undersander et al., 1993). 3.2.- Materias minerales o cenizas (MM) La determinacin del contenido en cenizas consiste en la oxidacin de toda la materia orgnica contenida en la muestra, sometiendo a sta a una combustin en un horno a 600 oC durante 2 horas, hasta conseguir una cenizas blanquecinas (AOAC, 1990). 3.3.- Protena bruta (PB) El mtodo Kjeldahl es el mtodo estndar de determinacin del contenido en nitrgeno desde finales del siglo XIX. El mtodo consiste bsicamente en tres grandes pasos (AOAC, 1990): 1) digestin de la muestra en cido sulfrico con un catalizador, hasta convertir todo el nitrgeno a la forma amoniacal; 2) destilacin del sulfato amnico en una solucin atrapadora; y 3) cuantificacin del amonaco por valoracin con una solucin estndar. Una vez conocido el contenido en nitrgeno de la muestra, la multiplicacin de aquel por el factor de conversin 6,25 nos aproxima al conocimiento del contenido en PB. Existe una alternativa al mtodo Kjeldhal de determinacin del nitrgeno que consiste en la combustin en una atmsfera de oxgeno puro y a alta temperatura (950 o C) de la muestra para detectar, por conductividad trmica, el nitrgeno presente en la misma (Undersander et al., 1993). 3.4.- Fibra neutro detergente (FND)
Para la determinacin del contenido de fibra neutro detergente (Van Soest et al., 1991) se emplea una solucin detergente neutra que disuelve las pectinas de la pared, fcilmente digestibles, y los solubles celulares (protenas, azcares y lpidos), resultando un residuo que representa el contenido en paredes celulares (celulosa, hemicelulosas y lignina). El detergente solubiliza las protenas, contribuyendo el sulfito sdico que se aade a eliminar la materia nitrogenada al romper los enlaces disulfuro. El cido etilendiamintetractico (EDTA) es empleado como quelante del calcio y para eliminar las pectinas a la temperatura de ebullicin. El trietilenglicol ayuda a eliminar parte de la materia no fibrosa de los alimentos concentrados y la amilasa termoestable es usada para eliminar el almidn. Dos adiciones de amilasa ayudan a mejorar la precisin de la determinacin y, sobretodo, facilita la filtracin. Debido a la contaminacin de la muestra con tierra, se recomienda tener en cuenta el contenido en cenizas y excluir ste del valor de FND. Van Soest et al. (1991) dan como opcional el uso de sulfito sdico que reduce el contenido proteico de la muestra y elimina los residuos de queratina de origen animal. Sin embargo, Mertens (2002) al describir la determinacin de la fibra neutro detergente tratada con amilasa incluye, sin alternativa, al sulfito sdico en el procedimiento.
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3.5.- Fibra cido detergente (FAD) y lignina cido detergente (LAD) Para disolver los solubles celulares, las hemicelulosas y los minerales solubles se utiliza una solucin cida de un detergente cuaternario, con lo que resulta un residuo formado por celulosa, lignina, cenizas insolubles y protena ligada a la pared celular, que recibe el nombre de fibra cido detergente (AOAC, 1990). Una alternativa para el conocimiento de las fracciones fibrosas es el anlisis secuencial, importante para evitar interferencias y para economizar muestra. La ventaja ms importante del anlisis secuencial es que la estima de la fraccin hemicelulosa, obtenida por diferencia entre FND y FAD, es ms exacta por esta va ya que en caso contrario sucede que la pectina precipita al determinar la FAD, interfiriendo en su determinacin (Van Soest y Robertson, 1985), y obtenindose valores aberrantes de FAD que pueden ser tan altos como los de FND. La determinacin opcional de lignina se podra realizar a continuacin, mediante sometimiento del residuo FAD, una vez pesado, a una digestin con cido sulfrico del 72% que elimina la celulosa (Van Soest, 1967). Otra variante de la determinacin de LAD utiliza permanganato potsico, como agente oxidante, en lugar de la hidrlisis cida. Por ltimo, cabe citar el procedimiento de la lignina Klason como residuo no hidrolizado tras una hidrlisis con cido sulfrico en dos etapas, usada en la determinacin de la fibra dietaria total (Theander y Westerlund, 1986). Esta determinacin de lignina procura valores de lignina bien distintos a los obtenidos con LAD, aunque existe una buena correlacin entre ambas y los valores de digestibilidad, por lo que pueden ser consideradas indistintamente como un buen predictor de la calidad de los forrajes (Jung et al., 1997). 3.6.- Extracto etreo o grasa bruta (EE) La extraccin con ter dietlico disuelve grasas, aceites, pigmentos y otras sustancias liposolubles (AOAC, 1990). El ter es a continuacin evaporado de la solucin y el residuo resultante, pesado. Las muestras deben estar libres de agua para evitar la coextraccin de componentes hidrosolubles en la muestra, como carbohidratos, urea, cido lctico, glicerol, etc. En el supuesto que la muestra contenga importantes cantidades de agua, debe desecarse previamente. Se desaconseja el uso de ter de petrleo ya que no disuelve todo el material liposoluble. 3.7.- Nitrgeno insoluble en solucin cido detergente (ADIN) y neutro detergente (NDIN) El nitrgeno insoluble en una solucin cido detergente (ADIN) es el nitrgeno que permanece en el residuo FAD, ya sea por causas naturales o como resultado de las alteraciones producidas durante el almacenamiento o procesado de los forrajes (Goering et al., 1972). El nitrgeno de alimentos sometidos a temperaturas elevadas es, en general, no disponible para los animales (Undersander et al., 1993). El ADIN se corresponde con la fraccin C del Cornell Net Carbohydrate and Protein System (CNCPS) que es considerada como indegradble ya que contiene protenas asociadas con lignina y taninos, y los
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productos de la reaccin de Maillard (Sniffen et al., 1992). Una reciente estandarizacin del mtodo puede encontrarse en la publicacin de Licitra et al. (1996). El nitrgeno asociado con la FND es normalmente protena ligada a la pared celular que tambin incluye al nitrgeno indigestible encontrado en el residuo cido detergente. La protena insoluble en la solucin neutra (NDIN), pero soluble en la cido detergente es digestible aunque lentamente degradable y considerada como fraccin especfica (B3) en el CNCPS (Sniffen et al., 1992), calculndose como diferencia entre NDIN y ADIN. Por su parte, en su ltima versin, el NRC (NRC, 2001) utiliza el valor de NDIN para restar ste del residuo FND en el momento de calcular por diferencia el contenido en carbohidratos no fibrosos (CNF = 100 - [(FND-NDIN) + PB + EE + MM]. En el supuesto de tener este objetivo, la determinacin de FND debe realizarse sin la adicin de sulfito sdico. La determinacin de NDIN tambin fue descrita por Licitra et al (1996). El cuadro 1 muestra las desviaciones estndar y los coeficientes de variacin que debemos aceptar para dar por vlidos los valores analticos encontrados al realizar las determinaciones por duplicado. De superar estos valores sera necesario realizar de nuevo la determinacin.
Cuadro 1.- Desviaciones estndar y coeficientes de variacin de las distintas determinaciones realizadas, como medida de su precisin (1Undersander et al., 1993; 2Galyean, 1997).
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Determinaci n MS MM PB Desviacin estndar1 FND FAD EE ADIN
0.10 0.10 0.10 con contenidos en PB de 10% 0.20 con contenidos en PB de 20% 0.35 con contenidos en FND de 40% 0.60 con contenidos en FND de 70% 0.20 con contenidos en FAD de 20% 0.35 con contenidos en FAD de 40% 0.10 entre 0.22 a 0.40
4.- ANLISIS DE FORRAJES FERMENTADOS Las determinaciones a realizar en los ensilados o en las mezclas donde participan ingredientes fermentados son, en principio los mismos que los citados para los forrajes o mezclas secas. Sin embargo, la presencia de productos voltiles, como resultado del proceso fermentativo, obliga a hacer algunos cambios en las determinaciones mencionadas
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Coeficiente de variacin2 0.5 % 2.0 % 2.0 % 3.0 % 3.0 % 4.0 % ---
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en el apartado anterior y a introducir nuevas, para poder tener un buen conocimiento del valor nutritivo de estos materiales. Para realizar correctamente las determinaciones en este tipo de muestras deberemos subdividir la muestra inicial en dos. La primera submuestra ser troceada y subdividida de nuevo en dos: 1) una parte ser utilizada en hmedo para realizar la determinacin de MS y PB, as como para realizar la maceracin en agua destilada (50 g de ensilado en 125 ml de agua; a 4 oC, durante una noche), cuando el prensado no sea posible, y 2) la segunda ser sometida a un secado a 60 oC antes de proceder a la determinaciones de cenizas, extracto etreo y de las fracciones fibrosas. La segunda submuestra ser sometida a prensado para la extraccin del lquido que nos permitir realizar los anlisis de la valoracin de la calidad fermentativa del ensilado. 4.1.- Materia seca (MS)
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Ensilados Sin aditivo y mala conservacin 1,11 1,07 1,06 1,09 Gramneas: - raigrs italiano - raigrs ingls - Otras Alfalfa Maz: - 20 % MS - 30 % MS - 40 % MS
El procedimiento hmedo para determinar el contenido en materia seca de muestras fermentadas se fundamenta en un proceso de destilacin donde el agua es atrapada por un solvente como el tolueno (AOAC, 1990). Con este procedimiento se evita la prdida de cidos voltiles, alcoholes y de nitrgeno amoniacal que se perderan en el caso de proceder igual que en los forrajes secos. La determinacin de MS mediante liofilizacin resulta ser una alternativa interesante, evitando as trabajar con un solvente como el tolueno que es considerado como irritante e inflamable. Sin embargo, no hay seguridad de que con la liofilizacin no se pierda parte del nitrgeno amoniacal y de los cidos grasos voltiles (Van Soest y Robertson, 1985). A pesar de todo, en el supuesto que la determinacin finalmente se realice en estufa a 100 oC durante 24 horas, puede aplicarse una correccin por prdidas (cuadro 2), segn propuesta de Dulphy y Demarquilly (1981).
Cuadro 2.- Factores de correccin para las prdidas de voltiles (Dulphy y Demarquilly, 1981).
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Sin aditivo y buena conservacin 1,10 1,07 1,05 1,07 1,08 1,05 1,03
Con aditivo 1,04 1,05 1,04 1,04
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4.2.- Valor nitrogenado Para etimar el valor nitrogenado de un ensilado debemos conocer el contenido en nitrgeno total o protena bruta (N x 6,25), como en el resto de muestras, pero adems es importante saber la proporcin de nitrgeno amoniacal y soluble en el total del contenido nitrogenado. Protena bruta.- Se recomienda realizar la determinacin directamente con la muestra hmeda, para evitar as la prdida de componentes nitrogenados (amonaco) que desapareceran con el sometimiento de la muestra a temperaturas de 100 oC. Nitrgeno amoniacal.- Se realiza a partir del lquido extrado por prensado o maceracin del silo. Su determinacin permite conocer que proporcin del total de nitrgeno de la muestra se encuentra en forma amoniacal y permite evaluar el grado de proteolisis que ocurri durante el proceso fermentativo. Valores por debajo del 10 % se consideran como recomendables (cuadro 3). Existen diferentes mtodos para la determinacin del nitrgeno amoniacal, entre los que destacamos: 1) Mtodo Conway basado en la difusin de la sustancia voltil hacia una solucin de cido brico en cmara de Conway, recomendado por Dulphy y Demarquilly (1981); 2) Mtodo de Chaney y Marbach (1962) en el que finalmente se realiza una lectura colorimtrica mediante un espectrofotmetro; 3) Mtodo de destilacin en presencia de una base (hidrxido sdico) y lectura mediante el Autoanalizador Kjeltec (Bremmer y Keeney, 1965); y por ltimo el propuesto por Faithful (2002) basado en un electrodo selectivo de amonio.
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Excelente Buena Mediocre Mala Muy mala AGV mmols/kgMS < 330 330-660 660-1000 1000-1330 >1330 Ac. actico g/kg MS <20 20-40 40-55 55-75 >75 Ac. butrico g/kg MS 0 <5 >5 >5 >5
Cuadro 3.- Calidad fermentativa de los ensilados (Dulphy y Demarquilly, 1981). N-NH3 %N Maz <5 5-10 10-15 15-20 >20 N-NH3 %N Alfalfa <8 8-12 12-15 16-20 >20 N-NH3 %N Otras <7 7-10 10-15 15-20 >20 N soluble %N <50 50-60 60-65 >65 >75
Nitrgeno soluble.- Esta fraccin nitrogenada del lquido extrado por prensado o maceracin se determina tambin por el mtodo Kjeldhal. Para el proceso de extraccin, diferentes mtodos fueron propuestos por Waldo y Goering (1979): 1) agua caliente; 2) solucin de Burroughs; 3) cloruro sdico y 4) lquido ruminal autoclavado, o bien puede usarse un tampn de borato-fosfato, segn propone Licitra et al. (1996). En cualquier caso, es importante que la fraccin soluble del ensilado sea inferior al 60 % del nitrgeno total (cuadro 3). Su medicin tiene una gran importancia ya que su conocimiento informa sobre el proceso de desaparicin del nitrgeno a nivel ruminal y, a la vez, advierte de la gravedad en las prdidas por escape en los efluentes del silo.
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4.3.- Caractersticas fermentativas El conocimiento de la calidad fermentativa de un silo se obtiene a partir de determinaciones realizadas sobre el lquido extrado del ensilado por prensado o maceracin. Estas determinaciones son: pH, cido lctico, cidos grasos voltiles y alcoholes. pH.- Posiblemente la medida ms simple y que nos da una visin general de la calidad fermentativa y de la estabilidad del ensilado. Su medida es sencilla y rpida ya que consiste simplemente en introducir la sonda de un pH-metro en un volumen del lquido extrado por prensado o maceracin. Debemos considerar que el pH de estabilidad es funcin del contenido en MS del ensilado, de manera que a mayor contenido en MS, el pH de estabilidad puede aumentar, sin que ello implique una mala calidad del silo (cuadro 4).
Cuadro 4.- Relacin entre contenido en MS y la estabilidad del ensilado (Dulphy y Demarquilly, 1981).
cido lctico.- Esta determinacin nos da una lectura del grado de ejecucin del proceso fermentativo, como consecuencia del uso de los carbohidratos y su conversin a cido lctico. El cuadro 5 muestra los niveles normales de cido lctico que podemos encontrar en distintos ensilados. Los mtodos enzimticos son los que se recomiendan, por su rapidez, para determinar los contenidos en cido lctico (Dulphy y Demarquilly, 1981).
Cuadro 5.- Niveles de cido lctico de los ensilados en g/kg de MS (Dulphy y Demarquilly, 1981).
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Ensilados Gramneas: - raigrs italiano - raigrs ingls - Otras Alfalfa Maz: - 20 % MS - 30 % MS - 40 % MS 75 90 65 70 60 50 50
MS % 15-20 20-25 25-30 30-35 35-40
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pH <4 <4,2 <4,4 <4,6 <4,8 Sin aditivos 70 80 70 65
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El mtodo de Noll (Gutmann y Wahlefeld, 1974) consiste en la transformacin del cido lctico en cido pirvico, mediante el uso del enzima lactato deshidrogenasa y la correspondiente formacin de NADH (nicotinamida-adenina-dinucletido), que es el que se lee finalmente mediante el uso de un espectrofotmetro. Sin embargo, considerando la necesidad de obtener informacin del contenido en cido lctico junto con el de los cidos grasos voltiles y alcoholes, la cromatografa de gases (GC) o la cromatografa lquida de alta presin (HPLC) sern sin duda la va ms lgica de obtener el contenido en lctico. cidos grasos y alcoholes.- El proceso fermentativo ideal que implica el proceso de ensilaje, presupone la actuacin exclusiva de las bacterias cido lcticas homo fermentativas, por lo que no debieran formarse, en principio, cidos grasos voltiles y alcoholes. Sin embargo, como este proceso ideal nunca es posible, stos se forman inevitablemente y nuestro objetivo es que su presencia sea lo ms baja posible. Los cidos que ms nos interesan son el actico y, sobretodo, el butrico. La tabla 3 nos da idea de las cantidades mximas toleradas para el actico y butrico, para considerar la calidad fermentativa de un ensilado. Para los alcoholes, las cifras se encuentran entre los 10 y 30 g/kg MS para los ensilados de gramneas, 15 g/kg MS para el ensilado de alfalfa y 20 g/kg para un ensilado de maz con un 30 % de contenido en MS. En el caso de utilizar aditivos los niveles debieran ser an ms bajos. La determinacin de los cidos grasos voltiles y alcoholes se realiza, como dijimos en el apartado anterior, mediante el uso de cromatografa en fase gaseosa (GC) o en fase lquida de alta presin (HPLC). Para GC, podemos destacar los mtodos descritos por: Suzuki y Lund (1980), Jouany (1982), Galletti y Piccaglia (1983), Playne (1985) y Fussell y McCalley (1987); mientras que para HPLC, podemos citar los mtodos de: Rooke et al. (1990), modificado posteriormente por Salawu et al. (1997). Sin embargo, Faithfull (2002) destaca las dificultades ms notables de ambas alternativas que en resumen son:
La valoracin de la calidad fermentativa de un ensilado es muy importante para hacer un buen uso del mismo, sin embargo dos grandes problemas conlleva el conocimiento de esta calidad: 1) la falta de estandarizacin de los mtodos de determinacin que dificulta asegurar la analtica de los ensilados y 2) la falta de laboratorios que tengan en su listado de tcnicas las apropiadas para realizar tales determinaciones. Por todo ello, en muchos casos deberemos basarnos en la medida del pH como nica herramienta para conocer el valor del ensilado, adems del resto de determinaciones clsicas a efectuar.
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1. Para GC, la dificultad de leer bien el cido lctico ya que tiende a dar un pico amplio que interfiere a los picos ms pequeos del n-valrico, iso- y n-caproico. 2. Para HPLC, la dificultad de identificar algunos picos de AGVs que en algunos cromatogramas pueden ser confundidos con picos de otras substancias orgnicas.
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5.- UTILIDAD DEL NIRS COMO MTODO DE ESTIMACIN La estimacin de la calidad forrajera mediante el uso de la tcnica fsica, nodestructiva, NIRS (near-infrared reflectance spectroscopy) se remonta a los aos setenta con un primer informe de Norris et al. (1976). Desde entonces mucho se ha avanzado hasta, por ejemplo, el reconocimiento por parte de la AOAC como mtodo de estimacin de la PB y de la FAD en forrajes (Barton y Windham, 1988). La regin del infrarrojo cercano del espectro electromagntico es una regin que tiene un rango de longitudes de onda ligeramente ms largo que la luz visible, pero no tan largo como las microondas o las radioondas. Un haz de luz de una lmpara de cuarzo-yodo es emitido sobre una muestra problema y el espectro de luz que se refleja es analizado mediante un espectrmetro (Faitfull, 2002). La tcnica se fundamenta en que las sustancias orgnicas absorben radiaciones del infrarrojo cercano (longitudes de onda entre 700 y 3000 nanmetros) en diferente medida para cada longitud de onda, segn el tipo de enlaces qumicos presentes en sus molculas. Un equipo NIRS presenta cinco componentes: 1) una fuente o lmpara de energa radiante; 2) un mecanismo o filtro para la seleccin de longitudes de onda; 3) un receptculo para la colocacin de las muestras; 4) un detector-convertidor de la energa en seales elctricas y 5) un registrador o procesador de la seal. Cuando un rayo luminoso incide sobre una muestra, sta absorbe una cantidad de energa que puede ser expresada por la Ley de Lambert-Beer, como el log10 del inverso de la reflectancia (1/R). A cada muestra le corresponde un espectro de absorcin y este espectro especfico es el que permite estimar la composicin qumica de la misma. Para lograrlo se precisa una calibracin previa del equipo, a partir de una buena seleccin de muestras representativas del forraje, que abarquen un amplio rango de valores y de las que hemos realizado con anterioridad determinaciones analticas para conocer bien su composicin. Adems, es necesario poseer otras muestras, independientemente de las usadas para la calibracin, que se usarn para la validacin de las ecuaciones de regresin establecidas durante la calibracin y comprobar que al comparar valores NIRS con los procedentes de la analtica, los coeficientes de correlacin y los errores estndar son los adecuados. El cuadro 6 muestra los valores de calibracin de diferentes parmetros analticos de muestras forrajeras y de otros de inters en nutricin animal. Como puede observarse no tan solo es posible estimar la composicin qumica de un forraje con la tcnica NIRS, sino que adems es posible hacer prediccin de la digestibilidad y de la ingestin voluntaria. Sin duda la tcnica NIRS ha contribuido a la valoracin rpida de los alimentos para el ganado permitiendo tomar decisiones rpidas, estratgicas y econmicas que permiten decidir el tipo de suplementacin ms adecuada en cada momento (Deaville y Flinn, 2000). Sin embargo, el costo del equipo y su mantenimiento no son asumibles sino en el contexto de un grupo empresarial o cooperativo.
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Cuadro 6.- Resultados de la calibracin de la composicin qumica de forrajes
Anlisis MS1 PB2 FND2 FAD2 LAD2 Digestibilidad MO3 Ingestin voluntaria4
Rango de valores 93,6-95,8 7-22 44-75 28-43 1,5-10 --52,6-112,3
R2 0,84 0.94 0.98 0.87 0.94 0,76 0,72
Error estndar 0,43 1,10 1,24 1,49 0,57 2,60 9,60
Fuentes: 1Coleman et al., 1981; 2Barton (1985); 3 Barber et al., 1990; 4Ward et al., 1982
6.- REFERENCIAS
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