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Preguntas para el anlisis de la experiencia: 1. Cul es el proceso que estudia este experimento? Explicar en qu consiste. 2. Qu variables se probaron? 3. Cmo es posible explicar las diferencias obtenidas en los diferentes tubos?
MANUAL DE PRACTICAS DE BIOTECNOLOGIA MSc JHON GARCIA LOPEZ ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Resultados esperados: en los tratamientos 2, 3 y 4 las plantas deberan crecer ms que las del tratamiento 1, debern ser de un color verde ms intenso y presentar ndulos en sus races, debido a la presencia de bacterias fijadoras de nitrgeno preexistentes en la tierra o por causa de la aplicacin de inoculantes. Las semillas inoculadas deberan presentar mayor nmero de ndulos que en el tratamiento sin inoculacin. En el tratamiento 1 no deberan visualizarse ndulos porque los microorganismos preexistentes deberan haberse degradado por la esterilizacin. Importante: si la tierra es muy rica en nitrgeno o es muy cida, las diferencias no podrn observarse con facilidad, ya que ambos factores acten inhibiendo la nodulacin, por lo cual se recomienda que las pruebas se realicen con tierra de diferentes zonas, para asegurar el xito de esta actividad.
MANUAL DE PRACTICAS DE BIOTECNOLOGIA MSc JHON GARCIA LOPEZ ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------c. Desinfeccin de granos o porotos de soja Materiales: - Granos de soja comercial - Alcohol 70% (70 ml de alcohol diluido en 30 ml de agua) - Lavandina 20% (20 ml de lavandina comercial diluida en 80 ml de agua) - Agua estril (esterilizar de la misma forma que el medio de cultivo) - Pinza de metal - Recipientes bien limpios para desinfectar las semillas Procedimiento 1. Usando una pinza estril, pasar los granos de soja durante un minuto por una solucin de alcohol 70%. 2. Luego sumergirlos en lavandina al 20% durante 15 minutos y por ltimo, darles 4 lavados en agua estril. Nota: Tanto para la desinfeccin como para la siembra, la pinza se esterilizar de la siguiente manera: mojar la pinza en alcohol puro, quemarla a rojo en el mechero, dejar enfriar Esto se realizar al inicio de cada etapa que requiera el uso de la pinza. Si la pinza se usa muchas veces para lo mismo, solo se mojar la pinza con alcohol y se quemar sin llevar a rojo. No usar guantes mientras se trabaja con el mechero. d. Siembra 1. Sembrar con pinza estril 4 granos por frasco de modo que el hilio (punto oscuro) quede hundido en el medio de cultivo y el resto del grano por encima del mismo. 2. Asegurarse de que los porotos queden firmes o agarrados al medio pero no totalmente hundidos (por lo menos la mitad del poroto debe salir hacia la superficie, de lo contrario no germinar). Nota: Esta etapa se realizar cerca del mechero. Esterilizar la pinza cada vez que tomo un nuevo grano 3. Tapar cada frasco con papel film (el de envolver alimentos) y dejar a una temperatura entre 24 y 26 (no debe ser menor a 20C), en un lugar donde reciba luz directa durante el da. e. Observaciones y Registro Desde el comienzo de la actividad se aconseja que los alumnos diseen un cuadro de 10 filas en el cual registrarn los cambios que observen durante 10 das: 1. Si hay imbibicin de las semillas (si absorben lquido y se hinchan); 2. Si hay emergencia de races 3. Cul es la longitud de la raz y cmo va variando a lo largo de los das. 4. Una vez obtenida la germinacin completa, se le pedir a los alumnos distinguir los cotiledones (hojas de reserva) del resto de las hojas, si hay presencia de pelos en las hojas, etc.
MANUAL DE PRACTICAS DE BIOTECNOLOGIA MSc JHON GARCIA LOPEZ ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------8. Mientras uno de los miembros del grupo mezcla la solucin de banana, otro miembro pondr el filtro N 2 de caf dentro de otra taza de plstico. Doblar el borde del filtro alrededor de la taza para que el filtro no toque el fondo de la taza. 9. Filtrar la mezcla vertindola dentro del filtro y dejar que la solucin drene por algunos minutos hasta que sean 5 ml aproximadamente de filtrado para testear. 10. Tomar un tubo de ensayo con alcohol fro. Para mejores resultados el alcohol debe estar tan fro como sea posible. 11. Llenar la pipeta plstica con la solucin de banana y agregarla al alcohol. El ADN no es soluble en alcohol. Cuando el alcohol se agrega a la mezcla, los componentes, excepto el ADN, permanecen en la solucin mientras el ADN precipita en la capa de alcohol. 12. Dejar la solucin reposar por 2 a 3 minutos sin mover. Es importante no batir el tubo de ensayo. Se puede observar el ADN blanco el cual precipita en la capa de alcohol. 13. Cuando se obtienen buenos resultados, habr suficiente ADN para levantar con una varilla de vidrio (el ADN se enrolla a la varilla). O usando una pipeta de Pasteur que haya sido calentada en la punta para formar un gancho, se puede recuperar (tomar) algo de ADN. El ADN tiene la apariencia de mucus blanco y fibroso.
Produccin de biogas
El biogas es un gas producido por la accin de microorganismos sobre materia orgnica de desecho, por ejemplo restos vegetales (cscaras de frutas, hojarasca, etc.) o estircol (excremento de animales). Durante este proceso de transformacin de la materia los microorganismos obtienen energa mediante diferentes procesos. Algunos de los microorganismos liberan dixido de carbono en el proceso de respiracin, que otros microorganismos emplean en la fermentacin y producen metano que liberan al entorno. El metano producido por este mtodo es una fuente de energa alternativa, denominada bioenerga, que puede reemplazar a las fuentes tradicionales de energa. Propsito de la actividad La experiencia consiste en la construccin de un digestor de materia orgnica, donde se podr comprobar la produccin de biogs por la accin de los microorganismos anaerobios (bacterias metangenas), que estn presentes en los desechos orgnicos. Mediante esta experiencia es posible demostrar la accin de un tipo de microorganismos que se incluye en el grupo de los extremfilos: las bacterias metangenas que viven en ausencia de oxgeno. Construccin del digestor de materia orgnica Materiales botella plstica de dos litros de capacidad, con tapa manguera de goma pinza o llave para cerrar la manguera tapn agujereado por donde atravesar la manguera de goma o un tubo de vidrio al que se unir la manguera de goma mechero caja de cartn, de madera o de telgopor lmpara de 60-75 watt que proveer de calor al sistema estircol de caballo, de vaca o de aves y restos vegetales agua hervida (sin cloro) agua de cal (se utiliza para comprobar la presencia de dixido de carbono). 2. Armado del digestor colocar los restos orgnicos dentro de la botella hasta la mitad de su capacidad; llenar la botella con agua hasta cubrir la materia orgnica (y un poco ms); cerrar la botella con el tapn que ya tiene atravesada la manguera o el tubo de vidrio; adems de poner el tapn se puede sellar la botella con una resina o con la misma tapa a rosca de la botella (que debe estar perforada para que entre el tapn) para evitar la fuga de gas o que el tapn se libere (ya que puede ser despedido por la presin que ejerce el gas que se acumula en la botella); unir la manguera al mechero y cerrarla con la pinza; colocar la botella dentro de la caja junto con la lmpara que debe permanecer encendida todo el tiempo para mantener la temperatura a 40oC aproximadamente. 3. Desarrollo Al cabo de 7 - 10 das, aproximadamente, el lquido de la botella tendr burbujas. Al tocar la manguera que la cierra, es posible comprobar que la presin es diferente a ambos lados de la llave.
MANUAL DE PRACTICAS DE BIOTECNOLOGIA MSc JHON GARCIA LOPEZ ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Colocar el extremo de la manguera dentro de un recipiente con agua de cal. Abrir la manguera para dejar salir el gas acumulado en la botella. Si el agua se pone turbia indica que la manguera despidi dixido de carbono que se produjo en la botella. Estrangular la botella para sacar la mayor cantidad posible de dixido de carbono. Volver a cerrar la llave de la manguera. A partir de este momento, habiendo poco oxgeno en la botella (consumido en una primera etapa por la respiracin de algunos microbios) se intensifica la produccin de gas metano por otro tipo de bacterias que no necesitan oxgeno. La produccin de biogs (metano) lleva varios das y, a medida que se produce, la botella estrangulada se hincha. Para comprobar la produccin de biogs abrir la llave de la manguera y prender el mechero. Aclaracin: hay que tener en cuenta que se trabaja con microorganismos que, como otros seres vivos, necesitan condiciones adecuadas para cumplir con sus actividades. Puede ocurrir que haya fluctuaciones en las condiciones de la experiencia y que la produccin de biogs sea escasa. En ese caso, se debe probar nuevamente hasta que se encuentren las condiciones adecuadas.
Elaboracin de queso
Este tipo de queso se puede elaborar aadiendo un agente acidificante a la leche (limn o vinagre) o empleando bacterias cido lcticas. El empleo de las bacterias ofrece la ventaja de que es la lactosa (azcar de la leche) la que se metaboliza produciendo un sabor, una textura y una digestibilidad superior a la del producto obtenido por la simple acidificacin. Como consecuencia de la fermentacin, en la cual las bacterias degradan el azcar de la leche (lactosa) se obtiene cido lctico. Un aumento en la acidez de la leche estimula la accin de enzimas que causan la coagulacin de las protenas lcticas (fundamentalmente casena) y esto resulta en la formacin de estructuras de mayor tamao que se separan de la parte acuosa de la leche (suero). Adems, la acidez inhibe el desarrollo de grmenes indeseables, incluyendo los potencialmente patgenos. El queso que se obtiene en este caso tiene un sabor marcadamente cido y su estructura es muy blanda. Nota: se puede probar aumentar o disminuir las dosis de fermento, los tiempos de acidificacin y de cuajado, trabajar a diferentes temperaturas y dejar madurar el queso bajo diferentes circunstancias para llegar a realizar una gama amplia de productos. Materiales necesarios: 1 litro de leche Olla grande para el bao Mara si la temperatura es inferior a 22 C Recipiente de plstico, acero inoxidable o vidrio. No se recomienda la porcelana, ni el aluminio, ni cualquier recipiente que pueda ser afectado por la accin del cido o no se pueda limpiar con facilidad. Gasa Fermento (bacterias lcticas). Se pueden adquirir o emplear un yogur comercial cido. Cucharn Colador Cuchillo de punta Cuchara sopera Termmetro (rango de 0C a 100C) Proceso de elaboracin: Pasteurizar la leche si se trabaja con leche no comercial: calentar la leche hasta 70C al bao Mara -nunca directamente- y mantener esta temperatura de 1 a 3 minutos. Enfriar rpidamente introduciendo el recipiente de la leche en agua fra. Bajar la temperatura hasta los 30C. Tomar 1 o 2 litros de leche pasteurizada y templarla a bao Mara hasta unos 30 C aproximadamente. Tomar la dosis de fermento iniciador y diluirla en una cucharada de leche tibia. Del fermento iniciador se debe aadir una cucharita por cada 1 o 2 litros de leche. Diluir la cucharada de leche con el fermento en el litro de leche revolviendo suavemente. Dejar reposar la mezcla en un sitio tibio (nunca inferior a 20C ni superior a 35C) durante 8 a 24 horas segn la temperatura ambiente. Es conveniente cubrir con una tela o trapo para permitir que la leche se airee pero evitar que se ensucie.
MANUAL DE PRACTICAS DE BIOTECNOLOGIA MSc JHON GARCIA LOPEZ ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- La cuajada est lista para desuerar cuando al introducir el cuchillo y levantar la punta hacia arriba se produce una grieta en la superficie. Esto significar que la leche se ha coagulado o solidificado y por lo tanto la cuajada est a punto. - Humedecer con agua la gasa de quesera y forrar con ella el colador. - Sacar con cuidado la cuajada y depositarla sobre la tela. Si fuera necesario, tomar la tela por sus extremos y levantarla ligeramente para destaponar la parte de la gasa que est en contacto con la cuajada y dejar salir el suero. - El tiempo de desuerado es muy variable y depende de la consistencia buscada y la temperatura ambiente. Llevar entre 4 y 8 horas. Al enfriarse, el queso se endurece.