INSTITUTO NACIONAL DE NEUROLOGA Y NEUROCIRUGA UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

Accin de los antioxidantes sobre los radicales libres ____________________________________________

Los antioxidantes entregan un electrn a los radicales libres, con lo cual los desactivan apagando el proceso de oxidacin, y transformndose ellos en radicales libres inactivos. Esta propiedad se debe a que su estructura qumica permite una gran movilidad de sus electrones en los orbitales moleculares, es decir, los tomos que conforman la molcula comparten un gran nmero de electrones en una nube electrnica que forma los orbitales moleculares hacindolos estables. En consecuencia, la estructura molecular del antioxidante sufre una modificacin qumica al reaccionar con un radical libre, pero con un costo mucho menor para el organismo que si la molcula daada tuviera funcin biolgica. Por ejemplo, es preferible la alteracin qumica de una molcula de vitamina E que puede ser reconstituida por otro antioxidante o reemplazada a travs de la dieta, que el dao al material gentico y sus consecuencias. Para que una sustancia acte como antioxidante debe ser capaz de reaccionar fcil y especficamente con un radical libre, debe encontrarse espacialmente prximo al radical libre, pues de otra manera este ltimo reaccionara con una biomolcula; y adems, debe estar en cantidad suficiente para ser efectivo. La determinacin de la capacidad antioxidante en suero o plasma se refiere a la capacidad que tiene el plasma para atrapar radicales libres, con el propsito de evitar que interacten con molculas biolgicas fundamentales como cidos nucleicos, protenas y lpidos. Los antioxidantes presentes en el plasma son responsables de esta capacidad antioxidante, cuyo alcance depender de la cantidad y calidad de ellos. Mientras mayor sea la capacidad (nmero de radicales libres inactivados por molcula de antioxidante) y la afinidad (rapidez con que un antioxidante inactiva a un radical) de un antioxidante por atrapar radicales, menor ser la probabilidad de dao a macromolculas. Por lo mismo, determinar la capacidad antioxidante del plasma es un excelente parmetro para evaluar el estado de defensa antioxidante. Se han empleado distintos mtodos para evaluar la capacidad antioxidante de mezclas complejas, como plasma, vino, extracto de tejidos y alimentos. No existe un mtodo nico y los ndices obtenidos para una muestra dependen del procedimiento utilizado para evaluarla. La capacidad antioxidante de una mezcla como plasma, est dada no slo por la suma de las capacidades antioxidantes de cada uno de sus componentes, sino que tambin depende del microambiente y de la interaccin de los compuestos entre s, pudiendo producirse efectos sinrgicos o inhibitorios. Como es el caso de la vitamina E y C, su interaccin conduce a una capacidad antioxidante superior a la esperada, lo que equivale a decir que entre ellas hay sinergia.

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Lo importante es que los ndices que miden capacidad antioxidante del plasma, de alguna manera, representan o reflejan el potencial de respuesta que tiene el organismo frente al ataque de los radicales libres. Los niveles plasmticos de los distintos antioxidantes tambin son una medida de la capacidad de defensa antioxidante del organismo. En forma de investigacin, se realiza un perfil de antioxidantes plasmticos para evaluar la capacidad de defensa antioxidante del organismo que incluye: vitamina E, vitamina C, licopeno, ubiquinol, -caroteno, urato, TAR y TRAP (Gonzlez et al, 2001). Algunos mtodos han sido desarrollados para medir la actividad total, la capacidad total o la potencialidad total de los antioxidantes. Algunos de los ms representativos son: Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC), Total Radical Absorption Potentials (TRAP), Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP), y Oxygen Radical Absorption Capacity (ORAC). Estos mtodos estn basados en la transferencia de electrones, la reaccin de transferencia de un tomo de hidrgeno entre un oxidante y un radical libre (Ou, et al, 2002). FRAP: El mtodo FRAP (reduccin del hierro/poder antioxidante), est basado en la capacidad reductora (transferencia de un electrn desde la molcula antioxidante a la oxidante) (Prior y Cao, 1999), es decir determina la capacidad de reduccin frrica que tiene una muestra. A pH bajo y en presencia de un reductor (antioxidante), el complejo de tripiridiltriazina (TPTZ) con Fe (III) se reduce a la forma ferrosa, desarrollando un intenso color azul con una absorcin mxima a 595 nm, que permite ser cuantificado espectrofotomtricamente por interpolacin en una recta de calibrado de un patrn. Se mide el incremento de absorbancia a los 30 minutos de comenzar la reaccin (Benzie et al, 1996). ORAC: El ORAC (Capacidad de absorcin de radicales oxgeno) se basa en la capacidad de neutralizar radicales libres (transferencia de un tomo de hidrgeno) (Prior y Cao, 1999), es el nico mtodo que combina ambos en una sola cantidad, puede analizar hasta nueve muestras en una sola concentracin. El mtodo ORAC para la medida de la actividad antioxidante se fundamenta en el retraso en presencia de compuestos antioxidantes de la disminucin de la fluorescencia debido a la accin de radicales peroxilos. La actividad antioxidante se mide en relacin a la sustancia de referencia Trolox (Cao et al, 1997). La medicin combina tanto tiempo de inhibicin como porcentaje de inhibicin de la accin de radicales libres por los antioxidantes usando un rea bajo la curva para la cuantificacin (Huang, et al, 2002). ABTS: En este mtodo, el producto de oxidacin del ABTS, el catin-radical de larga vida ABTS+, se presenta como una excelente herramienta para determinar la actividad antioxidante de antioxidantes donadores de hidrgeno (capturadores de radicales en fase acuosa) y antioxidantes rompedores de cadena (capturadores de radicales peroxilo lipdicos). El radical ABTS+ se genera mediante la interaccin del ABTS con la especie radical ferrilmioglobina, generada por la activacin de la metmioglobina en presencia de perxido de hidrgeno.

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En este mtodo, se mide el tiempo que tarda el radical ABTS en ser oxidado hasta el radical libre estable ABTS+ en presencia de compuestos antioxidantes como los polifenoles, que retarden dicha oxidacin o bien disminuyan la absorbancia de la disolucin por captura del radical. La absorbancia se mide a 734 nm, longitud de onda en la que el radical coloreado presenta un mximo. El resultado final se expresa como equivalentes del compuesto de referencia 6-hydroxy- 2, 5, 7, 8tetramethylchroman-2carboxylicacid (Trolox, anlogo hidrosoluble de la vitamina E) que generaran la misma respuesta (Re et al, 1999). DPPH: El mtodo DPPH se basa en la capacidad del radical libre estable 1,1difenil-2-picrilhidrazilo para reaccionar con donadores de H. El radical DPPH tiene un mximo de absorbancia a 517 nm y genera un producto incoloro cuando captura un antioxidante. De esta forma, se mide la disminucin de la absorbancia de una disolucin estable del radical DPPH en presencia de sustancias antioxidantes con grupos OH activos donadores de H capaces de capturar los radicales libres (Kaneda et al, 1995).

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