Stuart D.

Blacksell Recibido el 12 de diciembre de 2011; Aceptado 11 de febrero 2012 Hindawi Publishing Corporation Diario de Biomedicina y Biotecnologa Volumen 2012 , ID del artculo 151967 , 12 pginas

Comercial dengue pruebas de diagnstico rpido para la aplicacin de Punto de Atencin : Evaluaciones recientes y necesidades futuras ?

La fiebre del dengue , dengue hemorrgico y sndrome de shock por dengue (DF / DHF / DSS ) son enfermedades tropicales que causan daos humanitarios y econmicos significativos. Se estima que ms de 2,5 millones de personas estn en riesgo de infeccin y de ms de 100 pases que la transmisin del virus del dengue endmico. Las pruebas de laboratorio son esenciales para proporcionar un diagnstico preciso de la infeccin por el virus del dengue , para poder administrarle el tratamiento adecuado y el tratamiento del paciente. En muchos lugares endmicos de dengue , los recursos diagnsticos de laboratorio son pruebas de diagnstico rpido limitados y simples ( PDR ) ofrecen oportunidades para el diagnstico de punto de atencin . Este documento aborda cuestiones de actualidad relativas a la aplicacin de pruebas rpidas de dengue comerciales para el diagnstico de infeccin por el virus del dengue aguda, evaluaciones de diagnstico reciente , e identifica las necesidades futuras. 1 . introduccin 1.1 . La carga de Dengue . La fiebre del dengue , el dengue hemorrgico y el sndrome de choque por dengue (DF / DHF / DSS ) son un grupo de enfermedades tropicales que causan daos humanitarios y econmicos significativos. DF / DHF / DSS son causadas por el virus del dengue , el cual pertenece al gnero Flavivirus de la familia Flaviviridae . El gnero flavivirus incluye aproximadamente 70 virus de los cuales hay 3 complejos antignicos , el virus de la encefalitis japonesa , encefalitis transmitida por garrapatas , y los complejos del virus del dengue [ 1 ] . Therearefourdistinct serotipos del virus del dengue (por ejemplo , los serotipos del virus del dengue 1-4 ), que toda la enfermedad clnica causa . Se estima que ms de 2,5 millones de personas estn en riesgo de infeccin y de ms de 100 pases que la transmisin del virus del dengue endmico. Aunque el nmero exacto de casos de virus del dengue no estn disponibles, para el perodo 2000-2004 , el promedio anual fue de 925.896 casos, lo que fue casi el doble en comparacin con los 479.848 casos que se reportaron para el perodo 1990-1999 [ 2 ] . Alrededor de 250.000 a 500.000 casos de dengue hemorrgico son reportados anualmente , aunque la verdadera incidencia no es muy conocido [ 3 ] . En las regiones endmicas de dengue , que incluyen pases de Asia y las Amricas , la carga de dengue es aos de vida aproximadamente 1300 ajustados por discapacidad (AVAD ) por milln de habitantes , que es similar a la carga de enfermedad de la infancia y otras enfermedades tropicales, como la tuberculosis , en estas regiones [ 2 ] . 1.2 . Por qu necesitamos pruebas de diagnstico rpido (PDR ) y quin controla la calidad? Las pruebas de laboratorio son esenciales para proporcionar un diagnstico preciso de la infeccin por el virus del dengue agudo en la presentacin del paciente a una clnica para poder administrarle el tratamiento y la gestin adecuada del paciente . En muchos lugares endmicos de dengue , los recursos diagnsticos de laboratorio son pruebas de diagnstico rpido limitados y simples ( PDR ) ofrecen oportunidades para el diagnstico de punto de atencin . Las caractersticas de la prueba de diagnstico ideal se dice que estn definidas por los criterios asegur : ( 1 ) asequible por las personas en riesgo de infeccin , (2 ) Sensible ( pocos falsos negativos ) , (3 ) especfica ( pocos falsos positivos ) ; ( 4 ) de uso fcil ( fcil de realizar y que requiere una formacin mnima ) , ( 5 ) Rapid (para permitir el tratamiento en la primera visita ) y robusto ( no requiere almacenamiento refrigerado ) , ( 6 ) Equipo libre , ( 7 ) Entregado a aquellos que lo necesitan [ 4 ] . La necesidad de pruebas sencillas de diagnstico de punto de atencin ha llevado a la proliferacin de equipos de directores regionales basados en anticuerpos para infecciones tropicales como el dengue , la leptospirosis , la malaria y la melioidosis , utilizando el formato de ensayo inmunocromatogrfico (ICT ) . Desafortunadamente, muchos equipos de directores regionales basados en anticuerpos de dengue tuvo una actuacin deficiente para el diagnstico de dengue agudo en la presentacin del paciente que lleva a las evaluaciones a gran escala financiados por organizaciones internacionales independientes , como la Organizacin Mundial de la Salud (OMS ) [ 5 , 6 ] para determinar cules son el mejor de los ensayos comerciales . Hasta que se realizaron estas evaluaciones a gran escala , muchos fabricantes de "patio trasero" comercializan sus productos a travs de Internet con poca o ninguna verificacin independiente de las reclamaciones de rendimiento del fabricante. Los resultados de estas evaluaciones se han proporcionado detalles de rendimiento independientes a los consumidores y los pobres resultados desafiado a los fabricantes a mejorar el rendimiento del RDT . El mercado RDT sigue siendo en gran parte no regulado , con la excepcin de los EE.UU., donde en los dispositivos in vitro requiere la aprobacin de la Administracin de Alimentos y Medicamentos ( FDA ), sin embargo , en ausencia de normas nacionales , las evaluaciones de alta calidad, independientes en revistas revisadas por pares ofrecen la mejor guiar a la calidad.. 1.3 . Formatos de pruebas rpidas . Pruebas de inmunocromatografa para la deteccin de virus del dengue protena no estructural 1 ( NS1 ) antgeno , IgM , IgG , IgA y anticuerpos han sido desarrollados por una serie de empresas comerciales y han encontrado una amplia aplicacin debido a su facilidad de uso y rapidez de los resultados . Estos PDR dengue se presentan en la forma de un casete de flujo lateral que permite el flujo de muestra en un plano horizontal o una prueba de estilo mecha que se realiza en un tubo de muestra y extrae verticalmente por accin capilar . PDR virus del dengue utilizan un cctel de antgenos y anticuerpos monoclonales secas marcado con oro coloidal (especficos para el dengue NS1 antgeno, IgM , IgG o IgA ) onapadat la cabeza de una tira de nitrocelulosa que se impregna con un antgeno NS1 antidengue , IgM , IgG , o las lneas de anticuerpos IgA . Muestra de ensayo y tampn de ejecucin se aaden a la almohadilla que libera el oro coloidal de la almohadilla y facilita la mezcla de la muestra del paciente con el complejo de oro y facilita la migracin de los reactivos y la muestra por accin capilar a lo largo de la tira de nitrocelulosa hacia el anti- IgM humana , IgG o lneas de anticuerpos IgA . La presencia de antgeno NS1 del virus del dengue o IgM , IgG o IgA es significado por el desarrollo de lneas de color marrn en la ubicacin de las lneas de anticuerpos . Las pruebas rpidas de dengue tienen la ventaja de que se puede realizar en aproximadamente 10 a 15 minutos y no requiere equipo especializado o entrenamiento, lo que es ideal para entornos de baja tecnologa , sin embargo , este formato tiene la debilidad de la lectura subjetiva por parte del operador. 1.4 . Metodologas de evaluacin de pruebas rpidas . Los ensayos de diagnstico suelen ser evaluados en trminos de sensibilidad y especificidad que se calcula utilizando un 2 2 tabulacin cruzada donde un " estndar de oro " nmero ( el interlocutor reconocido , prueba ms precisa ) o el resultado estndar de referencia ( normalmente , el test ms utilizado ) se compara con la prueba rpida para determinar la exactitud diagnstica. Una prueba de que es 100 % sensible y especfico se considera una prueba perfecta . La eleccin del ensayo de oro estndar , resultado final paciente , o la comparacin con el ensayo no referencia como el comparador de referencia puede tener una gran influencia en los resultados finales diagnstico de la enfermedad . Por desgracia , hay una falta de conformidad de las metodologas de evaluacin y seleccin de ensayos de referencia para las evaluaciones de diagnstico de RDT dengue , sin embargo , hay que sealar que esta cuestin no se limita slo al diagnstico de dengue . Directrices para las evaluaciones de las pruebas de diagnstico de dengue se han publicado recientemente [ 7 ], que se espera que proporcione un marco para un enfoque uniforme para las evaluaciones de diagnstico . 1.5 . Dinmica de la infeccin por el virus del dengue : implicaciones para el diagnstico. La dinmica de la infeccin por el virus del dengue potencialmente tienen una gran influencia en la interpretacin de las PDR (Figuras 1 y 2 ) . Despus de la infeccin inicial , el virus del dengue se replica con ttulos elevados en la sangre antes de que los pacientes son lo suficientemente enfermos para presentar a un mdico , con viremia alcanzando un mximo en el momento o poco despus de la aparicin de los sntomas . Virus sigue siendo detectable en la sangre durante un mximo de 2 a 12 das despus de la aparicin de los sntomas y puede alcanzar los ttulos de hasta 1 108 dosis infecciosas 50 % ( ID50 ) por ml o 108,5 50 % mosquitos dosis infecciosas ( MID50 ) [ 8 , 9 ] . Durante la fase de viremia del dengue , el antgeno NS1 se produce simultneamente durante el proceso de replicacin del virus. Antgeno NS1 es una glicoprotena de 46 a 50 - kilodalton altamente conservadas por todos los serotipos del dengue y se expresa en cualquiera de las formas [ 10 , 11 ] asociada a la membrana o secretadas . Circula NS1 solubles en el suero de los pacientes durante la fase de viremia de la infeccin de las infecciones del virus del dengue y por lo tanto es un objetivo de diagnstico excelente para el diagnstico del dengue aguda . Diferencia en la persistencia de antgeno NS1 soluble en el suero entre primaria ( 5-6 das despus de la aparicin de la enfermedad ) y las infecciones de dengue secundarias ( 6 - 12 das ) ha sido , observado y se formula la hiptesis de que la presencia de anticuerpos anti - NS1 , que se detectan con mayor frecuencia en el dengue infeccin secundaria [ 12 ] , modula la formacin de complejos anticuerpo-antgeno que impiden la capacidad de la prueba para detectar el antgeno NS1 libre [ 13 , 14 ]

Figura 1 : Representacin grfica de la cintica de antgeno NS1 del dengue e IgM , IgG , IgA y anticuerpos durante una infeccin primaria del dengue . Figura 2 : Representacin grfica de la cintica de antgeno NS1 del dengue e IgM , IgG , IgA y anticuerpos durante una infeccin secundaria de dengue . La comprensin de las caractersticas de la respuesta inmune del husped humoral a la infeccin por el virus del dengue tambin es importante para la interpretacin de las PDR dengue . Anticuerpos contra dengue IgM son responsables marcador de infeccin reciente , pero no necesariamente con una infeccin aguda . En las infecciones del virus del dengue primarios , anticuerpos IgM desarrollan despus de la disminucin de la viremia entre los das 3-5 despus de la aparicin de la infeccin usando mtodos de deteccin muy sensibles [ 15 , 16 ] y los niveles pico Reache aproximadamente 2 semanas ms tarde [ 17 ] . La persistencia de anticuerpos IgM despus de la infeccin primaria por el mtodo de regresin lineal se ha estimado en 179 das ( intervalo de confianza del 95 %, 155 a 215 das) [ 18 ] . En zonas endmicas de dengue que en las infecciones secundarias dominan , los anticuerpos IgM pueden ser detectables por los equipos de directores regionales en cuanto a los 2-3 das de la infeccin [ 19-21 ] y los niveles de anticuerpos IgM pico son generalmente ms bajos que en las infecciones primarias [ 8 , 22 ] . La persistencia de anticuerpos IgM despus de la infeccin secundaria se estima que es ms corta que la de las infecciones primarias en 139 das (intervalo de confianza del 95% , 119 a 167 das) [ 18 ] , y otras estimaciones publicadas de la persistencia de anticuerpos IgM rango de 2 meses a 6 meses [ 8 , 23 ] . La respuesta de anticuerpos IgG desarrolla unos pocos das despus de la aparicin de la respuesta de anticuerpos IgM e es serotipo especfico y puede persistir durante muchos aos despus de una sola infeccin . Infecciones por el virus del dengue secundarias generan una respuesta de anticuerpos IgG anamnsica que se caracteriza por un rpido aumento de anticuerpos IgG detectables en 4-5 das de la enfermedad [ 16 ], que es mucho ms pronto que la respuesta de anticuerpos IgG normal de una infeccin primaria . Dengue anticuerpos IgA han sido reportados en el suero de pacientes con fiebre del dengue slo entre los das 8 y 11 despus de la aparicin de la fiebre [ 17 ] . Sin embargo , en las formas ms graves de la enfermedad , los anticuerpos IgA fueron indetectables segn se informa en pacientes de DH en la fase aguda de la enfermedad ( das 2 a 4 ) , pero aument en la siguiente fase de convalecencia temprana ( das 5 a 14 ) y , en pacientes DSS , el aumento de los niveles ms altos en los das de 8 a 11 y disminuy ligeramente de 15 das despus de desencadenar alguna vez [ 17 ] . En la infeccin primaria del dengue , se ha informado de la aparicin de niveles detectables de anticuerpos de IgA en promedio a los 5,5 das despus de la aparicin de la fiebre , y , en la infeccin secundaria , los anticuerpos IgA aumentaron lentamente durante los primeros das del estudio [ 22 ] . Las tasas de positividad para anticuerpos IgA en suero fueron significativamente mayores en los informes, las infecciones secundarias que en las infecciones primarias ( 100 frente a 84,6 %) [ 24 ] 2 . Las evaluaciones de diagnstico 2.1 . Realizacin de diagnstico basados en anticuerpos . Dengue IgM y PDR basados en anticuerpos IgG han existido durante aproximadamente 15 aos en diversas formas por distintos fabricantes ( vase la Tabla 1 para obtener una descripcin de los contempornea dengue IgM comercial y PDR IgG basados ) . Varias evaluaciones de diagnstico fue realizado a partir de la dcada de 1990 hasta mediados de la dcada de 2000 [ 25 a 29 ], sin embargo , la heterogeneidad significativa en las metodologas de evaluacin hace que la comparacin directa de la eficacia diagnstica problemtica [ 30 ] . En 2005 , la OMS Oficina Regional del Pacfico Occidental ( WPRO ) encarg una evaluacin independiente del dengue Ig rendimiento MRDT para el diagnstico aguda, as como una evaluacin de las condiciones de almacenamiento que utilizan muestras almacenadas de Tailandia [ 6] y las muestras de pacientes reclutados prospectivamente desde Laos [ 31 ] . Los resultados para la mayora de los anticuerpos IgM del dengue evaluado PDR una falta de sensibilidad para el diagnstico de infeccin por dengue aguda que variaron de 6,4 % a 65,3 % y especificidades vari de 69,1 % a 100 % ( los resultados seleccionados se presentan en la Tabla 2 ) . Posteriormente , la OMS patrocin una evaluacin multicntrica de anticuerpos IgM contra el dengue PDR donde la sensibilidad de ensayo variaron de 21% a 99 % y especificidad vari de 77 % a 98 % , en comparacin con las pruebas ELISA de referencia [ 5 ] . Las siguientes evaluaciones de la Panbio Duo IgM RDT informaron sensibilidades que oscilan desde 65,3 hasta 81,8 % y especificidades que van desde 75,0 hasta 97,6 % ( Tabla 2 ) . Las evaluaciones recientes de los Diagnsticos estndar ( SD ) IgM RDT demostraron una mayor sensibilidad frente a los muy pobres primera generacin de dispositivos resultados del estudio de la OMS [ 6 ] ( 21,8 % ) , con un dispositivo de segunda generacin despus de haber informado de sensibilidad de 53,5 % [ 21] y 79.2 % [ 19 ] . la mejora en la 2 generacin SD IgM RDT se document la reaccin positiva de las evaluaciones de diagnstico para los fabricantes. 2.2 . Rendimiento de NS1 Diagnsticos basados en antgenos . El acontecimiento ms importante en el diagnstico de dengue en los ltimos aos es la aparicin de la deteccin especfica de antgeno NS1 del virus dengue ( ver Tabla 1 para la descripcin de dengue NS1 PDR comerciales contemporneos antgeno) . PDR dengue que detectan antgeno NS1 emplean un nmero de anticuerpos monoclonales anti - NS1 serotipo - especficos para capturar y detectar solubles antgeno NS1 en el suero , plasma o sangre . El primer formato commercialassaysfordengueNS1antigendetectionusedthe ELISA [ 14 , 36 ] y ha demostrado una excelente sensibilidad y especificidad en la fase temprana de la infeccin que disminuye con la cada de los niveles de viremia . Los principales fabricantes de diagnsticos comerciales, PanBio , Biorad , y SD , tiene todas las pruebas del antgeno NS1 RDT basadas desarrollados, y todas cuentan con ensayos ELISA basados en equivalentes. El rendimiento diagnstico de las PDR NS1- basados de los fabricantes mencionados se ha evaluado en numerosos lugares geogrficos con los resultados de 21 evaluaciones de diagnstico que se presentan en la Tabla 3 . Doce estudios evaluaron la RDT TIRA Biorad para el diagnstico de la infeccin aguda por dengue usando muestras de admisin , y los resultados demostraron una considerable variacin en la sensibilidad ( 49,8 % -98,7 % ) , pero las especificidades reportados fueron ms consistentes con todo ser > 90 % . Para el 25 % ( 3/12 ) de los estudios , la sensibilidad fue> 89 %, sin embargo , todos estos estudios utilizaron un comparador sesgada de cualquier aislamiento viral , RT -PCR, o NS1 -ELISA y no examin la posibilidad de falsos - negativos resultados de anlisis de muestras pareadas de suero para examinar de aumento dinmico de pruebas serolgicas como IgM ( MAC ) o IgG ( GAC ) ELISA de captura . Los estudios que utilizaron una combinacin ms representativo de virus o deteccin del antgeno y la serologa como comparadores de referencia dieron sensibilidades de la Bande RDT de Biorad entre el 49,4 % [ 37] y 78,9 % [ 38 ] . El Bioline dengue Duo RDT tira de deteccin del antgeno NS1 SD se evalu para el diagnstico del dengue aguda en cuatro estudios (Tabla 3 ) con estimaciones consistentemente alta especificidad ( 96,7 a 100 % ) y las sensibilidades que variaban de 48,5 % [ 19 ] a 65,4 % [ 21 ] con los estudios ya sea usando una combinacin de deteccin de virus y serologa [ 21 , 39 , 40 ] como comparadores o solos serologa [ 19 ] . El RDT NS1 banda de deteccin de antgeno Panbio Early Rapid se evalu en dos estudios con muestras de tres localizaciones ( Vietnam, Malasia y Sri Lanka) con estimaciones de alta especificidad ( 92,5 a 96,7 % ) y las sensibilidades que van desde el 58,6% [ 19 ] de 69,2 % [ 20 ] para las muestras de admisin . Unos pocos estudios han comparado la precisin diagnstica de antgeno NS1 PDR en infecciones primarias y secundarias del dengue. En general , las PDR -antgeno NS1 demostraron mayor sensibilidad en las infecciones primarias en comparacin con las infecciones secundarias [ 39 , 41 - 43] , sin embargo , otros estudios han informado de lo contrario [ 37 ] . Como se mencion anteriormente , se ha sugerido que este fenmeno de disminucin de deteccin de NS1 - antgeno en infecciones secundarias del dengue es causada por antgeno NS1 complejante con anticuerpos anti - NS1 [ 12-14 ] . Esta observacin resulta en una incapacidad de la RDT NS1 - antgeno para detectar el antgeno complejado NS1 y no deben ser interpretados falta de sensibilidad en la parte del ensayo de diagnstico. 2.3 . La combinacin de antgeno NS1 y anticuerpos IgM Resultados . Para aprovechar todo el espectro temporal de la presentacin del paciente durante la fase aguda de la infeccin por dengue ( por lo general de 1 a 7 das despus del inicio de la fiebre) , antgeno NS1 y los resultados de anticuerpos IgM se han combinado de manera Boolean utilizar y / o los operadores . NS1 antgeno est presente en el suero en la fase temprana de la infeccin , sin embargo , los pacientes que se presentan tardamente en el curso de la infeccin pueden tener niveles indetectables de antgeno NS1 . Anticuerpos IgM contra el dengue estn normalmente presentes despus de 2-5 das de la infeccin , y , mediante la combinacin de los resultados de antgeno NS1 del dengue y la prueba de anticuerpos de IgM , el diagnstico preciso durante la presentacin aguda se le concede . Este enfoque fue descrito inicialmente [ 48 ] mediante la combinacin de los resultados del antgeno NS1 Panbio y pruebas ELISA de anticuerpos IgM en la RDP Lao . Posteriormente , los estudios [ 19-21 ] han combinado NS1 antgeno y el anticuerpo resultados para explotar las caractersticas de diagnstico temporales de cada analito ( Tabla 4 ) . La combinacin de la SD Bioline dengue Duo RDT antgeno NS1 y los resultados de anticuerpos IgM para el diagnstico aguda , la sensibilidad vari de 75,5 % [ 39 ] a 92,9 % [ 19 ] y la especificidad del 88,8 % [ 19 ] a 100 % [ 39 ] .

La combinacin de la Panbio temprana rpida RDT antgeno NS1 y los resultados de anticuerpos IgM , la sensibilidad vari de 89,0 % a 89,9 %, con la especificidad reportada fue 75,0 % [ 19 ] . 3 . Necesidades futuras para pruebas rpidas de dengue A pesar de las recientes mejoras en los equipos de directores regionales , hay una serie de cuestiones que requieren una mayor investigacin. 3.1 . Normalizacin de las evaluaciones de diagnstico . La mencionada falta de conformidad en la evaluacin del dengue PDR sigue siendo un problema y un enfoque estandarizado debe ser considerada cuando se realizan evaluaciones de diagnstico de manera que existe la comparabilidad entre los estudios . Las directrices recientemente publicadas para las evaluaciones de los ensayos de diagnstico de dengue [ 7 ] se deben seguir siempre que sea posible . 3.2 . La determinacin de la variacin geogrfica y los aspectos prcticos de uso de prueba . Para fortalecer an ms las estimaciones actuales de diagnstico de la enfermedad , se requieren estudios prospectivos de reclutamiento en diferentes lugares del dengue es endmica en las que hay variaciones en el estado de infeccin por dengue (primaria versus secundaria ) , das de enfermedad, y antes de la presentacin. Tambin se necesitan ms estudios para examinar algunos de los aspectos ms prcticos de dengue rendimiento RDT que incluye la influencia de la formacin de los operadores , la variacin entre operadores , y la facilidad de uso de los ensayos. Cuando los estudios de casos y controles se realizarn con muestras archivadas caracterizados , que tambin se tengan en cuenta la adecuacin de la composicin del dengue paciente (serotipos , das de la enfermedad ) y el paciente no dengue ( dengue otras fiebres ), por cohortes. 3.3 . La diferenciacin de las infecciones de dengue primaria versus secundaria . Los pacientes con infecciones secundarias o posterior del dengue se considera que tienen un mayor riesgo de las formas ms graves de la enfermedad , y por lo tanto, la deteccin precisa de primaria y secundaria en la presentacin a una instalacin clnica pueden convertirse en una herramienta de gestin de paciente prometedor . Algunos fabricantes de equipos de directores regionales basados en anticuerpos afirman sus ensayos son capaces de diferenciar las infecciones del virus del dengue primarias y secundarias utilizando los siguientes criterios : ( 1 ) infeccin por el virus del dengue primaria aguda definido como un resultado de IgM positivo e IgG - negativo ( IgM + / IgG - ) y ( 2 ) la infeccin por virus del dengue secundaria aguda define como resultados positivos de IgM e IgG - positivo (+ / IgG + IgM ) o IgM e IgG - negativo - positivo ( + IgM-/IgG ) . El examen de la voracidad de las afirmaciones del fabricante se limita a unos pocos estudios [ 6 , 19, 31 ] y, a menudo se lleva a cabo en lugares endmicos de dengue donde hay un predominio de las infecciones de dengue secundarias. Tales estudios han demostrado que las PDR no pueden diferenciar con fiabilidad los diferentes estados de infeccin de dengue . 3.4 . Tipo de muestra y el efecto de los anticoagulantes y conservantes . Muchos fabricantes permiten el uso de suero , plasma o sangre completa ( Tabla 1 ) para su uso en las PDR de dengue en ambos formatos de anticuerpos y antgeno . Curiosamente, los PanBio Duo PDR anticuerpos slo permite el uso de suero. Desafortunadamente , hay poca evidencia cuantitativa de que todos los tipos de muestras se desempean igual y es titular de los fabricantes a proporcionar estos datos de rendimiento. El efecto de los anticoagulantes de la muestra y la sangre entera en el rendimiento del RDT y la facilidad de lectura tambin requiere un examen en condiciones de campo . 3.5 . Consideraciones sobre el almacenamiento . Regiones endmicas del dengue estn localizadas en regiones tropicales que tienen altas temperaturas y los climas de alta humedad. Muchas de las pruebas rpidas de dengue contemporneos requieren refrigeracin ( es decir , 2-8 C ) ( vase la Tabla 1 ) , sin embargo , algunos fabricantes especifican el almacenamiento a 2 -30 C , sin embargo , temperaturas tropicales a menudo exceden los 30 C. Hay una necesidad urgente de examinar la temperatura de almacenamiento effectof en PDR dengue contemporneos como la nica investigacin anterior se concentr en las pruebas basadas en anticuerpos de generaciones anteriores [ 6 ] . 3.6 . Los marcadores de pronstico de gravedad de la enfermedad . Aunque el diagnstico de la infeccin aguda del dengue es clnicamente til, en un entorno endmico del dengue , donde la mayora de las infecciones se observan en pacientes ambulatorios , hay una clara necesidad de contar tambin con los detalles de pronstico de gravedad de la enfermedad . Las formas ms graves de infeccin por dengue ( FHD y DSS ) requieren ingreso del paciente al hospital y las instalaciones de cuidados intensivos , y los indicadores de pronstico de gravedad clnica proporcionaran orientacin para el manejo del paciente . Cuantificacin secretada antgeno NS1 se ha planteado la hiptesis de que un marcador de la gravedad de la enfermedad [ 14 ] , y estudios posteriores han demostrado que los niveles de antgeno NS1 del dengue se correlacionan con la gravedad de la enfermedad cuando los niveles plasmticos de secretada NS1 correlacionados con los niveles de viremia y fueron mayores en los pacientes con ICD que en los que tienen la fiebre del dengue clnico menos grave [ 13 , 49 ] . 4 . Conclusiones A pesar de las mejoras en la exactitud de las PDR IgM basados , este formato no es suficientemente sensible para el diagnstico del dengue aguda solo. Diagnstico de dengue aguda mediante PDR IgG basadas no se recomienda debido a la persistencia de toda la vida de los anticuerpos IgG del dengue y por lo tanto la posibilidad de un diagnstico errneo de la deteccin de falsos positivos . Diagnstico antgenos NS1- basados son un componente importante del punto de atencin de diagnstico modernos , sin embargo , slo son sensibles en la fase temprana de la infeccin y por lo tanto no son adecuados para su uso exclusivo en la configuracin del dengue es endmica donde se pueden producir a finales presentaciones clnicas . Para aprovechar las ventajas de los resultados de las pruebas de modalidades en todo el espectro temporal de la presentacin del paciente , antgeno NS1 del dengue , y el anticuerpo IgM , los resultados de IDT deben ser combinados , sin embargo , hay una necesidad de educar a los mdicos y cientficos de este hecho . El reto para los fabricantes e investigadores es abordar las lagunas en los aspectos ms prcticos de la actuacin dengue RDT incluyendo muestras de los tipos de almacenamiento , RDT , gravedad de la enfermedad , y la realizacin de las evaluaciones de diagnstico en el futuro.