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Los protozoos presentan diversos mecanismos de locomocin, que se tienen en cuenta como uno de los caracteres para su clasificacin. As, muchos se mueven gracias a que poseen rganos locomotores permanentes: cilios o flagelos. En otros el movimiento se produce como consecuencia de la formacin de pseudpodos, que son proyecciones citoplasmticas temporales y retrctiles que, fijndose al sustrato, ejercen traccin sobre el resto del cuerpo del protozoo. Por ltimo, hay bastantes protozoos que carecen de rganos especficos de locomocin en casi todas las etapas de su ciclo biolgico.
Los protozoos se multiplican por reproduccin asexual (binaria o mltiple) y solo algunos tienen reproduccin sexual. El enquistamiento en los protozoos Los ciclos biolgicos de los protozoos son ms o menos complejos dependiendo de las especies o grupos que se consideren. Entre los protozoos parsitos, cuando abandonan el hospedador en el que se encuentran para pasar a colonizar otro, es frecuente que adopten una forma de resistencia llamada quiste, a fin de superar las condiciones adversas del medio externo. Estos quistes estn formados por una masa citoplasmtica en la que se observan un nmero de ncleos igual o superior al que tena el trofozoito del que derivan. Todo ello est rodeado por una cubierta resistente llamada pared qustica que lo protege de los agentes externos, lo que permite que estos quistes acten como medios de transmisin del parsito de un hospedador a otro. Para algunas especies estos quistes sirven adems como reorganizadores de la divisin nuclear e incluso en otras actan como fijadores al hospedador.
Clasificacin La clasificacin de los protozoarios se basa de acuerdo a los rganos de locomocin que poseen al tipo o nmero de ncloes, plano de divisin celular (transeversal o longitudinal), y por poseer o no la capacidad de formar esporas durante alguna etapa de su ciclo biolgico. El phylum Protozoa se subdivide en dos subphylum Subphylum Plasmodroma: incuye protozoarios que poseen pseudpodos y/o flageos para locomocin u obtencin de alimento o pueden carecer de ambos. Ncleo de un solo tipo que puede variar en nmero. Con reproduccin asexual y/o sexual. Este subphylum posee cuatro clases: 1. Clase Mastigosphora. Los protozoarios parsito de este grupo poseen de uno a varios flegelos visibles, excepto en las formas que se adhieren a la superficie del hospedero (Costia ooidinium y Euglenososma). LA reproduccin asexual es por fisin binaria longitudinal. 2. Clase Sarcodina. Poseen pseudpodos, son generalmente parsitos del tracto intstinal (en peces solo se ha encontrado a Schizamoeba salmonis). Su ciclo biolgico consiste en trofozoitos y quistes. Estos ltimos son excretados con las heces fecales y son la forma infectiva.
3. Clase Sporozoa. No poseen cilios, flagelos o pseudpodos (algunos gneros desarrollan formas amoeboides). Forman esporas al final de su ciclo biolgico; la espora consiste en uno o mas esporozoitos. Todos son parsitos y en su reproduccin involucran periodos asexuales y sexuales. 4. Clase Ciliosphora. Los miembros de esta clase poseen esporas, cada espora tiene de 1 a 6 filamentos polares y de uno o ms Desarrollo experimental Objetivos Adquirir la capacidad de identificar protozoarios presentes en diferentes muestras como el agua encharcada. Conocer algunos grupos e protozoarios y helmintos a partir de las observaciones realizadas con el microscopio. Identificar los diferentes protozoarios y helmintos que pueden parasitar al humano y a los que se pueden encontrar en vida libre. Material Microscopio Esteroscopio Muestra de agua residual o estancada Portaobjetos y cubreobjetos Aceite de imersin Preparaciones fijas y/o diapositias de: a) Fasciola heptica b) Taenia solium c) Ascaris lumbricoides d) Entamoeba histoltica e) Guardia lamblia f) Plasmodium sp.
Realizar preparaciones del agua residual colocando una gota de la misma en un portaobjetos y posteriormente colocar un cubreobjetos.
Observar a 10x y 40x. Esquematizar lo observado, resaltando caractersticas morfolgicas de los parsitos.
Parasitologa mdica o clnica: Estudia los parsitos del ser humano. Zooparasitologa: Estudia los parsitos de los animales. Fitoparasitologa: Estudia los parsitos de las plantas.
Todo organismo vivo depende del ambiente en el cual vive, obteniendo de ste sus nutrientes, que en unos casos son inorgnicos (fotoauttrofos), en otros orgnicos (hetertrofos). La dependencia a un ambiente especfico determina la asociacin entre organismos vivos, supliendose as las necesidades metablicas, de una forma unilateral o bilateral. Las asociaciones entre organismos vivos se han divididos en varios tipos. La simbiosis ha pasado, de un tipo de asociacin biolgica a ser considerada como el trmino que abarca todas las asociaciones biolgicas. Tipos de simbiosis El comensalismo es una forma de interaccin biolgica en la que uno de los intervinientes obtiene un beneficio, mientras que el otro no se ve ni perjudicado ni beneficiado. El parasitismo es un tipo de simbiosis y tiene una estrecha relacin en la cual uno de los participantes, (el parsito) depende del otro (el hospedero u hospedador) y obtiene algn beneficio; lo cual no necesariamente implica dao para el hospedero. El mutualismo es una interaccin biolgica, entre individuos de diferentes especies, en donde ambos se benefician y mejoran su aptitud biolgica. El mutualismo se diferencia de otras interacciones en las que una especie se beneficia a costas de otra. Un parsito es todo ser viviente, animal o vegetal, unicelular o pluricelular, que debe sacar necesariamente su alimentacin de la sustancia de otro organismo vivo (llamado husped) Depredador muy especializado cuya accin expoliadora no causa la muerte inmediata de la especie de que toma el alimento, pero puede causrsela a largo plazo. Si acta en el exterior del patrn, se lo denomina ectoparsito; si lo hace en el interior, se le llama endoparsito.
Desarrollo experimental Objetivos Adquirir la capacidad para identificar parsitos as como la diversas formas en las que se presentan. Conocer algunos mecanismos de transmisin y propagacin de un parsito. Conocer los ciclos biolgicos de algunos parsitos. Material Microscopio Estuche de diseccin Solucin salina isotnica Colorante de giemsa Lugol Artrpodos vivos (pulgas, chinches, piojos, moscas, cucarachas, garrapatas, hormigas, termitas, etc.).
Tomar los insectos grandes por la cabeza con pinzas, colocarlos en una base y abrirlos con ayuda de bistur.
Tomar muestra o agregar una gota de solucin salina isotnica. Colocar cubreobjetos y observar a 10x y 40x.
Adicionar una gota de solucin salina isotnica en un cubreobjetos y colocar el contenido intestinal. Colocar cubreobjetos y observar a 10x y 40x.
Insectos pequeos: Colocar el insecto entre dos portaobjetos y presionar para obtener contenido intestinal.
Tcnica Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tincin con la sangre hacia arriba. Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glbulos sanguneos. El colorante deber cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deber agregarse una cantidad adicional si ste se comienza a evaporar. Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para evitar la coloracin dbil. Esperar la formacin de brillo metlico. Puede usarse de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos. Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensin presente un aspecto rosado al examinarlo a simple vista. Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodn humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante. Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersin. Tincin de Giemsa Es la segunda coloracin en uso, luego de la tincin de Wright, y en importancia de las mezclas de Romanowsky. Es quizs la mejor modificacin de este tipo de coloraciones para descubrir parsitos en la sangre, como en el caso de malaria (Plasmodium spp.) y tripanosomiasis (Trypanosoma cruzi). El colorante de Giemsa tambin da excelentes resultados para la tincin rutinaria de frotes sanguneos. Cuando se va a teir con este colorante, debe fijarse primero la muestra con metanol absoluto por un tiempo mnimo de tres minutos (cuando la preparacin no incluye metanol). El colorante en solucin nunca se utiliza de manera directa, por lo que se debe diluir con la solucin amortiguadora en una proporcin de 1:10 1:20 y el tiempo de coloracin podr ser de 10 20 minutos, respectivamente.
Tcnica Fijar el frotis con alcohol metlico de 3-4 minutos. En caso de que la preparacin del colorante ya posea metanol, este paso queda obviado. Sumergirlo verticalmente en una solucin de Giemsa preparada extemporalmente a partir de 1 volumen de la solucin colorante ms 9 volmenes de solucin tampn (pBs, pH 6.8) o bien en agua desionizada. Esperar durante 10-20 minutos. Lavar el frotis con abundante agua, directamente del chorro. Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodn humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante. Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersin.
A los animales solicitados se les sacrifica en una forma rpida y lo menos dolorosa posible.
NOM-062-ZOO-1999: Especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y uso de los animales de laboratorio. Numeral 8: Cualquier procedimiento que cause mayor dolor o molestia en los animales, que la producida por inyeccin o marcaje en orejas, requerir el uso de tranquilizantes, analgsicos o anestsicos. Numeral 9: Eutanasia. La eleccin del mtodo de eutanasia depende de la especie del animal, su cantidad y la naturaleza del estudio. El animal se coloca en un receptculo cerrado que contenga un algodn o gasa empapada en el anestsico. Los vapores se inhalan hasta que cesa la respiracin y ocurre la muerte. Manipulacin del vector Mantener vivo e integro al vector hasta la recoleccin del parsito El parsito debe ser recin extrado Debe ser representativo a la enfermedad que produce Parsitos en animales Parsitos en rata
Hymenolepis diminuta
Hymenolepis diminuta(huevo)
Acanthocephala rhadinorhynchus
Trypanosoma sp
Filaria sp
Echinostoma sp
Desarrollo experimental Objetivos Aprender a colectar material parasitario de animales de experimentacin y domsticos. Conocer y utilizar las diferentes tcnicas de tincin, utilizadas en parasitologa. Material Microscopio Papel absorbente Estuche de diseccin Animales como; sapos, ratones, ratas, pollo, palomas, tortuga, etc. Vsceras de animales de rastro
Reactivos Solucin salina isotnica 250 mL Formaldehido 100 mL Alcohol etlico al 95% 100 mL Ac. Actico glacial 100 mL Agua destilada 100 mL Azul de cresilo en solucin salina 50 L Azul de metileno en solucin salina 50 mL Colorante de Giemsa 50 mL Colorante de Wright 50 mL Amortiguador de fosfatos pH 6.8 (Fosfato de sodio monocido, fosfato de sodio dicido) 100 mL Glicerina 10 mL Solucin de AFA 100 mL Gelatina 10 g Etanol al 50% 100 mL
Etanol al 70% 100 mL Xilol 100 mL Blsamo de Canad 50 mL Hilo de camo 1 m Lactofenol 50 mL Una caja de portaobjetos y una de cibreobjetos Azul de cresilo al 75% en solucin salina 50 mL Ringer de mamferos 200 mL Ringer de anfibios 200 mL
Sacrificar a los animales solicitados en una forma rpida y lo menos dolorosa. Se les toma sangre y:
Colocar sobre un portaobjetos limpio una gota de sangre del animal estudiado y extender, formando un cuadro de 1.5 x 1.5 cm, dejar secar.
Depositar una gota de sangre del animal estudiado en un extremos del portaobjetos, con el borde de otro reallizar la extensin d ela sangre.
Mover rpidamente el segundo portaobjetos en un ngulo de 30, evitando lisar los eritrocitos.
Lisar los eritrocitos durante 810 minutos en agua destilada. Dejar secar y teir por mtodo de Giemsa. Observar a 10x, 40x y 100x.
Dejar secar, y teir con el mtodo de Wright. Observar a 10x, 40x y 100x.
Una vez abierto el animal buscar en la superficie de los rganos internos y las membranas serosas la presencia de quistes.
Realizar una impronta con una porcin pequea y delgada de algunos de los rganos del animal.
Extraer rgano por rgano, colocandolos en placas con solucin salina, de manera que cubra el rgano.
Abrir los rganos huecos con tijera y desmenuzar los esponjosos en busca de helmintios. observar el contenido del intestino en microscopio buscando protozoarios y helmintos.
Hemoparsitos
Un gran nmero de protozoarios con localizacin hemtica parasitan a los animales domsticos causando grandes prdidas econmicas ya sea por muerte de los mismos o por deterioro del organismo con la consecuente disminucin de la cantidad y calidad de sus productos y subproductos. A nivel del sistema hemtico existen protozoarios conocidos como hematozoarios por su localizacin hemtica ( Babesias, Tripanosomas y Anaplasmas ) y larvas de nematodos ( filarias ) con alta capacidad patgena. Coloracin para protozoarios hemticos La coloracin para protozoarios hemticos (hematozoarios)tiene como finalidad el poder reconocer los diferentes parsitos y facilitar un diagnstico mas exacto , luego de relizar el correspondiente examen clnico. Debe tenerse en cuenta que la mayor ayuda para un clnico es la utilizacin del laboratorio para lograr diagnsticos seguros que permita la instauracin o aplicacin de tratamientos eficientes y sistemas de profilaxis adecuados. Las coloraciones corrientemente utilizadas corresponden a las de Wright y Giemsa. Coloracin de Wright. El colorante de Wright es el mas usado en nuestro medio para el diagnstico de Hematozoarios. El colorante est compuesto de: Azul de metileno ( que tie los componentes cidos como el ncleo y el RNA citoplasmtico) y la eosina (que tie de rojo los componentes bsicos como la hemoglobina) Preparacin del colorante Wright. Colorante Wright Metanol 0.3 g 100 cc
Colocar en un mortero el colorante y adicionar peridicaamente el alcohol mientras se va macerando durante unos 15 minutos . Finalmente se debe filtrar y almacenar en frasco oscuro y tapar. Este colorante se encuentra preparado a nivel comercial. Se recomienda filtrar siempre la cantidad que se desee utilizar. Tcnica. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Secar el frotis sanguneo previamente preparado y luego fijarlo en alcohol Colocar la lmina sobre un soporte con el frotis hacia arriba Cubrir totalmente la lmina con el colorante durante tres minutos y un mximo de cuatro Dejar el colorante durante 5 7 minutos Lavar con agua destilada Dejar secar a medio ambiente Mirar al microscopio con objetivo de 100X y aceite de inmersin
0.75 g 35.0 cc
Mezclar ambas sustancias en un envase de vidrio que contenga perlas de vidrio. Dejar en maduracin encubando a 60 C durante 12 a18 horas y agitar peridicamente cada hora Agregar alcohol metlico puro en cantidad de 65 cc despus de enfriada la mezcla anterior Tapar bien el colorante para evitar evaporacin y contaminacin con polvo ambiental
Tcnica 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Dejar secar el frotis sanguneo a medio ambiente Fijar el frotis en alcohol metlico absoluto durante dos a tres minutos Secar a medio ambiente el frotis Sumergir la lmina en el colorante de Giensa durante 20 a 30 minutos Lavar con agua destilada y colocar la lmina verticalmente Dejar secar al aire Mirar al microscopio con objetivo de 100X y aceite de inmersin
Diagnostico de filariasis El diagnostico de la filariasis se basa en el hallazgo de sus primeras larvas o microfilarias. La muestra a examinar debe ser sangre por considerarse la va evolutiva que buscan las microfilarias para alcanzar a sus vectores. Las tcnicas comnmente utilizadas para el diagnostico directo de microfiliarias utilizan sangre con anticoagulante en proporcin de y gota de cido etil-diamino- tetra-actico (EDTA) por cada 1-2 ml de sangre, corresponden a: Preparaciones frescas, Woo del tubo capilar y Knott modificado. Dentro de la gama de Hemoparsitos y sus agentes vectores descritos en el continente tenemos a especies exoglobulares pertenecientes al Gnero Trypanosoma (Trypanosoma gambiense, producen la enfermedad del sueo. Trypanosoma rhodesiense, producen la enfermedad del sueo. Trypanosoma cruzi, produce la enfermedad de Chagas. Trypanosoma rangeli, no patgeno en humanos, pero produce alteraciones en los canes y equinos. Las especies de Plasmodium que afectan al hombre son: Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum, Plasmodium malariae, Plasmodium ovale. Los gneros de filarias que afectan al hombre son: con Vaina: Wuchereria bancrofti, Brugia malayi, Loa loa. Sin vaina: Onchocerca vlvulus, Dipetalonema perstans, Mansonella ozzardi Gnero Trypanosoma: Trypanosoma tiene un complejo ciclo de vida, inclusive con diferentes formas morfolgicas especialmente en las especies que transmiten va invertebrados. Tendrn una variedad de diferentes formas en el invertebrado husped, y en los huspedes vertebrados las clulas toman una caracterstica forma llamada tripomastigota, donde el flagelo corre de atrs hacia adelante de la clula y se conecta por una membrana ondulante plateada.
Epimastigota: alargado y con el cinetoplasto localizado anteriormente al ncleo, es la forma reproductiva en el tracto digestivo de los invertebrados y en medios de cultivo.
Tripomastigote: tambin alargado, pero con el cinetoplasto localizado posteriormente al ncleo. Se encuentra en la sangre de los mamferos y es la forma infectante de ellos. Esta forma no se divide. Patogenia Produce la llamada enfermedad de Chagas en Amrica. La diseminacin del T. cruzi se da por el contacto con las heces de insectos del tipo hempteros (chipo) entrando los parsitos por la herida causada por su picadura; llegan al del torrente sanguneo (forma tripomastigota metaciclico) viajando hacia los diferentes rganos y tejidos, replicndose principalmente en tejidos musculares y nervioso (forma amastigota). Pueden producir cardiopata chagasica daos irreparables en los plexos mientricos del tracto gastrointestinal, haciendo que la persona presente megaesfago, megacolon y que eventualmente muera, adems de todo esto la persona puede no presentar sntomas lo que beneficia al parsito ya que a travs del tiempo sea ms patgeno.
Desarrollo experimental Objetivos El alumno aprender a realizar tcnicas hematolgicas para determinar los parsitos presentes en sangre. Que el alumno tenga el conocimiento de las tcnicas que se utilizan en la actualidad para determinar parsitos presentes en sangre. Familiarizar al alumno con el manejo de muestras sanguneas para su posterior anlisis.
Material Microscopio Aceite de imersin Frotis o preparaciones realizadas en la prctica anterior Canastillas para tincin o en su defecto cajas petri Una caja de portaobjetos Una caja de cubreobjetos Laminila de lectura de la tcnica de ELISA Lector de ELISA
Reactivos Metanol 100 mL Colorante de Giemsa 50 mL Colorante de Wright 50 mL Amortiguador de fosfatos para la tincin de Giemsa y para la tincin de Wright, 100 mL para cada uno
Colocar el portaobjetos en la canastila para tinciny sumerjirlas totalmente en el recipiente que contiene colorante de Wright.
Tincin de Giemsa
Colocar los portaobjetos en canastilla spara tincin y sumerjirlas en un recipiente con metanol durante 20 minutos.
Sacar y dejar secar la preparacin y lavar con solucin amortiguadora (unas gotas del colorante en agua destilada) por 5 minutos
Realizar el mismo proceso de tincin para las improntas. Marcar los portaobjetos antes de realizarlas tinciones con lpiz punta de diamante.
Coproparasitoscopico
Un examen coproparasitoscopico es el estudio de material fecal para la bsqueda e identificacin de formas parasitarias. Puede ser cualitativa o cuantitativa. En este estudio, el material fecal ms utilizado es el recin obtenido por expulsin natural del paciente, ya sean bien formadas o ecuaciones diminutas en consistencia con moco o sangre. Este mtodo es de gran utilidad para la deteccin en fresco de trofozoitos de Entamoeba histolitica, Giardia lamblia y Balantidium coli. En la suspensin teida con lugol se puede identificar con facilidad quistes de protozoos. Este examen en fresco es sencillo, rpido y econmico, pues requiere poco material. Es excelente para la bsqueda de trofozoitos y protozoos. Es eficaz para la bsqueda e identificacin, de quistes, huevos y larvas. FROTIS FRESCO Es un mtodo rpido pero poco seguro. Tiene posibilidad de falsos negativos, por lo que es necesario repetir. Permite observar la motilidad de los microorganismos, Amibas y otros flagelados. Detecta quistes y huevos de helmintos. Desarrollo experimental Objetivos Realizar un examen macroscpico y microscpico de la materia fecal Determinar la presencia de parsitos en la materia fecal Material Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Tubos de ensayo de 13x100 para centrfuga Gasa Centrfuga clnica
Reactivos Muestra d emateria fecal, 100 g aproximadamente del tamao de una nuez, contenida en un frasco de boca grande. Sulfato de zinc al 33%, 500 mL con densidad de 1.180 +/- 0.02, 50 mL Lugol propio para las tcnicas de CPS, 50 mL.
Examen macroscpico Reportar las caractersticas que presenta la materia fecal por estudiar.
Examen microscpico
CPS directo. Con un abatelenguas tomar una pequea cantidad de materia fecal y colocar en un portaobjetos con dos gotas de lugol.
Agregar agua (hasta cubrir la muestra) al frasco con materia fecal y disolver moviendo con abatelenguas .
Verter sobre una gasa doblada colocada dentro de un embudo, agregar poco a poco agua destilada para macerar la muestra y recolectar el lquido en un tubo de ensayo.
Centrifugar a 2500 r.p.m. durante 3 minutos, desechar el sobrenadante y agregar al sediemento aga para resuspender.
Eliminar el sobrenadante de la ltima centrifugacin y agregar al sedimento lentamente por as paredes solucin de sulfato de zinc al 33% hast 3/4 del tubo y centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos
Sin eliminar el sobrenadante y sin agitar agregar cuidadossamente ms solucin se sulfato de zinc hasta formar un menisco cncavo en la boca del tubo.
Transferir el cubreobjetos a un portaobjetos que contenga 2 gotas de lugol y observar a 10x y 40x en microscopio.
La presencia de sustancias quitinosas en la pared de la mayor parte de las especies fngicas y su capacidad de depositar glicgeno los asemejan a las clulas animales. Los hongos son seres vivos eucariticos, con un solo ncleo, como las levaduras, o multinucleados, como se observa entre los hongos filamentosos. Su citoplasma contiene mitocondrias y retculo endoplasmtico rugoso. Son heterotrficos y se nutren de materia orgnica muerta (hongos saprfagos) o viva (hongos parsitos). Sus clulas poseen vida independiente y no se renen para formar tejidos verdaderos.
Los componentes principales de la pared celular son hexosas y hexoaminas. Algunos hongos tienen pared rica en quitina (N-acetil glicosamina), otros poseen complejos polisacridos y protenas, con predominancia de cistena. Hongos del gnero Cryptococcus, como el Cryptococcus neoformans presentan cpsula de naturaleza polisacardica, que envuelve la pared celular. Los protoplastos de hongos, pueden ser obtenidos por el tratamiento de sus cultivos, en condiciones hipertnicas con enzimas de origen bacteriana o extradas del caracol Helix pomatia. Los hongos son ubicuos, encontrndose en el suelo, en el agua, en los vegetales, en animales, en el hombre y en detritos en general. El viento acta como importante vehculo de dispersin de sus propgulos y fragmentos de hifas. Estructura de los Hongos Los hongos pueden desarrollarse en medios de cultivo especiales formando colonias de dos tipos:
Levaduriformes Filamentosas Las colonias levaduriformes son pastosas o cremosas, formadas por microorganismos unicelulares que cumplen las funciones vegetativas y reproductivas. Las colonias filamentosas pueden ser algodonosas, aterciopeladas o pulverulentas; son constitudas
fundamentalmente por elementos multicelulares en forma de tubo: las hifas. Las hifas pueden ser contnuas o cenocticas y tabicadas o septadas. Poseen hifas septadas los hongos de las divisiones Ascomycota, Basidiomycota y Deuteromycota y divisiones Mastigomycota e Zygomycota. poseen hifas cenocticas los de las
Al conjunto de hifas se da el nombre de micelio. El micelio que se desarrolla en el interior del sustrato, funcionando tambin como elemento de sustentacin y de absorcin de nutrientes es llamado micelio vegetativo. El micelio que se protege en la superficie y crece por encima del medio de cultivo es el micelio areo. Cuando el micelio areo se diferencia para sustentar los cuerpos de fructificacin o propgulos, constituye el micelio reproductivo. Los propgulos u rganos de diseminacin de los hongos, son clasificados, segn su origen, en externos e internos, sexuados y asexuados. Ms all que el micelio vegetativo no tenga especficamente funciones de reproduccin, algunos fragmentos de hifa pueden desprenderse del micelio vegetativo y cumplir funciones de propagacin, una vez que las clulas fngicas son autnomas. Estos elementos son denominados taloconidios y comprenden los:
Blastoconidios Artroconidios Clamidoconidios Los blastoconidios tambin denominados gmulas, son comunes en las levaduras y se derivan por brote de la clula madre. A veces, los blastoconidios permanecen enlazados a la clula madre, formando cadenas, las pseudos hifas, cuyo conjunto es el pseudomicelio.
Los artroconidios estn formados por fragmentacin de las hifas en segmentos rectangulares. Se encuentran en los hongos del gnero Geotrichum, en Coccidioides immitis y en Dermatfitos.
Los clamidoconidios tienen funcin de resistencia, semejantes a la de las esporas bacterianas. Son clulas, generalmente redondeadas, de volumen aumentado, con paredes dobles y espesas, en las cuales se concentra el citoplasma. Su localizacin en el micelio, puede ser apical o intercalar. Se forman en condiciones ambientales adversas, como escasez de nutrientes, agua y temperaturas no favorables al desarrollo fngico.
Entre otras estructuras de resistencia deben ser mencionados los esclerotos, que son corpsculos duros y parenquimatosos, formados por el conjunto de hifas y que permanecen en estado de hibernacin hasta la aparicin de condiciones adecuadas para su germinacin. Son encontrados en especies de hongos de las divisiones Ascomycota, Basidiomycota y Deuteromycota
Objetivos Reconocer las principales estructuras de hongos filamentosos y levaduriformes Adquirir la capacidad de diferenciar los tipos de esporas sexuales y asexuales. Adquirir experiencia para ser capaz de diferenciar a los hongos de otros tipos de microorganismos. Material Microscopio Preparaciones semipermanentes de hongos: 1. Calse Deuteromycota: a) Penicilium sp. b) Aspergillus sp. c) Geotrichum sp. d) Curvalaria sp. e) Alternaria sp.
f) Fusarium sp. 2. Phylum Zygomicota a) Mucor sp. b) Rhizopus sp. 3. Levaduras a) Blastoesporas b) Esporas sexuales Metodologia
Reactivos Agar Littman Agar Sabouraud KOH al 10% Azul de algodn de lactofenol Lugol Mezcla de antibiticos; Penicilina-Estreptomicina 1:1 Hipoclorito de sodio comercial
Pesar 0.5g de tierra y agregar a un tubo que contenga 4.5 mL de solucin salina estril con una dilucin de 1:10.
Verter agar sabouraud en dos de las cajas con diferente dilucin. Repetir rl procedimiento con el agar Littman.
Tomal 1 mL de la dilucin 105 y verter en dos cajas Petri esteriles diferentes. Repetir el procedimiento con la dilucin 10-6.
Preparar los medios Sabouraud y Littman, cuando esten fundidos y a temperatura de 25-30, aadir dos gotas de la mezcla de antibiticos.
Realizar lectura y reportar las caractersticas maroscpicas de los hongos desarrollados en las cajas Petri.
Aislamiento de hongos de frutas y verduras Cortar una pequea porcin del tejido de la fruta o verdura donde se encuentra el hongo con asa, pasar por hipoclorito. Si el hongo no tiene aspecto pastoso, este paso no es necesario.
Sembrar en una caja Petri con agar sabouraud, reptir para la caja con agar Lttman. La siembra se realiza por puncin superficial del hongo en el centro de la caja.
En caso de ser varias muestras, dividir las cajas y sembrar en el centro de cada divisin.
Realizar la lectura y reportar las caractersticas macroscpicas de lo que se desarrollo en la caja Petri.
De los especmenes trabajados en la prctica, reportar: a) Lugar donde se obtuvo Fuente de aislamiento Fecha de aislamiento Caractersticas macroscpica de las colonias como: Pigmentacin de la colonia, del frente y reverso, centro y periferia, diferentes zonas areas y en distintos periodos de incubacin. b) Consistencia c) Tipo de crecimiento: radial, lento, rpido, etc.