M I C R O B I O LO G A A R T C U LO C I E N T F I CO

D E L S U E LO

Revista Corpoica - Ciencia y Tecnologa Agropecuaria (2012) 13(2), 189-195

Effect of plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR) associated to Pennisetum clandestinum in the altiplano cundiboyacense

Efecto de bacterias promotoras de crecimiento vegetal (PGPR) asociadas a Pennisetum clandestinum en el altiplano cundiboyacense
Paola Jimena Criollo1, Melissa Obando1, Leonardo Snchez M.1, Ruth Bonilla1

ABSTRACT

RESUMEN

Pennisetum clandestinum (kikuyo) is a common pasture in the altiplano cundiboyacense silvopastoral systems, which possesses high nutritional value. Therefore, studies to improve the production process in both economic and environmental terms are very important. The role of inoculation with plant growthpromoting bacteria was evaluated on the growth of kikuyu grass. The 4K and 5B strains were identified, through amplification and analysis of their 16S rDNA, as members of the Stenotrophomonas and Pseudomonas genera, respectively. They were characterized in vitro for their efficiency of biological nitrogen fixation, production of indole compounds, and phosphate solubilization. Four treatments were evaluated under greenhouse conditions. Furthermore, the biomass was evaluated at different stages of the plant (70, 100 and 130 days). The 4K strain demonstrated a root dry weight that increased by 50% at 70 and 100 days and the 5B strain showed a statistically significant behavior for plant and root dry weight with an increase of 50% at 130 days. The most important effect was presented after 100 d where treatments, TQ, TB1 and TB2, exceeded more 80% to absolute control in the fresh weight of the air. These results showed that inoculation with PGPR represents a biotechnological alternative to promote growth of P. clandestinum, as we observed relevant effects on biomass production 100 days after planting. Key words: silvopastoral system, grasses, biological nitrogen fixation, indolic compounds, phosphate solubilization

Pennisetum clandestinum (kikuyo) es una pastura comn en los sistemas silvopastoriles del altiplano cundiboyacense, con altas propiedades nutritivas. Por tanto estudios que permitan mejorar el proceso de produccin en trminos econmicos y ambientales reviste gran importancia. En este estudio se evalu el papel de la inoculacin con bacterias promotoras de crecimiento vegetal (PGPR) sobre el crecimiento de pasto kikuyo. Las cepas 4K y 5B fueron identificadas mediante amplificacin y anlisis del 16S rADN, como Stenotrophomona ssp. y Pseudomona ssp., respectivamente, caracterizadas por su eficiencia in vitro en la fijacin biolgica de nitrgeno, produccin de compuestos indlicos y solubilizacin de fosfatos. Se evaluaron las cepas en condiciones de invernadero en tres tiempos de crecimiento de la planta (70, 100 y 130 das). Se evidenci que la cepa 4K increment el peso seco radicular de la planta en 50% a los 70 y 100 das, mientras que la cepa 5B mostr un comportamiento similar en el peso seco areo y radicular con aumentos de hasta el 50% a los 130 d. El efecto ms importante se present despus de 100 d donde los tratamientos TQ, TB1 y TB2, superaron en ms del 80% al testigo absoluto en el peso fresco de la parte area. Estos resultados demostraron que la inoculacin de PGPR representa una alternativa biotecnolgica para promover el crecimiento de P. clandestinum, con efectos relevantes en produccin de biomasa 100 das despus de la siembra (dds). Palabras clave: sistemas silvopastoriles, gramneas, fijacin biolgica de nitrgeno, compuestos indlicos, solubilizacin de fosfato
I N T R O D U C C I N

En Colombia, Pennisetum clandestinum Hochst. ex Chiov

Fecha de recepcin: 02-03-2012 Fecha de aceptacin: 22-10-2012
1

Centro de Investigacin Tibaitat, Corporacin de Investigacin Agropecuaria (Corpoica). Mosquera (Colombia). pcriollo@corpoica.org.co

(Kikuyo) es una pastura comn en muchos ambientes y se asocia principalmente a los sistemas silvopastoriles en el altiplano cundiboyasense con diferentes especies arbreas. Debido a su rpida tasa de crecimiento se utiliza para la alimentacin de ganado, adems es un pasto apetecible y altamente digerible, con alto valor proteico, bajo conte-

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nido de fibra y altas propiedades nutritivas (Marais et al., 1992), tambin se emplea en la recuperacin de suelos degradados en ambientes fros, para el control de la erosin, aplicados como cobertura del suelo. Numerosos reportes indican que P. clandestinum es tolerante al estrs abitico como la salinidad, la sequa, el anegamiento y la acidez del suelo (Sidari et al., 2004). El suelo es un ecosistema con una gran variedad y cantidad de microorganismos benficos. La fraccin del suelo donde influye la proliferacin de estos microorganismos por la presencia del sistema de races de las plantas se le conoce como rizsfera (Cassn et al., 2009). Las diferentes poblaciones bacterianas presentes en la rizsfera, se llaman rizobacterias o bacterias promotoras de crecimiento vegetal - PGPR (por su siglas en ingls Plant growth-promoting rhizobacteria) y poseen la capacidad de colonizar el sistema radicular de las plantas o su entorno ms cercano; clasificndose en tres grupos principales, las que pueden colonizar el tejido de la planta formando ndulos (simbiticas), las que se hospedan en estructuras internas de la planta (endofticas) y las que se encuentran cerca del sistema radicular de la planta (bacterias de vida libre) (Kloepper et al., 1989). Mltiples estudios han publicado que las PGPR se asocian con cultivos importantes tales como Oryiza sativa, Triticum spp., Sorghum spp, Sacharum officinarum, Zea mays (Okon, 2005; James, 2000; Andrews et al., 2003; Berg, 2009) y pasturas (Lugtenberg y Kamilova, 2009). Dentro de las PGPR ms referenciadas son Azospirillum sp., Bacillus sp., Rhizobium sp., Burkholderia sp., Enterobacter sp., Azotobacter sp., Erwinia sp., Herbaspirillum sp., Klebsiella sp., Pseudomonas sp. y Xanthomonas sp. (Cassn et al., 2009; Bashan et al., 2012). Inoculaciones de PGPR en cultivos de inters agronmico han demostrado el aumento del nitrgeno, fsforo y los niveles de algunos minerales menores que se hacen disponibles para la planta (Bashan y Holgun, 1997; Egamberdieva et al., 2004). Una amplia variedad se ha encontrado que estimula mediante diversos mecanismos el desarrollo de numerosas gramneas. El objetivo de esta investigacin fue determinar de forma preliminar el efecto de la inoculacin de Stenotrophomonas y Pseudomonas (PGPR) en la promocin del crecimiento de P. clandestinum en tres etapas de desarrollo de la planta bajo condiciones de invernadero.
M AT E R I A L E S Y M T O D O S

Trabajo del Laboratorio de Microbiologa del CBB (Centro de Biotecnologa y Bioindustria) - Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria (Corpoica). Para el presente trabajo se utilizaron las cepas 4K y 5B. Las cepas fueron crecidas en medio de cultivo Luria Bertani (LB) (Bertani, 1952; Bertani, 2004) durante 24 h y se agitaron a 120 rpm a 30C para procedimientos posteriores. Los controles de calidad presentaron 100% de pureza y la concentracin celular de 108 ufc/mL. Identificacin molecular por secuenciacin parcial de 16S rDNA El ADN bacteriano fue extrado mediante el uso de DNeasy Blood and Tissue Kit (Qiagen, Alemania) segn las instrucciones del fabricante. El ADN genmico extrado se diluy en agua estril Milli-Q antes de llevar a cabo el anlisis de PCR bajo las siguientes condiciones: 25 mL de mezcla de PCR que contena 1X Taq DNA polimerasa tampn (Invitrogen, USA), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM de trifosfato de desoxinuclesido, 25 pmol de primer (forward - reverse), 1 U de ADN polimerasa (Invitrogen, USA), y 1L del extracto diluido de ADN como molde. Casi genes completos del 16S rADN fueron amplificados con cebador forward 27F (5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3) y el cebador reward 1492R (5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3). El ADN se amplific con un termociclador iCycler (BioRad, USA) con el siguiente programa: 4 min de precalentamiento a 95C, 35 ciclos de 30 s de desnaturalizacin a 95C, 30 s de hibridacin del cebador a 57C, 2 min de elongacin a 72C, y 10 min de paso de extensin a 72C. Cada mezcla de amplificacin (5 L) se analiz por gel de agarosa (1,5% w/v) de tampn de electroforesis TAE (0,04 M Trisacetato, 0,001 M EDTA) que contena 20 g mL-1 (w/v) de bromuro de etidio. El ADN amplificado fue purificado utilizando el PureLink kit de gel extraccin rpida (Invitrogen, USA) segn las instrucciones del fabricante. La secuenciacin automatizada de los productos de PCR purificado se realiz utilizando el kit de secuenciacin BigDye Terminator y el secuenciador de ADN ABI 310 (Applied Biosystems, USA) de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Las secuencias parciales obtenidas fueron comparadas con las secuencias de nucletidos presentes en el GenBank utilizando el programa BLAST (Altschul et al. 1990) y las quimeras fueron detectadas utilizando el programa PINTAIL (Ashelford et al., 2005). Caracterizacin de las capacidades bacterianas de promocin de crecimiento vegetal in vitro Fijacin biolgica de nitrgeno. La actividad nitrogenasa se realiz por medio del ensayo de reduccin de acetileno en tubos de ensayo de 10 mL, conteniendo 5 mL de medio Ashby semislido (libre de nitrgeno). Despus se

Microorganismos y condiciones de crecimiento Los microorganismos autctonos de sistemas silvopastoriles previamente aislados se preservaron en el Banco de

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agregaron 50 L de suspensin bacteriana y se incubaron a 30C por 48 h. Posteriormente, se sustituy el 10% de la atmsfera por acetileno durante 1 h. La fijacin biolgica de nitrgeno fue cuantificada mediante cromatografa de gases (Perkin Elmer, USA) con detector de ionizacin de llama y una columna Poropak N 200/300 mesh de 6 pies y 3 mm de dimetro (Eckert et al., 2001). Produccin de hormonas indlicas. A partir de la fermentacin lquida en medio K - Lactato suplementado con triptofano (100 ug mL-1), se tomaron 4 mL de cultivo, se centrifugaron a 7378 G 10 min, se tom 1mL del sobrenadante y se llev a reaccin con 1mL del reactivo de Salkowsky modificado. La reaccin se incub por 30 min en completa oscuridad por triplicado. Una vez pasado el tiempo de reaccin, se determin la absorbancia de cada tubo en un espectrofotmetro a 540 nm. Con los datos de absorbancia se obtuvo el promedio de las rplicas y se reemplazaron los datos en la ecuacin de la recta de la curva patrn para determinar la produccin de ndoles totales (Carreo et al., 2000). Solubilizacin de fosfato. El mtodo cuantitativo de fosfomolibdato fue empleado para determinar el fosfato disponible. Para esto, cada cepa fue crecida en medio SRS (Sundara y Sinha, 1963) sin indicador e incubada por 120 h /150 rpm. Posteriormente, se tom 1 mL de alcuota de cada erlenmeyer, incluyendo los controles y se centrifugaron a 7378 G 10 min y finalmente 500 L del sobrenadante se emplearon para el anlisis (Fiske y Subbarow, 1925). Ensayo en invernadero El suelo y el material vegetal se obtuvieron de Corpoica, Centro de Investigacin Tibaitat, Mosquera (Cundinamarca). Fueron utilizadas bolsas de plstico con capacidad de 3 kg con 2,5 kg de suelo. Los estolones de P. clandestinum fueron seleccionados y desinfectados con etanol al 70% en 5 min y luego con solucin de hipoclorito de sodio 3% a 5 min. Para este estudio, el suelo fue fertilizado de acuerdo al anlisis de suelo, con nitrgeno (100 kg ha-1 en forma de urea) en los tratamientos que lo requeran. El anlisis del suelo utilizado se describe a continuacin (Tabla 1). Se implementaron cuatro tratamientos para evaluar la respuesta de P. clandestinum a la inoculacin de dos cepas
Tabla 1. Anlisis qumico del suelo del altiplano cundiboyanse
P (mg kg-1) S Ca Mg K Na (cmol(+) kg-1) Fe

con capacidad de promocin de crecimiento vegetal. Los tratamientos fueron los siguientes: TA: testigo absoluto, TQ: control qumico, TB1: inoculacin con la cepa 4K + 50% de la dosis de nitrgeno (en forma de urea) y TB2: inoculacin con la cepa 5B + 50% de la dosis de nitrgeno. Los muestreos se realizaron a los 70, 100 y 130 das despus de la siembra (dds) y las variables evaluadas fueron longitud area, peso fresco y seco de la parte area y radicular. As mismo, se determin el contenido de nitrgeno y fsforo total en el tejido vegetal a los 130 dds mediante el mtodo Kjeldahl (Norma AOAC 988.05) y Bray II respectivamente (Bray y Kurtz, 1945). Diseo y anlisis estadstico Para el diseo, se establecieron cuatro tratamientos con 12 rplicas mediante bloques completos al azar. Los datos fueron analizados utilizando el anlisis de varianza ANOVA y Tukey HSD (P 0,05) empleando el software estadstico SPSS 17.0 para Windows.
R E S U LTA D O S Y D I S C U S I N

Identificacin molecular de las cepas 4K y 5B El anlisis comparativo de las secuencias obtenidas con las registradas en la base de datos del NCBI mostr que la cepa 4K se acerc a un porcentaje del 98% de identidad con la secuencia de Stenotrophomonas sp. bA22 (JF772548.1) y la cepa 5B present un porcentaje del 97% de identidad con la secuencia de Pseudomonas sp. KVS86 (HQ591435.1). Las Gamaproteobacterias estuvieron representadas en este estudio por el orden de las Xanthomonadales y Pseudomonadales con la cepa 4K (pertenecientes al gnero Stenotrophomonas) y 5B (pertenecientes al gnero Pseudomonas) identificadas mediante la amplificacin del 16S rDNA. Las especies del gnero Pseudomonas se han reportado ampliamente como PGPR de diversas plantas incluyendo gramneas (Doty et al., 2009; Okon, 2005; Andrews et al., 2003). Con respecto a Stenotrophomonas sp., algunas especies han sido identificadas como patgenas humanas. Sin embargo, sta especie ha sido aislada de plantas sanas y descrita como una bacteria promotora de crecimiento de varios cultivos de importancia agronmica (Idris et al., 2009).

Cu

Mn

Zn

Materia orgnica

pH

68,3

50,1

10,6

4,32

0,62

0,65

736

5,9

25,6

29,8

0,32

6,4

5,3

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Caracterizacin de las capacidades bacterianas de promocin de crecimiento vegetal in vitro Las dos cepas en estudio son capaces de producir ndoles, fijar nitrgeno y son eficientes en la solubilizacin de fosfato. La descripcin de las capacidades de las cepas 4K y 5B se muestran en la Tabla 2.
Tabla 2. Caracterizacin de las capacidades bacterianas de promocin de crecimiento vegetal in vitro de las cepas 4K y B5
Cepa Solubilizacin de fsforo (g (PO4) 3 mL-1) Produccin de ndoles (g mL-1) Fijacin de nitrgeno (nmol C2H2 mL h-1)

promocin de crecimiento in vitro, de las cuales, las cepas UYSO14, UYSO19 y UYSO21 presentaron capacidad para fijar nitrgeno y UYSO16, UYSO17, UYSO18 y UYSO21 para producir ndoles. De acuerdo a lo anterior, la eficiencia de estos gneros vara de acuerdo al ecotipo y a los factores edafoclimticos que rigen su habitat y de ah la importancia de obtener cepas nativas que garanticen su eficiencia en la promocin de crecimiento mediante diversos posibles mecanismos que acten all. Caracterizacin de la respuesta del kikuyo a la inoculacin con bacterias de promotoras de crecimiento vegetal en invernadero En la evaluacin realizada a los 70 dds, no se presentaron diferencias significativas en peso fresco de parte area (PFA) entre los tratamientos TQ y TB1, los mejores valores fueron obtenidos con respecto a TA y TB2. En el peso fresco radical (PFR), el TQ present diferencias significativas (P 0,05) con respecto a los dems tratamientos evaluados. En cuanto al peso seco en parte area (PSA) y radical (PSR), se presentaron diferencias significativas (P 0,05) de TQ, seguido de TB2, con respecto a los dems tratamientos evaluados. El tratamiento TB2 mostr un incremento porcentual de 21% en la longitud de la parte area (LA) presentando diferencias significativas (P 0,05) con respecto a los dems tratamientos. Los resultados de 100 y 130 dds presentaron diferencias significativas (P 0,05) en los tratamientos TB1 y TB2 en todas las variables agronmicas evaluadas respecto al control no inoculado (TA) (Tabla 3). El efecto promotor de crecimiento vegetal de estos tratamientos, se evidenci cuando los valores fueron iguales al tratamiento qumico en las variables agronmicas evaluadas. Despus de 100 dds, los tratamientos TQ, TB1 y TB2, presentaron valores similares en el peso fresco de la parte area, superando en ms del 80% al testigo absoluto. As mismo, TB1 present diferencias significativas (P 0,05) comparadas con los dems tratamientos analizados para las variables PFR y PSA. En las variables PSR y LA, la respuesta se vio favorecida cuando los tratamientos fueron inoculados con las cepas 4K (TB1) y 5B (TB2), aumentando los valores en ms del 50% y 25% respectivamente en comparacin con los tratamientos TQ y TA. Todos los tratamientos bacterianos mostraron un aumento en sus ganancias de biomasa seca en el muestreo de 100 d, pero 30 d despus, el control qumico elev sus valores frente a las ganancias de biomasa seca, mostrando que los tratamientos bacterianas tienen efectos significativos en el crecimiento de P. clandestinum despus de 100 d de inoculacin, igualando los valores del tratamiento qumico. Adems, todos los tratamientos superaron el tratamiento

4K 5B

68,10 0,22 b 96,01 0,03 a

0,72 0,009 b 1,15 0 a

184,47 3,29 a 183,42 6,15 a

Medias en la misma columna con la misma letra no presentan diferencias significativas, segn la prueba de Tukey HSD (P 0,05). Las variaciones corresponden a desviacin estndar.

La produccin de hormonas indlicas tipo AIA, y sus efectos beneficiosos sobre la promocin del crecimiento vegetal han sido ampliamente estudiados (Sevilla et al., 2001; Shokri y Emtiazi, 2010; Obando et al., 2010). Adems, la capacidad de solubilizacin de fosfato desempea un papel fundamental en la interaccin plantamicroorganismo, por la disponibilidad de nutrientes poco mviles, as como en el control biolgico sobre patgenos (Rodrguez y Fraga, 1999; Vassilev et al., 2006; Shokri y Emtiazi, 2010). Los resultados obtenidos con la inoculacin de la cepa 5B presentaron diferencias estadsticamente significativas (P 0,05) con respecto a la cepa 4K en cuanto a la capacidad de solubilizacin de fsforo y produccin de ndoles. Por otro lado, no se presentaron diferencias en la prueba de fijacin de nitrgeno. No obstante, las dos cepas son eficientes en sta capacidad de acuerdo a lo reportado por Chowdhury et al. (2011), quienes encontraron que Azospirillum sp. y Pseudomonas pseudoalkaligenes tienen capacidad de reducir acetileno en el orden de 18 y 11,2 nmol de C2H4, lo cual se evidencia en este estudio con las cepas 4K y 5B, las cuales son eficientemente superiores en relacin a previos resultados referenciados (Mehnaz y Lazarovits, 2006; Eckert et al., 2001; Carcao-Montiel et al., 2006; Crdenas et al., 2010). Diversos reportes evidencian la variabilidad de las capacidades de promocin de Stenotrophomonas sp. y Pseudomonas sp., como lo mencionan Taul et al. (2011), quienes obtuvieron nueve cepas de Stenotrophomonas sp. a partir de Saccharum officinarum, con producciones de hormonas indlicas entre 6,9 31,8 g mL-1 y slo una cepa (UYSO27) present fijacin de nitrgeno mediante actividad de reduccin de acetileno. Con respecto a Pseudomonas sp., obtuvieron 8 cepas con potencial de

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Tabla 3. Parmetros agronmicos evaluados por tratamiento en pasto kikuyo (Pennisetum clandestinum), en tres pocas diferentes de muestreo
TA Parte area Parte radicular TQ Parte area Parte radicular 4K Parte area Parte radicular 5B Parte area Parte radicular 70 d PF (g) 7,4 0,3 c 6,33 0,6 c 95,85 0,3 a 31,6 3,6 a 84,25 15 ab 21,7 0,4 b 71,13 10 b 19,65 0,7 b PS (g) 1,7 0,2 c 0,95 0,15 c 20,55 0,15 a 5,8 0,6 a 15,67 2,25 ab 2,1 0,2 b 17,9 0,9 b 2,35 0,05 b Long (cm) 19,17 2,02 c ND 27,6 1,1 b ND 28 2 b ND ND PF (g) 6,5 0,2 b 7,1 1,2 c 87,3 13,3 a 13,3 1,93 b 90,25 12,35 a 26,8 1,4 b 14,57 2,3 a 100 d PS (g) 2,35 0,15 d 1,27 0,15 c 24,67 2,96 c 2,67 0,32 b 17,15 0,95 b 3,93 0,49 a 32,45 1,55 a 4 0,6 a Long (cm) 13,83 1,99 c ND 26 1 b ND ND 32,5 2,5 a ND ND 35,25 1,75 a PF (g) 44,8 5 d 22,3 2,8 b 95,9 4,28 c 42,5 5,57 a 71,17 7,78 b 32,9 4,06 ab 115,45 9,95 a 27,77 3,45 b 130 d PS (g) 19,35 0,9 c 5,47 0,8 c 32,07 1 b 10,45 1 a 24 1,8 c 7,85 0,4 bc 42,15 3,4 a 8,8 1,4 ab Long (cm) 16,27 1,42 b 40,77 5,45 b 42,8 5,73 a 46,85 4,15 b 19,5 1,95 b 81,75 9,75 a 32,87 4,56 a 55,83 6,37 b

35,25 2,75 a 99,85 6,95 a

ND: No determinado. Desviacin estndar. Medias con letras diferentes en la misma columna presenta diferencias significativas, segn la prueba de Tukey HSD (P 0,05). PF: Peso fresco, PS: Peso seco, Long: Longitud area

no inoculado que muestra el efecto de modificar la acumulacin de nutrientes y las actividades propias de la planta, que son estimulados significativamente con los tratamientos inoculados y qumico, que incidieron en el crecimiento de P. clandestinum. En relacin al contenido de nitrgeno y fsforo total en el tejido vegetal no se presentaron diferencias estadsticamente significativas (P 0,05) a los 130 dds (Datos no mostrados). Las PGPR, incluyendo las especies de Pseudomonas sp. y Strenotrophomona sp. identificadas en este estudio, se han reportado ampliamente por su efecto benfico en diversas plantas incluyendo gramneas (Doty et al., 2009; Okon, 2005; Andrews et al, 2003; Garrido et al., 2010; Crdenas et al., 2010). Las variables ms influyentes en la evaluacin de acumulacin de nutrientes y fotoasimilados se refleja en los incrementos de biomasa seca en los tratamientos TB1 y TB2. Mehnaz y Lazarovits (2006), encontraron un aumento de 12% en plantas de maz inoculadas con A. lipoferum N7 con respecto a las plantas no inoculadas. Daz et al. (2009), estudiaron la promocin de crecimiento en plantas de Eucalyptus globulus, estimulada por bacterias rizosfricas de los gneros Bacillus sp. y Stenotrophomona maltophilia aisladas de E. globulus y E. nitens, las cuales produjeron un aumento significativo en el enraizamiento en un rango de 19,4% y 69,4% con respecto al control, adems de incrementar la formacin de estacas y el aumento de la biomasa. En cuanto al peso fresco, los resultados muestran que los tratamientos inoculados igualan los valores obtenidos en el control qumico y superan al control sin inocular, resultados que concuerdan con los obtenidos por Rajkumar et al. (2005) quienes estudiaron la promocin de crecimiento vegetal generado por Pseudomonas sp. y Bacillus sp. en plantas de mostaza y reportaron un incremento en la longitud de la planta y el peso fresco y seco en comparacin con las plantas no inoculadas, adems de brindarle un efecto protector contra la absorcin de Cromo.

Hassen y Labuschagne, (2010), revelaron que la inoculacin individual de bacterias con potencial biofertilizante, estimulan el desarrollo de todos los estratos de la planta. La inoculacin individual de cepas nativas de B. simplex, B. cereus y Paenibacillus alvei en trigo, result en un incremento significativo tanto en el peso fresco y seco de los brotes y races. En la parte area, y el peso fresco aument entre el 45% y 50% y el peso seco entre 39,7% y 45% respectivamente. De la misma forma, el aumento del peso fresco radical oscil entre el 55% y el 62% y la biomasa seca aument entre el 25% y el 49%. Asghar et al. (2004), encontraron que PGPR asociadas a la rizsfera de especies de Brassica napus aumentaron en un 58% la longitud de la raz, 39% de la parte area, y 72% del peso seco total. Se ha reportado el efecto de PGPR en la disponiblidad de nitrgeno, fsforo y potasio en suelos deficientes en stos nutrientes que se ve reflejado en mayor absorcin de los mismos por plantas de maz inoculadas con cepas de Pseudomonas alcaligenes (PsA15), Bacillus polymyxa (BcP26) y Mycobacterium phlei (MbP18). (Egamberdiyeva, 2007) y en plantas de Gossipum hirsutum guisantes en una regin semirida de Uzbekistn (Egamberdiyeva y Hoflich, 2004). La inoculacin de PGPR en pasturas y su efecto positivo en el crecimiento y nutricin vegetal ha sido demostrado previamente (Bonilla et al., 2010). En trabajos realizados por Esqueda et al. (2002) se reporta un efecto positivo sobre la emergencia de plantas en seis especies de gramneas inoculadas con A. brasilense. Esta respuesta fue atribuida a que la bacteria propicia un ambiente benfico, incrementando la proliferacin de vellosidades de la raz, con lo que aumenta la absorcin de agua y nutrientes.
C O N C L U S I N

Las cepas 4K y 5B promovieron capacidades de crecimiento vegetal de Pennisetum clandestinum a los 100 y 130 d de muestreo, incrementando el peso fresco y seco de la planta en relacin con el control qumico, bajo condiciones de invernadero.

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R ecomendacin AGRADECIMIENTOS

De acuerdo con los resultados obtenidos en el presente estudio se recomienda continuar con estudios de inoculacin de las especies de PGPR empleadas y dosis de fertilizacin nitrogenada para determinar las recomendaciones de fertilizacin a emplear.

Los autores agradecen a Ins Roldn, Lady Molano y Stella Mendieta por su colaboracin en el desarrollo del presente estudio y al Ministerio de Agricultura y Fedegan por su apoyo y financiacin de esta investigacin.

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