UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS INSTITUTO DE CINCIAS BIOLGICAS DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E BIOLOGIA MOLECULAR

03- DETERMINAO DO ESPECTRO DE ABSORO DE CORANTES E CONSTRUO DE CURVA PADRO

PROFESSOR: Felipe GRADUANDA: Brbara Nadinne 103324

Dezembro - 2013

1. INTRODUO

A espectrofotometria o mtodo de anlises ptico mais usado nas investigaes biolgicas e fsico-qumicas. O espectrofotmetro um

instrumento que permite comparar a radiao absorvida ou transmitida por uma soluo que contm uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substncia. Todas as substncias podem absorver energia radiante, mesmo o vidro que parece completamente transparente absorve comprimentos de ondas que pertencem ao espectro visvel. A absoro A gua absorve das radiaes fortemente ultravioletas, na regio e

do infravermelho.

visveis

infravermelhas dependem das estruturas das molculas, e caracterstica para cada substncia qumica. Quando a luz atravessa uma substncia, parte da energia absorvida (absorbncia): a energia radiante no pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das substncias se deve a absoro (transmitncia) de certos comprimentos de ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas no absorvidos. Com base nos conceitos apresentados a presente aula prtica teve como objetivos: Determinar o espectro de absoro de solues de azul de bromofenol (ABF) e de metilorange (MO), caracterizar o comprimento de onda onde ocorre absoro mxima e construir uma curva padro para cada um dos corantes nos comprimentos de onda () adequados.

2. MATERIAIS E MTODOS

2.1.

MATERIAS

 Soluo de azul de bromofenol 0,01mg/mL Soluo de metilorange 0,01mg /Ml 6 tubos de ensaio Espectrofotmetro gua destilada Agitador de tubos - Vrtex

2.2.

PROCEDIMENTO

Foi determinado o espectro de absoro da soluo de azul de bromofenol (ABF) e de soluo de metilorange (MO), assim caracterizou-se o comprimento de onda onde ocorreu a absoro mxima e construda a curva padro para cada um dos corantes nos comprimento de onda () adequados.
.

3. RESULTADOS E DISCUSSES

O quadro 1 mostra as absorbncias em cada soluo ao variar o comprimento de onda, seguido das figura 1 e 2 que mostra os grficos de absorbncias x comprimento de onda. (nm) ABF MO 415 445 460 490 520 535 550 580 610 640

0,092 0,106 0,113 0,131 0,269 0,407 0,576 1,147 0,674 0,033 0,593 0,783 0,851 0,628 0,269 0,117 0,030 0,028 0,029 0,030

Quadro 1: Dados obtidos aps a leitura da absorbncia.

0.9 0.8 0.7

Absorbncia ABF

0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 100 200 300 400 500 600 700

Comprimento de Onda

Figura 1- Grfico de absorbncia x comprimento de onda para soluo ABF

0.9 0.8 0.7

Absorbncia MO

0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 100 200 300 400 500 600 700

Comprimento de Onda

Figura 2- Grfico de absorbncia x comprimento de onda para soluo MO

Assim, observa-se que obteve-se maior deteco no comprimento de onda no valor de 580 nm para ABF e 560nm para MO. A partir da equao , foi determinada a concentrao em cada tubo, os dados obtidos esto expostos no quadro 2.

Tubo

ABF ou MO

H2O (mL)

Abs (580 nm)

Concentrao (mg/mL)

B 1 2 3 4 5 Quadro 02: Dados bromofenol (ABF).

-5,0 1,0 4,0 2,0 3,0 3,0 2,0 4,0 1,0 5,0 -obtidos aps os clculos da

0 0 0,350 0,002 0,500 0,004 0,598 0,006 0,857 0,008 0,894 0,01 concentrao de azul de

A absorbncia da luz a cada comprimento de onda diretamente proporcional concentrao da soluo contida na cubeta. H uma relao linear entre a concentrao da substncia (expressa em molaridade, M) e a absorbncia ao comprimento de onda de medida. Assim, vemos que atravs da absorbncia lida no espectrmetro podese construir uma reta padro, e consequentemente descobrir a concentrao da substncia que se estuda. Com isso, a curva padro foi obtida atravs da absorbncia do ABF, variando apenas a concentrao, conforme figuras 3 e 4.

4. CONCLUSO

A aula prtica foi bem sucedida, como cada soluo age de forma especfica, foi possvel notar que pode-se identificar as substncias envolvidas a partir da absorbncia, alm de poder ter noes do comportamento, em relao a essas propriedades, analisando os grficos.

5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

REED, R., HOLMES, D., WEYERS, J. & JONES,A.J. 1998. Practical Skills in Biomolecular Sciences. Ed. Prentice Hal