Penentuan asam folat oleh elektroforesis kapiler dengan deteksi kemiluminensi abstrak Sebuah metode cepat dan sederhana

disajikan untuk penentuan asam folat (FA) oleh elektroforesis kapiler (CE) dengan chemiluminescence (CL) deteksi. Metode ini didasarkan pada meningkatkan efek dari FA pada reaksi CL antara luminol dan BrO- dalam larutan alkali berair. Optimal pemisahan dan penentuan diperoleh dengan buffer elektroforesis 35mM natrium borat (pH 9.4) yang mengandung 0.8 mM luminol, dan larutan pengoksidasi 1.6mM NaBrO di 100mM NaCO3 larutan buffer (pH 12,0). Dalam kondisi yang optimal, penentuan FA adalah dicapai dalam waktu kurang dari 20 menit, dan deteksi limit 2,0 10-8 M (S / N = 3). Deviasi standar relatif (RSDs) di daerah puncak dan migrasi waktu berada di 1,5 dan 1,1%, berturut-turut. Metode CE-CL diaplikasikan pada penentuan FA di farmasi komersial tablet, jus apel dan air seni manusia Pendahuluan Asam folat (FA), N-[4 - [[(2-amino-1,4-dihidro-4-oxo-6- pteridinyl) metil]-amino]-benzoyl]l-glutamat, adalah vitamin B larut air. Hal ini dihasilkan oleh tanaman (daun hijau, alga) dan mikro-organisme (bakteri, jamur). Hal ini dapat mendorong pembentukan sel darah merah, dan diyakini menjadikan darah kuat, awalnya diidentifikasi sebagai anti-anemia dan faktor pertumbuhan. FA juga salah satu komponen penting dari sistem haemopoietik, menjadi koenzim yang mengontrol generasi ferrohaeme. Kurangnya FA menimbulkan anemia gigantocytic, terkait dengan leukopenia, pelimpahan mentalitas, psikosis, dll. Selain itu, sebuah studi menunjukkan bahwa konsentrasi FA dalam darah manusia pasien kanker, pasien terutama prakanker, menjadi lebih rendah dibandingkan orang sehat. Dalam beberapa tahun terakhir, beberapa metode untuk penentuan FA telah dilaporkan, termasuk kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT), chemiluminescence aliraninjection (CL) dan metode spektrofotometri. Namun, Metode KCKT memberikan efek tidak baik dari sistem operasi yang rumit dan pemeliharaan, konsumsi sampel yang tinggi dan reagen mahal. Metode aliran injeksi kemiluminensi dan spektrofotometri tidak dapat diterapkan untuk penentuan FA dalam sampel biologis kompleks karena kurangnya pemisahan kemampuan. Elektroforesis kapiler (CE) adalah teknik pemisahan yang kuat karena resolusi tinggi, efisiensi tinggi, pemisahan cepat pada analit dan biaya operasi minimum. CE dengan deteksi UV telah diterapkan untuk penentuan FA dalam tablet dan urin manusia. Deteksi kemiluminensi telah terbukti menjadi salah satu teknologi deteksi yang paling sensitif, dan biaya setup forCLdetection berperan relatif rendah. Oleh karena itu, deteksi CL telah menjadi deteksi yang menarik skema untuk mendeteksi sensitif di CE. Dalam penelitian ini, CE / metode deteksi CL langsung telah dikembangkan untuk penentuan FA, dan telah diterapkan untuk penentuan FA di tablet farmasi komersial, jus apel dan air seni manusia. Metode 2.1. Kimia dan reagen Luminol dibeli dari Fluak ( Buchs , Swiss ) . FA diperoleh dari Shanghai ( Shanghai , Cina) . Semua bahan kimia lainnya dan pelarut organik yang digunakan dalam hal ini adalah

pekerjaan kelas analitis. Air Milli-Q digunakan untuk keseluruhan. Semua larutan disaring melalui saringan membran 0,45m. sebanyak 0,1 M larutan stok natrium borat disiapkan dengan cara melarutkan 3,814 g Na2B4O7 . 10 H2O dalam 100 ml air ; 0,01 M larutan luminol dibuat dengan melarutkan 0,0177 g luminol dalam 2mL larutan NaOH0,1 M , dan pengenceran sampai 10 ml dengan air. Larutan stok BrO- 0,1 M disiapkan dengan melarutkan 0,2 ml Br2 dalam 30 ml larutan NaOH 0,1 M , dan digunakan 2 hari kemudian. Larutan buffer berjalan disiapkan dengan mencampur 8,75 mL larutan natrium borat 0,1 M dan 2 mL larutan luminol 0,01 M , nilai pH disesuaikan menjadi 9,4 dengan larutan NaOH 0.1M, dan kemudian dilarutkan sampai 25 ml dengan air. Larutan oksidator dibuat dengan melarutkan 0,4 ml larutan stok BrO- dalam 25 ml 0,1 M NaCO3 larutan buffer (pH 12). Larutan standar FA dibuat dengan melarutkan 1,00 mg FA dalam 1 mL larutan NaOH 0,1 M, dan pengenceran untuk 5 mL dengan air. Sebuah aliquot dari 20,0 L dipindahkan ke dalam 25 ml pipet volumetrik gelap dan ditambahkan dengan 35mM buffer borat (pH 9.4) sebagai larutan kerja. Larutan bekerja dengan dipanaskan pada suhu 80 C selama 5 menit sebelum digunakan. 2.2. CE-CL instrumen Desain dasar dari sistem CE - CL sebelumnya telah dijelaskan. Secara singkat, pasokan tegangan tinggi (0-30 kV, Beijing Cailu Ilmu Instrument Company, Beijing , Cina ) digunakan untuk mendorong electrophoresis (50 cm 75 m I.D) kapiler yang tidak dilapisi dengan silika berfusi (Hebei Serat Optik , Cina ) digunakan untuk pemisahan . Polimida pada 2,5 cm bagian akhir kapiler dibakar dan digerakan. Setelah mengetsa dengan HF selama 1 jam , ujung kapiler dimasukkan ke dalam kapiler reaksi , yang memiliki diameter internal 320m. (Hebei Serat Optik , Cina ). Larutan CL itu tersedot ke tee. Elektroda dimasukkan ke dalam satu tempat dari tee. Larutan CL mengalir ke jendela deteksi, yang dibuat dengan membakar 1 cm dari Polimida dari reaksi kapiler dan ditempatkan di depan tabung foto multiplier (PMT,R374 dilengkapi dengan C1556 - 50DA - jenis soket perakitan , Hamamatsu , Shizuoka , Jepang). emisi CL dikumpulkan oleh PMT , dan dicatat dan diproses dengan komputer yang kompatibel IBM. Persiapan sampel Dua puluh tablet FA dibuat serbuk dan dicampur secara menyeluruh. Sebanyak 2,00 mg FA ditimbang, dan ditransfer ke 5mL volumetrik botol coklat. Sampel dilarutkan dengan 2,5 mL larutan NaOH 0.1M, dan pengenceran sampai 10 ml dengan air. Larutan disonikasi selama 30 menit dan disaring melalui 0,45 m membran filter. Sebuah alikuot dari 20,0 L adalah ditransfer ke 25 mL labu volumetrik gelap dan ditambahkan dengan 35mM larutan buffer borat (pH 9,4). Solusinya dipanaskan pada 80 C selama 5 menit sebelum dimasukkan ke kapiler. Sebanyak 1 mL jus apel dipindahkan ke labu gelap 10mL dan dtambahkan larutan buffer borat 35 mM (pH 9.4). Larutan dipanaskan pada 80 C selama 5 menit sebelum dimasukkan ke kapiler. Sampel urin manusia segar diperoleh dari berbagai relawan. Proses persiapan sama seperti jus apel. Kondisi CE Kapiler baru dibilas dengan 1M NaOH selama 30 menit sebelum digunakan pertama kali. Kapiler dibilas secara berurutan 0,1 M NaOH, air dan buffer berjalan selama 3 menit untuk masing-masing. Sampel disuntikkan ke dalam kapiler dengan aliran hidrodinamik pada

ketinggian diferensial dari 20 cm selama 10 detik. Tegangan yang digunakkan adalah 16 kV. Elektrolit elektroforesis nya 0.8mM luminol pada larutan buffer borat 35mM (pH 9.4). Larutan oksidatornya adalah 1.6mM NaBrO dalam 100mM larutan buffer NaCO3 (pH 12,0).