You are on page 1of 4

UNIVERSIDAD AUTONOMA CHAPINGO DEPARTAMENTO DE ZOOTECNIA MICROBIOLOGIA PECUARIA Ascao Reyes Johana, Cruz Caamao Yaneth, Epitacio Fernndez

Karina Profesor: Jos Isidro Quinto Ao Grupo D PRACTICA 5 TINCIN DE GRAM Las bacterias disponen de una pared celular que rodea a su membrana citoplasmtica. Las paredes celulares bacterianas estn hechas de peptidoglucano. Esta sustancia est compuesta por cadenas de polisacrido enlazadas por pptidos inusuales que contienen aminocidos. Estos aminocidos no se encuentran en las protenas, por lo que protegen a la pared de la mayora de las peptidasas. Las paredes celulares bacterianas son distintas de las que tienen plantas y hongos, compuestas de celulosa y quitina, respectivamente, tambin son distintas a las paredes celulares de archaea, que no contienen peptidoglucanos. Existen dos diferentes tipos de pared celular bacteriana denominadas Grampositiva y Gram-negativa, respectivamente. Estos nombres provienen de la reaccin de la pared celular a la tincin de Gram, un mtodo tradicionalmente empleado para la clasificacin de las especies bacterianas. Las bacterias Grampositivas tienen una pared celular gruesa que contiene numerosas capas de peptidoglicano en las que se inserta cido teicoico. En cambio, las bacterias Gram-negativas tienen una pared relativamente fina, consistente en unas pocas capas de peptidoglicano, rodeada por una segunda membrana lipdica que contiene lipopolisacridos y lipoprotenas. Los micoplasmas son una excepcin, pues carecen de pared celular. La mayora de las bacterias tienen paredes celulares Gram-negativas; solamente son Grampositivas Firmicutes y Actinobacteria. Estos dos grupos eran antiguamente conocidos como bacterias Gram-positivas de contenido GC bajo y bacterias Grampositivas de contenido GC alto, respectivamente. Estas diferencias en la estructura de la pared celular dan lugar a diferencias en la susceptibilidad antibitica. REVISIN DE LITERATURA Tincin es el proceso por el cual las molculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las clulas de los microorganismos y poder realizar la observacin en microscopio ptico.

Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algn tratamiento previo. Tincin simple: El colorante utilizado sirve solo para denotar la morfologa celular La tincin diferencial requiere ms de un tipo de colorante y se utiliza para distinguir entre varios tipos de clulas bacterianas. Una tincin diferencial tpicamente consiste de tres pasos principales: primero un colorante primario, el cual se utiliza para teir a todas las clulas en la tincin; enseguida un paso de decoloracin, el cual remueve el colorante solo de ciertos tipos de clulas y finalmente un colorante de contraste, el cual tie las clulas recin decoloradas pero no tiene efecto sobre las clulas que an retienen el colorante primario. Tincin diferencial La tincin propuesta por el mdico dans Christian Gram en 1884, es una de las tinciones diferenciales ms utilizadas en bacteriologa, que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas. La reaccin de la tincin de Gram se basa en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de estas bacterias. Las bacterias Gram positivas tienen muchas capas de pptido glucano, las cuales a su vez, sostienen molculas de cido teicoico. El cido teicoico reacciona con el cristal violeta y el yodo utilizado en este proceso de tincin. Un complejo de las molculas cristal violeta-yodo-cido teicoico es muy difcil de remover. Como la pared celular de las clulas Gram positivas retiene estos compuestos, es ms difcil decolorar una clula Gram positiva que una Gram negativa. Una mezcla de alcohol remueve el cristal violeta de la clula Gram negativa, pero no de la Gram positiva. Esta mezcla de alcohol tambin disuelve mucho de la capa exterior de lipopolosacrido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo cual acelera la remocin del colorante primario cristal violeta de estas clulas. Cuando otro colorante, usualmente safranina, se aade, las clulas Gram positivas siguen de color azul-violeta mientras que las Gram negativas absorben el color rojizo de la safranina. Al final del procedimiento de tincin, las clulas Gram positivas sern del color del cristal violeta, o colorante primario, y las clulas Gram negativas sern del color de la safranina que es el colorante de contraste. Descripcin de la tincin de GRAM: Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una solucin de cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son

lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las clulas, tanto las gram positivas como las gram negativas, estn teidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico. El ingrediente activo es aqu el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas gram positivas como las gram negativas se encuentran en la misma situacin. Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (gram positivos) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula (y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas gram positivas, a causa de sus paredes celulares ms espesa (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente, provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Despus de la decoloracin las clulas grampositivas son todava azules, pero las gram negativas son incoloras. Para poner de manifiesto las clulas gram negativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas gram negativas son rojas, mientras que las gram positivas permanecen azules. OBJETIVOS Clasificar algunas especies bacterianas del rumen en gram positivas o negativas de acuerdo a la tincin de gram Comprender la importancia que tienen estas tinciones para la caracterizacin e identificacin de las bacterias. MATERIALES Y MTODOS Se tom una muestra de tres repeticiones del lquido ruminal colocado en un porta objetos dispersndola con movimientos circulares, se fij ligeramente con fuego; una vez realizado se procedi al mtodo de tincin gram. Se cubri la muestra con tinte cristal violeta durante un minuto, transcurrido este tiempo se enjuago con agua y se agreg una gota de lugol dejando reposar, que funciona

como sellador de la muestra y se enjuago despus de un minuto, posteriormente se agreg alcohol por 5 segundos e inmediatamente se lav para agregar safranina dejando actuar durante 5 minutos, una vez realiza da la tincin se sec para la muestra para poder ser observada al microscopio. RESULTADOS Se pudo observar al microscopio pasando primero en 10X, 40 X y se utiliz un aceite de inmersin para enfocar con el objetivo 100X, asi se pudo percatarse de la diferenciacin de bacterias gram positivas y gram negativas por medio de la tincin realizada.

CONCLUSION La identificacin de bacterias en el laboratorio es particularmente relevante en medicina, donde la determinacin de la especie causante de una infeccin es crucial a la hora de aplicar un correcto tratamiento, as como tambin sera importante su aplicacin zootcnica. Por ello, la necesidad de identificar a los patgenos ha dado lugar a un potente desarrollo de tcnicas para la identificacin de bacterias.

BIBLIOGRAFA Universidad Autnoma de Mxico, ecologa, Manual de Prcticas, Practica 3, Tincin Diferencial de gram. Laboratorio 4 : tincin de microorganismos Biol 3725L recuperado el 29 de septiembre de 2013 de: http://academic.uprm.edu/~lrios/3725/Ejercicio4.pdf Universidad Tecnolgica Nacional, Facultad Regional Rosario, Departamento de Ingeniera Qumica, Biotecnologa 2009, Trabajo Practico N 4: Tincin y Observacin de Microorganismos.

You might also like