El virus BVD (Bovine Virus Disease), causante de la enfermedad de la Diarrea Viral Bovina, es uno de los patgenos ms comunes de los

bovinos en el mundo, asociado a varias formas clnicas, que van desde una infeccin inaparente hasta una fatal denominada Enfermedad de las Mucosas.1,2,3

Para comprender el mecanismo de la enfermedad es esencial dos conceptos: el primero, existen dos biotipos del virus BVD, el biotipo citopatognico (CP) y el no citopatognico (NCP); el segundo concepto, existen dos poblaciones de bovinos, los bovinos infectados persistentemente y, los bovinos "normales" libres de la infeccin.

Ambos biotipos del virus se diferencian a nivel molecular y en el laboratorio por su caracterstica en los cultivos celulares.4,5 Los dos biotipos producen la enfermedad de la Diarrea Viral Bovina en sus diversas formas clnicas, pero, el biotipo NCP es el que induce la infeccin persistente, con la condicin que el virus pase al feto a travs de la placenta durante los primeros 4 meses de gestacin; cuando esto ocurre, el feto nace infectado con el virus NCP y quedar infectado de por vida.6

El virus BVD es miembro del gnero pestivirus conjuntamente con los virus del clera porcino y de la Enfermedad de la Frontera (BD) que afectan al porcino y ovino respectivamente. Hasta hace poco, el gnero pestivirus fue uno de la Familia Togavidae, pero ala luz de los conocimientos en lo referente a la estructura molecular y modo de replicacin de su genoma semejante a los virus de la familia Fiaviridae, fue propuesto ante el Comit Internacional para la Nomenclatura de los Virus para ser reubicado dentro de la familia Flaviridae.7 Recientemente ha sido aceptada la propuesta y el gnero pestivirus ahora pertenece a la Familia Flaviridae.8

La introduccin del virus BVD al Per al parecer fue con la importacin de bovinos durante la dcada de 1960-1970. en 1962 - 1963 se presentaron en Lima y en el valle del Mantaro algunos animales hijos de vacas importadas con severos cuadros diarreicos. Los estudios anatomopatolgicos realizados y el anlisis serolgico confirmaron el diagnstico de diarrea viral bovina (De la Vega E, Samam H, Rosadio R, Comunicacin personal). Despus posiblemente hubieron factores como el clima, tipo de explotacin, etc. que hicieron posible una convivencia en equilibrio, pero, con la frecuente importacin de ganado sin control sanitario en estos ltimos aos, pudo haber ingresado nuevas cepas del virus encontrando una poblacin bovina susceptible; otra posibilidad es el estrs a que estn frecuentemente sometidos los bovinos lecheros,

favoreciendo el incremento de la patogenecidad del virus, y por ltimo, podran estar surgiendo nuevas cepas favorecidas por presiones antignicas, cualquiera que sea el caso, el virus es prevalente en el pas y est asociado a problemas reproductivos y respiratorios a nivel nacional.

1. PATOGENESIS

Unas de las caractersticas del virus BVD es la capacidad de producir mltiples expresiones clnicas, siendo las ms comunes las siguientes:

a. Infeccin subclnica. En USA y Canad el 70 a 99% de los bovinos susceptibles desarrollan la forma subclnica o inaparente; sin embargo, si se observa con atencin, los animales pueden tener fiebre, leucopenia y la recuperacin es usualmente rpida y completa debido a la aparicin e incremento de los niveles de anticuerpos neutralizantes, en 2 a 3 semanas posteriores a la exposicin al virus; muchas veces este tipo de infeccin predispone adems al animal a otras infecciones debido al carcter inmunosupresor del virus.1,9,10,11 La prevalencia superior al 50% de BVD encontrado en bovinos aparentemente normales hacen pensar que esta forma es tambin predominante en el Per (Rivera, datos no publicados).

b. Diarrea Viral Bovina. Es la forma aguda de la infeccin. En 1946, cuando BVD fue descrito por primera vez, esta fue la forma ms prevalente y uno de los signos ms saltante fue la diarrea, de all el nombre de diarrea viral bovina, aunque, en la actualidad se estima que solamente 1 a 5% de los animales de 6 meses a 2 aos de edad pueden presentar esta forma clnica. Brownlie12 han sugerido que en lugar de Virus de la Diarrea Viral Bovina" debe denominarse virus de la Enfermedad de las Mucosas. Clnicamente los animales que desarrollan la forma aguda presentan: fiebre de 41 - 42 C, aumentada leucopenia, descarga nasal y ocular, erosiones en la mucosa oral y a veces diarrea.1,6,10,13

c. Infeccin neonatal.

El ternero puede infectarse en la etapa perinatal, es decir en el ltimo perodo de la gestacin o despus de nacer, desarrollando luego una severa enteritis a veces fatal; 14 por lo tanto, es posible que BVD juegue un rol en la presentacin de la enfermedad entrica en terneros recin nacidos. Los anticuerpos que el ternero recibe de la madre a travsdel calostro y leche se agotan entre los 105 a 230 das de edad, despus del cual el incremento del ttulo de anticuerpos puede ser debido a una infeccin natural o a la vacunacin.1

d. Infeccin venrea.

El semen del toro infectado durante la etapa fetal o de toros con infeccin aguda, contiene virus BVD. En este caso, los espermatozoides tienen una motilidad disminuida y puede tambin presentar anormalidades morfolgicas.15 Sin embargo, el virus afecta la fertilizacin y no a la concepcin, caracterizndose por repeticiones de celo e incrementando entonces el nmero de servicios por concepcin. Este problema puede ser pasajero y eliminarse cuando la vaca adquiere inmunidad contra el virus.1

La comercializacin de germoplasma y la transferencia de embriones fueron en sus inicios potenciales medios de transmisin de BVD pero actualmente estos riesgos son mnimos si el germoplasma proviene de industrias con buen control sanitario.

e. Infeccin Transplacentaria.

El impacto econmico de la infeccin fetal por el virus BVD es de gran significancia en el ganado lechero10,16. Si una vaca preada susceptible es infectada por el virus BVD, puede desarrollar la forma subclnica o la aguda, existiendo la gran posibilidad que el virus atraviese la placenta e infecte al feto. El efecto del virus en el feto depende del perodo gestacional y del biotipo de virus infectante.1,17 Los efectos del virus en el feto pueden ser:

1) Reabsorcin embrionaria, si la infeccin ocurre antes de los 45 das aproximadamente.

2) Si la infeccin es entre los 50 a 100 das de vida puede ocurrir muerte fetal seguida por aborto o momificacin fetal y la expulsin del feto es frecuentemente semanas o meses despus.

3) Si la infeccin es entre los 100 a 150 das de vida fetal ocurren los defectos congnitos debido a que en este perodo de vida fetal est completndose el desarrollo del sistema nervioso central y la capacidad de la respuesta inmunolgica del feto; algunas de las lesiones teratognicas son microftalmia, catarata, hidrocfalo, hipoplasia del cerebelo, aplasia del timo, hipoplasia pulmonar, alopeca, etc.

4) Inmunotolerancia al virus BVD (ausencia de respuesta inmune del feto), esta condicin ocurre cuando el feto es infectado dentro de los 125 das de la gestacin, es decir, antes del completo desarrollo del sistema inmunolgico.

La inmunotolerancia, al virus BVD conlleva a una infeccin persistente y est asociada a la infeccin con el biotipo NCP

5) Una infeccin con el virus BVD puede tambin dar lugar a terneros con crecimiento retardado que se manifiesta por debilidad y falta de desarrollo corporal.

6) La infeccin con el virus BVD en el ltimo perodo de la gestacin puede no causar dao al feto, ya que entonces es inmunocompetente y puede responder con los anticuerpos neutralizantes. El ternero entonces, es normal y tiene anticuerpos contra el virus BVD al momento de nacer.

f. Infeccin persistente.

La mayora de los terneros con infeccin persistente nacen de vacas normales susceptibles que fueron infectadas con el biotipo NCP durante los 4 primeros meses de gestacin (120-125 das), pero tambin las vacas con infeccin persistente dan cras con la misma condicin; pudiendo generarse en un hato clones de animales persistentemente infectados. Un ternero que nace con infeccin persistente se caracteriza por el aspecto prematuro; estos terneros son vulnerables por los procesos respiratorios y entricos, y el 50% usualmente mueren durante el primer ao de vida. Sin embargo, algunos pueden tener apariencia normal y llegar hasta la edad reproductiva. Estos animales son los reservorios y diseminadores del virus y son particularmente susceptibles a desarrollar la forma clnica de Enfermedad de las Mucosas, de carcter fatal. Afortunadamente la ocurrencia de estos terneros no es muy frecuente; en USA por ejemplo, es de 1 a 2%, aunque puede ser mayor en algunos hatos20.

Los animales con infeccin persistente pueden ser identificados mediante pruebas serolgicas y por aislamiento del virus a partir de leucocitos y/o suero sanguneo colectados a intervalos de 3 ms semanas.20,21,22,23

g. Enfermedad de las mucosas (EM).

La enfermedad de las mucosas es una forma de la BVD no muy frecuente y se presenta usualmente en animales de 6 meses a 2 aos de edad. La forma severa se caracterizada por diarrea sanguinolenta y mucus, deshidratacin, severa leucopenia y muerte dentro de los pocos das de presentar los signos clnicos. Las lesiones macroscpicas mas saltantes en este caso son las lceras y erosiones de la mucosa del tracto digestivo. La mortalidad puede alcanzar al 50%.1,4,9,17

Esta forma clnica ocurre cuando hay coinfeccin o superinfeccin con el biotipo CP. La fuente del virus CP coinfectante puede ser un virus de campo o virus vacuna o un virus que resulta por mutacin del virus NCP (dentro del animal), causante de la infeccin persistente. Esta condicin al parecer ocurre cuando el virus CP coinfectante o superinfectante y el virus NCP se combinan perfectamente. Se debe puntualizar que no siempre las asociaciones de los biotipos NCP y CP dan como resultado la enfermedad de las mucosas, concepto que ha sido demostrado experimentalmente.24,25

En el Per ltimamente se report 2 casos clnicos compatibles con la enfermedad de las mucosas, desafortunadamente los estudios realizados no permitieron establecer el diagnstico (Andresen H. y Perales R. datos no publicados). Invoco a los veterinarios clnicos realicen todos los esfuerzos a fin de llegar a un diagnstico definitivo.

h. Diarrea viral bovina Crnica.

Esta forma es una secuela de la E.M. o de la forma aguda de BVD y se caracteriza porque el animal presenta una diarrea intermitente, ulceraciones en la cavidad buconasal, en los espacios interdigitales, debilitamiento y muerte, despus de semanas o meses de sufrir la enfermedad.'

i. El virus BVD y el Complejo Respiratorio bovino.

El virus BVD es parte importante del Complejo Respiratorio Bovino, por ser un agente inmunosupresor debido a la afinidad por el tejido del sistema inmunolgico. En general el virus produce atrofia del tejido linfoide, profunda leucopenia, alteracin en la funcin de las clulas polimorfonucleares, supresin de la produccin de interferon y otras disfunciones que favorecen la invasin y sinergismo de otros microorganismos neumotrpicos: Pasteurella, Herpes Bovino 1 (IBR), Mycoplasma, etc. que dan lugar a un proceso respiratorio agudo.1,2,10,11,25,26

En un estudio reciente en terneros de 2 das a 6 meses de edad con problemas respiratorios en diferentes hatos del Valle de Lima, se encontr al virus BVD como uno de los agentes asociados al complejo respiratorio con 54% de prevalencia, sugiriendo que el virus por ser inmunosupresor pudo haber iniciado o potencializado el efecto patognico de otros virus como el HBV-1.

2. DIAGNOSTICO

Los avances en el conocimiento de la naturaleza biolgica del virus, la capacidad de producir mltiples manifestaciones clnicas, llev a una confusin en la comunidad veterinaria en relacin al diagnstico e interpretacin de los resultados de laboratorio; afortunadamente el desarrollo y la utilizacin de la biotecnologa ha despejado muchas de stas dudas.2,27,28

En el laboratorio, BVD puede ser diagnosticado mediante los siguientes procedimientos:

a. Aislamiento del virus.

En principio este mtodo no ofrece dificultades siempre y cuando, la coleccin y transporte del espcimen (bazo, ganglios, rin, sangre con EDTA) al laboratorio sea adecuada, y que el laboratorio disponga con clulas susceptibles y libres de BVD endgeno, y por ltimo que cuente con reactivos de buena calidad. 27,29,30

Dado que los 2 biotipos del virus (NCP y CP) pueden dar lugar a los mismos signos clnicos, se supone que puede aislarse cualquiera de los 2 biotipos. Si el biotipo es CP (menos comn) se observa la lesin caracterstica en el cultivo celular o efecto citopatognico; si se trata del biotipo NCP (el ms comn en el campo) no se produce ninguna lesin ctoptica, por lo tanto es necesario una prueba adicional, la prueba de inmunofluorescencia o la inmunoperoxidasa.

El mtodo de aislamiento viral es caro y requiere de varios das o semanas para obtener el resultado; pero es muy sensible.

b. Deteccin de antgenos virales en muestras de tejidos.

Este procedimiento es rpido y disponible en la mayora de los laboratorios. Consiste en la visualizacin de antgenos del virus (protenas) directamente en una pequea muestra del espcimen, mediante tcnicas como la inmunofluorescencia o la inmunoperoxidasa; este ltimo til tambin en muestras fijadas en formol. Ambas tcnicas o mtodos son sensibles y especficas sobre todo si se usan anticuerpos monoclonales y los resultados son obtenidos en pocos minutos.31,32.33,34

C. Deteccin de anticuerpos contra el virus BVD (diagnstico serolgico).

Cuando un animal inmunocompetente es infectado por el virus BVD responde produciendo anticuerpos, que tienen la finalidad de neutralizar y eliminar al virus del organismo. Estos anticuerpos pueden ser detectados en el laboratorio mediante la prueba de virus neutralizacin (mtodo estndar). Este mtodo requiere el uso de cultivo celular y una cepa de BVD de laboratorio citopatognico, para facilitar la observacin de la neutralizacin viral o como un sistema indicador de la neutralizacin de virus, por los anticuerpos presentes en las muestras de suero o fluidos fetales en investigacin.

El diagnstico de BVD a travs de esta prueba en un animal o grupo de animales necesita de un doble muestreo (suero pareado) obtenidos en la fase aguda y en la fase de convalecencia; ambas muestras son trabajadas en el laboratorio en las mismas condiciones para comparar los ttulos de anticuerpos en ambas muestras. Un incremento de ttulo de anticuerpos definir el diagnstico de infeccin por BVD.

El mtodo de Virus neutralizacin es muy especfico y sensible pero costoso y laborioso.27,30,35,36

Estos tres mtodos se realizan rutinariamente en el Laboratorio de Virologa de la Facultad de Medicina Veterinaria de 1 a UNMSM. En nuestro medio no es frecuente contar con fetos bovinos, por lo que muchas veces el cultivo primario es preparado de tejidos de fetos ovinos en este caso tambin es recomendable descartar BVD/BD endgenos y de preferencia se debe usar a partir del tercer cultivo.

d. Otras pruebas diagnsticas recientes.

Estas pruebas ofrecen un gran futuro, aunque muchas de ellas an no estn disponibles. Algunas son:

- ELISA, sirve para la deteccin de anticuerpos o antgenos de BVD. Solo requiere anticuerpos monoclonales y antgeno purificado. La ELISA permite procesar gran nmero de muestras en corto tiempo.

En nuestro laboratorio estamos estandarizando la prueba para uso en estudios epidemiolgicos de HBV-1 y posiblemente tambin para BVD.

- Sondas de DNA (DNA Probes)

La sonda de DNA, son copias clonadas molecularmente de un segmento del genoma del BVD y marcadas con una molcula radioactiva o un grupo qumico que puede ser identificada con una sustancia cromgena; cuando esta pieza marcada se aade a un espcimen conteniendo el virus BVD se une en su porcin complementaria y dicha unin o alineamiento se denomina hibridizacin.26,27,40 Pero debido a una amplia variabilidad entre las cepas de BVD, al parecer este mtodo a la fecha no es muy confiable.27,41

- La Reaccin de la Polimerasa en Cadena (PCR) y Citometra de Flujo, son mtodos que al parecer ofrecen una gran alternativa por su velocidad, sensibilidad y la posibilidad de ser usadas en numerosas muestras, por ejemplo, para la deteccin de los animales persistentemente infectados dentro del hato.42,43,44

3. CONTROL.

Los recientes avances en el conocimiento de la patognesis y epidemiologa del BVD indican que es poco factible mantener hatos libres de BVD; por lo que el objetivo debe ser la prevencin y control a travs de 3 aspectos fundamentales.

a. Buen control sanitario.

La finalidad es evitar el ingreso del virus al hato. Con este propsito deben evitarse una serie de factores: el uso mltiple de la aguja hipodrmica, contacto con otros rumiantes que pueden ser portadores del virus, el uso de germoplasma de dudosa procedencia, el uso de vacunas a virus vivo modificado, el libre ingreso de animales al hato sin previo anlisis, el estrs, etc.1,12,30

b. Identificacin y remocin de los animales persistentemente infectados.

Esta es una de las medidas de enorme trascendencia 20 puesto que los animales con infeccin persistente (inmunotolerantes) son los principales diseminadores del virus. Afortunadamente

estos animales no superan al 2%, pero en algunos hatos pueden alcanzar porcentajes superiores.41

Este procedimiento debe hacerse cuando existen sospechas de tener la infeccin en el hato; por ejemplo: incremento de la frecuencia de abortos, nacen terneros dbiles o con malformaciones congnitas, incremento en el nmero de vacas que repiten el celo. En tal situacin, debe muestrearse todos los animales mayores a 6 meses. Si en el hato hay BVD, la prevalencia debe ser alta y los negativos deben ser considerados sospechosos y eliminados del hato, si el porcentaje de estos animales es mnimo.

La otra posibilidad de encontrar a estos animales es despus de la vacunacin con vacuna a virus muerto a todos los animales mayores a 6 meses, incluyendo la segunda dosis al tiempo recomendado, y posteriormente se realiza el anlisis serolgico a todos los animales vacunados, aquellos que no responden a la vacunacin sern eliminados del hato lo ms pronto posible. Esta medida ser repetido peridicamente para el chequeo de aquellos animales que no fueron muestreados (terneros menores a 6 meses).1,12,21 c. Vacunacin. En la actualidad existen dos tipos de vacunas: a virus vivo modificado y a virus muerto o inactivado. La vacuna a virus vivo modificado tiene la ventaja de producir altos niveles de anticuerpos sin la necesidad de una segunda dosis, por esta razn es adecuada para el ganado de crianza extensiva pero, tiene la desventaja de producir inmunosupresin predisponiendo al animal a otro infecciones, por ejemplo en animales estresados se incrementa la mortalidad por problemas respiratorios; no puede usarse en animales gestantes y puede revertir a la virulencia causando serios problemas.46 La vacuna a virus muerto tiene la desventaja de requerir una segunda dosis para inducir los anticuerpos a niveles protectivos, pero es segura, no es inmunosupresora y puede usarse en vacas gestantes. Por las facilidades del manejo esta vacuna es recomendada en bovinos de explotacin intensiva. En la actualidad existen muchas marcas comerciales y la tendencia es el empleo de vacunas a virus muerto polivalentes con dos o ms cepas de virus BVD.1,20,23,30,47