Cintica

INTRODUO
Formao de produto metablito pode ser relacionadaaconsumodenutriente; Alm do mais, formao de produto no pode ocorrersemapresenadeclulas; Assim, esperado que crescimento e formao de produto esto intimamente relacionados utilizao de nutrientes que dependendo dos controlesmetablitos regulatrios; A formao de produto ser ligada a crescimento e/ou concentraocelular.

INTRODUO
Arelaocinticaentrecrescimentoeformaode produtodependedopapeldoprodutono metabolismocelular.Asduascinticasmais comunssoaquelasquedescrevemasntesedo produtoduranteocrescimentoeapso crescimentotercessado.Umexemplomenos comumaplicaaocasoondeocrescimento inicialmenteocorresemformaodeproduto,mas apsalgumperododetempooprodutocomeaa aparecerenquantoocrescimentocontinua.

No grfico (a), a formao de produto associado ao crescimento celular No grfico (b), temos formao de produto associado ao crescimento, de uma forma mais ou menos confusa, chamada de formao de produto parcialmente associada ao crescimento
X [ ] [ ] X [ ] X

P (a) t (b)

P t (c)

P t

No grfico (c), temos formao de produto no associada ao crescimento.

VelocidadedeFormaodeProduto
Avelocidadedeformaodeproduto a derivadadePemcadapontodP/dt; DamesmaformaquedX/dt edS/dt no usado,dP/dt (velocidadedeformaode protuto)podesertransformadaem VelocidadeEspecficadeFormaode Produto(p)que definidocomo:

1 dP p= X dt

1 /max

1 /max

p/pmax (d) t (e)

p/pmax t

1 /max

p/pmax

(f)

Os grficos mostram: (d) formao de produto associada ao crescimento; (e) formao de produto parcialmente associada ao crescimento e (f) formao de produto no associada ao crescimento.

FATORESDECONVERSO
Crescimentoeformaodeprodutopormicrorganismosso processosdebioconverso nosquaisosnutrientesqumicos alimentados fermentaosoconvertidosamassacelular emetablitos; Cadaumadessasconversespodeserquantificadaporum coeficientederendimentos,expressocomomassade clulaouprodutoformadoporunidadedemassade nutrienteconsumido,Yx/s eYp/s,paraclulaeproduto, respectivamente; Assim,ocoeficientederendimentorepresentaaeficincia deconverso. Nosprocessoscujoproduto aclula(ex.obtenode leveduradepanificao)ogrficorepresentativoda fermentao mostradoabaixo

FATORESDECONVERSO
[] s
X

P X

s
tempo

onde maximizado o crescimento celular e minimizado a formao de subprodutos O coeficiente de rendimento de clula por nutriente torna-se Yx/s = X/S

Nosprocessoscujoobjetivo aformaodeumprodutoenoa clula(ex.obtenodeetanol,antibiticos); Ogrficorepresentativodafermentao mostradoabaixo

[] s
P

X P

s
tempo

onde maximizado a formao de produtos e minimizado o crescimento celular; O coeficiente de rendimento do produto por nutriente ser: Yp/s = P/S A maneira usual de calcular rendimentos medir a massa celular ou produto produzido e substrato consumido sob um perodo de tempo e calcular Yx/s e Yp/s. Obs.: Quando no meio h mais de um substrato de carbono, considera-se o substrato limitante do crescimento.

INFLUNCIADACONCENTRAODENUTRIENTESNA VELOCIDADEESPECFICADECRESCIMENTO Duranteamaioriadasfermentaesdescontnuas tpicas,avelocidadeespecficadecrescimento constanteeindependentedaconcentraodenutrientes queest variando.Todavia,velocidadedecrescimento, comoumavelocidadedereaoqumica, umafuno daconcentraodecompostosqumicos.Oscompostos qumicosnessecasosoosnutrientesessenciaisparao crescimento; Aformadarelaoentrevelocidadedecrescimentoe concentraodenutrientefoiobservadaem1949por Monod, OmodelodeMonod temaforma:

S = m . Ks + S

INFLUNCIADACONCENTRAODENUTRIENTESNA VELOCIDADEESPECFICADECRESCIMENTO

S = m . Ks + S
= vel. especfica de crescimento; max = vel. espec. de crescimento mximo; S = concentrao de nutriente; KS = constante de saturao e igual a S quando = 0,5.max

INFLUNCIADACONCENTRAODENUTRIENTESNA VELOCIDADEESPECFICADECRESCIMENTO
A equao de Monod representa uma simplificao de vrias situaes reais: *No prev fase LAG (x=0) x=0 S >>> Ks. *No prev fase estacionria (embora S no seja nulo, S 0; x=0. *No prev nem um tipo de inibio. *No se aplica a cultivos com limitao de outros nutrientes (apenas S limitante).

Representao da equao de Monod. Ex: para m = 0,14 h-1 e Ks = 0,60 mg/L (curva B), Ks = 0,030 mg/L (curva A).

INFLUNCIADACONCENTRAODENUTRIENTESNA VELOCIDADEESPECFICADECRESCIMENTO
A curva apresentada pela x em funo do tempo (condies experimentais), apresenta um trecho mximo e constante (AB), aps a fase LAG curta.

Variao da (x) e do tempo de gerao (tg), no cultivo descontnuo.

-Outros Modelos Matemticos:

Estes modelos, como o de Monod, tmbm no levam em conta o fenmeno da inibio (pelo substrato ou pelo produto).

O fenmeno de inibio do crescimento celular (figura abaixo) somente se aplica para valores de S relativamente baixos,menores ou iguais a Ks. Ks

Cintica de inibio pelo substrato (curva A) e sem inibio (---).

K i,s S x = m . * K s + S K i ,s + S

Ks= Constante de saturao definida na Equao de Monod; Ki,s=Constante de inibio pelo substrato

Com o objetivo de explicar a reduo da velocidade especfica de crescimento provocada pelos altos valores iniciais de substrato, uma modificao foi proposta para a Equao de Monod:

K i,s S x = m . * K s + S K i,s + S
Ks= Constante de saturao definida na Equao de Monod; Ki,s=Constante de inibio pelo substrato; Ki,s
max = = Ks, quando: x , porm para um valor de S, que provoque a inibio, 2

sendo assim superior ao correspondente S da equao de Monod.

Quanto a inibio pelo produto, um equacionamento semelhante foi proposto por JERUSALIMSKY & NERONOVA

K i,P S x = m . * K s + S K i,P + S

Ks= Constante de saturao definida na Equao de Monod; Ki,p=Constante de inibio pelo produto;

MODELODEMONOD

S = m . Ks + S

MODELODELINVEWEABERBURK
OmodelodeMonod temaforma: = . m

S Ks + S

LineweaverBurk,inverteuaEquaodeMonod linearizando aequao,eassimfacilitouas determinaesdasconstantesdeMonod:

KS

max

1 1 * + S max

A linearizao do modelo de MONOD:

max
1

ks

max
1 S

1 1 * + = max S max

ks

Alguns valores para Ks no modelo de Monod para crescimento

Nutriente Glicose Glicose Glicose KS (mg/L) 1,0 2,0-4,0 25,0 Microrganismo Enterobacter aerogenes Escherichia coli Sacharomyces cerevisiae

Observaes: a)Os valores de Ks so muito pequenos em relao concentrao do nutriente nas fermentaes industriais. b) max, quando S> 10 KS c)para S< 10 KS, uma forte funo da concentrao de nutriente. d)Durante a fase exponencial constante .

EVOLUODECALORDURANTEAFERMENTAO
Aevoluodecalorduranteafermentaoest intimamente relacionada utilizaodafontedecarbonoeenergia. a)Quandoafontedecarbonoest sendoativamente incorporada massacelularviacrescimento,tipicamente cercade4050%daentalpiadisponvel conservadana biomassaeorestante,perdidocomocalor(5060%); b)Quandoafontedecarbonoest sendometabolizada para manutenocelular,todaaentalpiaassociadacom combusto desprendidacomocalor.; c)Seumprodutoest sendoformado,entoocalor envolvidoporunidadedefontedecarbonometabolizada est entreosdoisextremos; Ointeressenaevoluodocalorest nanecessidadede removloduranteoprocessodefermentaoedautilidade docalorcomoindicadordaviabilidademetablica.

INFLUNCIADOAMBIENTENOCRESCIMENTO CELULAR Ahabilidadedeummicrorganismocrescere sintetizarprodutosemumdadoambiente determinadopelomicrorganismo(m.o); Odesenvolvimentobemsucedidode processosdefermentao dependente, primeirodaobtenodeboaslinhagenspor isolamentoemutao,segundo,dos parmetrosambientais nocrescimentocelular eformaodeproduto,principalmente temperaturaepH.

EfeitodaTemperaturanoCrescimentoCelular
Crescimento microbiano e formao de produto so resultados de uma complexa srie de reaes qumicas. Como elas, eles so influenciados pela temperatura da seguinte forma: tipos de curvas crescimento-temperatura

EfeitodaTemperaturanoCrescimentoCelular
A maioria dos m.os crescem num intervalo de temperatura entre 20 e 40 oC;

Morte max

Crescimento

pode ser dado pela equao de Arrhenius: = Ae-Ea/RT = Ae-Ea/RT A e A = constante (h-1) Ea e Ea = energia de ativao (cal/mol) R = 1,98 cal/mol K T = temperatura (K) = velocidade especfica de morte (h-1). = velocidade especfica de crescimento (h-1

(1/T)

A velocidade de crescimento cresce rapidamente quando a temperatura aumenta at a temperatura tima, mas a partir dessa, o crescimento cai tambm rapidamente; A maioria dos m.o. apresenta o seguinte comportamento:

EfeitodaTemperaturanoCrescimentoCelular
Aenergiadeativaoparacrescimentovariade15 20kcal/moleparamortede6070kcal/mol; Assimavelocidadeespecficademorte muitomaissensvel temperaturaqueadecrescimento. Atemperaturatambmpodeafetaroutrosaspectos importantesdocrescimentomicrobianocomoYx/s; Naproduodebiomassaoimportante atingiramxima conversodesubstrato massacelular; AssimocoeficientederendimentoYx/s celular deprincipal interesse; Essecoeficientederendimento mostradonafiguraaseguir paracrescimentodebactriasemmetanol,emfunoda temperatura.

EfeitodaTemperaturanoCrescimentoCelular

Yx/s

45

50

55

60

65

T(oC)

EfeitodopHnoCrescimentoCelular
max Escherichia coli (bactria)

5,0

6,0

7,0

8,0 9,0

10,0

pH

Bactrias pH 4 8 Leveduras pH 3 6 Fungos pH 3 7

EfeitodopHnoCrescimentoCelular
Comoconsequncia opHdevesercontroladonosseus valorestimosparamelhoraraperformancedoprocesso; Duranteafermentao,opHtemumatendnciaamudarpor vriasrazes; QuandoafontedeN umsaldeamnioNH4+ om.o. incorporadaformaRNH3+liberandoH+,portantoopH diminui; QuandoafontedeN NO3,om.o.removeH+domeiopara reduziroNO3 aRNH3+ logoopHaumenta. OutrarazoparavariaodopHocorrequandocidos orgnicossoproduzidos(cidoltico,pirvico,acticoe etc.). Atravsdamedidadocidooulcaliadicionadopara neutralizaramudanadepH, possvelobterinformaes sobrecrescimento(X)eformaodeproduto(P).

EfeitodopHnoCrescimentoCelular
A Figura abaixo mostra a relao entre a massa de NH4OH adicionado ao cultivo para controle de pH e a concentrao celular. O microrganismo utilizado foi E. coli BL21(DE3)pLysS para produo da protena recombinante Troponina C

X (g/L) X = 0,68 + 0,85(NH4OH) E. coli BL21(DE3)pLysS

NH4OH (g)

EfeitodopHnoCrescimentoCelular

Exerccio: Os dados obtidos de uma fermentao descontnua esto ilustrados na tabela abaixo. Determine os parmetros cinticos Ks e m.
T (h) 0,00 0,52 0,86 1,18 1,43 1,74 2,06 X (g/L) 15,50 22,50 28,60 35,30 41,10 48,20 53,00 S (g/L) 74,00 61,00 49,00 37,00 26,00 11,00 3,00 dx/dt 12,24 15,90 19,63 22,29 23,92 20,20 9,12

max
1

ks

max
1 S