PRACTICA

CULTIVO BACTERIOLOGICO
Objetivo: trabajar con organismos en base a tcnicas bacteriolgicas Competencia: el alumno conocera la utilidad del cultivo bacteriolgico para solicitarlo y utilizarlo en la
intencin de aislar, identificar y erradicar el agente casual de una infeccin bacteriana.

Introdccion al tema: las bacterias hetertrofas (que no producen su propio alimento) son las de mayor
importancia medica y requieren compuestos organicos mas complejos como fuente de carbono y nitrgeno, asi como protenas o sus derivados y tambin requieren carbohidratos y grasas, por lo que se utilizan a nivel laboratorio , medios de cultivo artificiales a los que se adicionan estas sustancias a fin dehacer crecer a los microorganismos en un ambiente artificial bajo condiciones de temperatura, Ph, humedad, controlados. La intencin es aislar al agente patgeno apartir de las muestras biolgicas del sitio de infeccin, simulando las condiciones en la que la bacteria se encontraba en el paciente causando dao. Dependiendo del tipo o la fase de la investigacin, se utilizan diferentes tipos de medios, como:

a)Medios para Aislamiento: se utilizan para sembrar muestras para un aislamiento general o para un
aislamiento selectivo de un organismo o grupo de organismos determinados. En estos medios peden agregarse substancias inhibidoras. Eje: agua peptonada, agar nutritivo

b)Medios para Enriquecimiento: son medios muy ventajosos, ya que estn concebidos para aumentar la
propagacin de ciertos organismos sin favorecer a otros. Son muy utilizados en las muestras entricas, eje: caldo tetrationato, caldo selenito

c)Medios para Identificacion y Diferenciacion: son de varios tipos y comprenden desde los medios
bsicos liquidos con carbohidratos pasando por los semislidos hasta los mas complejos y solidos; son tiles para diferenciar especies bactereologicas eje. SIM, kligler, urea, citrato

d)Medios para Mantenimiento: son utilizados en el transporte de muestras, sin permitir su crecimiento,
solo para mantenerlos vivos y luego proceder a cultivarlos. Ej: Medio de Stuart o de Aimes.

Fundamento:
Los medios de cultivo son necesario para la existencia de los microorganismos ya que aporta las condiciones ptimas para su crecimiento. Cada medio de cultivo contiene concentraciones adecuadas para nutrir a ciertos microorganismos por eso existe la variedad de cultivos; lquidos, solidos, enriquecidos, especficos y diferenciales asi como mucho ms.

Material y Reactivos: *Medios de cultivo preparados en placa: Agar sangre, Agar sal y Manitol, Agar EMB
*Asas Bacteriolgicas *Mechero *Estufa de Cultivo *Portaobjetos *Solucion Salina isotnica *Colorantes de Gram *Microscopio *Papel seda para lentes *Aceite de inmersin

Procedimiento de siembra para cultivo

1)Sembrar las placas petris que contienen a los diferentes agares, esterilizando el asa y dejndola enfriar cada vez que se va inocular. Incubar a 37c por 24 hr. Las cepas seleccionadas para la prctica son de crecimiento relativamente rpido, pero son cepas aisladas de hospital, es decir, ya multitratadas y multirresistentes, por lo que debern manejarse con mucha precaucion, cuidando de no manejar nada fuera del rea esteril (10 cm alrededor de la flama del fuego), tanto por proteccin personal como del resto del grupo. Obviamente, todo se manejara con guantes y con la cerrada para no contaminar su informe, que luego llevaran el resto del dia a todas partes, incluida la vivienda donde habitan. 2)Despues de 24 hr. Anotar las caractersticas que presenta la colonia bacteriana, tomando en

consideracin los siguientes datos. Esto se denomina Morfologia Colonial y arroja informacin importante en la investigacin de la identidad de la cepa aislada.

3)Preparar un frotis. Tocar con asa esteril y fra una de las colonias separadas de uno de los medios de cultivo que presenta mejor el crecimiento de la bacteria y extenderla sobre una laminilla a la que ya se le coloco una gota de solucin salina isotnica. Dejar secar, fijar y teir con la tcnica de Gram para observar al microscopio

Observar y anotar la morfologa y afinidad tintorial de la cepa bacteriana aislada. Con este importante dato, ya tenemos bastante avanzada la investigacin del agente causal, pues dependiendo del tipo de bacteria que resulta, es el camino que tomara la investigacin microbiolgica, ya que tendremos que realizar pruebas bioqumicas para dar con la identidad del microorganismo. La investigacin de la identidad de los gramnegativos es mas compleja que con los cocos grampositivos de importancia medica.

Morfologia Colonial: describir las colonias que crecieron en los medios, guindose en la ilustracin antes mostrada.

En agar sangre

Tubo una forma puntiforme, con elevacin pulivinada, y el borde ondulado. Color morado-rojo. Con olor ftido ha guardado. Tubo forma circular, con elevacin convexa, y su borde entero. Color blanco. Presencia de honogos y colonias Tubo forma irregular, conelevacion plana, y su borde pndulado.

En Sal y Manitol

En EMB

Observacion al microscopio: dibuje y describa lo observado en el frotis de la colonia, comenzando por la morfologa microbiana (coco, bacilo, levadura, cocobacilo, espirilo) su agrupacin (aislado, cadena, ttrada, cumulo o racimo) y su afinidad tintorial (Grammnegativo o Grampositivo). Observaciones: son de color lilaa que significa que son positivas, el frotis nos quedo muy bien ya que si
pudimos distinguer a simple vista y no batallamos

AQU VAS A PONER LA IMAGEN QUE OBSERVASTE Y AUN LADO PONDRAS METERLE ROLLO GRAM POSITIVO O NEGATIVO Y DESCRIBES QUE FUE LO QUE VISTE Y AH ECHALE MENTIRAS AJAJA SI FUERON LEVADURAS COCOS ESPIRILOS SI ESTUVIERON AISLADOS ETC o SI NO DEJALE ESTA IMEGEN

Si el microorganismo aislado resulto ser una levadura y no una bacteria, no se debe continuar con la investigacin bioqumica de identificacin, ya que esta est diseada para bacterias DIAGRAMA DE PRCTICA

PRACTICA Primero se le pone la cantidad necesaria para hacer el agar Despues se disuelve con agua en el matraz se pone en la parrilla a calentar y ya que este caliente se quita de la parrilla y se tapa

se lleva a el refrigerador y ahi se deja Al dia siguiente se saca y se pone a derretir el agar ya que se se derrite se pone cada una en su caja menos el agar-ssangre se saca sangre y se le aadeal agar revolviendolo en el matraz despues ya revuelto se le pone en su caja petri y se ponen a refrigeracion al siguiente dia se sacan y se pone la muestra de exudado faringeo y se meten a la incubadora despues de se saca y se observan las colonias y hongos se toma una pequea parte para teirlo y se lleva al microoscopio

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CONCLUSION:

Mi conclusin es que esta prctica me enseo mucho, ya que aprendi la tcnica para hacer un agar y ha ver los microorganismos que existen y se pueden desarrollar por medios de cultivo tal y como lo hicimos ya con esto, no tendre problemas y no se me dificultara hacer otro. Aprendi las tcnicas que se aplican en el medio de cultivo. Tambin la morfologia bacteriana. Y las caractersticas de hongos, levaduras y bacterias.

NOMBRE DEL ALUMNO: Silvia Sarahi Contreras FIRMA DEL ALUMNO: FIRMA DEL CATEDRAICO

GRUPO: 3BVC

Practica
TINCION DE GRAM
Objetivo: aprender a elaborar la tcnica de tincin de gram y saber que tipos de organismos se encuentran Competencia: el alumno entender el fundamento de la tcnica detincion de Gram para tener la habilidad de diferenciar microscpicamente entre una bacteria Grampositivo y una Gramnegativa y tomar las desiciones teraputicas acorde a la composcicion de la pared de estos agentes infecciosos Introduccin: La tincin de gram es muy fcil y rpida ya que no es laboriosa, la tincin de gram nos
enseara que tipo de gram es resistente la bacteria ya que no es capaz de resistir ciertos colorantes

Fundamento: Tincion de Gram: algunas especies bacterianas, debido a la naturaleza qumica de sus paredes celulares, poseen la capacidad de retener el cristal violeta, aun luego del tratamiento con un decolorante organico como la mezcla de alcohol y acetona. Tales bacterias se denominan Gram positivas, bacterias en que su pared celular contiene el 80% de peptidoglucano capturando el primer colorante al que son expuestas tindose de color morado intenso. Las bacterias que no toman la coloracin primaria (cristal violeta) tienen una membrana externa, con un contenido importante de lpidos, requirindose ser tratadas con el decolorante (solucin alcohol-acetona) para poder capturar el colorante de contraste, que en este caso es la Safranina, de color rojo; estas bacterias se denominan Gram negativas, pues no retienen el colorante primario.

Material y Reactivos * hisopos esteriles *abatelenguas *portaobjetos *mechero de bunsen *agua destilada Colorantes y soluciones de Gram Cristal violeta, yodo de gram, solucin de alcohol-acetona y Safranina -aceite de inmersin -microscopio y papel seda

OBTENCION DE UNA MUESTRA DE EXUDADO FARINGEO La muestra a examinar ser exudado farngeo, dado que es una muestra que contiene una microbioa mixta, donde el alumno podr observar una gran diversidad de microorganismos de distintas morfologas y caractersticas de tincin.

Tecnica para la preparacin de la muestra 1-Pedir al paciente que habr la boca para exponer faringe; 2-Colocar un abatelengua e introducir un aplicador teniendo cuidado de no tocar los carrillos ni la lengua y girar el hisopo al llegar a la faringe y amgdalas 3-Colocar la muestra suavemente en un portaobjetos con movimientos circulares 4-Dejar sacar el aire y fijar con el mechero, procurando no quemar la muestra

Tecnica para la tncion de Gram: 1)sumergir el frotis preparado en el vaso de Coplin que contiene el colorante cristal violeta durante 1 min. 2)enjuagar con agua de la llave bajo un chorro suave 3)sumergir en la solucin de yodo de Gram por 1 min. 4)repetir el enjuague con agua de la llave 5)agregar unas gotas del decolorante de alcohol acetona, hasta ver que ya no arrastra color 6)repetir el enjuague con agua de la llave 7)sumergir en el colorante safranina por 1min. 8)repetir el enjuague con agua de la llave; secar el aire Resumen de la tcnica de Tincin de Gram Examen Microscopio Para examinar al microscopio, es necesario que el frotis teido ya se encuentre seco. Colocarlo sobre la platina y sujetarlo con la pinza. Limpiar con antemano las lentes de lo oculares y objetivos con el papel de seda especial para lentes 1)con el objetivo de minimo aumento localizar la altura a la que se encuentra la muestra, subiendo la platina subiendo la platina con el tornillo macrometrico y observando a travs de los oculares. 2)una vez localizada la muestra , rotar el revolver para colocar el objetivo de 40x. subir el condensador a la mitad y abrir el diafragma a la mitad 3)colocar el objetivo 100x subir subir el condensador a su tope superior y abrir totalmente el diafragma pues requiere de la mxima luz posible.

Notas: en una muestra de exudado farngeo, es comn observar clulas epiteliales, filamento de moco, algunos leucocitos y distintas bacterias. Pueden incluso observarse algunas levaduras que usualmente son positivas al gram. tanto las clulas epiteliales como los leucocitos, no retendrn el colorante primario, ya

que en su pared no hay molculas afines al cristal violeta, por lo que se observaran de color rojo, pero para estas estructuras no se utiliza el termino gram negativo, ya que estas no son bacterias para clasificarlas Resultados: Dibuje lo observado describiendo lo siguiente: 1)presencia y cantidad de leucocitos 2)morfologa microbiana 3)agrupacin 4)afinidad tintorial Su agrupacion es de racimos yexesivamente juntos. Es puntiforme y con gram positivo

conclusin: en conclusin aprendia a identificar fcilmente microorganismos con la tincion de gram ya que me salio gram positivo. Vimos diferentes estructuras y formas

EXUDADO FARINGEO primero se toma la muestra de exudado fringeo despues se pone en el porta se le aade cristal violeta se limpia con agua se le aade yodo por 1min se limpia con agua se pone alcohol acetona por 10 seg se limpia con agua Se le aade sefarina por 10 min.

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NOMBRE DEL ALUMNO: Silvia Sarahi Contreras FIRMA DEL ALUMNO: FIRMA DEL CATEDRAICO

GRUPO: 3BVC