Tcnicas de preparo de amostra

Etapas de uma anlise

AMOSTRAGEM Dissoluo Extrao/Prconcentrao Derivatizao IDENTIFICAO e, ou QUANTIFICAO PROCESSAMENTO DOS RESULTADOS AVALIAO DOS RESULTADOS

Finalidade das operaes de preparo de amostras

TRITURAO
- reduo de tamanho das partculas; - homogeneizao da amostra.

Triturao

PREPARO DA AMOSTRA

DECOMPOSIO
- dissoluo do material slido da amostra; - separao de substncias interferentes; - pr-concentrao de elementos.

PR-CONCENTRAO
Compatibilizar: - a capacidade de processamento do sistema; - a sensibilidade de deteco desse sistema; - a demanda do procedimento analtico.

Preparao da amostra
Srie de etapas necessrias para transformao da amostra de tal forma que ela se torne apropriada a uma anlise

CLEAN-UP / LIMPEZA
Eliminar: - constituintes que possam danificar o sistema analtico; - materiais que possam interferir com a deteco / quantificao dos analitos de interesse.

Fatores a serem considerados na separao de analitos da matriz e dos interferentes

Propriedades fsico-qumicas dos constituintes da amostra; Concentrao de analitos e interferentes na amostra; Caractersticas da instrumentao disponvel; Requisitos tcnico-gerenciais.

Principais processos fsicofsico-qumicos de separao usados em metodologias de preparo de amostras

Partio ou absoro Adsoro (superfcie): fisiosoro ou quimiossoro Volatilizao

TCNICAS DE PREPARO DE AMOSTRAS PARA ANLISES DE INORGNICOS

EXTRAO Decomposio da amostra cidos inorgnicos Fundentes Combusto Extrao com solvente PR-CONCENTRAO Extrao lquido-lquido SPE Extrao por ponto nuvem Eletrodeposio Precipitao Troca inica

Mecanismo de absoro e adsoro.

Mtodos de extrao DECOMPOSIO COM CIDOS FORTES INORGNICOS OU BASES

Aquecimento em sistemas convencionais ou microondas

PRINCIPAIS CIDOS UTILIZADOS

HCl: Bom para amostras inorgnicas, limitado para amostras orgnicas. Aplicao: xidos, sulfetos, carbonatos, fosfatos e metais que se oxidam mais facilmente que o hidrognio. HNO3: Perda de halognios, enxofre e nitrognio por volatilizao em sistemas abertos. Aplicao: Concentrado e a quente dissolve todos os metais mais comuns, exceto Al e Cr. HNO3 e calor, ou com H2O2 ou Br2 determinao de metais . H2SO4: A maioria dos compostos inorgnicos so desidratados e decompostos nessa temperatura, podendo ser eliminados da amostra na forma de CO2 e H2O. Aplicao: Metais e ligas metlicas (a quente).

Princpio: Suspenso da amostra em cido aquecida at que haja o desaparecimento da fase slida presente na amostra.

M + nH+
Sistemas convencionais:

Mn+ + n/2H2
Microondas:
Focalizado Convencional

Placa aquecedora, bico de Bnsen, banho-maria, estufa, mufla

DECOMPOSIO POR MICROONDAS

H3PO4: Decompem-se conforme Aplicao: xidos refratrios ( quente). a temperatura do meio.
Pode ser realizada em frascos aberto ou fechados. Principal vantagem frente a sistemas convencionais: velocidade. Frascos fechados temperaturas mais altas, menores quantidades de reagentes, eliminao de perdas de compostos por volatilizao, fcil de ser automatizada (reduo no tempo de preparo). Tipos de frascos: Presso moderada (8 atm), alta presso 80 atm, temperatura mxima: 250 oC, mximo de 1 g de amostra) e presso atmosfrica (frascos abertos).

HClO4: Concentrado e a quente um poderoso agente oxidante. Aplicao: Matria orgnica j parcialmente oxidada com HNO3. Ligas de ferro e ao inoxidveis que no so atacados por outros cidos minerais . HF: Excesso deve ser removido pela adio de H2SO4 ou HClO4. Aplicao: Rochas e minerais a base de silicatos. Misturas oxidantes: HCl:HNO3 (3:1). Adio de Br2 ou H2O2 acelera a oxidao de materiais orgnicos presentes na amostra. Outras possibilidades: HNO3:HClO4 (matria orgnica). HF: HNO3: ligas, aos, carbetos refratrios, nitritos e boretos de titnio. Cl2 ou HClO4 em HCl: materiais de difcil dissoluo. ex: irdio.

Presso moderada

Alta presso.

DECOMPOSIO DE MATERIAIS INORGNICOS POR FUNDENTES

Usada para digerir silicatos, alguns xidos minerais e algumas ligas de ferro. Proporo de 2 a 20 x. Atingi-se temperaturas de 300C a 1.000C. Aps fuso solubilizao com solvente adequado.

Fundentes comuns
Fundente
Na2CO3 (Fundente bsico) Na2CO3 + agente oxidante (KNO3, KClO3 ou Na2O2) LiBO2 ou LiB4O4 ou Na2B4O7 (Fundente bsico) NaOH ou KOH (Fundente bsico) Na2O2 (Fundente bsico) K2S2O7 (Fundente cido) B2O3 (Fundente cido) CaCO3 + NH4Cl

Ponto de fuso (oC)

851 ---

Tipo de cadinho
Platina Platina (exceto com Na2O2), Nquel Platina, Ouro, Carbono vtreo Ouro, Prata, Nquel Ferro, Nquel Platina, Porcelana Platina

Tipo de substncia decomposta

Silicatos. Amostras contendo slica, alumina, fosfatos e sulfatos pouco solveis Amostras que requerem um ambiente oxidante (S, As, Sb, Cr etc) Minerais aluminossilicatos, carbonatos, escrias e cermicas Silicatos, carbeto de silcio e certos minerais Oxidante poderoso para sulfetos, ligas de Fe, Ni, Cr, Mo, W e Li insolveis em cido xidos pouco solveis e amostras contendo xidos Silicatos e xidos em que metais alcalinos devem ser determinados Produo de CaCl2 e CaO durante aquecimento do fundente. Empregado para silicatos em que metais alcalinos devem ser determinados

Desvantagens:
Problemas de segurana; Contaminao da amostra com impurezas presentes nos fundentes; Presena elevada de sais aps a fuso, podendo dificultar a anlise posterior. Devido s altas temperaturas de fuso, comum ocorrerem perdas por volatilizao; Contaminao da amostra por ataque do fundente ao recipiente de anlise.

--318 380 Decompe -se 300 577

---

Nquel

DECOMPOSIO DE AMOSTRAS ORGNICAS POR COMBUSTO

Amostra queimada na presena de excesso de oxignio e os produtos formados absorvidos em um lquido (ex: sol. carbonato de clcio) que analisado. Amostra de 2 a 200 mg: slido papel de filtro, lquido cpsula de gelatina

Fontes de erros na decomposio e dissoluo de amostras

Dissoluo incompleta dos analito; Situao ideal: o reagente selecionado dissolve completamente a amostra e no somente o analito . Perdas do analito por volatilizao; Ex: Em cido forte: CO2, SO2, H2S, H2Se, H2Te, etc. Reagente alcalino: NH3. HF: reage com silicatos e compostos contendo boro para produzir fluoretos volteis (As, B, Ge, Se, Ta, Nb, Ti e Te). HCl: Formao de cloretos volteis: SnCl4, GeCl4, SbCl3, AsCl3 e HgCl2. Cl- e H2SO4 ou HClO4 concentrados: Bi, Mn, Mo, Ta, V e Cr. xidos volteis em solues cidas quentes : tetrxido de smio (OsO4) e de rutnio e heptxido de rnio (ReO7). Introduo do analito como um contaminante do solvente; Introduo de contaminantes a partir da reao do solvente com as paredes do frasco. Ocorre em temperaturas elevadas e importante na anlise de traos.

Usada na determinao de C, H, N, S, P, As, B, O, halognios e alguns metais em compostos orgnicos; Usado em anlises por espectroscopia de absoro ou emisso atmicas; Vantagem: anlises rpidas.
Combusto de Schnniger. Frasco de 300 a 1000 mL.

Tcnicas de pr-concentrao para anlise de compostos inorgnicos

Precipitao
Seguida de solubilizao do precipitado e anlise da amostra Exemplos de precipitantes orgnicos Precipitao deve ser completa

PR-CONCENTRAO Extrao lquido-lquido SPE Extrao por ponto nuvem Eletrodeposio Precipitao Troca inica cida ou bsica Vantagens: Simplicidade e Formao de produto uniforme.

Troca inica
Imobilizao de grupos funcionais em suporte slido

Anlise direta da resina (Fluorescncia de raios X); B+(sol) Anlise aps eluio do material. Resinas comerciais: polmeros ou copolmeros de estirenodivinilvenzeno. Ex: CHELEX 10 (grupo funcional cido iminoactico): utilizada para a maioria dos ons metlicos. PuroLite (sulfonato de poliestireno): remoo de ctions.

(Polimero

ResinaA-)B ++

C+(sol)

(Polimero Resina

ResinaA-)C ++

Exemplos de resinas de troca inica

TCNICAS DE PREPARO DE AMOSTRAS PARA COMPOSTOS ORGN ICOS

Extrao em fase gasosa

Extrao com fluido supercrtico

Extrao com lquido pressurizado ASE

Extrao com lquidos LLE

Extrao com sorventes SPE

Headspace Esttico Dinmico

gua sub-crtica

Soxhlet MASE

MSPD SPME SBSE

Columnswitching

EXTRAO LQUIDO-LQUIDO
Extrao de analitos orgnicos ou pr-concentrao de analitos inorgnicos.

Extrao lquidolquido-lquido convencional

Volume de amostra com concentrao de analito Extrair com pequeno volume de solvente Coletar solvente extrator Extrair novamente a amostra com volume de solvente Coletar solvente e combinar com extrato da etapa anterior Extrair novamente com o solvente Coletar solvente e combinar com extraes anteriores

Analitos inorgnicos: reao de coordenao, quelao ou associao inica (espcie final neutra) antes da extrao com solvente orgnico; Analitos orgnicos: extrao direta com solvente orgnico.

Contnua. (a) solvente de extrao Convencional.

mais denso que lquido extrado e (b) menos denso que lquido extrado.

ANALISAR EXTRATO

Ag, Au, Bi, Cd, Cu, Pb, Zn: Metilisobutilcetona (medida direta AA)

Extrao lquidolquido-lquido
VANTAGENS Simples e rpida; Aplicvel a uma gama de matrizes e compostos; Alto grau de separao. DESVANTAGENS Seletividade ruim; Pr-concentrao limitada (50-100 x); Grande consumo de solventes orgnicos; Formao de emulso em muitos casos (perda de analito); Grande produo de resduos lquidos.

Microextrao em fase lquida

(LPME, Liquid Phase Microextraction)

Requisitos solvente LPME

Baixa solubilidade com a gua; Baixa volatilidade; Ser cromatografvel.

LPME com membrana protetora

Extrao em fase slida (SPE)

Dispositivos de SPE
CARTUCHOS - Tubos ou seringas - Corpo de polietileno - Capacidade: 50 mg a 10 g de amostra

Vantagens LPME Requer pequeno volume de solvente; Modos de extrao direta e atravs do headspace.

DISCOS - Forma e aparncia similares a papel de filtro - Partculas de sorvente dispersas em malha de PTFE - Dimetro 47 mm a 70 mm, espessura 0,5 mm

Etapas de extrao / concentrao de analitos por SPE

Mecanismo da prpr-concentrao SPE

A) Condicionamento B) Adio da amostra

C) Lavagem D) Eluio dos analitos

Sorventes para SPE

Fases estacionrias para HPLC Fases reversas: C8, C18, etc. Fases normais: CN, diol, etc. Adsorventes xidos inorgnicos e congneres (slica, alumina, florisil) Carves ativos grafitizados ou microporosos Orgnicos (resinas de poliestireno) Trocadores de ons orgnicos e inorgnicos Sorventes de alta seletividade / especificidade Materiais de acesso restrito Imunosorventes Polmeros com impresso molecular (MIP)

Limitaes materiais sorventes SPE

Matriz
Slica Alumina

Limitaes
2 < pH < 8 3 < pH < 12

Resina pH > 10 Poliestireno / divinilbenzeno Resina de modo misto Sem restries de pH

Capacidade retentiva de dispositivos de SPE

DEPENDE Massa de sorvente no dispositivo; Afinidade do sorvente pelo analito; Volume de amostra processado; Concentrao e natureza das impurezas. Sobrecarga do cartucho / disco; Rendimento de extrao baixo; Perda de reprodutibilidade. Dificuldade de eluio; Maior tempo de processamento.

Mecanismos de fluxo SPE

Vcuo Gradiente Presso

MASSA DE SORVENTE DEFICIENTE MASSA DE SORVENTE EXCESSIVA

Parmetros Operacionais Relevantes SPE

Natureza do sorvente; Solventes (amostra, lavagem, eluio ...); Formato do dispositivo extrator; Modo de operao; Vazo da amostra e do solvente.

Microextrao em fase slida

(SPME, Solid Phase Microextraction)

Holder SPME

Fibra SPME

Fibras de SPME disponveis comercialmente

FIBRA PDMS PDMS/DVB StableFlex ESPESSURA DO FILME (m) 100 b 30 b 7b 65 a 60 a 65 a USO RECOMENDADO GC/HPLC GC HPLC GC APLICAES Volteis Semivolteis no-polares No polares de alta MM Volteis, aminas e nitroaromticos Aminas e compostos polares Volteis, aminas e nitroaromticos Semivolteis polares Gases e compostos de baixa MM lcoois e compostos polares Surfactantes e compostos polares Anlise de traos

Poliacrilato Carboxen/PDMS StableFlex Carbowax/DVB StableFlex Carbowax/TR

85 a 75 a 85 a 65 a 70 a 50 a 50/30 a

GC/HPLC GC GC HPLC GC

(A) Fibra retrada na agulha, (B) Fibra exposta.

StableFlex DVB/Carboxen/PDMS
a: fase ligada, b: fase no ligada

Cromatograma obtido nas anlises atravs do headspace de amostras de lquor de cupuau

Modos de extrao em SPME: (a) direta, (b) headspace, (c) com proteo de membrana.

1 dimetilsulfeto 2 cido actico 9 2,5-dimetilpirazina 10 2,3-dimetilpirazina 11 benzaldedo 12- 2,3,5-trimetilpirazina 15- benzenacetaldedo 17- tetrametilpirazina 18- linalol 21- 2-metilpirazina

Oliveira et al., J. Chrom. A, 1025 (2004) 115 .

Processos de extrao e dessoro em uma anlise por SPME por cromatografia gasosa.

Parmetros operacionais mais relevantes

Modo de extrao; Natureza da fibra; Tempo e temperatura de extrao; Condicionamento da amostra; Temperatura e tempo de dessoro (GC); Natureza do solvente e tempo de dessoro (HPLC).

SPME x SPE
SPME Vantagens Simples e rpida; no so usados solventes; Aplicvel a extraes diretas e no headspace; Fibras reutilizveis. Desvantagens de fase extratora; Massas extradas limitadas pelo pequeno volume

Disponveis comerciais para SPME fornecidos por apenas um fabricante. Alta sensibilidade; Verstil. Desvantagens Uso obrigatrio e extensivo de solventes orgnicos; Operao pode ser demorada e complicada; Aplicao a extraes diretas. SPE Vantagens

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Mtodos de Headspace
Analitos volteis em amostras lquidas ou slidas

Estticas

Dinmicas

Parmetros operacionais relevantes na extrao por headspace dinmico

Quantidade de amostra processada Temperaturas nas etapas de purga e dessoro Vazo de gs e tempo de purga Dimenses do trap e natureza do material sorvente

Amostra lacrada em frasco hermtico e os analitos so coletados no headspace do frasco

Esttico

Analitos volteis em uma alquota de amostra so arrastados para um dispositivo apropriado de coleta com um fluxo contnuo de gs inerte

Carvo ativo, Carvo grafitizado (Carboxen ), Slica, Tenax , Chromosorb 102, Chromosorb 104, Porapaq Q
Dispositivo de purga e aprisionamento dinmico. dinmico.

Headspace esttico
VANTAGENS
Simples; No requer instrumentao sofisticada.

DESVANTAGENS
Pr- concentrao limitada; Resultados reprodutveis depende de termostizao rigorosa da amostra; Injeo manual requer manipulao cuidadosa.

Tendncias das tcnicas de preparo de amostra

Menor manipulao automao Miniaturizao microextraes No uso de solventes orgnicos on on-line

Headspace dinmico
VANTAGENS
Altssima sensibilidade; Facilmente automatizvel; Operao robusta.

DESVANTAGENS
Necessita de equipamento de alto custo; Cromatgrafo dedicado; Amostras aquosas.

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Derivatizao
Converso qumica do analito a uma forma que seja detectvel

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