Universidad Csar Vallejo

Facultad de Ingeniera
Escuela de Ingeniera Agroindustrial
EFECTO DE LOS SUSTRATOS TALCO INDUSTRIAL, HARINA DE PAPA (Solanum tuberosum) Y ALMIDN DE MAZ (Zea mays) EN LA VIABILIDAD DE ESPORAS DE Paecilomyces lilacinus

TESIS PARA OBTENER EL TITULO PROFESIONAL DE: INGENIERO AGROINDUSTRIAL

Autor: Miano Yucra, Kristy Normy Asesor Dr. Lezama Asencio, Pedro

Trujillo, Per 2013

EFECTO DE LOS SUSTRATOS TALCO INDUSTRIAL, HARINA DE PAPA (Solanum tuberosum) Y ALMIDN DE MAZ (Zea mays) EN LA VIABILIDAD DE ESPORAS DE Paecilomyces lilacinus .

Kristy Normy Miano Yucra Autora

Presentada a la Escuela de Ingeniera Agroindustrial de la Universidad Csar Vallejo para su aprobacin.

Dr. Jos Gonzalez Cabeza Presidente

Ing. Gabriela Barraza Jauregui Secretario

Dr. Pedro Lezama Asencio Vocal

TRUJILLO PER 2013

DEDICATORIA Se lo dedico con todo cario a

A Dios por haberme permitido llegar hasta este punto y haberme dado salud para lograr mis objetivos, adems de su infinita bondad y amor.

A mi madre Mnica por haberme apoyado en todo momento, por sus consejos, sus valores, por la motivacin constante que me ha permitido ser una persona de bien, pero ms que nada, por su amor.

A mis maestrospor su gran apoyo y motivacin para la culminacin de nuestros estudios profesionales y para la elaboracin de esta tesis.

A mis amigos por apoyarnos mutuamente en nuestra formacin profesional y que hasta ahora, seguimos siendo amigos, en especial a Barbara Zapata, por haberme ayudado en la realizacin de este trabajo.

AGRADECIMIENTO

Al finalizar un trabajo arduo como el desarrollo de tesis se reconoce la importante participacin de personas e instituciones que han facilitado las cosas para que este trabajo llegue a un feliz trmino. Es por ello, que es para m un verdadero placer utilizar este espacio para ser consecuente con ellas, expresndoles misagradecimientos. A mi madre, Mnica Yucra Ccasa por el apoyo incondicional que me brind a lo largo de la carrera. A mis tas Sonia Yucra Ccasa y Clara Yucra Ccasa que a pesar de la

distancia, siempre estuvieron pendientes de mi desarrollo acadmico, desendome lo mejor y brindndome todo su apoyo y amor. A la empresa SOLAGRO S.A.C. por haberme brindado su apoyo en la utilizacin de los laboratorios durante el desarrollo de este trabajo. Al personal dentro de la empresa, en especial a la Ing. Diana Moreno, Sra Janet Alayo Iko, por brindarme su apoyo y motivacin para seguir adelante en la realizacin del desarrollo de tesis. Tambin me gustara agradecer a mi profesor asesor Dr. Pedro Lezama

Asencio, por sus consejos, su enseanza y ms que todo por su amistad. Y a todas aquellas personas que de una u otra forma, colaboraron o participaron en la realizacin de esta investigacin, hago extensivo mi ms sincero agradecimiento.

LA AUTORA

PRESENTACIN

Seores Miembros del Jurado:

En cumplimiento con las disposiciones vigentes del reglamento de Grados y Ttulos de la Facultad de Ingeniera de la Universidad Cesar Vallejo de Trujillo, someto a su consideracin y elevado criterio el presente informe de Tesis intitulado: EFECTO DE LOS SUSTRATOS TALCO INDUSTRIAL, HARINA DE PAPA (Solanum tuberosum) Y ALMIDN DE MAZ (Zea mays) EN LA VIABILIDAD DE ESPORAS DE Paecilomyces lilacinus.

Es propicia esta oportunidad para manifestar nuestro sincero reconocimiento a nuestra alma Mater y toda su plana docente, que con su capacidad y buena voluntad contribuyeron a nuestra formacin profesional.

Trujillo, Diciembre del 2012

MIANO YUCRA, KRISTY NORMY

NDICE GENERAL DEDICATORIA iii AGRADECIMIENTO.. PRESENTACIN. iv v

RESUMEN. viii ABSTRACT ix 1. INTRODUCCION .. 1.1. PROBLEMA DE INVESTIGACION . 1.1.1. Realidad Problemtica ... 1.1.2. Formulacin del Problema.. 1.1.3. Justificacin ...... 1.1.4. Antecedentes ........ 1.1.5. Objetivos..... 1.1.5.1. 1.1.5.2. 1.2. Especficos 1 2 2 2 3 4 6

General 6 6

MARCO REFERENCIAL 6 1.2.1. Marco Terico.... 1.2.1.1. 1.2.1.2. Hongos Entomopatogenos.... Paecilomyces lilacinus... 6 6 7 7 7 8 9 9

1.2.1.2.1. Ubicacin Taxonmica 1.2.1.2.2. Caractersticas. 1.2.1.2.3. Accin frente a Nematodos 1.2.1.2.4. Bioplaguicidas a base de P.lilacinus 1.2.1.3. Sustrato.

1.2.1.3.1. Elaboracin de sustratos o formulados 10 1.2.1.4. Esporas.. 12 1.2.1.4.1. Viabilidad de las Esporas 12 1.2.1.4.2. Germinacin de esporas. 12 1.2.1.4.3. Factores que afectan la germinacin de esporas.. 13 1.2.2. Marco Conceptual 13 2. MARCO METODOLOGICO. 16 2.1. HIPOTESIS 16

2.2.

VARIABLES. 16 2.2.1. Definicin Conceptual.. 16 METODOLOGIA 17 DISEO EXPERIMENTAL. 18

2.3. 2.4.

3. RESULTADOS. 20 4. DISCUSIONES.. 26 5. CONCLUSIONES.. 28 6. SUGERENCIAS 29 7. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.. 30 8. ANEXOS. 34

INDICE DE CUADROS Cuadro 1. Operacionalizacin de variables 16 Cuadro 2. Recuento de conidias de P. lilacinus en tres sustratos diferentes por tres meses. 20 Cuadro 3. ANVA para recuento de conidias.. 21 Cuadro 4. ANVA para viabilidad de esporas de P. lilacinus.. Cuadro 5. TUKEY aplicado en recuento de conidias. 23 23

Cuadro 6. TUKEY de viabilidad de P.lilacinus 25

INDICE DE FIGURAS Figura 1. Esquema experimental para determinar el efecto de los sustratos talco industrial, fcula de papa (Solanum tuberosum) y almidn de maz (Zea mays) en la viabilidad de esporas de Paecilomyces lilacinus. 19 Figura 2. Cambio en el recuento de conidias de P. lilacinus en cada uno de los sustratos despus de 3 meses de anlisis Figura 3. Cambio en la viabilidad de P. lilacinus en cada uno de los sustratos despus de 3 meses de anlisis.. 24 22

RESUMEN

Debido a los ya comprobados efectos adversos derivados del uso indiscriminado de plaguicidas los investigadores se han abocado a la bsqueda de alternativas no qumicas para el manejo de plagas agrcolas, siendo el control biolgico una de las alternativas ms promisorias. El objetivo principal de la presente investigacin fue encontrar el sustrato ms adecuado y econmico que permita mantener la viabilidad de la espora del hongo entomopatgeno y antagonista Paecilomyces lilacinus por mayor

tiempo en almacenamiento, adems de asegurar su efectividad en el campo de cultivo. Se utiliz tres tipos de sustratos (talco industrial, harina de fcula de papa y almidn de maz), a los cuales se inocul 2g de espora pura del hongo P. lilacinus, adems de un testigo (sustrato en fresco ms esporas de dicho hongo). Estas muestras se mantuvieron en almacenamiento por un espacio de 3 meses bajo condiciones de refrigeracin entre 2-4C, Se encontr diferencias significativas (p < 0.05) en el recuento de conidias entre el primer y ltimo mes de anlisis de viabilidad del hongo Paecilomyces lilacinus almacenado en sustrato fresco, harina de papa (Solanum tuberosum), almidn de maz (Zea mays) y talco industrial. La harina de papa (Solanum tuberosum)fue el sustrato que present mayor recuento de conidias con 1.6x1010 cond./mL, en comparacin con los sustratos almidn de maz (Zea mays) con un recuento de 1.57x1010 cond./mL y talco industrial con 1.24x1010 cond./mL. El porcentaje de viabilidad fue mayor en el sustrato harina depapa (Solanum tuberosum) con 98.67%, en comparacin con los sustratos almidon de maz (Zea mays)con 97.67% y talco industrial con 97.33%. Se identific que la harina de papa(Solanum tuberosum) fue el sustrato ms adecuado para el el almacenamiento de la espora del hongo Paecilomyces lilacinus

ABSTRACT

Currently against the plenty use of pesticides around the world, we have the challenge of improve the Biological Control, such as the use of

entomopathogenic fungus Paecilomyces lilacinus. For that, in order to find an optimal and cheapest substrate for spores survive in storage and better effectuality in land soil, this research was made, using like substrates talcum powder, potatoes flour and maize starch. All were inoculated with two grams of pure spores of P. lilacinus, keeping in refrigeration between 2 - 4C. We found significant differences (p <0.05) in the count of conidia between the first and last month's analysis of the fungus P. lilacinus feasibility stored in fresh substrate, flour potato (Solanum tuberosum), maize starch (Zea mays) and talc industrial.Potato flour (Solanum tuberosum) was the substrate showed higher counts of conidia with 1.6x1010 cond. / mL, compared with corn starch substrates (Zea mays) with a count of 1.57x1010 cond. / mL and industrial talc with 1.24x1010 cond. / mL.The viability percentage was higher in the substrate flour potato (Solanum tuberosum) with 98.67%, compared with the substrates Cornstarch (Zea mays) with 97.67% and 97.33% industrial talc.It was identified that the flour potato (Solanum tuberosum) was the most suitable substrate for storing the fungus Paecilomyces lilacinus spore.

I.

INTRODUCCIN

Debido a los ya comprobados

efectos adversos derivados del uso

indiscriminado de plaguicidas los investigadores se han abocado a la bsqueda de alternativas no qumicas para el manejo de plagas agrcolas. Una de las alternativas ms promisorias es el control biolgico que incluye el control microbiano a travs del uso productos elaborados en base a hongos, bacterias y virus, conocidas en conjunto como bioplaguicidas. De estos, los hongos constituyen uno de los grupos de mayor importancia debido a la facilidad que ofrecen en cuanto a su aislamiento, produccin masiva y formulacin. El uso de estos microorganismos presenta un

inters mltiple; porque permite reducir el riesgo de sus residuos en los alimentos, cuando se consumen en fresco, como en el caso de numerosos productos hortcolas. Por otro, aumenta la seguridad laboral del agricultor y contribuye a preservar el medio ambiente, respondan a una mediante programas que

agricultura de manejo sostenible, que responda a la

creciente preocupacin de nuestra sociedad (Riva, 2007).

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1.1.

PROBLEMA DE INVESTIGACIN

1.1.1. Realidad problemtica

Actualmente, la produccin de hongos entomopatgenos para el control biolgico de nematodos radiculares en las plantas es una de las soluciones ms buscadas, por lo cual se considera importante emplear sustratos viables ideales para la comercializacin de dichos hongos, entre ellos de manera semi industrial las esporas de Paecilomyces

lilacinus, debido a su efectividad como controladora en nematodos de los gneros Meloidogyne, Pratylenchus y Radophulus y en algunos insectos como mosca blanca y chinches; actuando tambin como un buen colonizador de raz y competidor de rizsfera (Mont, 2002). En la actualidad existen en el Per empresas comercializadoras de Paecilomyces lilacinus como producto fresco, por ejemplo Productos Biolgicos para la Agricultura E.I.R.L. (PBA.E.I.R.L) en Lima-Per, que ayuda al control de nematodos en los cultivos. En Mxico empresas como NATURALMENTE PURESA que comercializa este hongo entomopatgeno de manera industrializada, es decir formulado, que les permite prolongar el tiempo de vida til del producto y la venta de esporas como producto seco, generando menor costo al productor y facilidad de obtencin al agricultor. Es por esto que en el presente proyecto de investigacin se trabajar con tres tipos de sustrato: Talco industrial, harina de papa y harina de maz para analizar la viabilidad de esporas de Paecilomyces lilacinus producida por la empresa SOLAGRO. SAC ubicado en la ciudad de Trujillo departamento de La Libertad.

1.1.2. Formulacin del problema

Cul ser el efecto de los sustratos talco industrial, harina de papa (Solanum tuberosum) y almidn de maz (Zea mays) en la viabilidad de esporas de Paecilomyces lilacinus?

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1.1.3. Justificacin

La mayor parte de los insectos que atacan a las plantas cultivadas tienen enemigos naturales que los parasitan y matan, produciendo as una reduccin considerable en su poblacin. As, entre los principales hongos entomopatgenos tenemos a:Beauveria, Metarhizium y

Paecilomyces, cuyo uso es un mtodo importante de control. Sin embargo, el de mayor uso es la especiePaecilomyces lilacinus, por tener un gran rango de hospedantes y utilizado para controlar diversos

gneros de fitonematodos comoMeloidogyne,PratylenchusyRadophulus en distintos cultivos (Caedo y Ames, 2004). En el Per se han trabajado en programas para el control de nematodos, observando que atacan tanto a estados mviles de estos nematodos y a las hembras sedentarias, pero es especialmente agresivo contra los huevos. Parasita las hembras de los nematodos patgenos, deforma su estilete, destruye sus ovarios y disminuye la eclosin de los huevos (Caedo y Ames, 2004). A pesar de su importancia, no se tiene un sustrato ideal para su comercializacin como producto formulado, es decir un producto basados casi en su totalidad a unidades infectivas del hongo (Riva, 2007). Frente a esta situacin se viene comercializando producto fresco refirindose como tal al crecimiento de hongos (incluyendo unidades efectivas) sobre granos de cereal que representa el 99% del peso total, los cuales son elaborados de manera semi artesanal ocasionando una demora de atencin de pedidos urgentes como mnimo de 20 das. Por esta razn se investigar la viabilidad de esporas de Paecilomyces lilacinus en sustratos econmicos y de fcil obtencin para disminuir los inconvenientes presentados hasta ahora como: minimizar costos de produccin y trasporte de la empresa comercializadora, reducir el espacios en almacn de producto terminado e incrementar el apoyo al desarrollo del manejo orgnico de plagas colaborando con la conservacindel medio ambiente.

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1.1.4. Antecedentes

A partir del aislamiento del hongo Paecilomyces lilacinus solubilizador de fosfatos obtenido de cultivos de arroz en el Municipio de Valledupar, Badillo y Sand (2010) masiva con miras al evaluaron la posibilidad de su propagacin diseo de un producto biofertilizante,

determinndosesu velocidad de crecimiento en medio mnimo de sales Czapeck-dox slido suplementado con melaza y lactosuero, utilizando 7 concentraciones de cada sustrato (2,5%; 5%; 10%; 20%; 30%; 40% y 50%), de la cual se seleccionaron las 3 concentraciones en las cuales el hongo present mayor crecimiento. Para el medio con melaza se determin que eran a las concentraciones de 2,5%; 5% y 10%; con lactosuero 10%, 20% y 30%, evalundose en cada uno su cintica de crecimiento. Se encontr que a una concentracin de melaza del 10% se obtiene el mejor desarrollo de micelio y conidios por mL, y en el medio con lactosuero al 20% se obtuvieron mejores resultados.

Vargas (2011) estudi la viabilidad de las esporas puras almacenadas en refrigeracin a 4-6C a travs del tiempo, los resultados indicaron que a los 5 meses aun conservan una viabilidad superior al 91,85%. Un segundo estudio se realiz en formulaciones lquidas de Paecilomyces lilacinus producidas por Novagri S.A.C., evalundose la viabilidad en dos tratamientos: En refrigeracin a 5 C (A), y en lugar fresco y seco a una temperatura de 21-26C (B). Los resultados mostraron que en A el formulado puede almacenarse refrigerado hasta 6 meses sin mostrar un valor de viabilidad menor al 91,2% en el sexto mes; mientras que bajo el tratamiento B, luego de 4meses, la viabilidad disminuy hasta un 90,0%. Figueroa et al, (2007) emplearon 6 sustratos naturales (cebada, arroz, avena, frjol, trigo y soya) para la propagacin masivadel hongo entomopatgeno Paecilomyces. fumosoroseusutilizandodos cepas: una nativa y una importada, bajo condiciones de laboratorio,determinando la taza de esporulacin de ambas cepas en cada uno de los medios. Con la evaluacoin se determin que la concentracin con cebada mostr la mayor productividad con
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para la cepa importada y

para la cepa nativa, seguido en rendimiento por avena y el arroz como medios. Estadsticamente se encontraron diferencia con respecto a la esporulacin entre los diferentes sustratos. Carr, et al (2003) evaluaron la reproduccin de las cepas Pz-5 y LBPf-4 dePaecilomyces fumosoroseus usando diferentes sustratos (cabecilla de arroz, cscara de arroz), tanto por va lquida como slida, realizando sus controles de calidad. Los resultados mostraron la posibilidad de utilizar la cabecilla de arroz como soporte slido para la propagacin de este microorganismo, donde se alcanzan concentraciones de 8-9 x 108 con/g, mientras que la combinacin de levadura torula al 1% y melaza al 2% result superior y significativamente diferente a los otros medios ensayados, alcanzando un valor de 108 esporas/mL.

Cortez (2001) realiz el estudio de la relacin entre produccin de conidias del hongo Lecanicillium lecanii en diferentes sustratos (medios nutritivos y soporte) y su patogenicidad. Como medios se evaluaron: sorgo, grano de arroz, grano de arroz quebrado (granillo) polvo de arroz (pulido), y como soportes: bagazo de caa, cascarilla de arroz y "olote" de maz. La combinacin de medios y soportes proporcion doce tratamientos ms un testigo constituido solo por arroz, encontrndose diferencias significativas entre tratamientos (p< 0.05). Los sustratos con mayor produccin de conidios fueron bagazo de caa y arroz (839.7 1.2 x 106cond/g) y sorgo y olote (825.8 1.7 x 106cond/g). Aunque el pulido fue el medio menos eficiente, la produccin conidial en todas sus combinaciones fue superior a la del arroz, aunque mostr la menor produccin conidial (265.4 1 x 106 g1). La patogenicidad de L. lecanii sobre Toxoptera aurantii y Aphis gossypii tambin se vio afectada por el medio y el soporte en que se produjo. La aireacin proporcionada por el soporte marc la diferencia entre los tratamientos y el testigo. Los resultados sealan que el medio de cultivo es importante en la produccin masiva de L. lecanii e indican que la patogenicidad del hongo tambin fue afectada por el mismo.Los resultados sugieren que la mayor o menor patogenicidad de los conidios obtenidos con los diferentes
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sustratos posiblemente se deba a la calidad nutritiva de losmedios, pero tambin puede obedecer a la influencia de los soportes.

1.1.5. Objetivos 1.1.5.1. General

Analizar el efecto de los sustratos talco industrial, harina de papa (Solanum tuberosum) y almidn de maz (Zea mays) en la viabilidad de esporas de Paecilomyces lilacinus.

1.1.5.2. Especifico

Determinar el nmero de esporas presentes en los sustratos de talco industrial, harina de papa (Solanum tuberosum) y harina de fcula de maz (Zea mays). Evaluar la viabilidad de esporas dePaecilomyces lilacinus en los diferentes sustratos. Identificar el sustrato ms adecuado.

1.2. MARCO REFERENCIAL

1.2.1. Marco terico. 1.2.1.1. Hongos Entomopatgenos

Los hongos Entomopatgenos son un grupo de microorganismos ampliamente estudiados en todo el mundo, existiendo ms de 700 especies pertenecientes a 100 gneros. Ellos tienen la particularidad de parasitar a diferentes tipos de artrpodos (insectos y caros) y de encontrarse en los habitats ms variados ya sea acuticos o terrestres y dentro de estos en cultivos anuales, semiperennes y perennes. Finalmente, su caracterstica de penetrar al hospedante va tegumento no es muy comn entre el resto de los entomopatgenos (Lecuona, 1996). Estos hongos se encuentran en la naturaleza, en rastrojos de cultivos, estircol del suelo, las plantas, etc. Logran un buen desarrollo en lugares frescos, hmedos y con poco sol, constituyendo el grupo de mayor importancia en el control biolgico de insectos plagas. Prcticamente,
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todos los insectos son susceptibles a algunas de las enfermedades causadas por dichos hongos. Se conocen aproximadamente 100 gneros y 700 especies de hongos entomopatgenos. Entre los ms importantes Entomophthora, Fusarium, estn: Metarhizium, Erynia, Beauveria, Eryniopsis, Paecelomyces Aschersonia, Akanthomyces, y Verticillium

Zoophthora,

Hirsutella,

Hymenostilbe,

(Monzn, 2001).

1.2.1.2. Paecilomyces lilacinus

1.2.1.2.1.

Ubicacin taxonmica Barnett (1999) expresa:

Clase: Deuteromicetos. Orden: Moniliales (Hyphomycetes). Familia: Moniliaceae. Gnero: Paecilomyces. Especie: P. lilacinus.

1.2.1.2.2.

Caractersticas

En la naturaleza P. lilacinus es encontrado como habitante del suelo, con habilidad de sobrevivir en materia orgnica y siempre se

encuentra presente en el campo principalmente en zonas hmedas. P. lilacinus es tambin patgeno de insectos, aunque su mayor relevancia es contra fitonematodos, ya que causa una alta tasa de mortalidad reduciendo sus poblaciones 2006) El hongo P. lilacinus (Thom) Samson ha sido reportado como un agente potencial de control biolgico de nematodos de nudo de raz y otros nematodos parsitos de las plantas (Khan y Williams, 1998). P. lilacinusest tambin relacionada con Penicillium, compartiendo su hbitat en el suelo (Chica, 2006). Las etapas sedentarias de la raz, nudo y nematodo del quiste son ms vulnerables a P. lilacinus. El hongo es capaz de colonizar las estructuras reproductivas del nematodo causando as la destruccin de las hembras, los quistes y huevos (Cardona y Leguizamon, 1997). en los cultivos (Elsegui,

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Las colonias de P. lilacinus en Agar Extracto de Malta (MEA) o Agar Papa Dextrosa (PDA) son de tonalidades violceas; al reverso incoloro o vinceo. Los conidioforos erectos, mayormente solitarios del micelio horizontal, raramente sinematoso, amarillo a prpura, paredes rugosas con filides agrupadas densamente. Los conidios fusiformes a elipsoidales, paredes lisas a suavemente. Puede producir conidiforos mononematosos o sinemas en insectos. Es un hongo tpico de suelo. Tiene alguna actividad antagonista contra bacterias y hongos. Producen el antibitico peptdico leucinostatina, efectivo contra un amplio rango de hongos y bacterias Gram positivas y tambin el lilacinin (Elsegui, 2006). 1.2.1.2.3. Accin frente a nematodos

Los productos en base a P. lilacinus actan contra los fitonematodos como productos de contacto. Este hongo produce estructuras llamadas conidias responsables del efecto sobre los nematodos. Estas conidias al hacer contacto con el cuerpo de estos organismos, se fijan en la pared externa, luego germinan y producen unas estructuras especializadas, a travs de las cuales penetran en el cuerpo del nematodo. En el interior el hongo toma sus nutrientes y se reproduce masivamente invadiendo totalmente el cuerpo, que finalmente causa su muerte. En condiciones favorables de humedad, despus de la invasin, las estructuras del hongo salen del cuerpo del nematodo y sobre este se producen nuevas conidias que pueden afectar a otros nematodos (Monzn y col., 2009). Los productos a base de paecilomyces no matan a los nematodos inmediatamente, ya que se requiere de cierto tiempo desde el momento de la adhesin de la conidias hasta el momento que ocurre la colonizacin del hongo en el nematodo. Sin embargo, a partir del momento que el hongo penetra al cuerpo, se afecta el

comportamiento

de los

nematodos (movimiento,

reproduccin,

alimentacin), por lo que a partir de ese momento la plaga deja de causar dao al cultivo, hasta que finalmente muere (Monzn et al, 2009).

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1.2.1.2.4.

Bioplaguicidas a base de Paecilomyces lilacinus

Por la eficiencia en el control de plagas y vectores, puede producirse bioinsecticidas a partirde diferentes gneros y especies de hongos entomopatgenos cuyo ingrediente activo es el propio hongo (Lozano y col. 2000). El uso de bioplaguicidas a base de P. lilacinus para el control de nematodos debe ser considerado como parte de programas de manejo integrado de plagas y no como nica medida de control. Por lo tanto, para un control efectivo de nematodos, el uso de Paecilomyces debe combinarse con medidas preventivas, tales como: Seleccin adecuada del lugar de siembra Uso de plantas (vivero) libres de nematodos Evitar el uso de plantas de vivero procedentes de reas infestadas con nematodos Uso de material de siembra tolerante a nematodos (injertos) Evitar el uso de suelo contaminado (en vivero) Regulacin del nivel de sombra en la plantacin Identificacin de especies de nematodos presentes y monitoreo de la poblacin (Monzn y col., 2009). Se debe considerar que los productos a base del hongo P. lilacinus son una medida de supresin directa, cuya efectividad depende del contacto con la plaga, de modo que si el hongo no llega hasta el nematodo no hay control. En ese sentido, se debe garantizar que la aplicacin del hongo llegue a cubrir el rea o zona donde se localizan los nematodos, lo cual se logra utilizando un volumen adecuado de agua para su aplicacin. P. lilacinus puede ser utilizado para el control de nematodos ya sea en plantas de vivero o en plantaciones establecidas (Monzn et al, 2009)
1.2.1.3.

Sustrato El trmino sustrato, que se aplica en agricultura, se refiere a todo material, natural o sinttico, mineral u orgnico, de forma pura o mezclado, cuya funcin principal es servir como medio de crecimiento y desarrollo a las plantas, permitiendo su anclaje y soporte a travs
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del sistema radical, favoreciendo el suministro de agua, nutrientes y oxgeno. El cultivo de plantas en sustrato difiere marcadamente del cultivo de plantas en suelo. As, cuando se usan contenedores, el volumen del medio de cultivo, del cual la planta debe absorber el agua, oxgeno y elementos nutritivos, es limitado y significativamente menor que el volumen disponible para las plantas que crecen en campo abierto. En la actualidad existen una gran cantidad de materiales que pueden ser utilizados para la elaboracin de sustratos, y su eleccin depender de la especie a propagar, poca, sistema de propagacin, precio, disponibilidad y caractersticas propias del sustrato (Hartmann y Kester, 2002). 1.2.1.3.1. Elaboracin de sustratos o formulaciones

Monzn (2001) seala que la formulacin del hongo es el proceso mediante el cual el ingrediente activo, es decir las conidias del hongo, se mezclan con materiales inertes, tales como vehculos, solventes, emulsificantes y otros aditivos. Estos materiales inertes ayudan a que el hongo trabaje mejor. Todo esto se hace con el fin de lograr una buena homogeneidad y distribucin de las partculas del hongo, para poder ser manipuladas y aplicadas adecuadamente. Para ser formulado, la viabilidad del hongo no debe ser menor de 95% y el contenido de humedad debe estar entre 4 y 6 %.A temperatura ambiente las conidias mantienen su viabilidad por ms tiempo cuando el hongo ha sido formulado que cuando se almacena el polvo sin formular. Tipos de formulaciones: a . Seco o polvo mojable: en la cual se utiliza un vehculo, el cual puede ser de origen mineral o vegetal, que ayuda a absorber la humedad de las conidias y mantiene la viabilidad por un tiempo considerable. Por ejemplo arcilla (caolinita), tierra de diatomeas, talco industrial, etc. (Monzn, 2001). a.1.Almidn de Maz Se usa como alimento, excipiente en la preparacin de productos farmacuticos y otras industrias. El Instituto
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de Ciencia Animal (ICA) emple fcula de maz como sustrato en un crudo enzimtico con actividad fitasa a partir de fermentaciones microbianas, mostrando una efectividad en el crecimiento de las cepas estudiadas (Albelo et al, 2008). a.2.Fecula de Papa Es un polmero de reserva, compuesto por unidades repetitivas de glucosa unidas por enlaces glucosdicos alfa 1-4 y alfa 1-6. Se utiliz harina de fcula de papa en Bogot con la finalidad de Inmovilizar Bacillus licheniformis y Saccharomyces cerevisiae para la produccin de etanol, demostrando que estos

microorganismos con harina de fcula de papa presentaron una mayor retencin de clulas (26x10 6 y 10x107 UFC/g) y permite la difusin de los productos (Sossa et al., 2008) b. Liquido o emulsificable que utiliza un lquido solvente y un emulsificante. El lquido utilizado tiene la funcin de mantener suspendidas las conidias en el medio para lograr una mezcla homognea que garantice una buena aplicacin. Adems este lquido debe evitar la absorcin de agua por las conidias y mantener su viabilidad. Ambas formulaciones son de fcil manejo y su uso depende de la disponibilidad. Por ejemplo: derivados de nonil fenol y otros coadyuvantes. Los materiales utilizados en la formulacin deben presentar algunas caractersticas tales como: No deben tener actividad biolgica (efecto sobre animales o plantas) Debe ser inocuo al ambiente. Debe presentar caractersticas fsicas adecuadas para mezclarse con las conidias. Debe facilitar la aplicacin del producto. No debe afectar la actividad del hongo y Debe ser econmicamente rentable (Monzn, 2001).

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1.2.1.4.

Espora Son estructuras del hongo que se encargan de realizar el efecto sobre los nematodos. Estas esporas al hacer contacto con el cuerpo de los nematodos, se fijan en la pared externa del cuerpo del nematodo, luego germinan y producen unas estructuras especializadas, a travs de las cuales penetran en el cuerpo del nematodo (Carrillo, 2003). Las esporas suelen ser pequeas y secas y las corrientes de aire las dispersan. Cada espora al germinar da lugar a una hifa y un micelio (Starr y Taggart,2005). Los conidiforos del gnero Paecilomyces son: ramificados, agrupados o irregulares. Las conidias se encuentran agrupadas en forma de cadena. P. lilacinus presenta un rpido crecimiento de sus hifas. El Conidiforo presenta grupos de ramificaciones laterales, cada una de las cuales presenta de 2 a 4 divisiones ovaladas antes de las conidias. Estas ltimas, tienen una longitud de 2.5-3.0 m y de 2.0-2.2 m de ancho; presentan coloracin lila (Lpez, 1995).

1.2.1.4.1.

Viabilidad de las Esporas

La viabilidad de los conidias se mantiene mayor tiempo en la formulacin lquida que en la slida. Sin embargo, cuando en la formulacin lquida se utilizan aceites minerales o derivados de petrleo, esta no es aceptada en produccin orgnica debido al tipo de aceite que contiene. Las conidias pierden su viabilidad a partir de los 10 - 15 das cuando se mantienen a temperatura ambiente, en cambio la viabilidad se mantiene por ms de 60 das en las mismas condiciones, cuando las conidias son formuladas (Monzn, 2001). 1.2.1.4.2. Germinacin de esporas

La germinacin de esporas de la gran mayora de hongos requiere al menos de alta humedad relativa, casi siempre por encima del 90% (Lecuona, 1996).

21

1.2.1.4.3.

Factores que afectan la germinacin de esporas: Efecto de la temperatura Los requerimientos de temperatura para germinar varan con las especies de hongos que se trate ya que los Deuteromicetos germinan a temperaturas de 25C. De modo general, la temperatura ptima para los diferentes hongos entomopatgenos vara de 10 a 30 C; y paraP. lilacinus oscila entre 20-25C (Mata, 2008). Efecto de la Luz. Todos los insecticidas microbianos son inactivados por exposicin a rayos solares. El efecto directo puede causar la reduccin de la estabilidad de los microorganismos y un tiempo limitado para su actividad. Las conidias de los hongos entomopatgenos expuestas a dosis sub letales de radiacin UV experimentan cambios genticos y/o fisiolgicos que puede afectar el ndice de germinacin y crecimiento (Mata, 2008). Requerimiento de humedad. Aunque las esporas pueden sobrevivir por largos perodos en un medio extremadamente seco, una humedad relativa de cerca del 90% es necesaria para su germinacin y rpido crecimiento (Nava, 2006).

1.2.2 Marco Conceptual Viabilidad: Corresponde al tiempo en que las esporas son capaces de germinar de manera exitosa permitiendo su estableciendo y colonizacin de los sustratos (Perez y Reyes, 1993). Sustrato: Se entiende por formulacin o sustrato del Hongos Entomopatgeno (HEP) al proceso mediante el cual el ingrediente activo -ya sea conidias o micelio- se mezcla con ciertos materiales inertes, tales como vehculos, solventes, emulsificantes o gelificantes, y otros aditivos que pueden ser nutrientes o estimulantes (Urtubia y France, 2007).
22

Control biolgico: El control biolgico de manera general se refiere al uso de organismos vivos para restringir el desarrollo y la proliferacin de un organismo indeseable (Mont, 2002), aunque tambin se puede definir como la accin de los parsitos predadores y patgenos para mantener la densidad de otro organismo en valor ms bajo que el que se podra presentar en su ausencia (Lecuona, 1996). Hongos entomopatgenos: Estos hongos se encuentran en la naturaleza, en rastrojos de cultivos, en el suelo, las plantas, etc. Logran un buen desarrollo en lugares frescos, hmedos y con poco sol. Los hongos

entomopatgenos constituyen el grupo de mayor importancia en el control biolgico de insectos plagas. Prcticamente, todos los insectos son susceptibles a algunas de las enfermedades causadas por estos hongos (Monzn, 2001). Conidio Unidad reproductiva asexuada de un hongo (Urtubia y France, 2007). Harina de papa: Est compuesta de grnulos con forma elipsoidal de 20-100 micras. El granulo se hincha y aumenta ligeramente de tamao en presencia de agua fra, cuando las suspensiones del almidn se calientan a temperatura de 50-55C, los puentes de hidrogeno intermoleculares de las zonas amorfas se rompen y continua la absorcin de agua en un fenmeno conocido como gelatinizacin. A medida que se aumenta la temperatura aumenta el agua absorbida (FABPSA, 2004). Almidn de maz: Es el polisacrido obtenido a travs de la molienda hmeda de los granos de diversas variedades del maz(Zea mays, L), Familia Poaceae antiguamente Gramineae (NMX-F-382-1986).
23

Talco Industrial: Es un material fibroso, suave y de textura grasa, presentado en forma de polvo muy fino de color blanco. Se emplea como carga en la industria de la cermica, pinturas, jabones, masilla, hules,

lubricantes, aislamientos elctricos (INSUMEX, 2011).

24

II.

MARCO METODOLGICO 2.1. HIPTESIS

Con el sustrato harina de papa (Solanum tuberosum) se obtendr una viabilidad mayor de la espora del hongo Paecilomyces lilacinus respecto a los sustratos almidn de maz (Zea mays) y talco industrial. 2.2. VARIABLES con

2.2.1. Definicin conceptual Variable independiente: Sustratos de Talco industrial, Harina de papa (Solanum tuberosum) y Almidn de maz (Zea mays). Variable dependiente: Viabilidad de esporas del hongo Paecilomyces lilacinus. 2.2.2. Definicin operacional Cuadro 1. Operacionalizacin de variables
VARIABLE DEFINICIN CONCEPTUAL Material fibroso, suave y de textura grasa Talco industrial Se emplea comocarga en pinturas, jabones, sustratos,etc Producto obtenido de la molienda de tubrculos apropiados para ser utilizados en el consumo humano Polisacrido que se obtiene de moler las diferentes variedades del maz. Suele formar parte de los carbohidratos que se ingieren de manera habitual a travs de los alimentos. Tiempo en que DEFINICIN OPERACIONAL INDICADORES ESCALA DE MEDICIN

El talco industrial que se empleara como sustrato para la espora del hongo Paecilomyces lilacinus

Numero de conidias y porcentaje de germinacin

- Porcentaje - Conidias/ml

Harina de papa (Solanum tuberosum)

La harina de que se empleara como sustrato para la espora del hongo Paecilomyces lilacinus

Numero de conidias y porcentaje de germinacin

- Porcentaje - Conidias/ml

Almidn de maz (Zea mays)

El almidn de maz que se empleara como sustrato para la espora del hongo Paecilomyces lilacinus

Numero de conidias y porcentaje de germinacin

- Porcentaje - Conidias/ml

Viabilidad

Esporas germinadas de

Porcentaje

25

permanecen viables, esto es, que son capaces de llevar a cabo una germinacin exitosa

Paecilomyces lilacinus inoculadas en cada uno de los sustratos

2.3. METODOLOGA Para recuento de conidias Se realiz el recuento deacuerdo a lo establecido por el Servicio Nacional de Sanidad Agraria (SENASA). Se recepcion la espora pura de hongo P. lilacinus. Se inocul 2 g de espora pura por sustrato: talco industrial, harina de papa (Solanum tuberosum) y almidn de maz (Zea mays). De cada sustrato inoculado se extrajo 1 g de muestra diluyndolo con 10 ml de agua destilada estril (ADE) + Tween 80 al 0.1%, con la finalidad de obtener una solucin madre. Se procedi a agitar la solucin madre utilizando un vortex durante 5 minutos, con la finalidad de suspender la mayor cantidad de esporas posibles. Se procedi a tomar 1 mL de esta solucin madre el cual es depositado en un tubo de ensayo que contiene 9 mL de ADE+Tween 80 al 0.1%, lo que constituye la solucin 10 -1 y as sucesivamente hasta obtener la dilucin 10-4. De la dilucin 10-4 se tom 0,01 mL con una pipeta esteril y se deposit con cuidado en la cmara de Neubauer, despus de esperar 5 minutos, se procedi a su lectura en el microscopio (ver Anexo 1-6)

Porcentaje de germinacin A partir de la ltima dilucin obtenida para el recuento de esporas, se evalu el porcentaje de germinacin, para lo cual, con una pipeta estril se procedi a tomar aproximadamente 1 mL el cual es depositado alrededor de una placa petri que contiene Agar Sabouraud Sacarosado (SDA).

26

Las placas se incubaron a temperatura ambiente y expuesta a luz constante durante 18-24 horas. Una vez transcurrido este tiempo se llev al microscopio. La observacin se hizo con el objetivo 40X y se cont un mnimo de 100 esporas (entre germinadas y no germinadas). Con los datos obtenidos se calcul el porcentaje de germinacin (viabilidad), para lo cual se utiliz la siguiente ecuacin:

Dnde: %G Ng Nng = Porcentaje de germinacin = Nmero de esporas germinadas = Nmero de esporas no germinadas

Anlisis de Pureza Despus de haber sido analizadas las muestras incubadas en las

placas Petri, se dejaron germinar durante 3 das mas, para determinar si las muestras ledas anteriormente se encontraban contaminadas por agentes externos. (ver Anexo 7-12)

2.4. DISEO EXPERIMENTAL Se analiz la viabilidad de las esporas del hongo Paecilomyces lilacinus en tres sustratos: talco industrial, harina de papa (Solanum tuberosum) y almidn de maz (Zea mays), mensualmente durante 3 meses. Se trabaj un Diseo Completamente Randomizado (DCR), con 3 tratamientos y 3 repeticiones cada uno, haciendo un total de 9 unidades experimentales, que se analizaron durante tres meses. Se utiliz un grupo control (producto fresco) como base para analizar la viabilidad de la espora. La variable dependiente (VD) es la viabilidad de esporas de hongo P. lilacinus y la variable independiente (VI) los sustratos de estudio: talco industrial, harina de papa (Solanum tuberosum) y almidn de maz (Zea mays) como se observa en la figura 1. Para el procesamiento de los datos se aplic el anlisis estadstico ANVA y Tukey, utilizando el programa Statistica7.
27

Espora pura del hongo Paecilomyces lilacinus

TRATAMIENTO 1 SUSTRATO FRESCO

TRATAMIENTO 2 Talco industrial + espora pura

TRATAMIENTO 3 Harina de papa (Solanumtuberosum) + espora pura

TRATAMIENTO 4 Almidn de maz (Zea mays) + espora pura

Repeticin 1

Repeticin 2

Repeticin 3

Repeticin 1

Repeticin 2

Repeticin 3

Repeticin 1

Repeticin 2

Repeticin 3

Repeticin 1

Repeticin 2

Repeticin 3

Figura 1. Esquema experimental para determinar el efecto de los sustratos talco industrial, harina de papa (Solanum tuberosum) y almidn de maz (Zea mays) en la viabilidad de esporas de Paecilomyces lilacinus.

28

III.

RESULTADOS

Para evaluar los cambios en el contenido de conidias y la viabilidad de la espora de P. lilacinus, se realiz un estudio mensual de dicha espora inoculado en los diferentes sustratos, cuyos datos se pueden evidenciar en el Cuadro 2. Cuadro 2.Recuento de conidias de P.lilacinus en tres sustratos diferentes por 3meses
Conteo de REPETICIONES conidias N conidias/ml R1 Sustrato Fresco R2 R3 Harina de 1 FECH A Almidn de maz + espora Talco Industrial + espora pura Sustrato Fresco papa+ espora R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 Harina de 2 FECH A Almidn de maz + espora Talco Industrial + espora pura Sustrato Fresco 3 FECH A Harina de papa+ espora Almidn de papa+ espora R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 6.75 x10 7.75 x10 3.50 x10 3.50 x10 3.00 x10 3.25 x10 2.75 x10 3.00 x10 3.25 x10 2.70 x10 2.75 x10 4.75x10
9 9 9

CAMBIO Viabilidad EN VIABILIDAD 98% 98% 98% 99% 99% 99% 98% 99% 98% 99% 99% 99% 98% 97% 98% 98% 99% 98% 99% 99% 99% 99% 99% 98% 97% 96% 96% 99% 98% 98% 97% 0% 1% 0% 1% 0% 1% -1% 0% -1% 0% 0% 1% 1% 2% 2% 0% 1% 1% 1%

10 10 10 10 10 10 10 10 10 9 9 9

1.05 x10 1.25 x10 1.25 x10 1.75 x10 2.05 x10 1.63 x10 1.70 x10 1.65 x10 1.59 x10 1.60 x10 1.57 x10 1.57 x10

10 10 10 10 10 10 10 10 10 9 9 9

0.85 x10 0.75 x10 0.10 x10 2.40 x10 2.10 x10 1.65 x10 2.05 x10

10 10 10 10

29

maz + espora

R2 R3

2.00 x10 1.25 x10 1.30 x10 1.26 x10 1.30 x10

10 10 10 10 10 9 9 9

97% 98% 97% 98% 97% 96% 96% 96% 99% 98% 99% 97% 98% 98% 97% 97% 98%

2% 0% 2% 1% 2% 2% 2% 2% 0% 1% 0% 1% 1% 0% 2% 2% 1%

Talco Industrial + espora pura Sustrato Fresco

R1 R2 R3 R1 R2 R3

0.60 x10 0.65 x10 0.75 x10 1.60 x10 1.53 x10 1.65 x10 1.57 x10 1.53 x10 1.60 x10 1.25 x10 1.23 x10 1.23 x10

Harina de 4 FECH A Almidn de maz + espora Talco Industrial + espora pura papa+ espora

R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3

10 10 10 10 10 10 10 10 10

Para determinar la variacin del recuento de conidias fue necesario realizar un anlisis ANVA, cuyos resultados se muestran en el Cuadro 3.

Cuadro 3. ANVA para recuento de conidias ANVA-RECUENTO DE CONIDIAS FV TIPO DE SUSTRATO Error Total GL 3 8 11 SC 2,573440E+20 5,517833E+19 3,125223E+20 CM 8,578132E+19 6,897292E+18 F 12,4370 p 0,002216

Dnde: FV: Fuente de Varianza GL: Grados de Libertad SC: Suma de Cuadrados CM: Cuadrados Medios F y p: Intervalos de confianza

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En la Figura 2 se muestra el cambio en el recuento de conidias de P. lilacinus en cada uno de los sustratos, despus de 3 meses de estudio.

SF

HP

AM

TI

Figura 2. Cambio en el recuento de conidias de P. lilacinus en cada uno de los sutratos despus de 3 meses de anlisis

Donde: SF: Sustrato fresco HP: Harina de papa AM: Almidn de maz TI: Talco industrial

31

Para determinar la variacin de la viabilidad, fue necesario realizar un anlisis ANVA, cuyos resultados se muestran en el Cuadro 4.

Cuadro 4. ANVA para viabilidad de esporas de P. lilacinus ANVA-VIABILIDAD FV TIPO DE SUSTRATO Error Total Dnde: FV: Fuente de Varianza GL: Grados de Libertad SC: Suma de Cuadrados CM: Cuadrados Medios F y p: Intervalos de confianza GL 3 8 11 SC 0,000567 0,000200 0,000767 CM 0,000189 0,000025 F 7,55556 p 0,010135

Se realiz una prueba Tukey para verificar si existe diferencia significativa entre el tipo de sustrato empleado para la conservacin de la espora de P. lilacinus.

Cuadro 5. Prueba TUKEY aplicado en recuento de conidias TUKEY-RECUENTO DE CONIDIAS TIPO DE SUSTRATO 1 2 3 4 GC CHE ME TIEP 0,002904 0,016717 0,004353 0,516864 0,983287 0,714638 {1} 575E7 0,002904 0,016717 0,516864 {2} 1740E7 {3} 1433E7 {4} 1663E7 0,004353 0,983287 0,714638

En el Cuadro 5. se observa quesi existe diferencias significativas (p<0.05) entre el conteo de conidias del hongo P. lilacinus, segn el tipo de sustrato con respecto al grupo control.
32

En la Figura 3 se muestra el cambio en la viabilidad de P. lilacinus en cada uno de los sustratos despus de 3 meses de anlisis

SF

HP

AM

TI

Figura 3. Cambio en la viabilidad de P. lilacinus en cada uno de los sustratos despus de 3 meses de anlisis.

Donde: SF: Sustrato fresco HP: Harina de papa AM: Almidon de maz TI: Talco industrial

33

Se realiz una prueba Tukey para determinar si existe diferencia significativa de viabilidad en los diferentes sustrato empleado para la conservacin de la espora de P. lilacinus.

Cuadro 6. TUKEY de viabilidad de P.lilacinus. TUKEY-VIABILIDAD TIPO DE SUSTRAT O 1 2 3 4 GC CHE ME TIEP 0,015039 0,045828 0,845277 0,845277 0,045828 0,144294 0,015039 0,045828 0,845277 0,845277 0,045828 0,144294 {1} .0200 0 {2} .00333 {3} .00667 {4} .01667

En el Cuadro 6se muestra si existe diferencias significativas (p<0.05) entre los sustratos empleados para mantener la viabilidad de la espora de P. lilacinus en espacio de tiempo de 3 meses.

34

IV.

DISCUSIN

Los resultados de este estudio mostraron que el talco industrial, la harina de papa(Solanum tuberosum) y el almidn de maz(Zea mays) como

sustrato mantuvieron mayor cantidad de conidias durante 3 mesescon un conteo entre 3-1 x 1010cond/mL, respecto al sustrato fresco, cuyo resultados se encuentran entre 6 - 0.6 x109 cond/mL. El conteo de conidias de harina de papa(Solanum tuberosum) en la ltima fecha de estudio fue de 1.6x1010cond./mL (Figura 1), probablemente debido a su alto contenido de carbohidratos y otros compuestos especialmente microelementos y vitaminas, necesarios para mantener la conservacin de las esporas de Paecilomyces lilacinus (Figueroa (2007).

En la Figura 2,la disminucin en la cantidad de esporas de P. lilacinus en sustrato fresco es muy notoria respecto a los otros sustratos, contndose al tercer mes solamente 0.57x1010 cond./mL.. En harina de papa (Solanum tuberosum) elnmero de conidias se mantiene con respecto al tiempo lo cual indica una menor variabilidad, por lo tanto es el sustrato ms

adecuado mantener a las esporas de P. lilacinus para su uso como controladores biolgicos formulados.

SENASA (2009) indica que si el producto tiene una concentracin de conidias/ml mayor o igual a 109, est apto para ser utilizado en campo. Contrastando con resultados expuesto por Carr (2003), quien reprodujo Paecilomyces fumosoroseus en diferentes sustratos obteniendo recuento de conidias promedio entre 8-9x108 cond/g, empleando como sustrato la cabecilla de arroz, probablemente porque los soportes slidos usados son para produccin semi artesanal y lo que se busca es el crecimiento de la espora en dichos sustratos.

En el Cuadro 4 en referencia al cambio en el recuento de conidias realizada mensualmente por un total de 3 meses, se observa que no existen diferencias significativas entre la harina de papa(Solanum tuberosum), almidn de maz (Zea mays) y talco industrial, siendo el
35

mtodo de seleccin para la aplicacin de estos como sustratosun tema econmico, en relacin a la cantidad de conidias conservadas. Sin embargo,Vargas (2011) resalta que se debe analizar la viabilidad de dichas esporas para garantizar su efectividad.

Con respecto a la viabilidad,y para asegurar su buena accin como controlador biolgico, se trabaj paralelo a los conteos de conidias, determinndose que el sustrato que tuvo menorvariacin menorfue la harina de papa (Solanum tuberosum), manteniendo su viabilidad en un 98.67% despus de 3 meses de almacenamiento (Figura 3), respecto a los dos sustratostalco industrial y almidn de maz, y al testigo comosustrato fresco. Este resultado es 6.77% ms que los resultados obtenidos por Vargas (2011) que analiz la viabilidad de espora pura de P. lilacinusalmacenadas por 5 meses obteniendo como resultado una viabilidad promedio de 91.9%, diferencia debido a que la espora de dicho hongo en esta investigacin cuenta con sustratos que le brindan un habitad adecuada para un mayor tiempo de vida a travs del tiempo de estudio. Este porcentaje de viabilidad de la espora es aceptable para su utilizacin en campos de cultivo. SENASA (2009) manifiesta que si el porcentaje de viabilidad es igual o superior al 90%, se considera que la viabilidad del producto es satisfactoria.

Existe una diferencia mnima estadsticamente evidenciable entre la harina de papa (Solanum tuberosum) y el almidn de maz (Zea mays), en la cantidad de esporas viables de dichos sustratos. Lpez (1995) expresa que esto se debe a que dichos sustratos son rico en elementos minerales y orgnicos, incluyendo vitaminas, produciendo mejor supervivencia de la espora de P. lilacinus,para obtener un buen desarrollo y una buena esporulacin.

36

CONCLUSIONES

Se encontr diferencias significativas (p < 0.05)en el recuento de conidias entre el primer y ltimo mes de anlisis de viabilidad del

hongoPaecilomyces lilacinusalmacenado en sustrato fresco, harina de papa(Solanum tuberosum), almidn de maz (Zea mays) y talco industrial. La harina de papa (Solanum tuberosum)fue el sustrato que present mayor recuento de conidias con 1.6x1010 cond./mL, en comparacin con los sustratos almidn de maz (Zea mays)conun recuento de 1.57x1010 cond./mL y talco industrial con1.24x1010 cond./mL. El porcentaje de viabilidad fue mayor en el sustrato harina depapa (Solanum tuberosum) con 98.67%, en comparacin con los sustratos almidon de maz (Zea mays)con 97.67% y talco industrial con 97.33%. Se identific que la harina de papa(Solanum tuberosum) fue el sustrato ms adecuado para el el almacenamiento de la espora del hongo Paecilomyces lilacinus

37

V.

SUGERENCIAS

Para una mejor evaluacin del porcentaje de viabilidad de la espora de Paecilomyces lilacinus, se recomienda que el tiempo de anlisis sea ms prolongado, sugirindose hasta los 6 meses.

De preferencia el almacenamiento de las muestras utilizadas en este tipo de investigaciones, debe de ser aislada de microorganismos contaminantes y expuestos a temperaturas constantes de refrigeracin.

38

VI. -

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Entomopatgenos para Control de Plagas en agricultura. Plagas y enfermedades, INIA, 2007, Pp. 46-49. VARGAS, D. muestras de Evaluacin de la viabilidad en el tiempo para esporas puras y en formulacin lquida de

Paecilomyces lilacinus. NOVAGRI [en linea], Mayo 2012. [Fecha de consulta: 15 Mayo 2012]. Disponible en:

http://es.scribd.com/doc/92333312/Informe-de-ad-de-Paecilomyces

42

VII.

ANEXOS

Anexo 1. Diagrama de recuento de conidias

1 gr
Solucin madre

1gr espora pura + 10 gr sustrato

1gr espora pura+sustrato + ADE+Tween 80 al 0.1%

1 mL

Dilucin -3 10

Dilucin -2 10

Dilucin -1 10
1 mL

9 mLADE+Tween 80 al 0.1% Recuento en Camara de Neubauer

Formula: N conidias/mL= X . 5 . 104 . ID Donde: 5= N cuadraditos contados en el cuadrante central X= promedio de conidias contadas ID= inversa de la dilucin empleada

Fuente: Elaboracin propia

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ANEXO 2. Pesado de la mezcla de la espora pura de P. lilacinus ms sustrato

ANEXO 3. Diluciones hasta llegar a la dilucin 10-4

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Anexo 4. Recuento en Camara de Neubauer

ANEXO 5. Rotulado de placas petric que se utilizaron para siembra en cultivo agar Sabouraud Sacarosado (SDA).

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ANEXO 6. Siembra de la dilucin 10-3, del sustrato ms espora pura, en placa con agar Sabouraud Sacarosado (SDA).

Anexo 7. Anlisis de pureza del Talco Industrial ms espora pura de P. lilacinus, despus de 3 das de siembra en placa agar Sabouraud Sacarosado (SDA).

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Anexo 8. Anlisis de pureza del harina de fcula de papa(Solanum tuberosu) ms espora pura de P. lilacinus, despus de 3 dias de siembra en placa agar Sabouraud Sacarosado (SDA).

Anexo 9. Anlisis de pureza del Almidn de maiz (Zea mays) ms espora pura de P. lilacinus, despus de 3 dias de siembra en placa agar Sabouraud Sacarosado (SDA).

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Anexo 10. Anlisis de pureza del Talco Industrial ms espora pura de P. lilacinus, despus de 3 dias de siembra en placa agar Sabouraud Sacarosado (SDA) en la 4 Fecha.

Anexo 11. Anlisis de pureza del Harina de fcula de papa (Solanum tuberosu) ms espora pura de P. lilacinus, despus de 3 dias de siembra en placa agar Sabouraud Sacarosado (SDA) en la 4 Fecha.

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Anexo 12. Anlisis de pureza del Almidn de maz (Zea mays) ms espora pura de P. lilacinus, despus de 3 dias de siembra en placa agar Sabouraud Sacarosado (SDA) en la 4 Fecha.

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