BIOTECNOLOGIA Es evidente el enorme progreso que han experimentado las Ciencias Biolgicas en los ltimos aos, que ha ido

ligado de manera directa a los avances experimentados por algunas de las ramas de la Biologa como son la Gentica, la Microbiologa y la Biologa molecular. No est lejos el da en que la denominada Ingeniera gentica permita que por ejemplo un hemoflico pueda recibir factores de coagulacin obtenidos por biotecnologa, sin que tenga que correr el riesgo de una posible infeccin trasmitida por los posibles donantes. Tambin es evidente el desarrollo experimentado por la agricultura, la farmacia, la alimentacin o la proteccin del medio ambiente, no debemos olvidar la aparicin de organismos transgnicos, el desarrollo de frmacos especficos o de hormonas, la gran variedad de productos comerciales obtenidos mediante procesos de fermentacin en la denominada microbiologa industrial o, por ltimo, los avances en tratamientos de aguas residuales o la biodegradacin del petrleo. Pero no todo lo relacionado con la Biotecnologa es positivo, entra dentro de lo posible, en el campo negativo, que algunas empresas o compaas de seguros puedan disponer de informacin del genoma de las personas, lo que de alguna manera podra condicionar las relaciones laborales o las primas de esas compaas. La Biotecnologa, por tanto puede presentar aspectos positivos o negativos, para evitar los segundos es necesario un profundo conocimiento de esta disciplina y de las consecuencias que su desarrollo y aplicacin pueden tener, tanto de tipo social como de tipo ecolgico. La Biotecnologa es una disciplina que conecta la biologa con la tcnica, es decir es la ciencia que trata de la utilizacin de los microorganismos en los procesos industriales. Recientemente se prefiere definir como la disciplina que se basa en la utilizacin de seres vivos o de sus componentes para realizar determinados procesos qumicos con finalidad industrial. Son conocidos, desde hace mucho tiempo, algunos procesos biotecnolgicos como las fermentaciones alcohlica, lctica o butrica, alguna de las cuales se remonta a civilizaciones muy antiguas. En sentido actual la biotecnologa se identifica frecuentemente con la aplicacin industrial de la Ingeniera gentica, que utiliza seres vivos modificados para producir compuestos como insulina humana, hormona humana del crecimiento, vacunas, enzimas, antibiticos etc., lo que implica la aplicacin de procedimientos genticos para crear nuevos organismos capaces de sintetizar esos productos especficos de elevado valor comercial. Como se deduce de lo anteriormente expuesto por definicin la Biotecnologa depende de la Ingeniera gentica que es la ciencia que se ocupa de la manipulacin (modificacin) de los genes y consecuentemente, de los productos elaborados a partir de ellos. Los productos que se pueden obtener mediante Ingeniera gentica tienen un enorme inters industrial, lo que ha impulsado un desarrollo, de impredecibles consecuencias, cuyo objetivo es aislar y patentar genes que puedan tener una aplicacin teraputica, los denominados genes teraputicos. As, los productos teraputicos o las patentes gnicas registradas aumentan de una manera constante. Los medicamentos del futuro se podrn disear especficamente. El conocimiento y secuenciacin del genoma humano, tambin el de animales, plantas u otros organismos, permitir disear productos que puedan usarse en la terapia frente a las enfermedades, en la mejora de los rendimientos agrcolas o ganaderos o en la lucha contra la contaminacin. Microorganismos utilizados en biotecnologa Los principales microorganismos utilizados en la Ingeniera gentica son bsicamente bacterias y hongos del tipo de los actinomicetos, las levaduras o los mohos; representan unos pocos centenares de especies que proporcionan productos de inters comercial como protenas, enzimas, polisacridos, etanol, cido actico, acetona, vitaminas, antibiticos, hormonas etc.

Principales tcnicas empleadas en biotecnologa Adems de las tcnicas tradicionales basadas en las fermentaciones, en la actualidad las tcnicas biotecnolgicas se basan en el desarrollo de la ingeniera gentica. La Ingeniera gentica es una tecnologa avanzada que permite modificar la composicin gentica de un organismo al introducir en l uno o ms genes procedentes de otro organismo. Los organismos modificados mediante ingeniera gentica se conocen como organismos transgnicos. Herramientas de la Ingeniera gentica La Ingeniera gentica se sirve de los avances de la Biologa molecular que permiten utilizar clulas y molculas como autnticas herramientas. Entre ellas tenemos que citar: Enzimas de corte o de restriccin Un vehculo o vector Enzimas de pegado o ADN ligasas a) Enzimas de corte o de restriccin, actan como tijeras moleculares que cortan el ADN por secuencias especficas denominadas secuencias de reconocimiento. Posteriormente estos fragmentos de ADN podrn unirse a vectores de clonacin que hayan sido cortados por el mismo procedimiento enzimtico. En la actualidad se conocen varios cientos de enzimas de restriccin.

b) Un vehculo o vector. Se utiliza para mover los genes. Los vectores ms utilizados son plsmidos bacterianos, pequeas molculas circulares de ADN que incorporan con facilidad ADN forneo (procedente de otro organismo) y que son fcilmente transferidos a otras clulas.

c) Enzimas de pegado o ADN ligasas. Unen fragmentos de ADN de distinta procedencia y originan un ADN hbrido, el denominado ADN recombinante. Etapas en la transferencia de genes El mtodo utilizado por la Ingeniera gentica se inicia con el aislamiento del gen que se desea transferir, y tiene como objetivo final la expresin de ese gen, es decir la sntesis de una determinada protena. El proceso se desarrolla segn las siguientes etapas: a) Obtencin del ADN hbrido: Las enzimas de restriccin cortan el ADN de la clula donadora en pequeos fragmentos entre los que se encuentra el gen de inters que se quiere transferir (por ejemplo el gen de la insulina). Con las mismas enzimas se cortan los plsmidos que se van a utilizar como vectores. Las ADN ligasas insertan en cada plsmido un fragmento de ADN forneo. Los plsmidos hbridos penetran en las bacterias receptoras y algunas incorporan el gen de inters b) Clonacin de genes. Se aslan las bacterias modificadas genticamente y se cultivan por separado para obtener clones. Cada clon de bacterias contiene un gen forneo repetido infinidad de veces. El conjunto de clones obtenidos recibe el nombre de genoteca y representa la totalidad del genoma del organismo.

Para que el proceso concluya con xito no basta con que la clula haya incorporado el gen forneo, sino que adems este tiene que expresarse, lo que se sabe si la clula fabrica la protena deseada. Los clones as obtenidos pueden utilizarse en la industria para fabricar esa protena, se detecta y selecciona el clon deseado a partir de la genoteca para posteriormente producir un gran nmero de clulas que contengan el clon buscado para su aislamiento y estudio.

Estructura del plsmido pBR332

Los plsmidos son tiles vectores de clonacin debido a algunas de sus propiedades caractersticas: El ADN circular es altamente estable durante su aislamiento qumico. Su pequeo tamao facilita su aislamiento y manipulacin. Presenta un origen de replicacin independiente, fuera del control del cromosoma. Presenta zonas caractersticas denominadas marcadores en las que se localizan genes de resistencia a antibiticos lo que facilita la deteccin y seleccin de los clones. Adems de los plsmidos tambin se usan como vectores de clonacin algunos bacterifagos, genomas modificados de adenovirus o cromosomas artificiales de levaduras etc. Huspedes para vectores de clonacin Para que la clonacin gnica tenga xito, el husped, debe presentar una serie de caractersticas: a) Capacidad de crecimiento rpido y en un medio de cultivo barato.

b) No ser daino ni patgeno. c) Ser capaz de aceptar un ADN forneo y que este permanezca estable en el cultivo. d) Debe contener las enzimas adecuadas que permitan la replicacin del vector. Los huspedes ms tiles para la clonacin son microorganismos que crecen bien y de los que se conoce bien su informacin gentica, los ms usados son Escherichia coli y Bacillus subtilis entre los procariotas y Sacharomyces cerevisiae entre los eucariotas. ADN sinttico y PCR En la actualidad es posible clonar genes a partir de ARN-m e incluso la fabricacin de ADN sinttico. Una vez que se tiene es amplificado rpidamente mediante la tcnica PCR (reaccin en cadena de la ADNpolimerasa) que puede multiplicar molculas de ADN hasta cien mil veces en un tubo de ensayo, es una tcnica por tanto "in vitro" (en el laboratorio, no en el ser vivo) En el primer caso lo que se hace es obtener una hebra de ADN a partir de una cadena de ARN-m mediante una transcripcin inversa. Posteriormente, a partir de la hebra de ADN obtenida y por accin de la ADN polimerasa, se obtiene una cadena doble de ADN que luego puede ser insertado (clonacin) en un plsmido o en otro vector. Esta tcnica presenta la ventaja de que al ARN-m no contiene intrones. Las siglas PCR indican la denominada reaccin en cadena de la polimerasa, mtodo de clonacin que hace uso de la enzima ADN-polimerasa, la cual es capaz de copiar molculas de ADN. Esta PCR puede multiplicar molculas de ADN por cien mil veces en un tubo de ensayo. En resumen, la tcnica PCR se desarrolla as: a)el fragmento de ADN a replicar se introduce en una disolucin que contiene ADN-pol. b)se aaden desoxirribonucletidos en cantidad y las molculas de cebador sintetizadas. c)al calentar, se separan las hebras complementarias de los fragmentos de ADN. d)si se enfra, se unen los cebadores a las hebras simples de nucletidos, lo cual es reconocido por la ADN-pol que comienza a aadir nucletidos formando la hebra complementaria. e)calentando y enfriando alternativamente la solucin, se pueden obtener millones de copias de ADN en perodos de tiempo cortos.

Esta tcnica permite: a) Obtener grandes cantidades de genes para los procesos de clonacin. b) Tambin se usa esta tcnica en estudios comparativos o evolutivos. Debido a su sensibilidad ha sido usada para clonar ADN de restos humanos momificados e incluso con restos de animales o plantas fsiles. c) Tambin es muy til en la prctica forense, pues permite amplificar cantidades muy pequeas de ADN presentes en una muestra.

Aplicaciones de la ingeniera gentica Entre las aplicaciones de la ingeniera gentica podemos citar las siguientes: En el campo de la medicina se usan para la fabricacin de gran cantidad de productos farmacuticos (produccin de insulina o de vacunas), tratamientos de terapia gnica dirigidos a tratar de curar enfermedades genticas humanas, utilizacin de animales transgnicos que se utilizan para producir protenas humanas de gran valor farmacolgico. En el campo de la agricultura y la ganadera se usan para conseguir plantas resistentes a herbicidas o al ataque de determinados insectos, mejoras de los productos o la proteccin frente a los ataques de cepas microbianas o de determinados virus. En la industria tradicional se usa la Biotecnologa en todos los proceso de fermentacin por ejemplo en la fabricacin del vino. Son muy variados los productos que se obtienen en estos procesos de fermentacin y que se comercializan, entre ellos: antibiticos, vitaminas y aminocidos, hormonas esteroideas, gran variedad de enzimas, vinagre, conservantes y acidulantes alimentarios, levaduras, bebidas alcohlicas, alcohol etlico a granel etc. Tambin debemos hablar de las aplicaciones medioambientales, como la biodegradacin del petrleo, los tratamientos microbiolgicos de aguas residuales o la remediacin de vertidos txicos. Algunas de las aplicaciones de la biotecnologa ya se han estudiado en el tema referente a microorganismos. Alimentacin Es la biotecnologa con mayor tradicin en la historia de la civilizacin humana, y dada la gran competitividad de la industria alimentaria, son numerosos los proyectos de I + D que se dedican a estudiar cmo acelerar procesos de fermentacin y de mejora de los alimentos primarios en los que las nuevas tcnicas biotecnolgicas desempean un papel crucial. As se utilizan actualmente bacterias y levaduras genticamente manipuladas para acelerar la elaboracin de los procesos fermentativos que dan lugar al queso, yogurt, cerveza... Fabricacin del pan: Las levaduras de la especie Saccharomyces cerevisiae llevan a cabo una fermentacin alcohlica, que emplea como sustratos los azcares presentes en la harina de trigo. Los productos resultantes son etanol, que se evapora en la coccin, y CO2, responsable de que la masa suba, es decir, aumente de volumen y se esponje. La reaccin es la siguiente: C6H12O6 2 CH3 CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP Glucosa 2 Etanol + 2 CO2 + 2 ATP La elaboracin del pan consiste en mezclar, en un primer paso, harina, agua, sal y levadura. Al entrar en contacto con el agua, las amilasas presentes en la harina se activan e hidrolizan el almidn a mono y disacridos, azcares que son rpidamente fermentados por la levadura. El CO2 resultante queda atrapado en el interior de la masa y forma un gran n de pequeas burbujas que determinan el aspecto esponjoso del mismo. La coccin de la masa elimina el etanol producido en la fermentacin y destruye las clulas de levadura. Asimismo, tiene lugar una importante reduccin en el contenido de agua. Fabricacin del vino y la cerveza Intervienen tambin levaduras de la especie Saccharomyces cerevisiae que llevan a cabo una fermentacin alcohlica semejante a la del pan, pero usando como sustrato los azcares presentes en el mosto, el zumo natural de las uvas, rico en fructosa y glucosa. La levadura se encuentra de forma natural en la piel de las uvas. Se obtiene etanol y CO2. El proceso de fabricacin del vino se inicia con el prensado de las uvas para obtener el mosto. Las levaduras de la uva comienzan la fermentacin rpidamente, aunque en la produccin industrial del vino se aaden cepas de levaduras seleccionadas con el fin de acelerar el proceso y de incrementar el contenido de etanol. La fermentacin dura unos pocos das. Durante este tiempo es necesario controlar la velocidad mediante la temperatura, ya que si sta aumenta mucho puede llegar a destruir las levaduras. Cuando termina la fermentacin, el vino se aclara (mediante filtrado y aadiendo compuestos que

facilitan la precipitacin de los elementos en suspensin) y se embotella, si se desea obtener vinos jvenes, o se somete a un proceso de maduracin en barricas apropiadas, para envejecerlo. El vino blanco y el tinto se elaboran a partir del mosto de uvas blancas o negras. Para obtener vino tinto hay que dejar la piel de la uva negra (el hollejo) en el vino. El alcohol producido en la fermentacin extrae los pigmentos del hollejo que son los que dan el color al vino. El CO2 resultante se evapora o se elimina artificialmente. En el caso de los vinos espumosos, se les aade una cantidad extra de azcar para que se produzca una segunda fermentacin alcohlica que se realiza a presin. En ella se libera el CO2 que constituye las burbujas. La obtencin de cerveza es algo ms complicada, pues se elabora a partir de cereales que contienen en sus granos almidn, que no fermenta directamente. Al germinar sus semillas producen amilasas, que convierten el almidn en glucosa. As, la malta (granos de cebada germinados y tostados), cuando se muele con agua, libera las amilasas que hidrolizan al almidn a glucosa, que es el sustrato para la fermentacin alcohlica, que dura de 5 a 10 das. El producto final se consigue mediante la incorporacin de algunos aditivos, como las flores de lpulo, responsables del sabor amargo de la cerveza. Tambin se filtra y se pasteuriza, antes de que pueda ser bebida. Fabricacin del queso y leches fermentadas En la elaboracin del queso y productos como el yogur o la cuajada interviene las llamadas bacterias lcticas (pertenecientes a diversos gneros, como Streptococcus, Lactobacillus y Lactococcus), que fermentan azcares sencillos para producir cido lctico. La reaccin de la fermentacin lctica es la siguiente: C6H12O6 2 CH3 CHOH COOH + 2 ATP o a partir de lactosa Lactosa 2 glucosa 4 cido lctico + 2 ATP Se utiliza leche entera, y como bacterias Streptococcus termophillus (realiza una fermentacin heterolctica dando cido lctico y etanol) y_Lactobacillus bulgaricus (realiza fermentacin homolctica). El proceso es el siguiente: se incuba la leche y las bacterias durante unas 8 horas (a 35-40 C), y se produce la fermentacin; para eliminar el olor caracterstico debido al lctico y al acetaldehdo, se aaden aditivos (aromatizantes) y sustancias con sabor a fruta. Las bacterias utilizadas son anaerobias pero tolerantes al oxgeno.

La elaboracin del queso se lleva a cabo en 3 etapas: 1) Adicin a la leche de renina, tambin llamada cuajo, una enzima que se encuentra en el estmago de los rumiantes. En combinacin con el cido lctico producido por las bacterias lcticas de la leche, la renina precipita (coagula) las protenas lcticas, formando un producto slido, la cuajada, que se separa posteriormente del componente lquido, el suero lcteo. 2) Separacin del suero y la cuajada, mediante un proceso de filtracin, haciendo pasar el conjunto a travs de telas limpias. A continuacin se aade sal a la cuajada y se prensa para expulsar el agua. 3) Maduracin del queso: Segn el tipo de queso, en esta etapa final intervienen otras bacterias y mohos, responsables del sabor y el olor propios de cada variedad de queso. Los agujeros caractersticos de algunos de ellos son el resultado del CO2, desprendido durante la fermentacin, que queda atrapado en la masa del queso y forma burbujas.

Procesos de inters ambiental Como ya explicamos, algunos microorganismos son tiles en la lucha frente a la contaminacin, un proceso denominado Biorremediacin. Actualmente se utilizan microorganismos capaces de consumir diversas sustancias txicas que pueden utilizarse para descontaminar reas de la superficie, del subsuelo o de las aguas subterrneas. La ingeniera gentica est empezando a estudiar diversas bacterias procedentes de medios naturales, en las que se ha detectado la existencia de genes para la biodegradacin de desechos

txicos, como pesticidas clorados, clorobencenos, naftaleno, tolueno, anilinas... Los genes deseados se aslan de especies como Pseudomonas y Alcaligenes y posteriormente se clonan mediante plsmidos. As se consigue aumentar su efectividad. Adems de las aplicaciones ya estudiadas, se estn potenciando mediante ingeniera gentica la capacidad natural de muchas plantas para concentrar metales pesados, a fin de utilizarlas para recuperar suelos contaminados (p.e. en el caso del cauce del ro Guadalquivir despus del vertido de la balsa minera de Aznalcllar). Actualmente se est procediendo a la seleccin de las formas adecuadas y a su experimentacin.

Farmacia y Sanidad Antibiticos: Son sustancias qumicas, sintetizadas por microorganismos, que impiden el crecimiento de otros microorganismos o bien causan su muerte. El primero en descubrirse fue la penicilina, por Alexander Fleming en 1929. Desde entonces, muchos ms han sido obtenidos en la industria farmacutica, principalmente a partir de hongos filamentosos como Penicillium, o bacterias del grupo de los Actinomicetos, como el gn. Streptomyces. Actualmente se conocen unos 10.000 antibiticos, y se siguen descubriendo otros nuevos, aunque slo unos 100 estn comercializados. En algunos casos son muy especficos, mientras que otros son efectivos frente a un amplio n de agentes infecciosos (antibiticos de amplio espectro) Vacunas: Se obtienen con preparaciones de agentes patgenos muertos y atenuados, para inducir inmunidad frente al germen activo. Actualmente se obtienen mediante ingeniera gentica, clonando los genes que codifican la protena que acta como antgeno. Luego esa protena se introduce en bacterias no patgenas, que, al incorporar ese gen a su cromosoma, fabrican grandes cantidades del antgeno, que, una vez aislado y purificado, se utiliza directamente como vacuna y desarrollar la respuesta inmune, sin problemas de posibles infecciones, como sucede con las vacunas tradicionales en algunas ocasiones. Este tema se desarrollar ms ampliamente en la unidad siguiente. Hormonas: Se obtienen mediante ingeniera gentica, introduciendo plsmidos recombinantes que portan el gen que codifica la hormona deseada en bacterias apropiadas. Una vez en el interior de la clula, los plsmidos se autorreplican al tiempo que las bacterias crecen y se dividen, obtenindose una poblacin de clulas idnticas (clon) que contienen el gen. As se consigue, p.e., la insulina humana (protena que permite que las clulas asimilen los glcidos que circulan por la sangre), la hormona del crecimiento humana y la eritropoyetina (EPO) que se utiliza en diferentes tipos de anemias, pues estimula la produccin de eritrocitos (glbulos rojos). PREGUNTAS DE SELECTIVIDAD (PAU ANDALUCA)
Defina microorganismo [05]. Cite un ejemplo de relacin beneficiosa [025] y otro de relacin perjudicial [025] entre los microorganismos y la especie humana. Defina biotecnologa [05]. Exponga en ejemplo de aplicacin biotecnolgica [05]. Microorganismo: ser vivo de pequeo tamao que no puede ser percibido por el ojo humano sin la ayuda de un microscopio.......... 0,5 p Relacin beneficiosa (directa o indirecta): produccin de alimentos, medicamentos y vacunas; papel en los ciclos de la materia y cadenas trficas, etc. Relacin perjudicial: infecciones bacterianas, vricas y fngicas, deterioro y putrefaccin de alimentos, etc. (0,25 puntos cada una) .......0,5 p Biotecnologa: conjunto de procesos industriales que utilizan microorganismos o clulas procedentes de animales o vegetales para obtener determinados productos.... 0,5 p Ejemplo de aplicacin biotecnolgica: obtencin de hormonas, fermentaciones industriales, alimentos transgnicos, etc....... 0,5 p Defina microorganismo [05]. Cite un ejemplo de relacin beneficiosa [025] y otro de relacin perjudicial [025] entre los microorganismos y la especie humana. Defina biotecnologa [05]. Exponga en ejemplo de ap licacin biotecnolgica [05]. Microorganismo: ser vivo de pequeo tamao que no puede ser percibido por el ojo humano sin la ayuda de un microscopio .......... 0,5 p Relacion beneficiosa (directa o indirecta): produccin de alimentos, medicamentos y vacunas; papel en los ciclos de la materia y cadenas troficas, etc. Relacion perjudicial: infecciones bacterianas, viricas y fungicas, deterioro y putrefaccion de alimentos, etc. (0,25 puntos cada una) .......0,5 p

Biotecnologia: conjunto de procesos industriales que utilizan microorganismos o clulas procedentes de animales o vegetales para obtener determinados productos.... 0,5 p Ejemplo de aplicacion biotecnologica: obtencion de hormonas, fermentaciones industriales, alimentos transgenicos, etc....... 0,5 p La leche pasteurizada se corta cuando se deja a temperatura ambiente en una tarde de agosto. No ocurre lo mismo cuando se guarda en el interior de un frigorfico. De una explicacin razonada a este hecho [1]. La leche se contamina espontneamente con las bacterias del cido lctico. Cuando se expone a temperatura ambiente alta para la multiplicacin de las bacterias, stas proliferan rpidamente y fermentan la lactosa de la leche cortndola.......... 0,5 puntos En refrigeracin, la proliferacin de las bacterias est atenuada por la baja temperatura........ 0,5 puntos Suponga que desaparecieran todas las bacterias de la Tierra. Proponga de manera razonada cuatro argumentos que pongan de manifiesto el perjuicio que provocara esta desaparicin [1]. Desaparicin de: productores de ecosistemas acuticos, descomponedores, flora normal o habitual del cuerpo humano, flora gastro-intestinal de rumiantes, adems no podran obtenerse algunos productos elaborados industrialmente, etc., (0,25 puntos cada argumento) Explique el proceso general que permite la obtencin de hormona del crecimiento humano a partir de microorganismos modificados genticamente [0,9]. Indique tres ventajas que ofrezca el empleo de hormona obtenida por este mtodo frente a la obtenida a partir de hipfisis de animales [0,6]. Debe describirse la clonacin y expresin de un gen humano en un microorganismo ............... 0,9 puntos Ventajas: abaratamiento, se trata de la misma hormona humana, no produce reacciones alrgicas, se puede obtener sin contaminantes, esta forma de produccin supone una mayor accesibilidad para los usuarios............. 0,6 puntos