You are on page 1of 4

Immunocytochemistry (ICC) is a common laboratory technique that uses antibodies that target specific peptides or protein antigens in the

cell via specific epitopes. These bound antibodies can then be detected using several different methods. ICC allows researchers to evaluate whether or not cells in a particular sample express the antigen in question. In cases where an immunopositive signal is found, ICC also allows researchers to determine which sub-cellular compartments are expressing the antigen.

Contents

1 Immunocytochemistry vs. immunohistochemistry 2 Methods 3 References 4 External links

[edit] Immunocytochemistry vs. immunohistochemistry


Immunocytochemistry differs from immunohistochemistry in that the former is performed on samples of intact cells that have had most, if not all, of their surrounding extracellular matrix removed. This includes cells grown within a culture, deposited from suspension, or taken from a smear. In contrast, immunohistochemical samples are sections of biological tissue, where each cell is surrounded by tissue architecture and other cells normally found in the intact tissue. Immunocytochemistry is a technique used to assess the presence of a specific protein or antigen in cells (cultured cells, cell suspensions) by use of a specific antibody, which binds to it, thereby allowing visualization and examination under a microscope. It is a valuable tool for the determination of cellular contents from individual cells. Samples that can be analyzed include blood smears, aspirates, swabs, cultured cells, and cell suspensions. There are many ways to prepare cell samples for immunocytochemical analysis. Each method has its own strengths and unique characteristics so the right method can be chosen for the desired sample and outcome. Cells to be stained can be attached to a solid support to allow easy handling in subsequent procedures. This can be achieved by several methods: adherent cells may be grown on microscope slides, coverslips, or an optically suitable plastic support. Suspension cells can be centrifuged onto glass slides (cytospin), bound to solid support using chemical linkers, or in some cases handled in suspension. Concentrated cellular suspensions that exist in a low-viscosity medium make good candidates for smear preparations. Dilute cell suspensions existing in a dilute medium are best suited for the preparation of cytospins through cytocentrifugation. Cell suspensions that exist in a highviscosity medium, are best suited to be tested as swab preparations. The constant among these preparations is that the whole cell is present on the slide surface. For any intercellular reaction to take place, immunoglobulin must first traverse the cell membrane that is intact in these preparations. Reactions taking place in the nucleus can be more difficult, and the extracellular

fluids can create unique obstacles in the performance of immunocytochemistry. In this situation, permeabilizing cells using detergent (Triton X-100 or Tween-20) or choosing organic fixatives (acetone, methanol, or ethanol) becomes necessary. Antibodies are an important tool for demonstrating both the presence and the subcellular localization of an antigen. Cell staining is a very versatile technique and, if the antigen is highly localized, can detect as few as a thousand antigen molecules in a cell. In some circumstances, cell staining may also be used to determine the approximate concentration of an antigen, especially by an image analyzer.

[edit] Methods
For more details on immunochemical methods, see immunohistochemistry. There are many methods to obtain immunological detection on tissues, including those tied directly to primary antibodies or antisera. A direct method involves the use of a detectable tag (e.g., fluorescent molecule, gold particles, etc., ) directly to the antibody that is then allowed to bind to the antigen (e.g., protein) in a cell. Alternatively, there are many indirect methods. In one such method, the antigen is bound by a primary antibody which is then amplified by use of a secondary antibody which binds to the primary antibody. Next, a tertiary reagent containing an enzymatic moiety is applied and binds to the secondary antibody. When the quaternary reagent, or substrate, is applied, the enzymatic end of the tertiary reagent converts the substrate into a pigment reaction product, which produces a color (many colors are possible; brown, black, red, etc.,) in the same location that the original primary antibody recognized that antigen of interest. Some examples of substrates used (also known as chromogens) are AEC (3-Amino-9EthylCarbazole), or DAB (3,3'-Diaminobenzidine). Use of one of these reagents after exposure to the necessary enzyme (e.g., horseradish peroxidase conjugated to an antibody reagent) produces a positive immunoreaction product. Immunocytochemical visualization of specific antigens of interest can be used when a less specific stain like H&E (Hematoxylin and Eosin) cannot be used for a diagnosis to be made or to provide additional predictive information regarding treatment (in some cancers, for example). Alternatively the secondary antibody may be covalently linked to a fluorophore (FITC and Rhodamine are the most common) which is detected in a fluorescence or confocal microscope. The location of fluorescence will vary according to the target molecule, external for membrane proteins, and internal for cytoplasmic proteins. In this way immunofluorescence is a powerful technique when combined with confocal microscopy for studying the location of proteins and dynamic processes (exocytosis, endocytosis, etc.).

Imunositokimia (ICC) adalah teknik laboratorium umum yang menggunakan antibodi yang menargetkan peptida tertentu atau antigen protein dalam sel melalui epitop tertentu. Antibodi ini terikat kemudian dapat dideteksi dengan menggunakan beberapa metode yang berbeda. ICC memungkinkan peneliti untuk mengevaluasi apakah tidak sel dalam sampel tertentu yang mengekspresikan antigen tersebut. Dalam kasus di mana sinyal immunopositive ditemukan, ICC juga memungkinkan peneliti untuk menentukan sub-seluler kompartemen mengekspresikan antigen.

Imunositokimia vs imunohistokimia Imunositokimia berbeda dari imunohistokimia dalam bahwa mantan dilakukan pada sampel sel utuh yang memiliki sebagian besar, jika tidak semua, dari sekitar matriks ekstraselular mereka dihapus. Ini termasuk sel-sel tumbuh dalam budaya, diendapkan dari suspensi, atau diambil dari smear. Sebaliknya, sampel imunohistokimia merupakan bagian dari jaringan biologis, di mana setiap sel dikelilingi oleh arsitektur jaringan dan sel-sel lain yang biasanya ditemukan dalam jaringan utuh. Imunositokimia adalah teknik yang digunakan untuk menilai adanya protein tertentu atau antigen dalam sel (sel kultur, suspensi sel) dengan menggunakan antibodi spesifik, yang mengikat untuk itu, sehingga memungkinkan visualisasi dan pemeriksaan di bawah mikroskop. Ini adalah alat yang berharga untuk penentuan isi seluler dari sel-sel individual. Sampel yang dapat dianalisis meliputi noda darah, aspirasi, penyeka, sel kultur, dan suspensi sel. Ada banyak cara untuk mempersiapkan sampel sel untuk analisis immunocytochemical. Setiap metode memiliki kekuatan sendiri dan karakteristik unik sehingga metode yang tepat dapat dipilih untuk sampel yang diinginkan dan hasil. Sel yang akan diwarnai dapat dilampirkan pada sebuah pendukung padat untuk memungkinkan penanganan mudah dalam prosedur berikutnya. Hal ini dapat dicapai dengan beberapa metode: sel patuh dapat ditanam pada slide mikroskop, coverslips, atau dukungan plastik optik cocok. Suspensi sel dapat disentrifugasi ke slide kaca (cytospin), terikat pada dukungan solid menggunakan linker kimia, atau dalam beberapa kasus yang ditangani dalam suspensi. Konsentrat suspensi seluler yang ada di media viskositas rendah membuat calon yang baik untuk persiapan smear. Suspensi sel encer yang ada dalam medium encer yang paling cocok untuk persiapan cytospins melalui cytocentrifugation. Sel suspensi yang ada dalam media tinggi viskositas, paling cocok untuk diuji sebagai persiapan swab. Konstanta di antara persiapan adalah bahwa seluruh sel hadir pada permukaan geser. Untuk reaksi antar berlangsung, imunoglobulin harus terlebih dahulu melintasi membran sel yang utuh dalam persiapan ini. Reaksi yang terjadi di inti dapat lebih sulit, dan cairan ekstraselular dapat menciptakan hambatan yang unik dalam kinerja imunositokimia. Dalam situasi ini, sel-sel permeabilizing menggunakan deterjen (Triton X-100 atau Tween-20) atau memilih fiksatif organik (aseton, metanol, etanol atau) menjadi perlu. Antibodi merupakan alat penting untuk menunjukkan baik kehadiran dan lokalisasi subselular antigen. Pewarnaan sel adalah teknik yang sangat fleksibel dan, jika antigen sangat terlokalisasi,

dapat mendeteksi sedikitnya sebagai molekul antigen ribu sel. Dalam beberapa keadaan, pewarnaan sel juga dapat digunakan untuk menentukan konsentrasi perkiraan antigen, terutama oleh analisa citra. [Sunting] Metode Untuk rincian lebih lanjut tentang metode immunochemical, lihat imunohistokimia. Ada banyak metode untuk mendapatkan deteksi imunologi pada jaringan, termasuk yang terkait langsung dengan antibodi primer atau antiserum. Sebuah metode langsung melibatkan penggunaan tag terdeteksi (misalnya, molekul neon, partikel emas, dll,) langsung ke antibodi yang kemudian diizinkan untuk mengikat antigen (misalnya, protein) dalam sel. Atau, ada metode tidak langsung banyak. Dalam satu metode tersebut, antigen terikat oleh antibodi primer yang kemudian diperkuat dengan menggunakan antibodi sekunder yang berikatan dengan antibodi primer. Selanjutnya, reagen tersier yang mengandung gugus enzimatik diterapkan dan mengikat antibodi sekunder. Ketika reagen kuaterner, atau substrat, diterapkan, ujung enzimatik reagen tersier mengubah substrat menjadi produk reaksi pigmen, yang menghasilkan warna (warna banyak mungkin, coklat, hitam, merah, dll,) di sama lokasi bahwa antibodi primer asli mengakui bahwa antigen bunga. Beberapa contoh substrat yang digunakan (juga dikenal sebagai chromogens) adalah AEC (3Amino-9-EthylCarbazole), atau DAB (3,3 '-Diaminobenzidine). Penggunaan salah satu reagen setelah terpapar enzim yang diperlukan (misalnya, lobak peroksidase konjugasi antibodi reagen) menghasilkan produk immunoreaction positif. Visualisasi imunositokimia antigen tertentu yang menarik dapat digunakan ketika kurang spesifik noda seperti H & E (Hematoksilin dan Eosin) tidak dapat digunakan untuk diagnosis harus dibuat atau untuk memberikan informasi prediksi tambahan mengenai pengobatan (dalam beberapa jenis kanker, misalnya). Atau antibodi sekunder dapat kovalen terkait dengan fluorophore (FITC dan Rhodamin adalah yang paling umum) yang terdeteksi dalam mikroskop fluoresensi atau confocal. Lokasi fluoresensi akan bervariasi sesuai dengan molekul target, eksternal untuk protein membran, dan internal untuk protein sitoplasma. Dengan cara ini imunofluoresensi adalah teknik yang kuat bila dikombinasikan dengan mikroskop confocal untuk mempelajari lokasi protein dan proses dinamis (exocytosis, endositosis, dll).

You might also like