UREA ENZIMTICA

10.013.00
FINALIDAD Kit destinado a la determinacin de Urea en el suero, plasma y orina. PRINCPIO DEL MTODO La urea es hidrolizada en la presencia de la enzima ureasa y agua, con produccin de NH3 y CO2. El amonio formado reacciona con salicilato y hipoclorito de sodio en medio alcalino, originando una coloracin verde (reaccin de Berthelot modificada). El aumento de la absorbancia y 580nm es proporcional a la concentracin de urea en la muestra. COMPOSICIN DE LOS REACTIVOS Tampn fosfato 50 mmol/L pH 6,7; EDTA 2 mmol/L; Salicilato sdico 60 mmol/L; Nitroprusiato de sodio 3,2 mmol/L; azida sdica 0,01% p/v. Hipoclorito sdico 140 mmol/L; Hidrxido de sodio 150 mmol/L. Azida sdica 0,095% p/v; Ureasa 30.000 U/L. Azida sdica 0,095% equivalente a 70 mg/dL p/v; urea en concentracin Reactivo de trabajo 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL 2. Mezclar cuidadosamente y bien e incubar los tubos durante 5 minutos a 37 C. 3. Pipetar: R2 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL 4. Mezclar cuidadosamente y bien e incubar los tubos durante 5 minutos a 37 C. 5. Medir la absorbancia del Patrn (Ap) y de la Muestra (Aa) frente al Blanco a 580nm. El color es estable durante 30 minutos. PROCEDIMIENTO DE CALIBRACIN/CLCULOS Clculo para Suero: Urea (mg/dL) = Absorbancia de la Muestra x Concentracin Patrn (mg/dL) Absorbancia del Patrn Ejemplo: Concentracin del Patrn = 70 mg/dL Absorbancia de la Muestra = 0,109 Absorbancia del Patrn = 0,237 cido rico (mg/dL) = 0,109 x 70 = 32,2 mg/dL 0,237 Con Factor de Calibracin: Factor de Calibracin = Concentracin Patrn (mg/dL) Absorbancia del Patrn Urea (mg/dL) = Absorbancia de la muestra x Factor de Calibracin Ejemplo: Factor de Calibracin = 70 0,237

La concentracin obtenida para este Patrn fue determinada usando el Patrn Primario Internacional NIST 912a. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Estabilidad: Estable hasta la fecha de validez del kit que est impresa en el rtulo del envase. No usar reactivos cuya fecha de validez haya expirado. Conservar de 2 a 8 C. No congelar y mantener al abrigo de la luz. MATERIAL NECESARIO NO PROVISTO Espectrofotmetro o fotmetro para lectura en 580 nm (560-600). Bao de agua, termostatizado a 37 C. Pipetas de vidrio y/o automticas. Reloj o Cronmetro. Tubos de ensayo. CUIDADOS Y PRECAUCIONES El kit se destina slo para uso diagnstico in vitro. Las muestras a ser analizadas deben ser tratadas como material potencialmente infectivo. Utilizar los EPIs de acuerdo con las Buenas Prcticas de Laboratorio Clnico. Desechar las sobras de las reacciones de acuerdo con las Buenas Prcticas de Laboratorio Clnico (BPLC) y Programa de Gestin de Residuos de Servicio de Salud (PGRSS). Las informaciones de Descarte, Seguridad y Primeros Socorros estn descritas en la Ficha Individual de Seguridad de Productos Qumicos (FISPQ) de este producto, disponible en www.biotecnica.ind.br o por el telfono +55 (35)-3214-4646. No mezclar reactivos de lotes diferentes. No cambiar las tapas de los frascos de los reactivos, a fin de evitar contaminacin cruzada. No usar el reactivo cuando ste presente caracterstica visual en desacuerdo con el especificado en la FISPQ del producto. Evitar dejar los reactivos fuera de las condiciones de almacenamiento especificadas, cuando los mismos no estn en uso. Usar pipetas de vidrio y punteras desechables especficas para cada muestra, control, patrn/calibrador y reactivo. El nivel de agua del bao-mara debe ser superior al de los tubos de ensayo que contienen las reacciones. MUESTRA - PREPARO Y ESTABILIDAD Suero y plasma (EDTA y heparina sdica): La urea en el suero es estable por 7 das de 2 a 8 C. Orina - Colectar la orina de 24 horas. - Mezclar cuidadosamente la orina, medir el volumen y separar 50 mL de la muestra. - Aadir una gota (50 L) de HCl 6N y mezclar. - Centrifugar por 10 minutos a 3000 rpm. - Diluir una alcuota de la orina centrifugada en la proporcin de 1:50 con agua purificada (cuando necesario, la dilucin de la orina deber ser alterada para obtenerse resultado dentro del intervalo operacional del mtodo). - Utilizar la orina diluida para proceder el ensayo. - Multiplicar el resultado obtenido por 50 (o por el factor que haya sido aplicado).

= 295

Urea (mg/dL) = 0,109 x 295 = 32,2 mg/dL Clculo para Orina: Orina (mg/24 horas) = *mg/dL x volumen urinario (em mL) 100 * Valor corregido por el factor de dilucin. SENSIBILIDAD Y LINEALIDAD - Sensibilidad Metodolgica: Calculado: 0,186 mg/dL Experimental: 3,73 mg/dL - Linealidad: 200 mg/dL Para valores superiores, diluir la muestra con NaCl 150 mM (0,9%), realizar nueva dosificacin y multiplicar el resultado obtenido pelo factor de dilucin. LIMITACIONES DE LA TCNICA Anticoagulantes Citrato, Fluoruro y Oxalato interfieren en la dosificacin. Hemlisis, Ictericia y Lipemia Hemoglobina > 400 mg/dL Bilirrubina > 20 mg/dL Triglicridos > 900 mg/dL CONTROL DE LA CALIDAD Todo laboratorio clnico debe mantener un programa de control interno de la calidad que defina claramente los objetivos, procedimientos, normas y criterios para lmites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. Al mismo tiempo, debe ser mantenido un sistema definido para monitorear la variabilidad analtica que ocurre en todo sistema de medicin. El uso de controles para avaluar la imprecisin de las determinaciones debe ser prctica rutinera en el laboratorio. Se sugiere usar un control en la faja de referencia o en el nivel de decisin y otro control con valor en otra faja de significado clnico. La aplicacin del sistema de reglas mltiplas de Westgard para avaluacin del estado de control tambin es recomendable. El laboratorio debe participar de programas de control externo de calidad a fin de verificar la exactitud de sus resultados. Se tiene como ejemplo los programas ofrecidos por la SBAC (Sociedade Brasileira de Anlises Clnicas) y SBPC (Sociedade Brasileira de Patologia Clnica). Para Control Interno de Calidad de Laboratorio se recomienda el uso del suero calibrador y de los sueros control abajo: Suero Calibrador - Autocal H Suero Control Normal - Quantinorm Suero Control Patolgico - Quantialt VALORES DE REFERENCIA 13.002.00 13.003.00 13.004.00

La urea en la orina es estable por 5 das de 2 a 8 C. PROCEDIMIENTO TCNICO A) PREPARACIN DE LOS REACTIVOS Reactivo de Trabajo: Mezclar en la proporcin: 25 partes do R1 + 1 parte do R3. Estable 21 das de 2 a 8 C. B) PROCEDIMIENTO 1. Pipetar en tubos de ensayo: STD Muestra Blanco ----Patrn 10 L --Muestra -10 L

Suero y Plasma Orina

mg/dL mmol/L 15 - 45 2,49 - 7,49 26 a 43 g/24 horas 26 - 43

Estos valores son nicamente para orientacin, siendo recomendable que cada laboratorio establezca su propio intervalo de referencia. Conversin para Unidad del Sistema Internacional (SI): mmol/L

BIOTCNICA IND.COM. LTDA. Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica, Varginha MG BRASIL CEP: 37026-470 Tel/fax: +55 35 3214 4646 www.biotecnica.ind.br

Revisin: 01 - 09/2009

Urea (mg/dL) x 0,167 = Urea (mmol/L) CARACTERSTICAS DE DESEMPEO Repetibilidad La realizacin de 20 determinaciones de una misma muestra en un mismo da, con valores dentro de la faja de referencia mostr un Coeficiente de Variacin de 1,19%. Reproducibilidad La realizacin de 10 determinaciones de una misma muestra, analizada en das diferentes mostr un Coeficiente de Variacin de 3,08%. Especificidad Analtica La comparacin con un mtodo similar, ya validado, mostr un coeficiente de correlacin, r, igual a 0,991 a partir de muestras obtenidas de pacientes de ambulatorio. La ecuacin de regresin obtenida fue Y = 1,015 X - 1,37. SIGNIFICACIN CLNICA La urea es el metabolito cuantitativamente ms importante del catabolismo de las protenas. Producida en el hgado, ella pasa para la circulacin sangunea, donde es degradada en nivel intersticial y eliminada por el sudor, trato gastrointestinal y rin. Es libremente filtrada por los glomrulos dependiendo del estado de hidratacin y 40% a 80% de la urea filtrada son pasivamente reabsorbidas en los tubuelos proximales. Su concentracin vara en individuos sanos y es influenciada por diversos factores como: grado de hidratacin, dieta proteica y funcin renal. Es utilizada en la avaluacin del estado del funcionamiento renal. La uremia es observada en la dieta rica en protenas, insuficiencia cardiaca congestiva, nefritis, insuficiencia renal aguda y carcinomas en el trato urinario. La disminucin de la urea est relacionada a la insuficiencia heptica grave, aumento de la diuresis y reduccin del catabolismo proteico. La lesin renal provoca una retencin de substancias txicas como la urea a travs de disturbios de la filtracin, reabsorcin, secrecin y excrecin. En la lesin heptica, habr una disminucin de la conversin de amonio en urea, causando una hiperamonemia. Niveles aumentados A Pre-renal Condiciones en que la circulacin a travs de los riones es menos eficiente que el normal Deshidratacin (diarrea persistente) Choque Disminucin del volumen sanguneo (hemorragias digestivas) Catabolismo proteico aumentado (fiebre, estrese, quemaduras etc.) Insuficiencia cardiaca B Renal Disminucin de la filtracin glomerular como consecuencia de una enfermedad renal aguda o crnica Nefropatas Tratamiento con glicocorticoides (efecto antianablico) C - Pos Renal Resultado de una obstruccin del trato urinario. Obstruccin del trato urinario (clculo, obstruccin prosttica etc) Niveles disminuidos Caquexia, embarazo, enfermedad celiaca, hemodilucin, en la infancia, insuficiencia heptica aguda e ingestin proteica disminuida. OBSERVACIONES 1. La limpieza y secado adecuados del material usado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtencin de resultados correctos. El agua utilizada en la limpieza del material debe ser reciente y exenta de agentes contaminantes. La limpieza de la vidriara debe ser hecha con detergente neutro. El enjuague debe ser exhaustivo siendo los ltimos con agua destilada o deionizada. 2. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada a cada aplicacin. As, para preparar reactivos y usar en las mediciones, el agua debe ser del Tipo II, con resistividad > 1 megaohms o conductividad < 1 micro siemens y concentracin de silicatos < 0,1 mg/L. Para el enjage inicial de la vidriara, el agua puede ser del Tipo III, con resistividad > 0,1 megahoms o conductividad < 10 micro siemens. En el enjuague final, utilizar agua del Tipo II. Columna deionizadora con su capacidad saturada libera agua alcalina, varios iones y tambin substancias con gran poder de oxidacin o reduccin que deterioran los reactivos en pocos das o mismo horas, alterando de manera imprevisible los resultados. As, es fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua. PRESENTACIONES R1 R2 R3 STD 1 x 250 mL 1 x 250 mL 1 x 10 mL 1 x 4 mL 250 tests de 2 mL 400 cal. de 10 L

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS BERTHELOT, M. P. E. Violet daniline. Report. Chim. Appl. v.1, p.282-284, 1859. GENTZKOW, C. J.; MASEN, J. M. An accurate method for the determination of blood urea nitrogen by direct nesslerization. J. Biol. Chem. v.143, p.531-544, 1942. CHANEY, A. L.; MARBACH, E. P. Modified reagents for determination of urea and ammonia. Clin. Chem. v.8, p.130-132, 1962. GUYTON, A. C.; HALL, J. E. Fisiologia humana e mecanismos das doenas. 6 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan. 1998. 580p. YOUNG, D.S. Effects of drugs on clinical laboratory tests - vol. 2, 5 ed. Washington DC: AACC Press, 2000. WESTGARD, J. O. et al. A multi-rule shewhart chart quality control in clinical chemistry. Clin. Chem. v.27 p.493-501, 1981. RESPONSABILIDAD TCNICA Dr. Gilson Srio Pizzo - CRF MG - 5310 MS 80027310159

TABLA DE SMBOLOS INTERNACIONALES SMBOLO IDIOMA

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DEFINICIN
Consultar Instrues de Uso Consult instructions for use Consultar la metdica Cdigo Code Cdigo Nmero de lote Batch code Denominacin de lote Para uso diagnstico in vitro For in vitro diagnostic medical device Para uso en diagnostico in vitro Contedo do kit Contents of kit Contenido del estuche Contedo suficiente para <n> testes Contains sufficient for <n> tests Contenido suficiente para <n> ensayos Calibrador Calibrator Calibrador Controle Control Control Padro Standard Patrn Reagente e seu nmero/abreviao Reagent and its number/abbreviation Reactivo y su nmero/abreviacin Limite de temperatura Temperature limitation Temperatura lmite Data limite de utilizao (ltimo dia do ms) Use by (last day of the month) Estable hasta (ultimo da del mes) Fabricado por Manufactured by Elaborado por Risco biolgico Biological risk Riesgo biolgico Corrosivo Corrosive Corrosivo Txico Toxic Txico Inflamvel Flammable Inflamable Nocivo / Irritante Harmful / Irritant Nocivo / Irritante Material reciclvel Recyclable material Material reciclable No descartar diretamente no ambiente Dispose properly Desechar adecuadamente

Presentacin 1

GARANTIA DE CALIDAD Antes de ser liberados para el consumo, todos los reactivos Biotcnica son testados por el Departamento de Control de Calidad. La calidad de los reactivos es asegurada hasta la fecha de validez mencionada en el envase de presentacin, desde que almacenados y transportados en las condiciones especificadas. Los datos relativos al Control de Calidad de este producto (lote impreso en las etiquetas de los frascos de reactivos) pueden ser solicitados en: sac@biotecnicaltda.com.br AUTOMACIN Este procedimiento es automatizado en la mayora de los analizadores. Los protocolos estn disponibles en www.biotecnica.ind.br SAC - SERVICIO DE ASISTENCIA AL CLIENTE Cualquier duda en la utilizacin de este kit, entrar en contacto con la Asesora Cientfica de la Biotcnica Ltda, a travs del telfono +55 35 3214 4646 o por el e mail sac@biotecnicaltda.com.br