UNIVERSIDAD DE ANTOFAGASTA FACULTAD RECURSOS DEL MAR INGENIERIA EN ALIMENTOS

PRACTICO DE MOHO Y LEVADURAS

Profesora:

Asignatura: Microbiologa II. Nombre:

1. INDICE Pagina Introduccin Objetivos Marco terico Material y mtodo Resultado Discusin Conclusin 3 4 5-6 8-7 9 10 11

2. INTRODUCCION Es bien conocido por todos que cuando dejamos un alimento por un largo tiempo sin utilizar en algn lugar, en este comienzan a salir mohos. Pues si bien es un agente contaminante tambin es un microorganismo beneficioso para las industrias alimentarias. Los mohos y Levaduras son fcilmente encontrados en alimentos, incluso en aquellos en los cuales el ambiente es menos favorable para el crecimiento bacteriano por ej. a pH o menor, baja actividad de agua, alto contenido de sal o azcar, baja temperatura de almacenamiento y presencia de antibiticos.

Los hongos estn ampliamente distribuidos en la naturaleza. Y se pueden encontrar formando parte de la flora normal de un alimento, o como agentes contaminantes y en los equipos higienizados inadecuadamente, provocando el deterioro fsico qumico de stos, debido a la utilizacin en su metabolismo de los carbohidratos, cidos orgnicos, protenas y lpidos originando mal olor, alterando el sabor y el color en la superficie de los productos contaminados, adems la resistencia a sustancias qumicas y radiaciones puede permitir el crecimiento de bacterias patgenas

Los mohos son generalmente aerobios estrictos, en cambio las levaduras pueden crecer en condiciones de aerobiosis o anaerobiosis y su desarrollo es ms rpido que el que presentan los mohos.

Existen varios medios de cultivos o recomendados para el recuento de mohos v levaduras en alimentos. La selectividad de estos medios se logra ya sea por disminucin de pH a valores bajo 4 o por adicin de antibioticos tales como penicilina+, estreptomicina, cloramfenicol, clortetraciclina, oxitetraciclina o gentamicina.

El propsito de este laboratorio es estimar el nmero de microorganismos formadores de colonias encontrados en un alimento.

3. OBJETIVOS. 3.1 Objetivo especifico Identificar el nmero de moho y levadura en un alimento lcteo

3.2 Objetivo general Poder ver y identificar entre un moho y una levadura en una misma placa

4. MARCO TEORICO. Las levaduras se presentan de forma cremosa, blanca y coloreada, y las colonias de moho se presentan bajo una horma filamentosa caracterstica 8micelio) y de color variable. Agar sabouraud: es un tipo de agar que contiene peptonas. Se usa para cultivar dermatofitos y otros tipos de hongos. Composicin Glucosa Pluripeptona Agar Cloranfenicol pH 5.6 Disolver los ingredientes y esterilizar 15 minutos a 121 C. pH final 5.6 0.2 (http://es.wikipedia.org/wiki/Agar_Sabouraud ) Tincin simple: Se entiende por tincin (o coloracin) simple al teido de los microorganismos aplicando slo una solucin colorante. Este tipo de tinciones pueden ser positivas o negativas. La coloracin positiva es la tincin de los microorganismos, efectuada con colorantes bsico que, como ya dijimos, poseen afinidad por los constituyentes celulares y se combinan qumicamente con el citoplasma microbiano. La tcnica consiste en La coloracin consiste en cubrir el frotis, despus de fijado, con la solucin colorante y se deja actuar el tiempo preciso. Luego se lava con agua y se deja secar. Reactivos para tincin simple. Solucin A: Azul de metileno Etanol (95%) 0.3 g 30 ml Gramos por litro 40 10 15 0.05

Disolver el colorante en etanol al 95%, dejar reposar para completar la disolcin. Mantener en frasco color mbar. 5

Solucin B: KOH diluido (0.01%) 100 ml

Mezclar las soluciones A y B en el momento de utilizar.

5. MATERIAL Y METODO. Equipos y material fungible: Estufa de cultivo (se fija la temperatura a 22 + 1C) Contador de colonias tipo Quebec de campo oscuro o equivalente Bao termorregulado (se fija la temperatura a 45 + 1C) Pipetas bacteriolgicas de 1 y 5 ml (graduadas a 0,1 ml) Placas de Petri Propipetas

5.1 MTODO. Preparar la muestra segn procedimiento indicado en Preparacin de diluciones de muestras de alimentos para anlisis microbiolgicos. Sembrar 1 ml en triplicado en placas Petri de las diluciones 10-1 a 10-2 o mayores. Agregar 15 ml de agar fundido y temperado a 45 1C. Mezclar el inculo con el agar fundido siguiendo las instrucciones dadas en RAM. Una vez solidificado el agar, incubar sin invertir a 22C durante 3 a 5 das. Seleccionar las placas que contengan entre 10 y 150 colonias. Si solo se dispone de placas con menos de 20 colonias, utilizar dichas placas. Contar las colonias de mohos que se presentan bajo una horma filamentosa caracterstica (micelio) y de color variable. Contar por separado las colonias de levaduras. Se presentan en forma de colonias cremosas, blancas o coloreadas. Para confirmar la presencia de levaduras, se debe realizar un examen microscpico (tincin simple). Registrar por separado el nmero de colonias de mohos y levaduras, respectivamente, y el factor de dilucin correspondiente.

6. RESULTADOS

En la mayora de las placas se obtuvieron placas muy numerosas para contar, haba bastantes colonias, imposibles de contar. En la dilucin 10-3 se observaron 3 colonias visibles, las cuales 2 eran mohos y 1 levadura. Resultando: 3 ufc por gramo o mL de dilucin.

7. DISCUSION. La gran cantidad de colonias en las 3 primera diluciones (10-1 10-3 10-3) se da manifiesto por que la muestra contena ya los mohos y levaduras, obteniendo as un resultado claramente positivo.

El agar sabareaud es un medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos. En el medio de cultivo, la ipeptona y la glucosa son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos de mohos y levaduras, el alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH cido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias.

Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento.

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8. CONCLUSIN Durante aos los mohos y levaduras se pueden considerar en algunos alimentos beneficiosos en cuanto a sus caractersticas organolpticas. En este laboratorio se sembr una muestra se queso, el cual se dejo incubando a temperatura ambiente (22 C). En consecuencia, los objetivos no fueron los deseados, ya que en la mayora de las placas hubo una sobrepoblacin, por lo que fue MNPC, cabe mencionar, que en dos placas hubo formacin de levaduras bastante pequeas. Los resultados no eran los esperados, ya que se tendran que ver levaduras en la mayora de las placas.

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