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VERIFICACION DE METODOS
D.C. EDUARDO BRAMBILA COLOMBRES Facultad de Ciencias Qumicas Benemrita Universidad Autnoma de Puebla Departamento de Qumica y Biologa Universidad de las Amricas Puebla
Temario
infecciosas en banco de sangre 2. Evaluacin, validacin y verificacin de mtodos analticos cuantitativos 3. Estimacin de Incertidumbre "Distintos Modelos Prcticos" 4. Evaluacin de la Linealidad 5. Lmites de Referencia 6. Ejercicios prcticos 7. Evaluacin del mdulo
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Orden
Interpretacin
Recoleccin
Anlisis
Transporte
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Estndares de Calidad
En trminos analticos
Solucin estndar. Empleada para calibracin o evaluar un
En trminos administrativos
Provee una forma consistente de hacer las cosas
Proceso estndar de pruebas Proceso estndar de validacin de mtodos Estndar de calidad. Criterio que describe el nivel aceptable de alguna caracterstica
Tiempo de reporte de resultados Que tan cercanos estn los resultados del valor verdadero
C De la
Mejoramiento de la
Planeacin
C C
Estndares
Cen el laboratorio C
Control de
Procesos
Evaluacin de la
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Control de Calidad
Procedimientos para monitorear el proceso de anlisis
Evaluacin de la Calidad
Monitoreo de la totalidad de las caractersticas del proceso que permitan satisfacer las necesidades del usuario, p.e.
Tiempo de entrega del resultado Preparacin del paciente Obtencin del especimen Etc.
Mejoramiento de la Calidad
Determina las causas o problemas identificados por el CC o EC
Problemas identificados
Analistas Individuales Equpo de Analistas Herramientas (Cartas de flujo, Diagramas de Pareto, Diagramas causa-efecto, etc)
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Planeacin de la Calidad
Establecimiento y validacin de los procesos encaminadas a las necesidades de los usuarios
Seleccin y evaluacin de nuevos mtodos e instrumentos Seleccin y diseo de los procedimientos de control de calidad
Objetivos de la Calidad
Requerimientos que deben ser logrados para satisfacer las necesidades de los usuarios Calidad Analtica
Producir resultados que sean correctos dentro de ciertos limites establecidos
VERIFICACION
Especmenes
Monitoreo CC estadstico
Resultados
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VALIDACIN DE MTODOS
VALIDACIN DE MTODOS
Cules son los criterios para introducir un mtodo al trabajo de rutina en un laboratorio?
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Objetivo de la VALIDACION DE METODOS El proceso de evaluacin de mtodos tiene como objetivo EVALUAR LA MAGNITUD DEL ERROR DEL MTODO
Determinar si la magnitud del error del mtodo afecta la interpretacin de los resultados y el diagnstico dado a los pacientes
Error al azar
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Error sistemtico
Error Total
Es el efecto neto o combinado del error al azar y el error sistemtico Debido a que los laboratorios realizan una sola medida por analto, el resultado puede estar en la regin del error comprendido entre la: media+/-2 3s
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Enero 24 de 2003 Todos los mtodos de moderada a alta complejidad deben ser validados antes de ser introducidos al trabajo de rutina.
Mtodos No Modificados
Mtodos No Modificados
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?
Que estndares de calidad debemos emplear para determinar si la magnitud del error del mtodo es lo suficientemente grande para afectar la interpretacin de los resultados?
Requerimientos mdicos
La decisin de aceptar o rechazar un mtodo candidato para su introduccin a rutina depende de los requerimientos del usuario final El error del mtodo es excesivo si tiene efecto en los resultados finales y puede producir un diagnstico incorrecto
DIAGNSTICO
???
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Concentraciones de nivel de decisin mdica Son los niveles de concentracin a los cuales existe la mayor probabilidad de cometer un error diagnstico.
50 mg/dL
110 mg/dL
Estndares de ejecucin
Para cada concentracin a un nivel de decisin mdica (Xc) se han formulado estndares de ejecucin: Error permitido (Ep)
La validacin de los mtodos determina el error de los mtodos a un nivel de decisin mdica y los resultados se comparan con el error permitido para cada mtodo en particular
ALBMINA BICARBONATO BILIRRUBINA CALCIO CLORUROS COLESTEROL CREATININA GLOBULINAS GLUCOSA pH PCO2
35 g/L 20 mmol/L 30 mmol/L 10 mg/L 200 mg/L 85 mg/L 100 mg/L 90 mmol/L 100 mmol/L 2500 mg/L 20 mg/L 35 mg/L 500 mg/L 1200 mg/L 7.35 7.45 35 mm Hg 50 mm/Hg
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PO2 FSFORO POTASIO PROTENAS TOT. SODIO TRIGLICRIDOS BUN CIDO RICO ENZIMAS FOSFATASA CIDA FOSFATASA ALCALINA AMILASA LACTATO DESHIDROGENASA ASPARTATO AMINO TRANSFERASA
80 mm/Hg 45 mg/L 3 mmol/L 6 mmol/L 70 g/L 130 mmol/L 150 mmol/L 1600 mg/L 270 mg/L 60 mg/L NIVEL DE DECISIN
Error Permitido
90% o ms de la identificacin Valor Blanco 3SD basado el porcentaje de Leucocitos Cuenta de Eritrocitos Valor Blanco 6% Hematocrito Valor Blanco 6% Hemoglobina Valor Blanco 7% Cuenta de Leucocitos Valor Blanco 15% Cuenta de Plaquetas Valor Blanco 25% Fibringeno Valor Blanco 20% Tiempo Parcial de Tromboplastina Valor Blanco 15% Tiempo de Protrombina Valor Blanco 15%
ESPECIFICACIONES DE CALIDAD
En Abril de 1999 la IUPAC, la IFCC y la WHO, convocaron a la discucin de las estrategias para determinar las especificaciones de calidad en los laboratorios clnicos. El consenso fue publicado en : Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation
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CATEGORIA
ESTRATEGIA
SUBCLASES
Especificaciones de calidad en situaciones clnicas especificas A. Especificaciones Generales de Calidad basados en Variabilidad Biolgica B. Especificaciones Generales de Calidad basadas en opiniones mdicas A. Guas de Grupos de Expertos Nacionales o Internacionales
Recomendaciones profesionales B. Guas de expertos individuales o Grupos Institucionales Especificaciones de calidad por Regulaciones o por Organizadores de EQAS A. Especificaciones de calidad determinadas por Regulaciones B. Especificaciones de calidad determinadas por organizadores de EQAS A. Datos Publicados de PT o EQAS
Revisin de la literatura
Validacin de mtodos
Formulando un plan
Defina los requerimientos de calidad (Error permitido) Seleccione los experimentos apropiados para revelar los tipos de error analtico Recolecte los datos experimentales necesarios Compare los errores experimentales con los errores permitidos Juzgar la aceptabilidad o rechazo del mtodo
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Tipos de errores
Todas las mediciones presentan un error
Imprecisin Inexactitud E.C. E.P. E.A.
VERIFICACIN
VERIFICACIN
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VERIFICACION DE METODOS Debido a que los laboratorios buscan la manera de asegurar la calidad al menor costo, ha surgido la pregunta de cuales son los estudios minimos necesarios para satisfacer los requerimientos regulatorios para verificar el desempeo establecido por los productores de reactivos y equipos de laboratorio.
CLINICAL LABORATORY STANDARDS VERIFICACION DESTANDARD. METODOS INSTITUTE. EP15 Es una guia que permite a los usuarios demostrar que pueden obtener el mismo desempeo en los mtodos analticos como ha sido establecido por los productores
OBJETIVOS DE LA VERIFICACION DE METODOS Desarrollar un protocolo que sea bastante simple para ser aplicado a laboratorios con un amplio intervalo de sofisticacin y recursos Desarrollar un protocolo lo suficientemente riguroso para obtener conclusiones estadsticas vlidas para los estudios de verificacin
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USO DE LA GUIA La gua EP15 puede ser usada cuando un mtodo es inicialmente introducido al trabajo del laboratorio Tambin puede servir de base para verificar el desempeo de un mtodo despus de una accin correctiva en el mtodo
REPETIBILIDAD. Precisin de medidas sucesivas del mismo mesurando obtenida bajo las mismas condiciones de medida (anteriormente llamada precisin dentro de la corrida) CONDICIONES DE REPETIBILIDAD. Condiciones en donde los resultados son obtenidos con el mismo mtodo, el mismo material de prueba, en el mismo laboratorio y con el mismo operador en un intervalo de tiempo corto
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PROTOCOLO DE PRECISION
Periodo de Familiarizacin Se recomienda emplear un protocolo de Control de Calidad Los materiales de control deben tener valores cercanos a los niveles de decisin mdica y cercanos a los niveles especificados por el productor en donde realiza sus especificaciones de precisin Si es posible, emplear los mismos materiales que el productor, o muy similares (matriz)
PROTOCOLO DE PRECISION
Analizar una corrida por da con 3 muestras replicadas a cada una de dos concentraciones por 5 das Si existe algun problema y se tiene que rechazar una corrida (CC), descarte los datos y realice una corrida adicional Incluya las muestras de control empleadas diariamente Las muestras para los experimentos de veracidad pueden ser analizadas en las mismas corridas Calibre el sistema de acuerdo a las especificaciones del productor (calibracin nica o multiples)
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( x
sr =
d =1 i=1
x d )2
D( n 1)
D
( x
s =
sI =
2 b d =1
x )2
D 1
n 1 2 2 sr + sb n
Desviacin Estndar dentro del laboratorio
T=
D = Numero total de das n = Numero de replicados por da = Resultado del replicado i para el da d
x di
La guia EP15 recomienda que sea calculado un valor de verificacin para proveer un limite superior para la precisin establecida por el productor. Este valor depende del numero de replicados (n), el numero de das (D), la varianza dentro de la corrida (sr2) y la varianza entre las corridas (sb2). El procedimiento calcula el parmetro T, el cual son los grados de libertad efectivos.
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VALOR DE VERIFICACION
Valordeverificacin = sestablecida C
C - Es determinado a partir de una tabla de puntos de porcentaje seleccionados de una distribucin chi-cuadrada con 5% de falsos rechazos Sestablecida Corresponde a la desviacin estndar declarada por el productor
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T1/ 2
CALCULO DE C
PORCENTAJES SELECCIONADOS DE LA DISTRIBUCIN CHI-CUADRADA PARA NUMEROS SELECCIONADOS DE NIVELES PARA PROVEER UN 5% DE FALSOS RECHAZOS A B C D DISTRIBUCIN CHI-CUADRADA p = 0.05 Grados de Libertad 2 Niveles 3 Niveles 4 Niveles
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 9.35 11.14 12.83 14.45 16.01 17.53 19.02 20.48 21.39 23.34 24.74 26.12 27.49 28.85 30.19 31.53 32.85 34.17 35.48 36.78 38.08 39.36 40.65 10.24 12.09 13.84 15.51 17.12 18.68 20.12 21.71 23.18 24.63 26.06 27.48 28.88 30.27 31.64 33.01 34.6 35.7 37.04 38.37 39.68 41 42.3 10.86 12.86 14.54 16.24 17.88 19.48 21.03 22.56 24.06 25.53 26.98 28.42 29.84 31.25 32.64 34.03 35.4 36.76 38.11 39.46 40.79 42.12 43.35
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Muestras
Nuevo Mtodo
Las diferencias se atribuyen al mtodo reemplazado Esto es verdadero si el nuevo mtodo es de mejor calidad que el mtodo a se reemplazado
PROTOCOLO RECOMENDADO
Ensayar 20 muestras con concentraciones que cubran el intervalo reportable del mtodo Ensayar las muestras bajo las condiciones de rutina del laboratorio Medir con los dos sistemas de medicin de 5 a 7 muestras al da, en un periodo de 3 a 4 das, de preferencia de manera simultnea (4 h de diferencia mximo)
PROTOCOLO RECOMENDADO
Evale las muestras en conjunto con un sistema de CC para asegurar la operacin estable de los sistemas de medicin Inspeccione los resultados e identifique resultados discrepantes Calcule la diferencia entre los pares de resultados y grafique la diferencia contra el valor de comparacin
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PROTOCOLO RECOMENDADO Realizar un anlisis estadstico mediante una prueba t de student para datos pareados y determine la diferencia promedio entre los mtodos Calcule los limites de confidencia o verificacin para comparar el bias observado con las especificaciones del productor.
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EP15 provee un segundo protocolo para verificar la veracidad de un mtodo con el empleo de materiales de referencia con valores asignados Los materiales deben ser cuidadosamente seleccionados
Materiales recomendados
Materiales de referencia certificados. Disponibles en el Instituto Nacioanal de Estndares y Tecnologa US (NIST) Materiales de referencia con valores asignados por programas de competencia de pruebas Materiales del productor con valores asignados Materiales de programas de evaluacin externa de la calidad Materiales de tercera opinin con valores asignados por analisis en diferentes laboratorios Estndares que preparados con concentraciones conocidas
RECOMENDACION
La guia EP15 que sean seleccionados al menos 2 materiales que representen concentraciones de niveles de decisin altos y bajos en el intervalo reportable del mtodo Los materiales deben prepararse de acuerdo a las direcciones del productor, analizando 2 replicados por corrida en 3 a 5 corridas
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PROTOCOLO
Evale las muestras en conjunto con un sistema de CC para asegurar la operacin estable de los sistemas de medicin Inspeccione los resultados e identifique resultados discrepantes Calcular los Intervalos de Confianza Comparar con el valor de bias declarado por el productor
VERIFICACION DE LA PRECISION
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VERIFICACION DE LA PRECISION
Da 1 Da 2 Da 3 Da 4 Da 5
n di
D=5 n=3
( x
sr =
d =1 i =1
x d )2 =
D ( n 1)
4.000 5(3 1)
= 0.632
VERIFICACION DE LA PRECISION
Da 1 Da 2 Da 3 Da 4 Da 5
Mdia de la Corrida (Xdi - Xd)2 240.000 1.778 238.333 9.000 243.667 5.444 242.667 1.778 242.000 0.444 241.333 18.444
( x
s =
2 b d =1
x )2
=
D 1
18.444 4
=4.611
VERIFICACION DE LA PRECISION
D
D n
( xdi x d )2
sr =
d =1 i =1
( x
= 0.632
x )2
=4.611
D (n 1)
s =
2 b
d =1
D 1
= 2.209
sI =
n 1 2 2 3 1 sr + sb = 0.6322 + 4.611 n 3
Desviacin Estndar dentro del laboratorio
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VERIFICACION DE LA PRECISION
sr
= 0.632
2 sb
=4.611
sI = 2.209
T=
2 2 (( n 1) s + ( n sb )) 2 2 2 n 1 n ( sb ) ( ) sr4 + ( ) D D 1
2 r
T=
VERIFICACION DE LA PRECISION
Valordeverificacin = sestablecida C
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T1/ 2
CALCULO DE C
PORCENTAJES SELECCIONADOS DE LA DISTRIBUCIN CHI-CUADRADA PARA NUMEROS SELECCIONADOS DE NIVELES PARA PROVEER UN 5% DE FALSOS RECHAZOS A B C D DISTRIBUCIN CHI-CUADRADA p = 0.05 Grados de Libertad 2 Niveles 3 Niveles 4 Niveles
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 9.35 11.14 12.83 14.45 16.01 17.53 19.02 20.48 21.39 23.34 24.74 26.12 27.49 28.85 30.19 31.53 32.85 34.17 35.48 36.78 38.08 39.36 40.65 10.24 12.09 13.84 15.51 17.12 18.68 20.12 21.71 23.18 24.63 26.06 27.48 28.88 30.27 31.64 33.01 34.6 35.7 37.04 38.37 39.68 41 42.3 10.86 12.86 14.54 16.24 17.88 19.48 21.03 22.56 24.06 25.53 26.98 28.42 29.84 31.25 32.64 34.03 35.4 36.76 38.11 39.46 40.79 42.12 43.35
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VERIFICACION DE LA PRECISION
T1/ 2
4.471/ 2
= 3.16 mg/dL
CONCLUSION
VALOR DE VERIFICACON = 3.16 mg/dL Desviacin Estndar dentro del laboratorio = 2.209 mg/dL
LA DESVIACION ESTANDAR DENTRO DEL LABORATORIO ES MENOR QUE EL VALOR DE VARIFICACON POR LO QUE:
EL METODO VERIFICA
Mtodo de Comparacin
177 221 262 194 225 248 241 254 288 192 239 169 208 201 275 268 154 285 204 231
Yi-Xi
-1 6 -6 9 4 -3 1 0 10 1 1 3 4 -2 0 0 5 -2 9 5
(Yi-Xi-Bias)
-3.2 3.8 -8.2 6.8 1.8 -5.2 -1.2 -2.2 7.8 -1.2 -1.2 0.8 1.8 -4.2 -2.2 -2.2 2.8 -4.2 6.8 2.8 41.8
Suma
44 2.2 Bias
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D
n
44 = 2.2 20
2
sD =
(D D )
n 1
41.8 = 4.29 19
sD =
t=
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LIMITES DE CONFIANZA
x ds
a x + ds
=2.2+/-(2.861*4.29/RAIZ(20)) =2.0+/-(2.861*4.29/RAIZ(20))
Lmites de Confianza
p=0.01 p=0.01
t-critica
2.861 2
n
20
superior
4.97
inferior
-0.57
superior
4.77
inferior
-0.77
EL METODO VERIFICA
EP15 VERACIDAD CON MATERIALES DE REFERENCIA Da 1 Da 2 Da 3 Da 4 Da 5 Replicado 1 Replicado 2 Replicado 1 Replicado 2 Replicado 1 Replicado 2 Replicado1 Replicado 2 Replicado 1 Replicado 2 237 238 239 237 238 236 239 238 238 237 10 237.7 0.95 0.3 3.25 238.67 236.73
240 mg/dL
Cuenta Promedio Desv. Estndar Error Estndar t Crtica p = 0.01 Limite de confianza superior Limite de confianza inferior
NO VERIFICA
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USO PRETENDIDO VALIDACION. Permite juzgar y aceptar o no, un mtodo con base a estndares de calidad definidos basados en requerimientos mdicos VERIFICACION. Permite juzgar y aceptar o no un mtodo con base en las especificaciones de los productores de equipos y reactivos
Ejercicios Prcticos
86 de 107
Taller: VERIFICACIN
87 de 107
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Evaluacin
88 de 107
30