Natal, Novo Ano, novos rumos.

Que o passado nos sirva como experincia para planejar e realizar nossos objetivos e que os desafios sejam transformados em oportunidades para o sucesso. Desejamos os melhores votos de paz, sade e boas festas, que nesse final de ano, possa se somar e festejar todas as alegrias e conquistas entre todos os colaboradores.

Ano VII - Ed. 39 - Outubro | Novembro | Dezembro de 2010 - Circulao Trimestral

INFORMATIVO CEFAR DE MICROBIOLOGIA

O VALOR D NA ESTERILIZAO
Dando continuidade aos temas que abordam os bioindicadores em processos de esterilizao, nessa edio traremos um outro assunto pouco entendido e abordado, o valor D de um processo de esterilizao. A esterilidade ou nvel de segurana de um produto pode ser definido pela incapacidade de desenvolvimento das formas sobreviventes ao processo de esterilizao, durante a conservao e utilizao de um produto. A manuteno do nvel de esterilidade conferido a um produto garante o prolongamento da vida til de prateleira e depende das operaes presterilizao, de esterilizao e ps-esterilizao. O processo de crescimento de microrganismo iniciado quando o ambiente apresenta condies favorveis, podendo estar presentes em qualquer produto e iniciarem um processo de multiplicao. Se forem realizadas contagens microbianas peridicas, estas podem ser representadas graficamente colocando o logaritmo decimal do nmero de microrganismos viveis por mililitro de diluio do produto em questo na ordenada (eixo de y) e a unidade de tempo de crescimento na abscissa (eixo de x). Obtm se assim a curva de crescimento, que caracterizada por quatro fases distintas, denominadas de fase de latncia (lag), exponencial ou logartmica, estacionria e de declnio ou morte A fase de latncia caracteriza o tempo necessrio ao ajuste dos microrganismos ao novo ambiente fsico-qumico. O prolongamento mximo dessa fase aumenta a vida til de um produto, ou seja, o produto encontra-se estril ou o mais prximo desse status. Durante a fase logartmica ou exponencial, as clulas se dividem em ritmo constante, e o incremento do nmero de clulas diretamente proporcional ao tempo de gerao. A velocidade de multiplicao bacteriana proporcional ao nmero de clulas presentes, e pode ser representada pela equao: Log N = Log N0 + (k/2.303)t (1), onde Log N o logaritmo decimal da populao aps um tempo (t) de incubao (horas); Log N0 o logaritmo decimal da populao no tempo inicial (t = 0); k a constante de velocidade especfica de crescimento por hora (h-1). A fase logartmica deve ser inibida antes, durante e aps o processamento do produto, definindo o nvel de esterilidade do produto final. O tempo necessrio para que o nmero de clulas dobre, isto N=2No denominado tempo de gerao (g). Substituindo N por 2No, a equao (1) pode ser representada por Log (2No)=LogNo+(k/2.303)g, ou por Log (2No) - Log No= (k/2.303)g onde Log (2No/ No)= (k/2.303)g , e Log 2 = (k/2.303) g. Portanto g= (2.303/k) Log 2, ento g= 0.693/k. O tempo de gerao (g) expresso em horas. A velocidade de crescimento normalmente expressa em termos de tempo de gerao ou por seu recproco, a constante de velocidade exponencial de crescimento expressa em geraes por hora, obtida da relao: =1/g . Na fase estacionria a velocidade de crescimento constante, o microrganismo mais resistente a qualquer agente fsico (calor, radiao) ou qumico (cloro, xido de etileno). Para bactrias do gnero Geobacillus, Bacillus e Clostridium essa a fase de esporulao. Durante a fase de morte ou inibio do crescimento o nmero de clulas viveis decresce em ritmo constante, frente s condies desfavorveis do meio ambiente. O processo de esporulao continua[01]. Destruio Microbiana Um produto qualquer se mantm conservado, microbiologicamente falando, se no houver a manifestao dos microrganismos presentes; isto significa dizer que, aps a exposio ao calor mido, poder haver microrganismos dormentes ou em estado latente de sobrevivncia, que no se multiplicaro durante a vida til de prateleira de um produto, porque esse no oferece condies favorveis de crescimento e reproduo. O nmero final de microrganismos sobreviventes expostos ao calor mido representa o efeito do processo. A destruio trmica de uma populao homognea de microrganismos considerada logartmica, equivalente cintica qumica de uma reao de 1a ordem. O fenmeno de destruio trmica pode ser representado pelo modelo de curva linearizada, semilogartmica de sobreviventes. A representao grfica do logaritmo decimal de sobreviventes, em relao ao tempo de exposio temperatura constante resulta em curva linearizada decrescente. A variao do nmero de sobreviventes, com o tempo de exposio, funo do nmero de microrganismos inicialmente presentes, e representada pela equao: Log Nf = Log N0 - (k/2.303)t (2), onde Log Nf o logaritmo decimal da populao sobrevivente aps um tempo (t) de exposio; Log No o logaritmo decimal da populao no tempo inicial (t=0); k a constante de velocidade especfica de destruio por unidade de tempo (t). Para um mesmo microrganismo todos os parmetros de tratamento devem ser mantidos constantes durante o tempo de exposio estabelecido; pois a resistncia trmica funo da concentrao de vapor mido presente. Para o modelo de curva semilogartmica de sobreviventes, o tempo necessrio para a destruio de 90% da populao de esporos o intervalo de tempo exigido para a curva percorrer 1 (um) ciclo logartmico. O intervalo de tempo

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Produo e Controle de Qualidade Dr. Nelson Kioshi Higuti Gerncia Administrativa: Ernani Jos Alves Compras: Irnio Jos da Silva (compras@cefar.com.br)

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de reduo decimal (Valor D) o principal parmetro de avaliao das caractersticas de termoresistncia da populao microbiana homognea. Valor D ou tempo de reduo decimal um parmetro que determina o tempo de reduo da populao microbiana de um ciclo logartmico quando em contato com um agente desinfetante ou esterilizante. o intervalo de tempo temperatura constante de tratamento para uma reduo de 90% da populao de microrganismos viveis. O valor D o inverso negativo do coeficiente angular da equao da reta calculada utilizando-se do mtodo da regresso linear, atravs dos mnimos quadrados, aplicado regio linear da curva de sobrevivncia. O valor D relaciona-se constante especfica de reao atravs da relao: D = (2.303/k) (3). Portanto a equao pode ser igualmente representada por Log Nf = Log N0 (1/D)t (4). O nvel de destruio trmica (n) o nmero de ciclos logartmicos reduzidos [n = Log N0 - Log Nf = Log (N0 / Nf)] (5) na populao microbiana. Se o nvel de destruio trmica corresponder a um ciclo reduzido (n=1), ento o tempo total de processo (t) equivalente ao tempo de reduo decimal valor D. Logo o tempo de processo temperatura de referncia (Tr) um mltiplo do tempo de reduo decimal: tTr = n x DTr = [Log (N0 / Nf)] x DTr (6). Clculos analticos so empregados para anlise dos valores obtidos em cada lote de bioindicador Cefar produzido. Nesses clculos so utilizadas metodologias de quantificao de um nmero recupervel de microrganismos inferior a 5 x 10 UFC/mlL [01, 02]. Curva de Inativao de Microrganismos A eliminao de microrganismos durante o processo de esterilizao segue padres de dose x resposta, ou seja, quanto maior a exposio ao agente esterilizante, maior a morte dos microrganismos. Essas curvas so caractersticas da interao de uma espcie com um dado agente de esterilizao em condies especficas. Por exemplo, a curva de inativao da Pseudomonas aeruginosa em calor mido a 127 C diferente daquela do Bacillus cereus mesma temperatura ou da prpria Pseudomonas aeruginosa a 100 C. Est curva segue um padro logartmico de inativao, como visto na Figura 1 [03].

curva representada pelo logaritmo decimal do Valor D ou de seus mltiplos em funo da temperatura de referncia. o nmero de graus em temperatura, sob condies especficas, necessrias para conseguir uma reduo logartmica no valor D. A partir do valor D do lote, usar o valor Z para predizer os parmetros de operao de ciclos com temperaturas diferentes de 121C. Portanto, o valor Z representa o intervalo de temperatura que ocasiona uma variao de 10 vezes na velocidade de destruio. Quanto menor o valor Z, maior a variao da velocidade de destruio com a temperatura de exposio. Nvel de Esterilidade O nmero de ciclos logartmicos reduzidos na populao do bioindicador define o nvel de esterilidade ou Sterility Assurance Level (SAL) do produto final estril. O nvel de segurana do processo define a probabilidade de falha prevista para a operao, estabelece o nmero final de sobreviventes (Nf) por unidade de produto e define o tempo de processo temperatura de referncia. Os nveis de destruio e de nmero final (Nf) de esporos sobreviventes por unidade de produto estril, assumindo populao inicial unitria (N0= 1 UFC), sugerem uma populao sobrevivente de Clostridium botulinum de Nf = 10-12 UFC (1 unidade contaminada para cada 1012 unidades do produto) equivalente a 12 ciclos reduzidos; para bactrias mesfilas no patognicas (Bacillus atrophaeus, Clostridium sporogenes) uma populao final de Nf = 10-5 UFC (1 unidade contaminada para cada 105 unidades do produto) equivalente a 5 ciclos reduzidos; para bactrias termfilas no patognicas (Geobacillus stearothermophilus), Nf = 10-3 UFC (1 unidade contaminada para cada 103 unidades do produto) equivalente a 3 ciclos reduzidos. O nvel de esterilidade o nvel de certeza de ausncia de multiplicao microbiana, durante a conservao e utilizao de um produto; e depende da populao inicial (No) presente no produto. O nvel de segurana definido em Nf = 10-6 (uma unidade de produto contaminado em cada 106 unidades expostas) equivalente reduo de 12 ciclos logartmicos na populao microbiana original do produto, admitindo No = 106 UFC por unidade. As medidas preventivas podem aumentar o nvel de segurana para um universo superior a Nf > 10-6 UFC por unidade do produto [01, 04]. Referncias Bibliogrficas 1. Penna, T.C.V.; Martins, A.M.Z.; Machoshvili, I.A. Conceitos Bsicos de Esterilizao e Desinfeco. Capitulo 01, 2002. 2. International Standard ISO 11138 Sterilization of health care products. General requirements. 2 ed., 2006 3. Acra, A.; Jurdi, M.; Muallen, H.; Karahagopian, Y.; Raffoul, Z. Water disinfection by solar radiation: assessment and application. IDRC, 1990. Disponvel on-line em: http:// almashriq.hiof.no/lebanon/600/610/614/solar-water/idrc/2644.html. Ultimo acesso em: 12 Nov 2010. 4. International Standard ISO 17665 Sterilization of health care products. Requirements for the development, validation and routine control of a sterilization process for medical devices. 1 ed., 2006.

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A Mini Incubadora CEFAR foi desenvolvida para a verificao dos ciclos de esterilizao realizados em autoclaves, estufas e xido de etileno, com a utilizao de indicadores biolgicos - Cefar, onde seu tamanho e preciso fazem a diferena na rotina laboratorial.
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Figura 1: Curvas de inativao. Adaptado de ACRA et al, 1990

Valor Z A relao entre tempos de processo a diferentes temperaturas para um mesmo nvel de destruio microbiana definida atravs da curva do tempo de destruio trmica. Essa

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