UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, Decana de Amrica) FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

(Creada el 29 de Octubre de 1943) ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS

Fisiologa animal y vegetal

RETARDO DE LA SENESCENCIA FOLIAR

Informe de Laboratorio N 4
Catedrtico
Mery Suni, Blga.

Alumnos Alvarado Flores Gian Marco Aroste Cern Claudia Cndor Valencia Marco Antonio Gonzales Dvalos Diego Hinojosa de la Cruz Karina Grupo 1 Mesa N 01

2013

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INTRODUCCION La senescencia es un conjunto de procesos degenerativos genticamente programados que conducen irreversiblemente a la degradacin y muerte de una planta, rgano, tejido o clula. A nivel bioqumico se caracteriza por la degradacin de clorofilas, almidn, cidos nucledos y protenas. La degradacin de las clorofilas desenmascara los carotinoides, durante la senescencia. El amarilleo de las hojas se usa como indicador visual de la senescencia. Estos cambios estn asociados con un incremento de la actividad de enzimas hidroliticas. A nivel metablico, disminuye la fotosntesis y aumenta la respiracin. A nivel molecular, se producen cambios en la expresin gnica, aumenta la transcripcin de genes que codifican protenas que intervienen activamente en la senescencia foliar no solo en un proceso degradativo sino tambin un proceso de reciclaje. Los productos que se forman de la degradacin de pigmentos, protenas, lpidos, y cidos nucledos son transportados desde las clulas senescentes hacia rganos que crecen activamente o bien se acumulan en rganos de reserva. En muchas especies, la abscisin marca el fin de la senescencia foliar. La senescencia est programada genticamente por su inicio resulta de una compleja interaccin entre factores endgenos (edad, desarrollo reproductor, hormonas) y factores ambientales (fototropismo, sombra, temperaturas extremas, sequias, ozono, dficit de nutrientes, infeccin de patgenos y herida). Condiciones ambientales desfavorables provocan un prematuro inicio de la senescencia. Las citoquininas son importantes moduladores de la senescencia, retrasndola al inhibir la degradacin de clorofila, protenas, RNA, y modular de expresin de los genes asociados a senescencia. El objetivo de este problema sera el de evaluar el efecto de kinetina y el agua de coco en la senescencia de fragmentos foliares de perejil y mastuerzo mantenidas en condiciones naturales. La senescencia se evaluara cualitativamente al comparar una semana despus con el control donde no se ha aadido la hormona.

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PRACTICA 4: RETARDO DE LA SENESCENCIA FOLIAR I. GENERALIDADES

Senescencia y muerte celular programada

Proceso fisiolgico de muerte celular en que se eliminan selectivamente clulas no deseadas o innecesarias. Es necesaria para el crecimiento y desarrollo normal del individuo. El organismo controla el inicio y la ejecucin del proceso de muerte celular (diversos mecanismos). Senescencia es un tipo de muerte celular programada.

Senescencia Las clulas senescenticas son metablicamente activas y sufren reorganizacin interna. Algunas vas metablicas se activan y otras se desactivan. La senescencia de un rgano culmina en muerte y/o abscisin del mismo.

Fig1. Senescencia de la hoja.

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Fig2. Etapas en el proceso de senescencia de una hoja.

Etapas del proceso de senescencia 1. Iniciacin Cambios metablicos Alteraciones de estado redox Cascada de seales

2. Reorganizacin Activacin de rutas de rescate Autotrfico o heterotrfico Eliminacin de metbolitos Detoxificacin Rediferenciacion de organelos

3. Terminal Acumulacin de antibiticos Incremento de radicales de radicales libres Eliminacin de metabolitos Perdida irreversible de integridad y de viabilidad

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Fig3. Disminucion de la tasa fotosinttica de la cebada.

Hormonas en el proceso de senescencia Etileno, ABA, jasmonatos. Promueven cambios asociados a senescencia. Citoquinas, giberalinas, ac. Saliclico. Retardan la senescencia. Principales cambios metabolicos. Disminucin de la tasa fotosinttica Incremento de respiracin Ruptura de membranas cloroplasticas Degradacin de clorofila Metabolismo de lpidos y protenas Degradacin de cidos nucleicos.

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Fig4. Senescencia de la hoja.

Citocininas Las citocininas disminuyen su concentracin durante la senescencia foliar pero la aspersin de la citocinina bencilaminopurina (BAP) retrasa este proceso, lo cual puede tener aplicaciones en el control de la senescencia de pastos forrajeros, ornamentales de follaje y hortalizas verdes. Durante la senescencia foliar, la asimilacin de carbono se reemplaza por el catabolismo de clorofila y macromolculas como protenas, lpidos de membranas y ARN; el material acumulado se trasforma en nutrientes exportables para los rganos en desarrollo (Lim et al., 2007). Parte de la energa requerida para la removilizacin de los asimilados, se obtiene por el aumento de la respiracin (Hopkins et al., 2007). Se propone que los azcares y algunos reguladores de crecimiento inducen la senescencia (Jordi et al., 2000; Pourtau et al., 2006). Durante la senescencia los azcares tienen las siguientes funciones: intervienen en el control de la fotosntesis (Wingler et al., 1998), son elementos importantes en las relaciones fuentedemanda (Roitsch y Ehne, 2000) e inducen y regulan enzimas involucradas en la movilizacin de nitrgeno (Masclaux et al., 2000). Algunas de las enzimas del metabolismo de aminocidos como la glutamina sintetasa citoslica y el glutamato deshidrogenasa, intervienen en la senescencia (BuchananWollaston et al., 2005). Esas dos enzimas participan en la conversin de aminocidos en compuestos que puedan ser exportados de la hoja, como la glutamina, principal aminocido transportable durante la senescencia natural (Feller y Fischer 1994). Otras enzimas como la fosfoenolpiruvato carboxilasa

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(PEPC) y la fosfoenolpiruvato carboxicinasa (PEPCK) se han estudiado poco durante la senescencia y mucho menos en plantas C3. La importancia de estas enzimas durante la senescencia es su intervencin en el metabolismo de lpidos, de nitrgeno y en la regulacin del pH (BuchananWollaston et al., 2005; Chen et al.,2000; Gregersen y Holm, 2007). Se menciona que las enzimas PEPC y PEPCK mantienen el floema activo para facilitar la exportacin de los compuestos nitrogenados generados durante la senescencia (Chen et al., 2000). Adems estas enzimas se encuentran en diferentes tejidos vegetales, especialmente en aquellos con un activo metabolismo de nitrgeno (Walker et al., 2001; DelgadoAlvarado et al., 2007). Durante la senescencia disminuye la concentracin de las citocininas, pero su aspersin o la sobreexpresin del gen ipt, que codifica la enzima

isopenteniltransferasa (IPT) de Agrobacterium tumefaciens, bajo control del promotor especfico de la senescencia SAG 12 (PSAG12IPT), retrasan los cambios catablicos de la senescencia foliar (McCabe et al., 2001; Lim et al., 2007). A pesar del notable efecto que tienen las citocininas para retardar la senescencia en plantas, el mecanismo de accin aun no es bien entendido. Se propone que durante la senescencia, las citocininas son percibidas por receptores asociados a histidinas cinasas y que la seal generada se traduce por medio de una cascada de fosforilaciones que finalmente estimulan genes blanco responsables del programa del retardo de la senescencia foliar, donde intervienen principalmente tres mdulos: los receptores histidinacinasas (HK), las protenas fosfotransferasas (HP) y los reguladores de respuesta (RR) (Lim et al., 2007). Al respecto, en Arabidopsis spp. uno de los tres receptores de las citocininas, la histidina cinasa 3 (AHK3), tiene una funcin primordial al controlar la longevidad de la hoja mediada por la fosforilacin especfica del regulador de respuesta ARR2 (Kim et al., 2006).

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II.

PARTE EXPERIMENTAL

A. MATERIALES

1. Plantas de cebada de 15 das de edad aproximadamente 2. Solucin de agua de 1 coco autoclavado 3. Kinetina solucin 10-4M o 10-5M 4. Placas petri, 6 placas por subgrupo de trabajo 5. Pipetas de 10 mL 6. Probetas 10 mL 7. Rotulador 8. rea de cultivo de las plantas 9. Balanza de precisin 10. Cmara fotogrfica B. METODOLOGIA

1)

Se esterilizaron las placas petri y el agua de coco agregado en

un beacker.

Fig5. Esterilizacin de placas petri.

2)

Se separaron en grupos de dos placas y en cada grupo se le

agrego una hoja de perejil y una hoja de una planta desconocida y pesar las hojas.
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Fig6. Hoja de perejil.

Fig7. Hoja de mastuerzo.

3) Luego se aadi en cada grupo 10 ml de agua destilada, en otro 10 ml de agua de coco (esterilizada) y 10 ml de kinetina quedando completamente sumergidas en las soluciones.

Fig9. Solucin de agua de coco.

Fig8. Solucin de kinetina.

4) Se procedi a ponerlas en un rea de cultivo por una semana.

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III. RESULTADOS Luego de la prctica se obtuvieron los siguientes resultados:

Tabla N 1. Resultados en los pesos de los tratamientos.

Tratamiento

Peso inicial

Peso final Kinetina 10-4

Color inicial

Color final

Rep 1 Rep 2

0.09 0.1

0.072 0.081 Agua de coco

Verde Verde

Verde Verde

Rep 1

0.07

0.062

Verde

Ligero pardeamiento

Rep 2

0.1

0.085

Verde

Ligero pardeamiento

Control (agua destilada) Rep 1 Rep 2 0.06 0.07 0.055 0.061 Verde Verde Ligera decoloracin Ligera decoloracin

Fig10. Resultados de los 3 tratamientos con distintas soluciones de kinetina, agua y coco.

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Fig11. Ambas hojas de perejil y mastuerzo presentaron una coloracin mostaza debido a la presencia de hongos por el agua de coco.

Fig12. Ambas hojas de perejil y mastuerzo presentaron una coloracin verde y muy dbil consistencia con disminucin de peso.

b
Fig13. En (a) se observa coloracin verde tanto para el perejil como para el mastuerzo. En (b) tuvo coloracin amarillenta. Ambos presentaron la mejor consistencia.

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IV. DISCUSIONES Las citocininas inducen la expresin de genes fotosintticos, promueven la sntesis de protenas y mantienen altos niveles de Rubisco durante la senescencia foliar (Ookawa et al., 2004). En plantas transgnicas PSAG12IPT de tabaco (Nicotiana tabacum L.), se demostr que los niveles de protenas solubles (30 %) se conservan mejor que los de Rubisco (15 %) en las hojas senescentes (Jordi et al., 2000). En contraste, en el presente estudio las hojas de trigo (Triticum aestivum L.) asperjadas con BAP conservaron un porcentaje mayor de LSU de Rubisco (50 %) que de protenas solubles (44 %) a los 41 DDS respecto a los 21 DDS. Lo anterior evidencia las diferencias en la degradacin de macromolculas entre especies y tratamientos. Al respecto, BuchananWollaston et al. (2005) documentan los resultados en la expresin de genes y en las vas de sealizacin comparando la senescencia natural y la inducida con oscuridad, resultados que mostraron no solo similitudes sino tambin diferencias, e inclusive la presencia de vas diferentes en procesos catablicos, particularmente en la movilizacin de nitrgeno y de carbohidratos. En los ltimos aos se viene investigando para conseguir retardar los efectos de la senescencia en las hojas de perejil despus de su recoleccin. Los resultados ms prometedores se han conseguido mediante el uso de CO2 y cido giberlico para contrarrestar los efectos de la produccin de etileno, inductor de la senescencia (Lers et al, 1998).

Pero el CO2 no solo contribuye a ralentizar el proceso de senescencia de las hojas frescas del perejil una vez recolectadas, sino que tambin se ha demostrado el efecto beneficioso de la fertilizacin carbnica sobre cultivos de invernadero experimentales desarrollados en zonas ms fras. El incremento de los rendimientos fue de hasta un 17 % mayor que en los cultivos testigo (Mortensen, 1994).

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V.

CONCLUSIONES

En el tratamiento con agua de coco las hojas de perejil y mastuerzo, no se pudo observar lo esperado debido a que estas se honguearon, pudindose haber producido debido al ingreso microorganismos en las en las placas petri pasteurizadas.

Al observar las hojas con el tratamiento con kinetina, la coloracin verdosa se mantuvo como estaba inicialmente, debido a que la kinetina es una fitohormona que retarda la senescencia foliar, pero su consistencia era muy dbil

Las hojas de perejil y mastuerzo con el tratamiento con agua si ocurri la senescencia foliar pues se notaba la clorosis en sus hojas, notndose con ms claridad en la hoja de mastuerzo.

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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Guiamet Juan J. La senescencia foliar: incgnitas del desmantelamiento celular. revisado en octubre 2013.Disponible en:

http://www.safv.com.ar/Giamet101004.pdf 2. Gonzlez Santos, R, DelgadoAlvarado, A, Zavaleta Mancera A, HerreraCabrera , E. La citocinina BAP promueve la acumulacin de hexosas e incrementa la actividad de fosfoenolpiruvato carboxilasa y fosfoenlopiruvato carboxicinasa durante el retraso de la senescencia foliar de trigo. Rev agrociencia (Mexico).2009; may./jun 43(4):381-383.
3. Infoagro.com [En lnea]. Espaa. El cultivo del perejil. [Accesado 11 de

octubre

2013].

Disponible

en:

http://www.infoagro.com/aromaticas/perejil2.htm

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